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中国森林病虫 2025年

作者：伍鸿源蔡守平曾丽琼林浩宇吴松青徐云福建农林大学林学院福建省林业科学研究院福建省森林培育与林产品加工利用重点实验室

为研究中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia携带白僵菌孢子的能力以及所携带孢子的活性和毒力，评价二者联合应用的潜力，基于球孢白僵菌Beauveria bassiana BbFz-91菌株对中华甲虫蒲螨致病力低，采用孢子喷粉法，用扫描电镜观察喷粉后12... 详细信息

为研究中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia携带白僵菌孢子的能力以及所携带孢子的活性和毒力，评价二者联合应用的潜力，基于球孢白僵菌Beauveria bassiana BbFz-91菌株对中华甲虫蒲螨致病力低，采用孢子喷粉法，用扫描电镜观察喷粉后12，24，48 h中华甲虫蒲螨体表携带的孢子情况，用血球计数板和菌落计数法定量检测不同处理时间所携孢子的数量和活性，同时测定中华甲虫蒲螨所携孢子对松墨天牛的毒力。结果表明：中华甲虫蒲螨体表可携带白僵菌孢子，经过BbFz-91菌株喷粉处理后12 h，平均每头螨可携带1.54×105孢子，平均10头中华甲虫蒲螨携带并传播的孢子可在培养基上形成33个菌落，松墨天牛Monochamus alternatus幼虫在第10天的累积校正死亡率达80.65%；随着时间的延长，携带孢子数量和形成的菌落数量逐渐减少，幼虫校正死亡率也逐渐降低。白僵菌喷粉处理后12 h，松墨天牛幼虫致死中时最短，为6.17 d，处理后72 h，幼虫的致死中时显著延长，为10.46 d。中华甲虫蒲螨具有主动传播孢子的能力，且散落孢子具有一定活性和毒力。林间应用中华甲虫蒲螨携带白僵菌联合防控松墨天牛具有可行性，结果为进一步开展林间应用技术研究奠定理论基础。

关键词：中华甲虫蒲螨白僵菌孢子活性毒力松墨天牛

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球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟杀虫作用及其相关酶活性影响

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东北林业大学学报 2023年第5期51卷 139-146页

作者：刘行聂振业迟德富贺丽敏东北林业大学哈尔滨150040 河北省农林科学院昌黎果树研究所

为研究球孢白僵菌(Beauveria bassiana)和中华甲虫蒲螨(Pyemotes zhonghuajia)对冷杉梢斑螟(Dioryctria abietella)的毒杀作用及冷杉梢斑螟的解毒、保护机制,采用浸虫法和室内接种蒲螨的方法,测定了CFCC81428、CFCC83116这两株菌的亚致... 详细信息

为研究球孢白僵菌(Beauveria bassiana)和中华甲虫蒲螨(Pyemotes zhonghuajia)对冷杉梢斑螟(Dioryctria abietella)的毒杀作用及冷杉梢斑螟的解毒、保护机制,采用浸虫法和室内接种蒲螨的方法,测定了CFCC81428、CFCC83116这两株菌的亚致死浓度(LC_(25))、半数致死浓度(LC_(50))和中华甲虫蒲螨的亚致死数量(LD_(25))、半数致死数量(LD_(50))及幼虫被侵染或寄生后的累计校正死亡率。研究LC_(25)的CFCC81428菌株和LD_(25)的中华甲虫蒲螨对幼虫谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)、乙酰胆碱酯酶(AChE)这2种解毒酶和多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)这3种保护酶的影响。结果表明:菌株CFCC81428对幼虫的毒力更强,其侵染幼虫第10天的LC_(25)、LC_(50)分别为2.04×10_(4)、7.24×10_(5)孢子/mL,幼虫被孢子浓度为108孢子/mL的CFCC81428菌株侵染10 d后的累计校正死亡率为77.30%;中华甲虫蒲螨寄生幼虫第3天的LD_(25)、LD_(50)分别为16.60、25.12头;幼虫被两者联合处理后的累计校正死亡率高于被中华甲虫蒲螨寄生后的累计校正死亡率,联合处理后的僵虫率高于单独感染球孢白僵菌的幼虫僵虫率。幼虫被球孢白僵菌侵染后,2种解毒酶GSTs和AChE活性均高于对照组,处于被诱导状态;幼虫被中华甲虫蒲螨寄生后,其GSTs和AChE活性在60 h前均高于对照组,处于被诱导状态,72 h开始低于对照组,处于被抑制状态;幼虫被联合处理后,其解毒酶活性与其他两个处理组相比呈现进一步下降趋势。幼虫被球孢白僵菌侵染后,3种保护酶PPO、SOD、CAT的活性,除PPO和CAT活性在12 h时低于对照组,其余取样时间均高于对照组,处于被诱导状态;幼虫被中华甲虫蒲螨寄生后,这3种保护酶活性呈现先升高再降低的趋势;幼虫被联合处理后,PPO和CAT活性与其他2个处理组相比呈现提前下降趋势。

