检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2025年第05期 610-616页

作者：胡楠王财常月立张玉妥河北北方学院病原生物学与免疫研究所

不可分型流感嗜血杆菌（non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi）是一种无荚膜的革兰阴性球杆菌，广泛定植于人类上呼吸道，可在免疫力低下时引起侵袭性感染。近年，随着b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）疫苗... 详细信息

不可分型流感嗜血杆菌（non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi）是一种无荚膜的革兰阴性球杆菌，广泛定植于人类上呼吸道，可在免疫力低下时引起侵袭性感染。近年，随着b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）疫苗的普及，NTHi已成为流感嗜血杆菌感染的主要致病型别，其临床分离率在全球范围内呈上升趋势，且对β-内酰胺类等抗生素的耐药性日益增强。NTHi常与肺炎链球菌、卡他莫拉菌等病原体形成混合感染，通过生物膜形成、免疫逃逸等机制导致中耳炎、脑膜炎、慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）急性加重等。目前，抗生素仍是治疗NTHi感染的主要药物，但耐药性问题促使疫苗研发成为重要研究方向。基于外膜蛋白及黏附素等抗原开发的候选疫苗已显示出良好的免疫原性和保护效果，但仍需进一步优化以提高交叉保护作用。本文就NTHi的流行现状、相关疾病及疫苗研究进展作一综述，以期为NTHi感染的防控提供参考。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌流行现状耐药性致病机制疫苗

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靶向不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6重组M13噬菌体疫苗的构建及其免疫效果评价

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中国生物制品学杂志 2025年第2期38卷 129-136,142页

作者：王财常月立胡楠李唯峰赵子红安晶张玉妥河北北方学院病原生物学与免疫研究所河北张家口075000

目的构建靶向不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6的重组M13噬菌体疫苗,并评价其免疫原性,以期为NTHi疫苗的进一步研发提供新思路。方法通过基因重组技术将NTHi外模蛋白P6基因整合至载体pMECS Pha... 详细信息

目的构建靶向不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6的重组M13噬菌体疫苗,并评价其免疫原性,以期为NTHi疫苗的进一步研发提供新思路。方法通过基因重组技术将NTHi外模蛋白P6基因整合至载体pMECS Phagemid,获得重组P6-M13噬菌体单克隆,经包装及纯化后,制备为重组P6-M13噬菌体疫苗。Western blot法检测疫苗中P6-M13 PⅢ融合蛋白的表达情况,双层琼脂平板法测定疫苗滴度,透射电镜下观察重组P6-M13噬菌体形态。将90只5周龄BALB/c雌性小鼠随机分为PBS、M13噬菌体、重组P6-M13噬菌体疫苗组,每组30只,分别于0、14、28 d经腹腔注射PBS(500μL/只)、M13噬菌体[1×10^(12)pfu/(500μL·只)]、重组P6-M13噬菌体疫苗[1×10^(12)pfu/(500μL·只)]。末次免疫2周后,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG水平及脾淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5和IL-17A水平,CCK-8法分析脾淋巴细胞的增殖情况;末次免疫3周后,用1.5×108cfu/mL NTHi经小鼠鼻腔进行攻毒,攻毒1周后,HE染色法观察小鼠鼻黏膜和肺组织病理变化;末次免疫4周后,称量小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏质量,计算脏器系数,并制备组织病理切片,进行病理学观察。结果制备的重组P6-M13噬菌体疫苗可正确表达P6-M13 PⅢ融合蛋白,滴度为5.5×10^(14)pfu/mL,镜下观察可见形态规则的重组P6-M13噬菌体。与M13噬菌体及PBS组比较,重组P6-M13噬菌体疫苗组小鼠血清特异性抗体IgG水平显著升高(F=71.489,P<0.05);脾细胞分泌IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5水平明显降低(F分别为8.315、16.986、39.204、6.291,P均<0.05),3组间IL-17水平差异无统计学意义(F=0.863,P>0.05);脾细胞刺激指数明显升高(F=22.952,P<0.05)。攻毒后,PBS和M13噬菌体组小鼠鼻黏膜及肺组织结构严重受损,炎性细胞增多;重组P6-M13噬菌体疫苗组小鼠鼻黏膜及肺组织结构正常,少见炎性细胞。各组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏脏器系数差异均无统计学意义(F分别为1.012、1.642、0.300、2.079、0.405,P均>0.05),主要脏器大体形态色泽及病理切片检查均未发现病理改变。结论构建的靶向NTHi外膜蛋白P6的重组P6-M13噬菌体疫苗在小鼠体内可引起有效的体液免疫和细胞免疫应答,具有一定的免疫保护能力及良好的安全性。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6 噬菌体展示技术 M13噬菌体疫苗免疫原性

