检索结果-内蒙古大学图书馆

贵州医科大学学报 2019年第10期44卷 1134-1139页

作者：王圆圆刘慧铭梁露群张会芳向珈谊郭兵贵州医科大学基础医学院病理生理教研室贵州贵阳550025 贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室贵州贵阳550025

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)是否通过转录共抑制因子(SnoN)影响高糖介导大鼠肾小管上皮细胞纤维病变。方法:将体外培养NRK-52E细胞分为对照组(NG组,正常糖培养液培养)、高糖对照组(HG组,高糖培养液培养)、10μg/LrhHGF干预组(低剂量rh... 详细信息

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)是否通过转录共抑制因子(SnoN)影响高糖介导大鼠肾小管上皮细胞纤维病变。方法:将体外培养NRK-52E细胞分为对照组(NG组,正常糖培养液培养)、高糖对照组(HG组,高糖培养液培养)、10μg/LrhHGF干预组(低剂量rhHGF组,10μg/LrhHGF高糖培养液培养)及20μg/LrhHGF干预组(高剂量rhHGF组,20μg/LrhHGF高糖培养液培养);培养48h时,采用Westernblot方法检测各组细胞SnoN、细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)信号通路及E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)蛋白的表达,qRT-PCR技术检测SnoNmRNA的表达。结果:与NG组相较,HG组细胞中α-SMA、Col-Ⅲ蛋白和活化的ERK1/2表达上调(P<0.05),E-cadherin、SnoN蛋白表达下调(P<0.05),SnoNmRNA表达增高(P<0.05);然而与HG组比较,在rhHGF干预组,10μg/L或20μg/LrhHGF均可使NRK-52E细胞α-SMA和Col-Ⅲ蛋白表达减少(P<0.05),而E-cadherin、SnoN蛋白和活化的ERK1/2表达增多(P<0.05),SnoNmRNA表达进一步增高(P<0.05)。结论:HGF阻断或对抗高糖介导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化和间质细胞外基质的沉积,其机制可能是通过活化ERK1/2通路上调SnoNmRNA表达实现。

关键词：糖尿病肾病肝细胞生长因子转录共抑制因子细胞外信号调节激酶肾小管上皮细胞上皮细胞-肌成纤维细胞转分化

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脉血康胶囊对UUO大鼠肾组织STAT3和α-SMA表达的动态研究

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重庆医学 2016年第24期45卷 3323-3326页

作者：郭庆喜蒲霞陈凯锋杨成万曹灵孙兴旺西南医科大学附属医院病理科四川泸州646000 中国人民解放军42医院病理科四川乐山614100 西南医科大学附属医院肾病内科四川泸州646000

目的动态观察脉血康胶囊对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织信号转导与转录激活因子-3(STAT3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨脉血康胶囊对防治肾脏间质纤维化的可能机制。方法将96只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、假手术组... 详细信息

目的动态观察脉血康胶囊对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织信号转导与转录激活因子-3(STAT3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨脉血康胶囊对防治肾脏间质纤维化的可能机制。方法将96只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、假手术组、模型对照组及脉血康组4个组,各24只,前3组给予生理盐水灌胃,脉血康治疗组术前3天开始给予脉血康溶液灌胃。于造模后第1、4、7、14天每组随机处死6只大鼠,动态观测肾组织形态学变化、纤维化情况及肾组织STAT3、α-SMA的表达。结果随梗阻时间延长,模型对照组及脉血康组肾小管上皮变性、萎缩,肾小管扩张,肾间质增宽,以模型对照组最明显。模型对照组和脉血康组肾小管上皮STAT3、α-SMA表达逐渐增高,与健康对照组及假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01),脉血康组与模型对照组相比较,STAT3、α-SMA表达减少(P<0.05)。结论脉血康胶囊可能是通过Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/STAT信号通路调节肾小管上皮细胞转分化,延缓UUO大鼠肾间质纤维化进程。