关键词：冷杉梢斑螟球孢白僵菌中华甲虫蒲螨毒杀作用解毒酶保护酶

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苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟的杀虫作用

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东北林业大学学报 2023年第7期51卷 146-154页

作者：王倩倩迟德富东北林业大学哈尔滨150040

为阐明苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis *** Bonnefoi et de Barjac)和中华甲虫蒲螨(Pyemotes zhonghuajia Yu,Zhang and He)分别对冷杉梢斑螟(Dioryctria abietella)老熟幼虫的杀虫效果及对酶活性的影响,以冷杉梢斑螟老熟幼虫为研究对象,分别采用不同菌浓度苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种浸泡的饲料饲喂冷杉梢斑螟老熟幼虫,和接入不同数量中华甲虫蒲螨到冷杉梢斑螟老熟幼虫上,测定两者分别对梢斑螟死亡率以及相应酶活性影响。结果表明:苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种作用于冷杉梢斑螟致死率高达100%,致死中浓度为6584.065菌落/mL。冷杉梢斑螟老熟幼虫在取食不同菌浓度苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种后,对解毒酶乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶均有激活作用;对羧酸酯酶有抑制作用;过氧化氢酶和过氧化物酶随苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种菌浓度的升高以及作用时间的延长,表现出逐渐抑制的作用。中华甲虫蒲螨寄生冷杉梢斑螟,致死率高达90%,半数致死数量为27.454头。中华甲虫蒲螨处理对乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶均有激活作用;虫螨数量比为1∶20、1∶30、1∶40、1∶50时,冷杉梢斑螟幼虫过氧化氢酶表现出抑制-激活-抑制的作用,虫螨数量比为1∶60时,表现为全部抑制作用;对羧酸酯酶和过氧化物酶多表现出抑制作用,虫螨数量比为1∶20、1∶30时,表现出抑制-激活的作用,虫螨数量比为1∶40、1∶50、1∶60时,表现出抑制的作用。苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种和中华甲虫蒲螨主要通过释放毒素来扰乱冷杉梢斑螟老熟幼虫保护解毒酶系动态平衡,干扰幼虫的正常生理代谢,从而起到毒杀冷杉梢斑螟老熟幼虫的作用。

关键词：冷杉梢斑螟苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种中华甲虫蒲螨解毒酶保护酶

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中华甲虫蒲螨全基因组分析及毒素基因的克隆与表达

中华甲虫蒲螨全基因组分析及毒素基因的克隆与表达

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作者：宋燕飞贵州大学

学位级别：硕士

中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia Yu,Zhang&He是我国特有的天敌寄生螨,能寄生鳞翅目、鞘翅目、同翅目和双翅目等多种农林害虫。中华甲虫蒲螨可以寄生并致死超过自身体重68万倍的害虫,其首先向寄主体内注射毒素以麻痹致死寄主,再... 详细信息