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不可分型流感嗜血杆菌Hap黏附素T-B优势抗原表位及其免疫原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第8期37卷 594-600页

作者：吴中秀王荣山黄燕颖金洪星严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 浙江省血液中心献血科杭州310000 浙江省义乌市妇幼保健医院 322000 温州医科大学检验医学院和生命科学学院 325035

目的了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中Hap黏附素编码基因（hap）分布及其序列保守性,筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞（T-B）联合抗原表位及其免疫原性.方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联... 详细信息

目的了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中Hap黏附素编码基因（hap）分布及其序列保守性,筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞（T-B）联合抗原表位及其免疫原性.方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联合抗原表位.采用PCR扩增NTHi临床菌株hap基因5′端156 bp和3′端855 bp片段（hap-5′-156和hap-3′-855）后测序.构建Hap蛋白N端52 aa和C端285 aa片段（Hap-N52和Hap-C285）7个T-B联合抗原表位肽噬菌体展示系统.采用Western blot和ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白（rPⅢ）展示的T-B联合抗原表位肽抗原性和免疫反应性.结果 hap基因产物为NTHi膜表面蛋白.不同NTHi菌株hap基因5′端156 pb和3′端855 bp序列相对保守,中间区变异较大.56株NTHi临床菌株均能检出hap-5′-156和hap-3′-855片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性为92.3％～100％.Hap-N52片段中Hap-N5-24以及Hap-C285片段中Hap-C4-27、Hap-C28-47、Hap-C114-129、Hap-C150-173、Hap-C200-227和Hap-C241-267为评分较高且变异较小的预测T-B联合抗原表位.Western blot和ELISA检测结果显示,rPⅢ展示的Hap-C4-27或Hap-C150-173表位肽能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带且96.9％（63/65）和92.3％（60/65）NTHi感染患儿血清标本相应抗体阳性.结论 hap基因在NTHi临床菌株中分布广泛且5′端156 pb和3′端855 bp序列保守.Hap-C4-27和Hap-C150-173为Hap蛋白优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位.

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 Hap黏附素优势抗原表位免疫原性多抗原肽疫苗

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不可分型流感嗜血杆菌经NF-κB信号通路抑制组蛋白脱乙酰酶活性促进支气管上皮炎症反应

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中国病理生理杂志 2020年第3期36卷 557-561,567页

作者：付晓李慕文平邵阳学院基础医学院湖南邵阳422000

目的:明确不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)对支气管上皮细胞炎症反应的影响,并初步探讨其作用机制。方法:培养人正常支气管上皮细胞BEAS-2B,采用感染复数(MOI)=10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,分别采用ELISA和RT-qPCR分别检测细胞上清中白细胞介... 详细信息

目的:明确不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)对支气管上皮细胞炎症反应的影响,并初步探讨其作用机制。方法:培养人正常支气管上皮细胞BEAS-2B,采用感染复数(MOI)=10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,分别采用ELISA和RT-qPCR分别检测细胞上清中白细胞介素8(IL-8)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的表达水平;Western blot检测细胞内IκBα含量以及组蛋白去乙酰化水平,并检测组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的表达以及HDAC的酶活性;电泳迁移率变动分析和染色质共沉淀实验分别测定NF-κB以及IL-8的结合活性。通过NF-κB以及HDAC抑制剂预处理细胞后,检测细胞内GM-CSF和IL-8的表达水平。结果:MOI=10的NTHi感染BEAS-2B细胞后,细胞上清中IL-8和GM-CSF含量及其mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);NTHi感染可显著下调胞浆内总IκBα的表达,增强细胞内NF-κB的DNA结合活性,并显著诱导细胞内组蛋白H3和H4的磷酸乙酰化,促进IL-8和RNA聚合酶II的结合;细胞内HDAC的表达水平及酶活性也显著降低(P<0.05)。NF-κB抑制剂均显著减少细胞内GM-CSF和IL-8的表达水平(P<0.05),而HDAC抑制剂则会促进细胞内IL-8的分泌(P<0.05)。结论:NTHi可通过激活NF-κB信号通路抑制HDAC表达和活性,促进支气管上皮细胞分泌IL-8和GM-CSF,从而加重炎症反应的发生。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 NF-κB信号通路组蛋白脱乙酰酶炎症反应支气管上皮细胞