关键词：脉血康胶囊肾间质纤维化上皮细胞-肌成纤维细胞转分化信号转导与转录激活因子-3 α-平滑肌肌动蛋白

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TGF-β1／Smads调控与肾脏纤维化治疗研究进展

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实用中医药杂志 2016年第10期32卷 1041-1042页

作者：刘勇王锐施欣辛李颖陈明成都中医药大学临床医学院四川成都610075 成都中医药大学附属医院肾内科四川成都610072

肾脏纤维化是各种慢性肾脏病进展过程中的共同表现，其病理学基础主要是细胞外基质大量堆积。炎症介质、细胞因子、氧化应激等参与了整个病理环节。TGF-β1／Smads信号转导通路是肾脏纤维化最重要的通路，主要通过促进肾实质细胞的凋亡... 详细信息

肾脏纤维化是各种慢性肾脏病进展过程中的共同表现，其病理学基础主要是细胞外基质大量堆积。炎症介质、细胞因子、氧化应激等参与了整个病理环节。TGF-β1／Smads信号转导通路是肾脏纤维化最重要的通路，主要通过促进肾实质细胞的凋亡、肾小球及肾小管上皮细胞肥大，激活肾间质成纤维细胞，促进肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，增强ECM的合成并抑制其降解，导致ECM过度积聚，最终导致肾脏纤维化。因此，通过调控TGF-β1／Smads信号通路可望成为治疗肾脏纤维化的新靶点，拟为肾脏纤维化的防治提供新策略。

关键词： TGF-β1 肾脏纤维化 Smads 上皮细胞-肌成纤维细胞转分化肾小管上皮细胞肥大治疗调控肾间质成纤维细胞

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中间丝蛋白Nestin在肾小管上皮细胞转分化中表达的研究

中间丝蛋白Nestin在肾小管上皮细胞转分化中表达的研究

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作者：尤莉复旦大学

学位级别：博士

第一部分中间丝蛋白Nestin在间质纤维化动物模型肾小管上皮细胞转分化中表达的研究背景肾小管间质纤维化是一系列慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的决定性因素之一,肾小管上皮细胞—肌成纤维细胞转分化（Epithelial-myofibroblast transit... 详细信息

