检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肿瘤防治杂志 2013年第1期20卷 75-80页

作者：郑智坤刘文超西安市第四军医大学西京医院肿瘤中心陕西西安710032

目的:总结国内外上皮细胞间质转化与miR-200家族及肿瘤细胞耐药中的研究进展。方法:应用PubMed、CNKI及维普数据库以"EMT、miR-200和肿瘤耐药"为关键词,检索2000-2012年相关文献。共检索到英文文献5 789条,中文文献9条。纳入... 详细信息

目的:总结国内外上皮细胞间质转化与miR-200家族及肿瘤细胞耐药中的研究进展。方法:应用PubMed、CNKI及维普数据库以"EMT、miR-200和肿瘤耐药"为关键词,检索2000-2012年相关文献。共检索到英文文献5 789条,中文文献9条。纳入标准:1)上皮细胞间质转化的特性与功能;2)miR-200家族成员主要功能;3)EMT及miR-200与肿瘤耐药的关系;4)针对EMT及miR-200为靶点进行逆转肿瘤细胞耐药性的研究。根据纳入标准符合分析的文献共54篇。结果:EMT同诱导肿瘤细胞侵袭性改变以及获得性耐药的发生息息相关,miR-200家族在肿瘤细胞中的表达下调同样可以导致肿瘤耐药形成,且EMT与miR-200间可能存在一定联系,以EMT与miR-200为靶点逆转肿瘤细胞耐药性取得一定成效。结论:上皮细胞间质转化与miR-200在诱导肿瘤细胞耐药机制中有着重要作用,从两者入手是解决肿瘤细胞获得性耐药的可能途径。

关键词：肿瘤抗药性上皮细胞间质转化 miR-200

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食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第1期50卷 40-47页

作者：高凤霞吴剑任德莲西南医科大学免疫学教研室泸州646000

目的探讨食管鳞癌上皮细胞间质化(EMT)对自然杀伤(NK)细胞生物学活性的影响。方法通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞... 详细信息

目的探讨食管鳞癌上皮细胞间质化(EMT)对自然杀伤(NK)细胞生物学活性的影响。方法通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组(NC组)、EC9706细胞上清液刺激-NK组(EC9706组)与KYSE150细胞上清液刺激-NK组(KYSE150组),将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达。10ng/mL转化生长因子-β(TGF-β)处理KYSE150细胞株7d诱导EMT化后,收集KYSE150EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡。结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株(EC9706和KYSE150)用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%。不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义。与KYSE150上清刺激比较,KYSE150EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义。结论食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸。

关键词：食管鳞癌自然杀伤细胞上皮细胞间质转化生物学活性增殖与凋亡

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力达霉素对人宫颈癌Hela细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化能力的影响

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中国药理学通报 2019年第10期35卷 1406-1415页

作者：徐珊周游刘钰妮王世恩杨建林王艳林曹春雨三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室湖北宜昌443002 宜昌市疾病预防控制中心健康管理服务中心湖北宜昌443000

目的研究力达霉素(LDM)对Hela细胞的细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法MTT法分析LDM对Hela细胞增殖的影响;流式细胞术检测LDM对Hela细胞的细胞周期、细胞凋亡的影响;Westernblot检测细胞内相关蛋白... 详细信息

目的研究力达霉素(LDM)对Hela细胞的细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法MTT法分析LDM对Hela细胞增殖的影响;流式细胞术检测LDM对Hela细胞的细胞周期、细胞凋亡的影响;Westernblot检测细胞内相关蛋白的表达水平;Transwell法分析LDM对Hela细胞迁移、侵袭能力的影响;QT-PCR分析LDM对Hela细胞赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达的影响。结果LDM明显抑制Hela细胞增殖,其不同处理时间的IC50值分别为19.24ng·mL^-1(24h)、6.678ng·mL^-1(48h)和3.221ng·mL^-1(72h)。LDM可诱导Hela细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡。低浓度LDM(5ng·mL^-1)可诱导Hela细胞发生自噬,但高浓度LDM(20ng·mL^-1)则抑制Hela细胞的自噬水平。LDM抑制Hela细胞迁移和侵袭,改变EMT相关因子的蛋白表达水平,且这一过程与LSD1无关。结论LDM能抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭转移,其作用机制可能与阻遏细胞周期、诱导细胞凋亡、干扰细胞自噬和抑制EMT密切相关。

关键词：力达霉素宫颈癌 Hela细胞细胞凋亡细胞自噬上皮细胞间质转化

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具核梭杆菌介导的上皮细胞间质转化对结直肠癌干细胞恶性潜能的影响