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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的重组表达及免疫保护作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第4期30卷 349-354页

作者：陈祥鹏王健李莉莉陈敬张振龙北京生物制品研究所中试一室 100024

目的研究不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）重组外膜蛋白P6的理化性质和对小鼠的免疫保护作用。方法利用PCR技术，以NTHi基因组为模板，扩增出编码外膜蛋白P6的基因片段；构建pET-32a—P6重组质粒；转化到大肠杆菌B121（DE3）中进行表达，... 详细信息

目的研究不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）重组外膜蛋白P6的理化性质和对小鼠的免疫保护作用。方法利用PCR技术，以NTHi基因组为模板，扩增出编码外膜蛋白P6的基因片段；构建pET-32a—P6重组质粒；转化到大肠杆菌B121（DE3）中进行表达，并对表达条件进行了优化。通过阴离子交换和凝胶过滤层析对蛋白进行纯化。经SDS—PAGE、Western blot等对蛋白的理化性质进行初步分析，继而免疫BALB／c小鼠，用同源菌经腹腔攻击，比较免疫组和对照组小鼠死亡率。结果实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达，产物表达形式为可溶性表达，纯化后蛋白纯度可达95％，收率可达5mg／g（蛋白／湿菌），相对分子质量（Mr）为14145．848，Western blot证实重组P6蛋白能与菌源提纯P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验结果表明重组P6蛋白在小鼠体内能诱生高滴度的抗体，显示免疫组小鼠存活率明显高于对照组（P〈0．01）。结论重组NTHi外膜蛋白P6的原核表达产物为可溶性蛋白，在小鼠体内能诱生高效价抗体，在小鼠感染模型中具有保护作用，为NTHi疫苗的研发提供了基础资料。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白 P6 克隆表达免疫保护

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不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析

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南方医科大学学报 2010年第5期30卷 953-956页

作者：姚锋李婉宜邝玉李明远丰锋冯伟张强四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在***21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行... 详细信息

目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在***21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 Hap重组蛋白免疫原性粘附活性

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不可分型流感嗜血杆菌生物膜体外形成规律及其扫描电镜形态学

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吉林大学学报（医学版） 2014年第4期40卷 729-733页

作者：姜俊如刘岚沈犁楚丽娟张佳星王磊周薇伏小红重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治预防国际科技合作基地重庆400014 重庆市妇幼保健院检验科重庆400014 四川省成都市第七人民医院检验科四川成都610021

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)生物膜(BF)体外形成规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株,以铜绿假单胞菌(PA)标准菌株PAO1为阳性对照菌株,同时设空白对照组,分别培养1、2、3、4... 详细信息

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)生物膜(BF)体外形成规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株,以铜绿假单胞菌(PA)标准菌株PAO1为阳性对照菌株,同时设空白对照组,分别培养1、2、3、4、5、6和7d时,使用平板计数法和结晶紫染色法检测BF形成情况,并于3d时采用SEM检测ATCC49247的BF结构。结果:平板计数法检测BF内菌落数,ATCC49247和PAO1培养3d时活菌数逐渐上升至最高,而后逐渐下降,至7d时分别降至(0.829 4±0.007 5)×107cfu·mL-1和(0.942 6±0.019 9)×107cfu·mL-1,培养3、4、5和6d时2组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌各不同时间点间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结晶紫染色检测BF致密程度,ATCC49247和PAO1培养3d时BF致密度逐渐上升至最高,波长570nm吸光度(A570)值分别为2.717 4±0.017 2和2.885 3±0.039 0,而后逐渐下降,至7d时分别降至0.151 7±0.074 5和1.196 9±1.108 5,各时间点2组细菌与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05),培养3、4和5d时2组细菌间比较差异均有统计学意义(P<0.05),同种细菌不同时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。SEM观察,培养3d时ATCC49247形成了典型的BF结构。结论:ATCC49247可以在体外形成BF,结晶紫染色、平板计数和扫描电镜可作为检测BF的常规手段。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌生物膜结晶紫染色平板菌落计数扫描电镜