第一部分中间丝蛋白Nestin在间质纤维化动物模型肾小管上皮细胞转分化中表达的研究背景肾小管间质纤维化是一系列慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的决定性因素之一,肾小管上皮细胞—肌成纤维细胞转分化（Epithelial-myofibroblast transition,EMT）在间质纤维化过程中发挥了重要的致病作用。巢蛋白（Nestin）属于第Ⅵ类中间丝蛋白,可能在各种细胞骨架蛋白中起桥梁作用,参与调节整个细胞骨架结构的稳定。我们先前的研究于国内外率先发现:在肾脏发育阶段,Nestin一过性表达于分化未成熟的小管上皮细胞,而在分化成熟的小管上皮细胞中再无表达。肾间质纤维化时,由于EMT过程涉及肾小管上皮细胞的去分化以及细胞形态和迁移能力的改变,因而肾小管发育阶段曾表达的Nestin有可能重新表达于肾小管上皮细胞并发挥一定的作用。因此,我们通过构建单侧输尿管梗阻（UUO）的肾间质纤维化动物模型,观察肾小管EMT过程中是否出现Nestin的表达。方法选用60只200-250g雄性SD大鼠,建立UUO动物模型,以假手术大鼠为对照,分别于手术后3天、6天、11天和14天处死大鼠。Masson染色观察大鼠间质纤维化情况,免疫组化法检测大鼠TGFβ1、上皮细胞表型特异性标志物E-钙粘蛋白、肌成纤维细胞表型标志物-平滑肌肌动蛋白α（αSMA）及Nestin在肾脏的表达;免疫荧光共染色检测Nestin和E-钙粘蛋白/αSMA表达的关系;实时定量PCR法检测大鼠皮质Nestin mRNA水平;Western blot法检测Nestin、E-钙粘蛋白和αSMA的蛋白水平;Pearson法分析Nestin改变与皮质间质容量分数及E-钙粘蛋白、αSMA蛋白表达的相关性。结果与对照大鼠比,随着输尿管梗阻时间的延长,大鼠肾间质纤维化面积逐渐增加,术后3天为2.1%,6天达到12.2%,11天时为18.0%,14天间质有近30%的面积出现纤维化,均有统计学意义（P＜0.05）。UUO大鼠的间质和小管内出现TGFβ1的表达。与此同时,随梗阻时间延长,UUO大鼠肾小管上皮表型E-钙粘蛋白表达下降,11天时下降明显,14天时表达量几乎无法检测到(UUO11d0.34±0.041,UUO14d0.02±0.007 vs CON 1.19±0.087,P＜0.05);肌成纤维细胞表型αSMA自术后3天即呈时间依赖性增加（与对照比P＜0.05）。大鼠小管EMT的同时,间质和小管部位先后出现Nestin的表达,荧光染色显示UUO6天时大鼠Nestin表达于E-钙粘蛋白缺失的小管上皮,并部分与αSMA共表达。随手术时间延长,Nestin mRNA和蛋白水平均呈时间依赖性增加。Nestin蛋白水平与间质纤维化程度（r=0.816,P＜0.05）及αSMA蛋白水平（r=0.97,P＜0.05）呈正相关,与E-钙粘蛋白水平呈负相关（r=-0.816,P＜0.05）。结论（1）在UUO间质纤维化动物模型中,存在着肾小管上皮细胞的转分化;（2）伴随着EMT的发生,分化未成熟小管上皮细胞标志物Nestin再次表达;（3）Nestin的表达与肾间质纤维化程度及细胞表型特异性标志物的改变密切相关。第二部分Nestin在体外培养的人近端小管上皮细胞转分化中的研究背景肾小管上皮细胞是肾脏中生理功能最活跃的细胞之一,各种损伤因素,如缺血、缺氧、蛋白尿以及免疫炎症均可导致小管上皮细胞的损伤,损伤的小管上皮细胞发生活化,其细胞运动、迁移、吞噬等能力显著增强。而肾小管上皮细胞在组织发生过程中与间质成纤维细胞具有同源性,在一定的病理条件下可以发生上皮细胞—肌成纤维细胞转分化,直接参与肾间质纤维化损伤过程。Nestin作为中间丝蛋白的一种,在调控整个细胞骨架蛋白网络结构的稳定性中具有一定的作用,在肾脏发育早期,Nestin表达于分化未成熟的小管上皮细胞,参与其分化过程。我们前一部分的动物研究已经证实,分化未成熟小管上皮细胞标志物Nestin在肾间质纤维化小管EMT的过程中再次表达。因此,本部分研究将以体外培养的人近端小管上皮细胞（HKC）为观察对象,用TGFβ1诱导其转分化,体外验证小管EMT时,Nestin是否重新表达及其与肾小管上皮细胞去分化表型改变及细胞迁移能力的关系。方法体外人近端小管上皮细胞（HKC）培养,以5ng/ml转化生长因子β1（TGFβ1）干预不同时间,以非干预组为对照。实时定量PCR法检测Nestin mRNA水平,免疫荧光法及Western blot法检测Nestin、E-钙粘蛋白、αSMA的表达,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。结果

关键词：肾间质纤维化上皮细胞—肌成纤维细胞转分化巢蛋白 E-钙粘蛋白平滑肌肌动蛋白α 人近端小管上皮细胞转化生长因子β1 巢蛋白上皮细胞-肌成纤维细胞转分化细胞迁移巢蛋白上皮细胞—肌成纤维细胞转分化细胞迁移 RNA干扰

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大黄酸对高糖环境下肾小管上皮细胞转分化的影响

大黄酸对高糖环境下肾小管上皮细胞转分化的影响

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作者：陆小兰中南大学

学位级别：硕士

背景及目的糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病主要的微血管并发症之一,肾小管间质纤维化是糖尿病肾病进展为终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)的重要病理基础,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肾间质过量... 详细信息