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中华肿瘤防治杂志 2022年第17期29卷 1256-1263页

作者：郭怀娟茅静贤陶明阳朱思源王颖严雪冰扬州大学附属医院肿瘤科江苏扬州225000

目的通过体外内实验明确具核梭杆菌(F_(n))对结直肠肿瘤干细胞(CSCs)恶性潜能的影响并初步探讨相关分子机制。方法采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系HCT-116、HT-29、LOVO、SW480和SW620中CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群比例,并选择比例最... 详细信息

目的通过体外内实验明确具核梭杆菌(F_(n))对结直肠肿瘤干细胞(CSCs)恶性潜能的影响并初步探讨相关分子机制。方法采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系HCT-116、HT-29、LOVO、SW480和SW620中CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群比例,并选择比例最高的细胞系进行筛选。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、克隆形成及Transwell实验分别检测F_(n)干预后CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力的改变。将裸鼠随机分为F_(n)干预组和对照组,构建裸鼠皮下移植瘤模型,明确F_(n)干预后CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群体内成瘤能力的改变。采用蛋白质印迹法检测F_(n)干预后CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群中上皮标志物、间质标志物及细胞增殖指标的表达水平。结果流式细胞术检测发现HCT-116细胞系中CD133^(+)CD44^(+)细胞亚群所占比例最高,为(87.59±0.37)%,因此选择该细胞系用于后续实验。CCK-8实验结果表明,F_(n)干预(F_(组别)=156.53,P_(组别)<0.001)及生长天数(F_(天数)=410.79,P_(天数)<0.001)的主效应差异有统计学意义,且两者联合有协同交互作用(F_(组别×天数)=19.83,P_(组别×天数)<0.001)。F_(n)干预组的克隆形成数目多于对照组,t=19.11,P<0.001。F_(n)干预组的细胞侵袭和迁移数量分别为(115.67±8.14)和(131.00±6.56)个,均高于对照组,均P<0.05。F_(n)干预组及对照组的皮下移植瘤体积分别为(1.66±0.57)和(0.69±0.23)cm^(3),重量分别为(1.66±0.40)和(0.58±0.24)g,均P<0.05。免疫组化实验结果显示,F_(n)干预组皮下移植瘤中Ki-67染色阳性率〔(80.60±5.86)%〕高于对照组〔(60.40±11.99)%〕,t=3.39,P=0.016。蛋白质印迹实验显示,F_(n)干预组较对照组E-cadherin表达水平下调,而N-cadherin、Snail及增殖细胞核抗原的表达水平上调。结论F_(n)通过调控上皮细胞间质转化促进CD133^(+)CD44^(+)结直肠癌细胞亚群的体内外恶性潜能,因此,靶向F_(n)有望成为抑制结直肠CSCs进而预防肿瘤复发转移的新策略。

关键词：具核梭杆菌肿瘤干细胞上皮细胞间质转化结直肠癌生物标志物

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两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化模型转录调控因子的比较及意义

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中华男科学杂志 2010年第2期16卷 137-141页

作者：吴开杰曾津朱国栋张栋薛艳陈玉乐王新阳贺大林西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的:初步筛选、对比决定两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化(EMT)模型(LNCaP/HIF1α细胞模型、ARCaP细胞模型)表型的转录因子,为利用这两个模型深入研究前列腺癌转移机制奠定基础。方法:分别体外培养LNCaP/HIF1α细胞模型中的LNCaP细胞... 详细信息

目的:初步筛选、对比决定两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化(EMT)模型(LNCaP/HIF1α细胞模型、ARCaP细胞模型)表型的转录因子,为利用这两个模型深入研究前列腺癌转移机制奠定基础。方法:分别体外培养LNCaP/HIF1α细胞模型中的LNCaP细胞、稳定高表达缺氧诱导因子HIF1α的LNCaP细胞和ARCaP细胞模型中的IF11细胞、IA8细胞,提取总RNA行RT-PCR,检测目前发现的决定EMT表型的5种转录因子(Snail、Slug、ZEB1、SIP1、Twist1),对比两种模型的差异。结果:LNCaP/HIF1α细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达5种转录因子,其中Slug、Twist1有差异,表型转化后Slug表达升高,而Twist1表达降低(P<0.05);ARCaP细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达Snail、Slug、ZEB1、SIP1,不表达Twist1,其中ZEB1、Slug有差异,表型转化后ZEB1、Slug表达升高(P<0.05)。结论:决定不同来源的前列腺癌EMT模型表型转化的转录调控机制各不相同,Slug可能是决定HIF1α诱导LNCaP细胞EMT表型转化的关键转录因子,而ZEB1、Slug则可能在ARCaP细胞EMT表型转化中起决定作用。