中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia Yu,Zhang&He是我国特有的天敌寄生螨,能寄生鳞翅目、鞘翅目、同翅目和双翅目等多种农林害虫。中华甲虫蒲螨可以寄生并致死超过自身体重68万倍的害虫,其首先向寄主体内注射毒素以麻痹致死寄主,再在寄主体表选择一个合适的位置进行寄生,最后通过取食寄主为自身及子代获得营养。为何中华甲虫蒲螨体型微小却能致死比自身体积重68万倍的寄主?它的毒素蛋白主要成分是什么?因此,本研究以中华甲虫蒲螨为研究对象,基于中华甲虫蒲螨全基因组数据,挖掘和分析蒲螨毒素基因,表达和纯化毒素蛋白,开展毒素蛋白的生物活性测定。研究结果将为理解中华甲虫蒲螨对寄主的寄生致死机制,以及开发新型绿色杀虫剂提供理论基础。主要研究结果如下:1.中华甲虫蒲螨全基因组的测序和分析本研究对中华甲虫蒲螨进行了全基因测序,经过组装显示中华甲虫蒲螨全基因组大小为71.943 Mb,共拼装出3条染色体。通过对基因组进行注释,得到214种非编码RNA,77,050条重复序列及11,183个蛋白编码基因。系统进化分析和分化时间评估表明中华甲虫蒲螨与二斑叶螨Tetranychus urticae亲缘关系最近,两者起源于三叠纪。通过参考螯肢亚门Chelicerata和多足亚门Myriapoda的毒蛋白参考序列,共注释得到皮肤坏死毒素家族Dermonecrotic toxin、神经毒素家族Neurotoxin和肽基毒素agatoxins家族。2.中华甲虫蒲螨毒素基因生物信息学分析对中华甲虫蒲螨毒素基因进行生物信息学分析表明,神经毒素基因家族分布于三条染色体上,皮肤坏死毒素基因家族和肽基毒素agatoxins基因家族位于3号染色体上。除Pz DNT1无信号肽外,其余所有毒素蛋白N端有信号肽。通过对毒素蛋白的理化性质进行分析,发现所有毒素蛋白理化性质差异较大,大部分毒素基因在中华甲虫蒲螨成螨时期表达量比膨腹体时期高。3.中华甲虫蒲螨毒素蛋白的表达与生物活性测定对中华甲虫蒲螨神经毒素基因(Neurotoxin)Pz NT1、Pz NT10、Pz NT11和肽基毒素基因(agatoxins)Pz Ag3进行了体外表达,在目的基因两端添加Bam HI和Xho I位点后与表达载体p ET-28a(+)通过同源重组的方式进行连接,最后将连接好的质粒转化到BL21(DE3)细胞内,使用1m M IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE凝胶电泳检测四种目的蛋白。最后对复性后的毒素蛋白进行生物活性测定,通过饲喂法,观察毒素蛋白对草地贪夜蛾的死亡率、蛹重及各发育阶段时长的影响。在四种毒素蛋白中,10 mg/m L的Pz NT1和Pz NT11与低浓度蛋白相比对草地贪夜蛾致死率有显著影响(37.9%、31.2%);Pz NT10和Pz NT11能显著降低草地贪夜蛾蛹重;与对照组相比,Pz NT11处理后的幼虫发育时长显著降低(20.4天);四种毒素蛋白处理后的蛹期时长显著增加。

关键词：中华甲虫蒲螨全基因组毒素蛋白生物防治草地贪夜蛾

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中华甲虫蒲螨对皂角豆象的生防潜能研究

中华甲虫蒲螨对皂角豆象的生防潜能研究

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作者：陈思雨贵州大学

学位级别：硕士

皂角豆象Megabruchidius dorsalis（F?hraeus,1839）隶属Megabruchidius属,是皂角属Gleditsia Linn.植物的寡食性仓储害虫,广泛分布于亚洲与欧洲,主要以幼虫钻蛀危害皂角种子,阻碍皂角产业的发展,造成严重的经济损失。中华甲虫蒲螨Pyemo... 详细信息