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不可分型流感嗜血杆菌Hap基因的克隆及原核表达

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生物医学工程学杂志 2009年第5期26卷 1072-1076页

作者：李婉宜邝玉姚锋杨远陈长春蒋忠华李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白。以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap... 详细信息

构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白。以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap重组原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,将经PCR、酶切及DNA测序鉴定正确者转化***21(DE3),诱导表达带有His标签的Hap融合蛋白。SDS-PAGE电泳分析重组蛋白的相对分子量大小及表达形式,Western blot进一步鉴定表达产物的特异性。通过PCR成功扩增出NTHi Hap基因,构建了具有正确基因序列的Hap原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,SDS-PAGE电泳分析成功表达出相对分子量(Mr)为176000的重组融合蛋白,该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot结果表明该重组融合蛋白可与抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合。NTHi Hap蛋白在原核表达系统中的成功表达,将为Hap蛋白免疫活性的深入研究及NTHi新型保护性疫苗的开发奠定实验基础。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 Hap蛋白原核表达

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不可分型流感嗜血杆菌LPD基因分布及其重组表达产物免疫保护作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第12期34卷 928-932页

作者：王荣山金洪星柳锡永金志标丁红辉严杰孙爱华义乌市妇幼保健医院 322000 浙江大学医学院病原生物学系浙江医学高等专科学校杭州310053

目的：了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中外膜脂蛋白D（LPD）基因分布及其序列保守性，确定重组表达的LPD（rLPD）免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR检测NTHi临床菌株中LPD基因，T-A克隆后测序。构建LPD基因原核表达系统，采... 详细信息

目的：了解无荚膜型流感嗜血杆菌（NTHi）临床菌株中外膜脂蛋白D（LPD）基因分布及其序列保守性，确定重组表达的LPD（rLPD）免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR检测NTHi临床菌株中LPD基因，T-A克隆后测序。构建LPD基因原核表达系统，采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rLPD。采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rLPD表达情况及其产量。采用ELISA和Westernblot检测rLPD的抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rLPD对NTHi致死性感染的免疫保护效果。结果所有NTHi菌株均检出LPD基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达98.0％～99.4％和98.5％～100％。所构建的原核表达系统能高效表达rLPD。rLPD免疫家兔可产生高效价抗体，NTHi全菌兔抗血清及NTHi感染患儿血清能识别rLPD并与之结合。ELISA结果显示，93.6％（58/62）和53.2％（32/62）NTHi感染患儿血清分别rLPD-IgM和rLPD-IgG阳性。100μg或200μgrLPD对NTHi致死性感染小鼠的免疫保护率分别为60.0％或73.3％。结论LPD基因在NTHi菌株中广泛分布且序列保守，其重组表达产物rLPD具有良好的免疫原性及一定的免疫保护作用，可作为NTHi基因工程疫苗候选抗原之一。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 LPD基因/ 脂蛋白D 重组表达免疫原性免疫保护性

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不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的原核表达及其黏膜免疫效应

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中国免疫学杂志 2014年第2期30卷 216-221页

作者：乔海霞张彦霞戴明艳张存辉常月立贾晓辉张玉妥河北北方学院医学检验学院张家口075000

目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入*** XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Wester... 详细信息

目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入*** XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Western blot分析;纯化的重组蛋白经滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾细胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:成功构建了重组表达载体PGEX-6P2/P6,并表达GST-P6融合蛋白。Western blot证明GST-P6蛋白能与菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验表明重组P6蛋白通过滴鼻途径既能刺激小鼠产生血清IgG,又能诱导肺黏膜产生较高的特异性IgA抗体。重组蛋白+IL-2组小鼠脾淋巴细胞所产生的IL-17和IFN-γ的含量高于对照组(P<0.05)。结论:P6蛋白的原核表达载体PGEX-6P2/P6在大肠杆菌XL1-Blue中大量表达,重组P6蛋白经黏膜免疫可以同时诱导产生体液免疫和细胞免疫。此实验为P6蛋白疫苗的研发提供了理论基础。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6 原核表达黏膜免疫效应

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