关键词：前列腺癌 LNCaP/HIF1α模型 ARCaP模型上皮细胞间质转化转录因子

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贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

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现代药物与临床 2021年第10期36卷 1993-1998页

作者：李军芳来利红河南科技大学第一附属医院河南洛阳471000 河南科技大学第一附属医院心血管内科河南洛阳471000

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10... 详细信息

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P<0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P<0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P<0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P<0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P<0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P<0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P<0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P<0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P<0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。

关键词：贝那普利肾小管上皮细胞氧化低密度脂蛋白上皮细胞间质转化转化生长因子-β

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养清尘肺方对矽肺模型大鼠上皮细胞间质转化的影响

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中国职业医学 2022年第6期49卷 601-609页

作者：王相成李建生田燕歌河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南省中医药防治呼吸病重点实验室河南郑州450046 河南中医药大学中医药科学院河南郑州450046

目的探讨养清尘肺方(YCF)对矽肺模型大鼠肺组织上皮细胞间质转化的影响。方法选择无特定病原体级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、汉防己甲素组和YCF组,每组8只。后3组大鼠均一次性气管内注入l.00 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅... 详细信息

目的探讨养清尘肺方(YCF)对矽肺模型大鼠肺组织上皮细胞间质转化的影响。方法选择无特定病原体级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、汉防己甲素组和YCF组,每组8只。后3组大鼠均一次性气管内注入l.00 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅混悬液,对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液;于造模后第15天,汉防己甲素组大鼠予汉防己甲素27.0 mg/kg体质量,YCF组大鼠予YCF 8.91 g/kg体质量,对照组和模型组大鼠均予2.00 mL的0.9%氯化钠溶液;每日早、晚共灌胃2次,连续灌胃14 d。实验第29天检测各组大鼠潮气量、功能残气量(FRC)和肺活量后,分离大鼠肺组织,采用苏木素-伊红染色法和Masson染色观察肺组织病理情况并进行纤维化评分,采用比色法检测羟脯氧酸水平,采用免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,采用免疫荧光法检测上皮细胞黏附分子(EpCAM)和成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)表达。结果对照组大鼠肺组织结构完整,肺泡结构基本正常;模型组大鼠肺泡结构破坏,肺泡壁增厚,可见细胞性结节;汉防己甲素组和YCF组大鼠肺组织病变均较模型组减轻,且该两组间病变程度无差异。与对照组比较,模型组大鼠潮气量、FRC和肺活量均降低(P值均<0.05),肺组织中E-Cad蛋白相对表达水平降低(P<0.05),纤维化评分和肺组织中羟脯氨酸、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、N-Cad和α-SMA蛋白相对表达水平均增加(P值均<0.05),EpCAM蛋白荧光强度降低,而FSP-1蛋白荧光强度增加。与模型组比较,汉防己甲素组和YCF组大鼠潮气量、FRC和肺活量均增加(P值均<0.05),肺组织纤维化评分、羟脯氨酸水平和COL-Ⅰ、N-Cad、α-SMA蛋白相对表达水平均降低(P值均<0.05),E-Cad蛋白相对表达水平均增加(P值均<0.05),EpCAM蛋白荧光强度均增加,FSP-1蛋白荧光强度均降低。与汉防己甲素组比较,YCF组大鼠仅肺组织中N-Cad相对表达水平降低(P<0.05)。结论YCF能够改善二氧化硅诱导的矽肺模型大鼠肺功能和胶原沉积,抑制肺组织上皮细胞间质转化,从而改善矽肺纤维化进程。

关键词：养清尘肺方矽肺上皮细胞间质转化肺纤维化胶原大鼠

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丙戊酸通过抑制肺泡上皮细胞间质转化减轻肺纤维化的实验研究

丙戊酸通过抑制肺泡上皮细胞间质转化减轻肺纤维化的实验研究

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作者：陈林华中科技大学

学位级别：博士

第一部分丙戊酸通过降低Smad2/3磷酸化水平抑制TGF-β1引起的肺泡上皮细胞间质转化目的上皮细胞间质转化(EMT)是成纤维细胞的来源之一,其参与了纤维化的发生发展。本研究旨在探讨丙戊酸在EMT过程中可能存在的作用及有关机制。方法采用T... 详细信息