皂角豆象Megabruchidius dorsalis（F?hraeus,1839）隶属Megabruchidius属,是皂角属Gleditsia Linn.植物的寡食性仓储害虫,广泛分布于亚洲与欧洲,主要以幼虫钻蛀危害皂角种子,阻碍皂角产业的发展,造成严重的经济损失。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia Yu,Zhang&He是我国一种特有的林木钻蛀性害虫天敌,通过向寄主注入神经毒素麻痹寄主并吸食寄主血淋巴孕育子代,具有趋暗性、搜寻能力强等特性。本文通过研究皂角豆象生物学特性,为后续中华甲虫蒲螨寄生皂角豆象室内实验提供理论基础,继而研究中华甲虫蒲螨对皂角豆象的室内寄生效能（致死率、寄主选择和寄生功能反应等）,揭示中华甲虫蒲螨对皂角豆象不同发育阶段的寄生能力,以及研究中华甲虫蒲螨对皂角豆象生长发育（生命表）和代谢的影响,评估中华甲虫蒲螨对皂角豆象的生防能力,为皂角豆象的生物防控提供理论依据。主要研究结果如下:1.皂角豆象幼虫龄期划分皂角豆象幼虫龄期划分等生物学特性的研究结果表明,皂角豆象幼虫龄数为4龄,以幼虫头壳宽为最佳分龄指标,上颚宽为辅助分龄指标。推测皂角豆象在皂角种子内发育1～2 d为1龄幼虫,2龄幼虫介于3～9 d,3龄幼虫介于5～11 d,4龄幼虫介于8～16 d之间。在温度28±1℃,相对湿度65%±5%,光周期L:D=10:14条件下,卵期为8.620±0.052 d,幼虫期和蛹期为28.980±0.225 d,雌雄成虫期分别为23.800±0.605 d和21.160±0.549 d,每雌产卵量为17.860±2.557。2.中华甲虫蒲螨对皂角豆象的寄生效能中华甲虫蒲螨对皂角豆象的寄生效能研究结果表明,5头、10头、20头中华甲虫蒲螨对皂角豆象卵、1～2龄幼虫、3～4龄幼虫、蛹的24 h致死率显著高于对照组,分别为卵（64%、80%、94%）、1～2龄幼虫（92%、100%、100%）、3～4龄幼虫（64%、92%、96%）、蛹（78%、90%、98%）。中华甲虫蒲螨对皂角种子内部发育1～5 d和6～10 d的皂角豆象具有显著的寄生致死作用,且偏好选择寄生皂角豆象3～4龄幼虫和蛹。中华甲虫蒲螨寄生皂角豆象卵和1龄幼虫符合III型功能反应,日最大寄生量分别为10.739（卵）和13.493（1龄幼虫）,对皂角豆象1龄幼虫寄生效能（瞬时攻击率a/处理时间Th）高于对卵的寄生效能。中华甲虫蒲螨存在自身密度干扰,相互干扰常数为0.570,自身密度对皂角豆象1龄幼虫的搜寻效应有显著的负向影响。3.中华甲虫蒲螨寄生对皂角豆象生长发育的影响中华甲虫蒲螨寄生皂角豆象成虫后,皂角豆象亲代和子代的种群参数、发育历期和繁殖均受到显著影响。5头中华甲虫蒲螨寄生皂角豆象成虫后,其亲代的平均繁殖率F显著降低,子代的种群参数（内禀增长率r、周限增长率λ、净增殖率R0、平均世代周期T、总生殖率GRR和平均繁殖率F）、发育历期、繁殖力（fx、mx、lxmx）、繁殖价值vx均显著低于对照组。10头或20头中华甲虫蒲螨处理皂角豆象成虫后,亲代皂角豆象的种群参数（除平均世代周期T外）、繁殖力（fx、mx、lxmx）、繁殖价值vx均受到显著的负向影响,平均世代周期T、雌雄成虫寿命、预期寿命ex均显著长于对照组,皂角豆象子代的平均世代周期显著短于对照组。5头中华甲虫蒲螨寄生皂角豆象4龄幼虫12 h、24 h、36 h、48 h和72 h后,鉴定出的差异代谢物包括乙酰胆碱酮葡糖苷酸、4-羟基肉桂酰丁胺、硫酸脱氢表雄酮、吲哚乙醛、生物素砜和N-琥珀酰-L,L-2,6-二氨基丙烯酸酯。中华甲虫蒲螨显著影响皂角豆象4龄幼虫的氨基酸代谢（缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,色氨酸代谢,组氨酸代谢）,脂质代谢（α-亚麻酸代谢,甘油磷脂代谢,亚油酸）,辅助因子和维生素的代谢（泛酸和辅酶A生物合成,生物素代谢）,从而可能导致皂角豆象4龄幼虫免疫系统紊乱,内分泌失调,细胞凋亡等。综上所述,中华甲虫蒲螨对皂角豆象具有显著的寄生致死作用（对皂角种子内部发育的皂角豆象亦具有明显的寄生致死作用）,且偏好选择寄生皂角豆象3～4龄幼虫和蛹;对皂角豆象的寄生显著抑制皂角豆象的生长发育、亲代与子代的繁殖力。寄生皂角豆象4龄幼虫不同时间后,显著影响皂角豆象4龄幼虫的氨基酸代谢、脂质代谢、辅助因子和维生素的代谢。本研究表明中华甲虫蒲螨对皂角豆象具有生防潜能。