背景及目的糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病主要的微血管并发症之一,肾小管间质纤维化是糖尿病肾病进展为终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)的重要病理基础,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肾间质过量堆积是其基本病理特征。目前认为肾间质ECM主要由肌成纤维细胞(myofibroblast,MyoF)产生。研究发现在病理条件下,肾小管上皮细胞可发生上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(Tubular epithelial-myofibroblasttransdifferentiation,TEMT),即丧失原有的上皮细胞表型特征:E-钙粘蛋白(E-Cadherin),而获得MyoF的新特征:α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),其是肾间质MyoF的重要来源。许多因素可诱导TEMT,而采用高糖模拟体内高血糖环境,肾小管上皮细胞是否发生TEMT?目前尚少见报道。大黄是临床治疗慢性肾脏病处方中使用频率很高的一味中药。大黄酸(Rhein)是从大黄蒽醌衍生物中分离出的一种前体组分,为大黄的主要有效成分。糖尿病肾病动物模型中大黄酸具有减少蛋白尿,减轻肾组织病变的作用,其机制是否与TEMT有关目前尚未见报道,本实验采用大黄酸干预高糖环境下肾小管上皮细胞,观察大黄酸是否对TEMT有影响,试从TEMT这一途径阐述糖尿病肾病可能的发病机制及大黄酸对其的影响。本研究模拟糖尿病高糖环境,体外培养人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),采用反映上皮细胞表型特征的E-Cadherin、反映MyoF表型特征的α-SMA和作为ECM成分之一的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)等指标,观察高糖单因素作用下是否存在TEMT;并用大黄酸干预处理,观察其对TEMT的影响,初步探讨大黄酸防治糖尿病肾病的可能机制。方法按下列实验条件分六组培养HK-2细胞:空白对照(N组),低糖(5.5mmol/l)DMEM培养基;甘露醇(含24.5 mmol/l D-甘露醇+5.5mM D-葡萄糖)对照组(M组);高糖(H组)葡萄糖浓度30mmol/L;高糖+大黄酸25ug/ml(H+25R组);高糖+大黄酸50ug/ml(H+50R组);高糖+大黄酸100ug/ml(H+100R组),于48h观察细胞形态,收集各组细胞,western-blotting法检测E-Cadherin、α-SMA和FN蛋白水平。结果高糖组与低糖组比较,E-Cadherin蛋白表达减少(P＜0.05),α-SMA和FN蛋白表达增多(P＜0.05);甘露醇组与低糖组比较,E-Cadherin蛋白、α-SMA和FN蛋白表达无明显差异(P＞0.05)。经大黄酸处理后的各大黄酸组与高糖组比较E-Cadherin蛋白表达上调(P＜0.05),α-SMA和FN蛋白表达下调(P＜0.05),且与大黄酸呈剂量依赖性关系。结论 1.高糖因素可导致HK-2细胞E-Cadherin蛋白表达减少,α-SMA和FN蛋白表达增加,提示高糖能促发TEMT。 2.大黄酸可抑制高糖环境下的HK-2细胞向MyoF转分化,阻抑TEMT,这可能是大黄酸防治DN的作用机制之一。

关键词：糖尿病肾病人近端肾小管上皮细胞上皮细胞-肌成纤维细胞转分化大黄酸

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大黄酸对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化与MMP-9/TIMP-1的影响

大黄酸对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化与MMP-9/TIMP-1的影响

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作者：李文星中南大学

学位级别：硕士

背景及目的糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）是引起慢性肾功能衰竭的主要病因之一。肾小管间质病变是包括糖尿病肾病（Diabeticnephropathy,DN）在内的慢性肾脏疾病（Chronic kidney disease,CKD）进展为终末期肾脏病（End-stage ... 详细信息