第一部分丙戊酸通过降低Smad2/3磷酸化水平抑制TGF-β1引起的肺泡上皮细胞间质转化目的上皮细胞间质转化(EMT)是成纤维细胞的来源之一,其参与了纤维化的发生发展。本研究旨在探讨丙戊酸在EMT过程中可能存在的作用及有关机制。方法采用TGF-β1处理肺泡上皮细胞A549建立EMT模型,蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测EMT相关蛋白的表达情况。MTT法检测不同浓度的丙戊酸对A549细胞活性的影响。采用蛋白免疫印迹法检测丙戊酸处理的浓度及时间对TGF-β1引起的EMT的影响。进一步确认特定浓度的丙戊酸能否抑制TGF-βl引起的EMT,检测其对上皮细胞标志E-cadherin和间质细胞标志Vimentin表达的影响,同时检测该过程中Akt和Smad2/3的激活情况。接着分别使用PI3k-Akt抑制剂(LY294002)和Smad2/3抑制剂(A8301)处理细胞,检测它们在EMT中的作用并与丙戊酸进行对比。结果使用TGF-β1处理肺泡上皮细胞48小时后成功观察到上皮细胞间质转化,A549细胞中E-cadherin表达降低的同时Vimentin的表达增加,而且细胞失去正常的极性,细胞形态呈现类似于成纤维细胞的长梭形。低浓度的丙戊酸对A549细胞活性没有影响。丙戊酸抑制EMT呈时间和浓度依赖性,细胞在造模前72小时进行浓度为1mM的丙戊酸处理可以显著抑制由TGF-β1引起的EMT。丙戊酸预处理在抑制EMT的过程中可以降低Akt和Smad2/3的磷酸化水平。LY294002可以明显下调p-Akt的表达,但是并不能抑制TGF-β1引起的EMT,而A8301在下调p-Smad2/3表达的同时可以抑制 EMT。结论1mM丙戊酸预处理细胞72小时可以抑制由TGF-βl引起的肺泡上皮细胞EMT,这一作用依赖于Smad2/3失活而不是降低Akt磷酸化水平。第二部分丙戊酸通过抑制肺泡上皮细胞EMT减轻博来霉素引起的小鼠肺纤维化目的上皮细胞向间质细胞转化在肺纤维化过程中扮演着重要角色,且在纤维化过程中组蛋白去乙酰化酶呈过度表达。本研究旨在探讨丙戊酸(一种HDACs抑制剂)在肺纤维化小鼠中可能存在的作用。方法采用博来霉素气管内滴注法建立小鼠肺纤维化模型。观察不同剂量的丙戊酸对肺纤维化小鼠生存率、体重和肺组织的影响。肺组织切片行HE染色和Masson染色判断肺纤维化程度。收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)并测定其中蛋白质含量以及炎症细胞因子的浓度。检测肺组织中羟脯氨酸含量。蛋白免疫印迹以及组织免疫荧光染色检测肺组织中E-cadherin和Vimentin的表达。LY294002和A8301用来检测相关信号通路在肺纤维化中的作用。结果与肺纤维化小鼠相比,丙戊酸(l00mg/kg和200mg/kg)可以提高小鼠的存活率并减少体重丢失,且可以减轻肺组织纤维化程度。丙戊酸和Smad2/3抑制剂A8301均显著提高了肺纤维化小鼠的生存率且减少了体重丢失,肺纤维化程度减轻,肺组织结构恢复,它们还可以降低BALF中蛋白含量及炎症因子的浓度并减少肺组织中羟脯氨酸含量,然而LY294002除了降低小鼠BALF中炎症因子浓度以外并没有在整体和组织水平减轻肺纤维化。丙戊酸治疗增加了肺纤维化小鼠肺组织中E-cadherin的表达并减少了 Vimentin的表达,EMT被抑制,这一效应与Smad2/3磷酸化减少相关;A8301治疗也可以抑制小鼠肺组织中的EMT但是LY294002不能抑制EMT。结论丙戊酸可以提高肺纤维化小鼠的生存率并通过抑制EMT减轻肺组织纤维化程度。

关键词：肺上皮细胞上皮细胞间质转化丙戊酸转化生长因子-β 组蛋白去乙酰化酶肺纤维化丙戊酸

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KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化的促进作用

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中华消化外科杂志 2013年第8期12卷 586-591页

