检索结果-内蒙古大学图书馆

口蹄疫病毒O型、A型和Asia I型三重实时荧光定量rt-pcr检测方法的建立及初步应用

中国动物传染病学报 2023年

作者：王翠赵雪丽王东方王淑娟马震原杨海波刘影柴茂谢彩华闫若潜河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室

为建立一种口蹄疫病毒（FMDV）O型、A型和Asia Ⅰ型三重实时荧光定量rt-pcr检测方法，本研究在比对多条FMDV基因的基础上，根据2B基因的最优保守区，设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物；再根据VP1基因的比对结果，以变异区为... 详细信息

为建立一种口蹄疫病毒（FMDV）O型、A型和Asia Ⅰ型三重实时荧光定量rt-pcr检测方法，本研究在比对多条FMDV基因的基础上，根据2B基因的最优保守区，设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物；再根据VP1基因的比对结果，以变异区为扩增靶区域，设计3对分别针对O型、A型和Asia Ⅰ型FMDV的特异性引物和TaqMan MGB探针。经优化反应体系和扩增程序等反应条件，建立一种基于探针技术的FDMV三重实时荧光定量rt-pcr检测方法。验证该方法的特异性、敏感性和重复性，对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，并与基因测序方法及rt-pcr方法进行比较分析。本研究成功建立了FMDV三重FQ-pcr方法，实现了一步法对FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型病原样品的鉴别检测。该方法可特异性扩增FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型标准株细胞培养物，但对猪水疱性口炎病毒(VSV)等7种病原及阴性对照未出现扩增，特异性较强；对FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型阳性重组质粒标准品的最低检出限均可达到10 拷贝/μL，敏感性较高；批内/批间试验变异系数在0.48%～1.55%，重复性较好；利用建立的三重FQ-pcr方法对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，检测结果与基因测序结果完全一致，优于rt-pcr方法。本研究建立的三重FQ-pcr方法具有敏感性高、特异性强，在同一反应体系中能同时鉴别检测出FMDV O型、A型和AsiaⅠ型等优点，能满足临床鉴别检测的需求。

关键词：口蹄疫病毒三重实时荧光定量rt-pcr 应用

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甲型肝炎病毒、帕斯拉属和罗卡属戊型肝炎病毒三重荧光定量rt-pcr检测方法的建立和应用

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中华实验和临床病毒学杂志 2025年第1期39卷 115-121页

作者：毕敬琛尹文娇杨磊河北医科大学公共卫生学院石家庄050017 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 河北省环境与人群健康重点实验室石家庄050017

目的为弥补目前临床检验方法对肝炎患者感染来自啮齿动物的罗卡属(genus Rocahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-C)的漏检情况,以及与甲型肝炎病毒(HAV)感染进行快速鉴别,本研究建立一种可同时检测HAV、帕斯拉属(genus Paslahepevirus)戊型肝... 详细信息

目的为弥补目前临床检验方法对肝炎患者感染来自啮齿动物的罗卡属(genus Rocahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-C)的漏检情况,以及与甲型肝炎病毒(HAV)感染进行快速鉴别,本研究建立一种可同时检测HAV、帕斯拉属(genus Paslahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-A)和HEV-C的三重实时荧光定量rt-pcr(qrt-pcr)检测方法。方法选取3对扩增引物和3条TaqMan探针,对反应体系及扩增温度进行优化,构建三重qrt-pcr方法;利用质粒建立标准曲线,并评价该方法的灵敏度;利用其它标本评价特异度;利用HAV、HEV-A和HEV-C的核酸进行稳定性评价;对疑似甲型或戊型肝炎病例标本进行检测,并与HAV(或HEV)IgM抗体和巢式rt-pcr(nrt-pcr)检测结果比较。结果三重qrt-pcr的三条标准曲线的相关系数R 2均大于0.99,斜率均接近-3.3;对HAV、HEV-A和HEV-C质粒的最低检出限分别为8拷贝/μl、5拷贝/μl和8拷贝/μl;与乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等无交叉反应;批内和批间试验变异系数均小于5%。HAV IgM抗体检测法、HAV nrt-pcr和三重qrt-pcr对疑似甲型肝炎病例血清的检测阳性率分别为95.1%(58/61)、83.6%(51/61)和83.6%(51/61),其中HAV IgM抗体检测法与HAV nrt-pcr(或三重qrt-pcr)的检测一致率为85.2%(52/61),差异具有统计学意义(χ^(2)=4.00,P=0.039)。HEV IgM抗体检测法、HEV nrt-pcr和三重qrt-pcr对疑似戊型肝炎病例血清的检测阳性率分别为89.7%(61/68)、69.1%(47/68)和72.1%(49/68),其中HEV IgM抗体检测法与三重qrt-pcr的检测一致率为79.4%(54/68),差异具有统计学意义(χ^(2)=8.64,P=0.002);HEV nrt-pcr和三重qrt-pcr对疑似戊型肝炎病例粪便的检测阳性率分别为80.0%(20/25)、76.0%(19/25),检测一致率为96%(24/25),差异无统计学意义(χ^(2)=0,P>0.05)。结论本研究建立了一种可同时快速检测甲型肝炎病毒、帕斯拉属或罗卡属戊型肝炎病毒的三重实时荧光定量rt-pcr检测方法,其灵敏度、特异度和稳定性高,适用于新近感染甲型肝炎病毒或戊型肝炎病毒患者标本的快速检测。