背景及目的糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）是引起慢性肾功能衰竭的主要病因之一。肾小管间质病变是包括糖尿病肾病（Diabeticnephropathy,DN）在内的慢性肾脏疾病（Chronic kidney disease,CKD）进展为终末期肾脏病（End-stage renal disease,ESRD）的共同病理基础,其核心特征是肾间质纤维化,细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）在肾间质过量堆积是肾间质纤维化基本病理特征。目前认为ECM主要由肌成纤维细胞（Myofibroblast,MyoF）分泌,MyoF是肾间质纤维化发生的重要效应细胞。有研究发现在病理条件下,肾小管上皮细胞可发生上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（Epithelial-myofibroblast transdifferentiation,EMT）,即丧失原有的上皮细胞表型特征,而获得MyoF的新特征。有文献报道,皮质中至少36%的MyoF来源于肾小管上皮细胞转分化,是肾间质MyoF的重要来源之一。基底膜是肾小管的重要结构之一,其不仅是肾小管上皮细胞的支撑结构,同时也影响着肾小管上皮细胞的行为,如维持正常状态下肾小管上皮细胞的上皮型表型。基质金属蛋白酶（Matrixmetalloproteinases,MMPs）是一类肽链内切酶的统称,其中MMP-9又称明胶酶B,主要降解Ⅳ型纤维,其裂解基底膜使得转分化而来的细胞进入肾脏间质是EMT关键步骤之一。另外,MMP-9与其特异性抑制物基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（Tissue inhibitor of metallopr-oteinases-1,TIMP-1）共同调节ECM的降解,MMP-9表达减少或活性下降、TIMP-1表达增加、活性增强都将促进肾间质纤维化的发生发展,研究发现MMP-9/TIMP-1较稳定,能够反映肾间质纤维化的严重程度。大黄（Rhubarb）是临床上治疗慢性肾脏病常用的中药,能有效减缓慢性肾脏病进程,具有肯定的肾脏保护作用,其延缓CKD进展的作用与其葸醌类化合物有着密切的关系。研究表明该类化合物能够抑制链脲菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾脏肥大以及系膜细胞的增殖、间质成纤维细胞的激活等。大黄酸（Rhein）是大黄葸醌类化合物中主要组分之一,为大黄的主要有效成分。但大黄酸对DN的保护作用,是否涉及抑制EMT的进程及通过影响MMP-9/TIMP-1的改变减少ECM的积聚、减轻间质纤维化,尚少见报道。本研究以STZ大鼠腹腔注射建立糖尿病模型,HE、Masson染色分别评价肾小管间质损伤指数和肾间质胶原相对面积,免疫组化法检测反映上皮细胞表型特征的E-钙粘素（E-Cadherin）、反映MyoF表型特征的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和影响ECM积聚的MMP-9、TIMP-1等指标,观察在DN小管间质病变中,是否发生EMT以及MMP-9/TIMP-1的变化;用大黄酸干预处理,缬沙坦干预作为阳性对照,观察EMT、MMP-9/TIMP-1与肾小管间质纤维化的关系以及上述两种药物对其的影响,比较大黄酸、缬沙坦的疗效有无差别,探讨大黄酸的肾脏保护机制。方法 48只雄性Wistar大鼠分别为正常对照组（对照组,n=12）、糖尿病模型组（糖尿病组,n=12）、糖尿病大黄酸干预组（大黄酸组,n=12）和糖尿病缬沙坦干预组（缬沙坦组,n=12）。采用腹腔内一次性注射STZ55mg·kg-1建立糖尿病大鼠模型。成模后,分别给予干预组大鼠大黄酸100mg·kg-1·d-1、缬沙坦组30 mg·kg-1·d-1灌胃。分别于第8、16周末,留24小时尿测定24小时尿蛋白排泄量;然后每组随机选取6只大鼠,心脏取血测血肌酐（SCr）、血甘油三酯（TG）和胆固醇（CHO）;肾脏原位灌洗后,取肾组织:做石蜡切片,HE染色观察肾小管间质病变;Masson染色观察肾间质纤维化;石蜡切片免疫组化法检测肾脏E-Cadherin、α-SMA及MMP-9、TIMP-1的表达。结果 1.糖尿病组、大黄酸组、缬沙坦组大鼠的24小时尿蛋白量、血肌酐与肾小管间质损伤指数、间质胶原相对面积等均随病程进展而增加,明显高于同期对照组（P＜0.01）;大黄酸、缬沙坦干预后,能够降低24小时尿蛋白量、血肌酐,减轻肾小管间质损伤,降低肾间质胶原面积。16周时大黄酸组、缬沙坦组较同期糖尿病组,肾脏保护作用更加显著（P＜0.01）,大黄酸组与缬沙坦组比较,差异无统计学意义。 2.糖尿病组、大黄酸组、缬沙坦组大鼠肾小管上皮细胞E-Cadherin表达随病程逐渐减少（P＜0.05）,而α-SMA、MMP-9表达逐渐增加,MMP-9/TIMP-1比