关键词：皂角豆象中华甲虫蒲螨幼虫龄数寄生效能功能反应昆虫生命表代谢组学生物防治

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中华甲虫蒲螨与虫生真菌对马铃薯块茎蛾的联合防控研究

中华甲虫蒲螨与虫生真菌对马铃薯块茎蛾的联合防控研究

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作者：叶帅贵州大学

学位级别：硕士

马铃薯块茎蛾Phthorimaea operculella（Zeller）隶属于鳞翅目Lepidoptera麦蛾科Gelechiidae,其分布广泛,严重危害全球马铃薯产业的发展,是世界上重要的马铃薯害虫之一。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia,是一种对鞘翅目、膜翅目和鳞... 详细信息

马铃薯块茎蛾Phthorimaea operculella（Zeller）隶属于鳞翅目Lepidoptera麦蛾科Gelechiidae,其分布广泛,严重危害全球马铃薯产业的发展,是世界上重要的马铃薯害虫之一。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia,是一种对鞘翅目、膜翅目和鳞翅目等害虫有良好致死效果的我国本土外寄生性天敌,有较广泛应用前景。联合应用天敌螨和虫生真菌在害虫生物防治领域具有重要意义,其中虫生真菌对天敌螨的兼容性及其增效作用是值得关注的重点。本研究通过测试中华甲虫蒲螨和虫生真菌对马铃薯块茎蛾的致死效果和亚致死效应,同时结合虫生真菌对中华甲虫蒲螨的安全性评价,比较联合和单独应用中华甲虫蒲螨和虫生真菌对土豆内马铃薯块茎蛾的控制效果,为高效利用中华甲虫蒲螨和虫生真菌联合防控马铃薯块茎蛾提供理论基础。主要研究结果如下:1中华甲虫蒲螨对马铃薯块茎蛾致死效果和亚致死效应不同密度中华甲虫蒲螨对马铃薯块茎蛾各虫态的致死率研究结果表明,100头蒲螨在5 d内对马铃薯块茎蛾卵的累计致死率为61.80±1.54%。单头蒲螨对单头马铃薯块茎蛾4龄幼虫24 h内致死率为95.00±5.00%,3头以上蒲螨即可在72h内100%致死一头4龄幼虫。蒲螨密度为20头时,对单头蛹72 h内的致死率为90.00±5.77%。单头蒲螨能在23.46 min内致死1～3龄幼虫,致死4龄幼虫需要2076.00 min;中华甲虫蒲螨短期寄生（30 min、60 min）对马铃薯块茎蛾的亚致死效应研究结果表明,短期寄生显著延长了雌虫的蛹期和未成熟期,显著降低了雌成虫寿命、产卵前期、产卵天数和平均产卵量,马铃薯块茎蛾种群的内禀增长率（rm）、净增殖率（R0）和周限增长率（λ）均显著下降,平均世代周期（T）被显著延长。2中华甲虫蒲螨对土豆内马铃薯块茎蛾控制效果和亚致死效应不同密度中华甲虫蒲螨对单个和5斤土豆内部马铃薯块茎蛾控制效果研究结果表明,40和20及以上蒲螨或蒲螨膨腹体能够显著降低了单个土豆和5斤内马铃薯块茎蛾的化蛹量。蒲螨膨腹体密度为100个时,对马铃薯块茎蛾的羽化率也有显著降低作用。