作者：孙诚谊江建新潘耀振詹磊贵阳医学院附属医院肝胆外科 550001

目的研究KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化（EMT）的调节作用。方法构建LV-plenti-GFP。KAP-1慢病毒载体。将Capan-2细胞分为实验组（转染LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体）、阴性对照组（转染空载体）以及空白对照组1（含10％... 详细信息

目的研究KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化（EMT）的调节作用。方法构建LV-plenti-GFP。KAP-1慢病毒载体。将Capan-2细胞分为实验组（转染LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体）、阴性对照组（转染空载体）以及空白对照组1（含10％小牛血清的1640培养基）；而后再将实验组Capan-2细胞分为抑制剂组（转染化学合成的miR-100-5p抑制剂）、空载体对照组（转染无关序列micro-RNAs抑制剂）、空白对照组2（含10％小牛血清的1640培养基）。用双酶切及测序鉴定慢病毒并计算病毒滴度。LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体稳定转染至Capan-2细胞后，观察细胞的形态学改变。应用实时定量PER检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白以及miR-100-5pmRNA的表达情况。应用Westernblot法检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白表达水平。计量资料采用x-±s表示，组间比较均采用方差分析。结果成功构建LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体，病毒滴度为2×10^8 TU／ml。慢病毒载体转染Capan-2细胞48h后，实验组细胞与对照组比较其形态有明显间质样改变。实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白mRNA的相对表达量：KAP-1分别为1．77±0．83、5．03±0．29、5．13±1．14，N-钙黏蛋白分别为2．62±0．71、5．07±1．53、5．81±1．49，波形蛋白分别为2．50±0．21、3．83±0．57、4．92±0．90，E-钙黏蛋白分别为7．20±1．17、7．83±0．78、3．07±0．36，miR-100-5p分别为1．81±0．40、7．01±0．96、6．87±0．35，3组比较，差异有统计学意义（F=5．99，7．62，7．88，6．62，4．64，P〈0．05）。抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1mRNA的相对表达量分别为1．56±0．42、4．89±0．61、5．20±0．38，3组比较，差异有统计学意义（F=5．14，P〈0．05）；波形蛋白mRNA的相对表达量分别为3．10±1．37、3．44±0．94、3．08±1．16，3组比较，差异无统计学意义（F=0．49，P〉0．05）。Westernblot检测结果表明：实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白的相对表达量：KAP-1蛋白分别为2．77±1．99、0．83±0．46、0．71±0．26，N-钙黏蛋白分别为1．31±0．38、0．41±0．37、0．08±0．04，波形蛋白分别为4．25±0．63、1．03±0．33、1．37±0．92，E-钙黏蛋白分别为0．62±0．06、1．17±0．45、3．04±0．65，3组比较，差异有统计学意义（F=5．54，4．68，3．19，8．18，P〈0．05）。抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1蛋白的相对表达量分别为2．27±0．71、0．56±0．43、0．61±0．39，3组比较，差异有统计学意义（F=4．81，P〈0．05）；波形蛋白分别为3．19±0．55、3．93±0．06、3．61±0．73，3组比较，差异无统计学意义（F=0．04，P〉0．05）。结论KAP-1转录因子通过特异性调控其下游miR-100-5p表达，从而促进人类胰腺癌细胞Capan-2EMT。

关键词：胰腺肿瘤 KAP-1 上皮细胞间质转化微小RNA

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SIN1通过调控上皮细胞间质转化促进肝细胞癌侵袭转移

SIN1通过调控上皮细胞间质转化促进肝细胞癌侵袭转移

引用

作者：徐江锋中南大学

学位级别：博士

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界上最为常见的恶性肿瘤之一。其发病率居男性恶性肿瘤的第五位,死亡率居男性恶性肿瘤第二位。全球每年新发病例约748300人,年死亡病例达695900人。随着肝脏外科技术的进步,肝癌的... 详细信息