关键词：糖尿病肾病上皮细胞-肌成纤维细胞转分化基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶组织抑制剂-1 大黄酸

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AP-1 decoy寡核苷酸对肾小管上皮细胞生物学行为及其病理炎性效应影响的体外研究

AP-1 decoy寡核苷酸对肾小管上皮细胞生物学行为及其病理炎性效应...

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作者：甘卫华南京医科大学

学位级别：博士

越来越多的实验研究和临床研究已证实，各种肾脏疾病进展为终末期肾衰的速度并非取决于肾小球损伤及肾小球硬化的程度，而主要与肾小管间质损伤及肾间质纤维化(Renal Interstitial Fibrosis，RIF)的程度密切相关。肾小管间质损伤时，肾... 详细信息

越来越多的实验研究和临床研究已证实，各种肾脏疾病进展为终末期肾衰的速度并非取决于肾小球损伤及肾小球硬化的程度，而主要与肾小管间质损伤及肾间质纤维化(Renal Interstitial Fibrosis，RIF)的程度密切相关。肾小管间质损伤时，肾小管上皮细胞(Tubular Epithelial Cell，TEC)并非仅仅是被动的受害者，更是积极的参与者。尽管目前对TEC在RIF中的作用有了一定的认识，但其中许多详细的机制及环节尚很不清楚，因此，努力探讨TEC在RIF发生发展中的作用机理并积极寻找以TEC为靶点的新型的抗肾纤维化药物是目前肾脏病研究者的热门话题。核转录因子AP-1的活化在肾脏疾病中的作用已逐渐受到人们的关注。为数不多的体内外的研究已初步表明，AP-1在肾小管上皮细胞的活化，炎症介质产生中起着重要作用。因此，我们设想从基因水平特异性地阻断TEC内AP-1的活性以减轻肾间质的炎性损伤及纤维化进展。Decoy核酸技术作为一个新的基因治疗策略，可特异性地阻断核转录因子的活性而抑制下游基因的表达，也极可能成为有效治疗肾脏疾病的新方法。为证实我们的设想，并为利用AP-1 decoy寡核苷酸(ODN)类药物治疗肾小管间质病变提供理论依据和技术基础，本研究借助阳离子脂质体介导的基因转染技术，首次应用AP-1 decoy ODN竞争性地封闭近端肾小管上皮细胞(Proximal Tubular Epithelial cell，PTEC)中AP-1的转录活性，进行了以下三个方面的研究。南京医科大学博士学位论文上皮细胞内AP一1活性的影响，探讨AP一1在肾小球肾炎及肾小管间质纤维化发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学技术分别检测AP一1亚单位c一Jun和TGF一p，在增殖性和非增殖性肾小球肾炎及正常肾组织中的表达，应用真彩色医学图像分析系统分析c一Jun表达与肾小球或’爵J.管间质损伤的关系。利用体外培养的猪近端肾小管上皮细胞(LLC一PKI)，应用凝胶电泳迁移率(EMSA)及叭触stem blot检测TNF一a，诱导的LLC一PKI细胞核内AP一1的活性变化及”一1 蛋白表达;应用超迁移率实验(GSA)检测AP一1二聚体中c一Jun和c一Fos成分的变化。结果:(1)正常肾组织可组成型表达c一Jun，主要位于肾小球内皮细胞和包曼氏囊上皮细胞，肾小球系膜细胞中表达较少;肾小管则主要见于近端肾小管上皮细胞。病理状态下，c一Jun表达上调，。一Jun在有慢性进展性病变(肾小球硬化或/和肾小管间质纤维化)肾组织中的表达明显强于急性可逆性病变(增殖性病变和渗出性病变等)的肾组织;c一Jun在肾小管间质部位的表达明显强于肾小球。(2)肾小球内e一Jun的表达强度与肾小球中TGF一p: 的表达强度无明显相关性;’爵J、管内c一Jun的表达强度与’爵卜管中TGF一pl 的表达强度呈显著正相关;(3)在正常培养状态下，LLC一PKI细胞核内有 ”一1蛋白表达，但活性较低。TNFa:可呈剂量依赖性的方式促进AP一1 DNA 结合活性以及c一Jun和c一Fos的蛋白表达。TNFa:激活AP一1二聚体成份中的 c一Jun和e一Fos(以e一Jun为主)。结论:TNF一a:在近端肾小管上皮细胞内AP一1活性和蛋白表达的调控中发挥重要作用。病变的肾组织中”一1的表达增加可能是由于炎性介质活化肾脏固有细胞所致;肾小管间质中AP一1的表达明显强于其在’爵卜球中的表达并与TGF一p:表达呈正相关。这些研究结果表明’爵卜管上皮细胞内AP一1转南京医科大学博士学位论文录途径的激活可能在肾小管间质纤维化的进展中起着重要的作用。第二部分、AP一ldecoy寡核昔酸对肾小管上皮细胞生物学行为的影响目的:确定阳离子脂质体介导AP一1 deeoy寡核普酸转染体外培养的肾小管上皮细胞的最佳效率;探讨AP一1 decoy ODN对体外培养的猪肾小管近端上皮细胞(LLC一PKI