蒲螨对单个土豆和5斤土豆的重量与虫粪堆数也影响显著,较高密度的蒲螨能显著提升土豆重量并减少虫粪堆数;中华甲虫蒲螨对单个土豆内马铃薯块茎蛾F1代的亚致死研究结果表明,100头蒲螨能够显著降低单个土豆内马铃薯块茎蛾F1代雌雄虫的卵期、未成熟期和成虫寿命,40头及以上蒲螨则对马铃薯块茎蛾雌虫的幼虫期、未成熟期以及产卵天数也有显著抑制作用,所有蒲螨密度处理组的平均产卵量均显著下降。马铃薯块茎蛾种群的rm、R0、T以及λ都随着蒲螨密度的增加而减少,其中T在蒲螨密度≥40头时下降显著,rm和λ在蒲螨密度为100头时下降显著。3虫生真菌对马铃薯块茎蛾的致死效果和亚致死效应马铃薯块茎蛾高毒力菌株的筛选研究结果表明,玫烟色虫草Cordyceps fumosorosea KY1136和球孢白僵菌Beauveria bassiana KY1115对马铃薯块茎蛾卵、4龄幼虫和蛹都具有较好的致死效果,校正死亡率分别为61.67±5.78%、88.33±3.33%、98.33±2.89%和61.67±23.6%、73.33±4.41%、81.67±7.64%,对马铃薯块茎蛾卵的LC50分别为1.9x10～6个/m L、0.9x10～7个/m L;玫烟色虫草KY1136和球孢白僵菌KY1115对马铃薯块茎蛾的亚致死效应研究结果表明,KY1136和KY1115会显著延长马铃薯块茎蛾雌雄虫的幼虫期和未成熟期,而产卵前期、产卵天数、平均产卵量以及雌雄成虫寿命均显著减小。马铃薯块茎蛾种群的rm、R0、λ和GRR（Gross reproductive rate总繁殖率）均显著下降。4虫生真菌对中华甲虫蒲螨的安全性评价以及中华甲虫蒲螨与虫生真菌对马铃薯块茎蛾的联合防控玫烟色虫草KY1136和球孢白僵菌KY1115对中华甲虫蒲螨安全性评价研究结果表明,KY1136和KY1115对中华甲虫蒲螨无明显毒力,对蒲螨的死亡率和单螨繁殖力均无显著影响;中华甲虫蒲螨和虫生真菌对马铃薯块茎蛾的联合防控研究结果表明,同时应用中华甲虫蒲螨和虫生真菌处理组的马铃薯块茎蛾化蛹量显著低于单独应用蒲螨处理组,虫粪堆数略低于单独应用蒲螨处理组,但差异不显著,100螨+高浓度KY1136处理组土豆重量大于100螨处理组,且与无马铃薯块茎蛾对照组无显著差异。

关键词：马铃薯块茎蛾中华甲虫蒲螨虫生真菌生物防治

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中华甲虫蒲螨和苏云金杆菌鲇泽亚种联合防治冷杉梢斑螟研究

中华甲虫蒲螨和苏云金杆菌鲇泽亚种联合防治冷杉梢斑螟研究

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作者：王倩倩东北林业大学

学位级别：硕士

冷杉梢斑螟(Dioryctria abietella),属鳞翅目,螟蛾科,主要蛀食红松球果,近年来,给林业生产带来巨大损失,是我国重要的林业害虫。中华甲虫蒲螨通过叮咬寄主的同时可以产生神经毒素将寄主麻痹、毒杀寄主。Bt产生的芽孢在被昆虫取食之后,... 详细信息