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界上最为常见的恶性肿瘤之一。其发病率居男性恶性肿瘤的第五位,死亡率居男性恶性肿瘤第二位。全球每年新发病例约748300人,年死亡病例达695900人。随着肝脏外科技术的进步,肝癌的手术治疗水平已有显著提高,但其术后5年复发转移率仍高达70%,严重制约了肝癌患者整体治疗水平的提高。因此,深入研究肝癌复发转移的机制,探索有效的预防和治疗复发转移的手段是当今肝癌研究的热点,对于进一步提高肝癌患者整体治疗水平具有十分重要的意义。应激活化蛋白激酶作用蛋白1（SAPK interacting protein1,SIN1）新近发现的胚胎发育关键蛋白。SIN1被认定为TORC2关键组成成分,可通过调控AKT磷酸化影响AKT下游信号通路。众所周知,AKT信号通路对包括肝癌在内的恶性肿瘤的侵袭转移发挥着重要的作用,尤其是近年来大量研究发现AKT信号通路可以调控上皮细胞间质转化,从而促进肿瘤转移。这些均提示SIN1很可能在肝癌的侵袭转移中发挥重要作用。为此,本课题试图研究SIN1在肝癌组织样本及肝癌细胞系中表达水平,并结合随访资料,分析SIN1与肝癌临床病例特征的关联以及SIN1与肝癌患者生存预后的关系。我们利用siRNA干扰技术在肝癌细胞系中抑制SIN1的表达,从体外和体内研究SIN1对肝癌侵袭转移的作用,并探讨了SIN1对肝癌上皮细胞间质转化的调控作用。以期阐明SIN1在肝癌侵袭转移中的作用及其作用机制。我们的研究结果表明： ***1mRNA和蛋白在肝癌组织和肝癌细胞系中显著高表达首先我们通过实时定量PCR检测了30对肝癌组织以及相应癌旁组织中SIN1mRNA的表达水平,结果显示SIN1mRNA在肝癌组织中显著高表达（中位值为2.2倍）。通过western blot检测SIN1蛋白在肝癌组织以及相应癌旁组织中的表达,结果表明SIN1蛋白在肝癌组织中的表达水平显著高于邻近非癌肝组织（P＜0.05）。通过进一步分层分析我们发现,SIN1在孤立性大肝癌（SLHCC）中的表达水平显著低于结节性肝癌（NHCC）（P=0.016）,而与小肝癌（SHCC）之间则没有显著差别（P＞0.05）。我们进一步采用real-time PCR和western blot检测了SIN1mRNA及蛋白在正常肝细胞系L02,以及五种不同的肝癌细胞系HepG2、MHCC97-L、MHCC97-H、 HCCLM3和3MMC-7721中的表达水平。实验结果显示：SIN1在肝癌细胞系中的表达水平显著高于正常肝细胞系LO2（P＜0.05）,且SIN1在肝癌细胞系中的表达水平随着各肝癌细胞系侵袭转移潜能的增强而增高,提示SINl与肝癌的侵袭转移密切相关。同时,我们还选取了SIN1表达水平最高的HCCLM3和MHCC97-H细胞系作为下一步的研究对象。 ***1表达水平与肝癌临床病理特征及预后的关系通过免疫组化检测SIN1在60对肝癌组织和相应癌旁组织中的表达,结果同样表明其在肝癌组织呈显著高表达,且SIN1高表达组的总体生存率和无瘤生存率均显著低于SIN1低表达组（P＜0.05）,提示SIN1高表达组的肝癌病人预后较差。而且研究尚发现SIN1表达水平与肿瘤结节个数（P=0.012）,包膜形成（P=-0.037）,血管浸润（P=0.023）,及TNM分期（P=0.020）密切相关。 ***1在体外能显著增强肝癌细胞的运动和侵袭能力为了研究SIN1在体外对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响,我们首先构建了SIN1siRNA,通过慢病毒转染SIN1相对高表达的HCCLM3和MHCC97-H细胞系,采用western blot验证SIN1siRNA干扰效率。通过划痕愈合实验和Transwell侵袭小室实验研究SIN1对肝癌细胞系HCCLM3和MHCC97-H侵袭运动能力的影响。划痕愈合实验结果显示HCCLM3SIN1-RNA1迁移运动能力较HCCLM3NC细胞明显减弱（95%versus45%,P＜0.05）;Transwell实验结果显示HCCLM3SIN1-RNAi细胞侵袭能力较HCCLM3NC细胞明显下降（161±8versus56±13,P＜0.05）;同样,在MHCC97-H细胞系中也得到了相似的结果（P＜0.05）。提示下调SIN1的表达可显著抑制肝癌细胞的侵袭运动能力。 ***1在体内能促进肝癌转移为了研究SIN1在体内对肝癌侵袭转移的作用,我们构建了人肝癌细胞裸鼠肝脏原位种植模型。我们选择侵袭转移潜能最强同时也是SIN1表达水平最高的细胞系HCCLM3来进行研究,结果显示,HCCLM3SIN1-RNAi组肝癌肝内转移结节数目较HCCLM3NC组明显减少（7±3v

关键词： SIN1 肝细胞癌上皮细胞间质转化侵袭转移预后

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