关键词：激活蛋白-1 AP-1 decoy寡核苷酸肾小管上皮细胞近端肾小管上皮细胞 LLC-PK1 肿瘤坏死因子-α1 转化生长因子β1 肾小球肾炎肾间质纤维化基因治疗细胞转染阳离子脂质体细胞增殖细胞凋亡细胞周期细胞因子黏附因子趋化因子上皮细胞-肌成纤维细胞转分化

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酸性成纤维细胞生长因子诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

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第三军医大学学报 2002年第7期24卷 778-781页

作者：钟波张璟第三军医大学附属新桥医院肾内科重庆400037

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理... 详细信息

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理过及未处理的玻璃表面 ,无血清培养 6d。使用透射电镜、免疫细胞化学对肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞形态及表型的转变进行评估。结果　不同剂量的aFGF(1、1 0、50ng/ml)处理后的NRK细胞形态和表型发生不同程度的改变 :体积增大、失去尖端基底极性和微绒毛、细胞延长、具有浸润特征的前后向双末端极性、出现肌动蛋白中间丝结构。免疫组化和Westernblot分析显示加入aFGF后角蛋白表达减少 ,有肌成纤维细胞的特异性标志物α 平滑肌动蛋白 (α SMA)的表达。α SMA阳性细胞的比例与aFGF的浓度呈正相关 ,亲和抗aFGF抗体可消除这种转分化现象。加入aFGF后 ,在玻璃表面α SMA阳性细胞数 (34 4± 0 0 90 ) %较Ⅰ型胶原处理培养表面α SMA阳性细胞数 (74 6± 0 1 0 1 ) %有显著差异 (P <0 0 5)。结论　aFGF在促进肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化的过程中有重要的意义 ,该过程亦与细胞的生长环境有关。

关键词：酸性成纤维细胞生长因子肾小管上皮细胞上皮细胞-肌成纤维细胞转分化肾脏疾病预后

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