冷杉梢斑螟(Dioryctria abietella),属鳞翅目,螟蛾科,主要蛀食红松球果,近年来,给林业生产带来巨大损失,是我国重要的林业害虫。中华甲虫蒲螨通过叮咬寄主的同时可以产生神经毒素将寄主麻痹、毒杀寄主。Bt产生的芽孢在被昆虫取食之后,在昆虫的肠道中萌发繁殖,最后透过肠道进入血液,最终导致昆虫因饥饿、脱水、败血症死亡。本文以冷杉梢斑螟为研究对象,采用中华甲虫蒲螨(Pyemotes zhonghuajia Yu,Zhang and He)和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis *** Bonnefoi et de Barjac,Bta)分别单独、联合作用于冷杉梢斑螟老熟幼虫的方法,对其死亡率、保护酶解毒酶活变化,还有中华甲虫蒲螨进入球果的可行性进行研究。主要研究结果如下:1.冷杉梢斑螟老熟幼虫取食均匀浸蘸苏云金杆菌鲇泽亚种菌悬液(设置5种浓度)的饲料24h后的死亡率和保护酶解毒酶活变化。表明Bta作用于冷杉梢斑螟,对幼虫体内的解毒酶(acetylcholinesterase,ACh E),(glutathione-S-transferase,GSTs)均有激活作用;对(carboxylesterase,Car E)有抑制作用;(catalase,CAT)和(peroxidase,POD)随Bta处理浓度的升高以及作用时间的延长表现出逐渐抑制的作用。10～9CFU/m L Bta致死率最高,幼虫死亡率高达100%。2.接不同数量中华甲虫蒲螨(20、30、40、50、60头)到冷杉梢斑螟老熟幼虫的死亡率和保护酶解毒酶活变化。表明中华甲虫蒲螨处理后对虫体内ACh E、GSTs均有激活作用;虫螨比为1:20,1:30,1:40或1:50时对冷杉梢斑螟幼虫CAT表现出抑制激活抑制的作用,虫螨比为1:60时表现全部抑制作用;对Car E和POD多表现出抑制作用,虫螨比为1:20或1:30时表现出抑制激活的作用,虫螨比为1:40,1:50或1:60时表现出抑制的作用。接60头蒲螨到虫体的致死率最高,幼虫死亡率高达90%。模拟室外实验,探究中华甲虫蒲螨进入球果的可行性的实验,表明中华甲虫蒲螨可以爬行进入球果蛀道,沿蛀道找到并叮咬冷杉梢斑螟,最终导致幼虫死亡。3.冷杉梢斑螟老熟幼虫取食均匀浸蘸苏云金杆菌鲇泽亚种菌悬液(设置5种浓度)的饲料24h后再接30头中华甲虫蒲螨到幼虫体上后的死亡率和保护酶解毒酶活变化。表明Bta+蒲螨联合作用于冷杉梢斑螟老熟幼虫,对幼虫体内的解毒酶ACh E、GSTs多有激活作用,对Car E酶有抑制作用;对保护酶CAT酶活性,多有激活作用,高浓度(5×10～4、1×10～4CFU/m L)Bta+蒲螨联合作用对幼虫POD酶活性呈激活抑制激活的趋势,中浓度(5×10～3CFU/m L)POD酶活性呈激活抑制的趋势,低浓度(1×10～3、1×10～2CFU/m L)POD酶活性呈抑制激活的趋势。5×10～4CFU/m L Bta+蒲螨联合作用处理死亡率最高,高达80%。

关键词：冷杉梢斑螟老熟幼虫苏云金杆菌鲇泽亚种中华甲虫蒲螨保护酶解毒酶生测

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中华甲虫蒲螨和管氏肿腿蜂联合控制双条杉天牛初探

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中国农学通报 2023年第1期39卷 107-111页

作者：胡帅罗立平孙猛杨禹温俊宝北京市植物园管理处/北京市花卉园艺工程技术研究中心北京100093 国家棉花工程技术研究中心乌鲁木齐830091 北京林业大学林木有害生物防治北京市重点实验室北京100083