关键词：甲型肝炎病毒帕斯拉属戊型肝炎病毒罗卡属戊型肝炎病毒三重实时荧光定量rt-pcr

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PPRV、RVFV、SBV三重普通及实时荧光定量rt-pcr检测方法的建立及其初步应用研究

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现代畜牧兽医 2021年第2期 5-11页

作者：赵文华李富祥杨仕标云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

为同时检测小反刍兽疫病毒(PPRV)、裂谷热病毒(RVFV)及施马伦贝格病毒(SBV) 3种外来动物疫病病原,根据GenBank相关病毒序列设计引物及探针,建立PPRV、RVFV、SBV三重普通rt-pcr及三重实时荧光定量rt-pcr检测方法,并初步应用于临床检测。... 详细信息

为同时检测小反刍兽疫病毒(PPRV)、裂谷热病毒(RVFV)及施马伦贝格病毒(SBV) 3种外来动物疫病病原,根据GenBank相关病毒序列设计引物及探针,建立PPRV、RVFV、SBV三重普通rt-pcr及三重实时荧光定量rt-pcr检测方法,并初步应用于临床检测。结果显示:所建立的PPRV、RVFV、SBV三重普通rt-pcr方法可同步特异性检测PPRV、RVFV、SBV,检测敏感度可达10~3 copies/μL DNA;对临床症状相似的羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、蓝舌病及鹿流行性出血热等病毒未有扩增。所建立的PPRV、RVFV、SBV三重实时荧光定量rt-pcr方法对PPRV、RVFV、SBV有特异荧光信号,检测敏感度可达10~(1.33)~10~(2.13) copies/μL DNA;而对临床症状相似羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、蓝舌病及鹿流行性出血热等病毒未有荧光信号。应用PPRV、RVFV、SBV三重实时荧光定量rt-pcr方法检测925份临床样本,检出一例PPRV阳性样本,经常规rt-pcr扩增及序列测定Blast确定为PPRV谱系IV型毒株。研究所建立的PPRV、RVFV、SBV三重普通rt-pcr方法和三重实时荧光定量rt-pcr方法可同步特异性检测3种病原,并初步应用于临床样本的检测。

关键词：小反刍兽疫病毒裂谷热病毒施马伦贝格病毒三重普通rt-pcr 三重实时荧光定量rt-pcr

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寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒三重荧光定量rt-pcr检测方法的建立及评价

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病毒学报 2018年第1期34卷 52-58页

作者：龚雪蕊李阿茜刘洋李川张全福李德新梁米芳王世文中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室

本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶... 详细信息

本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶标区域设计三组特异性引物探针,建立三重实时荧光定量rt-pcr检测方法。用ZIKV、DENV、CHIKV病毒体外转录RNA和病毒细胞培养物对该方法的灵敏性、特异性、重复性等方面进行评价,最后临床样本以及模拟标本验证。结果显示：三重实时荧光定量rt-pcr检测方法扩增效率均可达到90%以上,三种病毒体外转录RNA最低检测限均低于15拷贝/pcr,病毒培养物最低检出限均低于10PFU/mL且与单重检测方法无明显差异。与其他病毒无交叉反应,变异系数均在2%以内。临床标本及模拟标本检出率均可达95%以上。本研究建立的检测寨卡病毒、登革病毒以及基孔肯雅病毒的三重实时荧光rt-pcr方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于寨卡病毒病等相关临床标本的检测。

关键词：三重实时荧光定量rt-pcr 寨卡病毒(ZIKV) 登革病毒(DENV) 基孔肯雅病毒(CHIKV)

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几种外来动物病毒多重普通和实时荧光定量rt-pcr检测方法的建立及其初步应用

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中国兽医杂志 2022年第2期58卷 27-33,38页

作者：赵文华李富祥杨仕标云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录pcr(... 详细信息

为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录pcr(rt-pcr)和实时荧光定量rt-pcr检测方法,并在采集的临床样本检测中进行初步应用验证。结果显示:建立的PPRV/BTV8/EHDV1三重实时荧光定量rt-pcr检测方法仅对PPRV、BTV8和EHDV1有特异荧光信号,检测敏感度可达10^(1.70)~10^(2.08) copies/μL DNA;建立的PPRV/BTV8/EHDV1/AHSV四重普通rt-pcr方法可特异性同步检测PPRV、BTV8、EHDV1和AHSV,检测敏感度可达10^(3) copies/μL DNA;2种方法对羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、牛病毒性腹泻等临床相似的病毒均无扩增。在925份临床样本中检测出1例PPRV核酸阳性样本;经核苷酸序列测定及BLAST比对确定为谱系Ⅳ型PPRV毒株序列。本试验所建立的三重实时荧光定量rt-pcr检测方法和四重普通rt-pcr方法可特异性同步检测相应的3种或4种病毒病原,且具有临床样本检测的应用潜力。

关键词：小反刍兽疫病毒蓝舌病病毒8型流行性出血热病毒1型非洲马瘟病毒四重普通rt-pcr 三重实时荧光定量rt-pcr

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