为探索2种寄生性天敌联合应用于害虫防治的可行性,为生物防治提供天敌利用的新思路,本研究选取中华甲虫蒲螨和管氏肿腿蜂开展同时作用和先后作用于双条杉天牛3龄幼虫的试验。研究发现:(1)中华甲虫蒲螨和双条杉天牛幼虫联合作用于双条杉... 详细信息

为探索2种寄生性天敌联合应用于害虫防治的可行性,为生物防治提供天敌利用的新思路,本研究选取中华甲虫蒲螨和管氏肿腿蜂开展同时作用和先后作用于双条杉天牛3龄幼虫的试验。研究发现:(1)中华甲虫蒲螨和双条杉天牛幼虫联合作用于双条杉天牛幼虫时,寄生率和寄生成功率均达到100%。(2)单种天敌寄生时,育出的中华甲虫蒲螨膨腹体和羽化成功的管氏肿腿蜂子代数量均在70以上;但当2种天敌同时寄生或者先后寄生时,各自育出的子代数量均显著下降。因此在生产上建议用中华甲虫蒲螨和管氏肿腿蜂防治双条杉天牛的幼虫时,释放中华甲虫蒲螨约10天后再释放肿腿蜂,降低两者竞争同种寄主资源的概率,既能避开天敌竞争又可以让肿腿蜂去防控较高龄期的靶标害虫。研究结果可为多种天敌联合防控钻蛀性害虫提供参考。

关键词：中华甲虫蒲螨管氏肿腿蜂种间竞争联合控制生物防治

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中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制作用研究

中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制作用研究

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作者：陈亦钗贵州大学

学位级别：硕士

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是一种世界性农业害虫,危害寄主植物超过353种,对主要经济作物可造成毁灭性损害。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia是我国本土优势天敌,能有效地寄生鳞翅目、鞘翅目、膜翅目等害虫。有研究发现中华甲... 详细信息

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是一种世界性农业害虫,危害寄主植物超过353种,对主要经济作物可造成毁灭性损害。中华甲虫蒲螨Pyemotes zhonghuajia是我国本土优势天敌,能有效地寄生鳞翅目、鞘翅目、膜翅目等害虫。有研究发现中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾卵、幼虫、预蛹和蛹致死效果显著。目前,国内外有关中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制研究未见报道。本论文研究了中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾细胞免疫反应和体液免疫反应的影响,并对被中华甲虫蒲螨寄生的草地贪夜蛾5龄幼虫进行转录组和蛋白组测序分析,鉴定出与免疫有关的差异基因和差异蛋白,为中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的抑制机制研究提供理论支撑。1、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾免疫反应的影响草地贪夜蛾幼虫被中华甲虫蒲螨寄生后的细胞免疫和体液免疫能力降低。寄主幼虫的血细胞总数在被寄生后显著高于对照组,在寄生2 h达到最高,2 h后有所降低但仍显著高于对照组。同时,被中华甲虫蒲螨寄生后寄主血细胞延展率显著低于未被寄生的幼虫,且凋亡率明显高于对照组。此外,寄主血细胞的吞噬能力和包囊能力在被寄生后显著低于对照组,黑化作用的抑制程度加重,黑化率显著低于对照组,同时,酚氧化酶活性受到抑制,被寄生后的血细胞活性显著低于对照组。2、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾转录组表达水平的影响及免疫相关基因的鉴定利用真核无参转录组测序技术分别对10头和40头中华甲虫蒲螨寄生24 h后的草地贪夜蛾5龄幼虫和对照组进行转录组测序,获得的原始数据经质控后得到55309个Unigenes。将Unigenes比对到Nr、Pfam、Swiss-prot、KEGG和GO五个数据库进行功能注释,在五个数据库中共同注释的Unigene有360个。同源比对发现注释到斜纹夜蛾Spodoptera litura物种的Unigenes最多。对获得基因进行差异分析,结果发现:与对照组相比,在10头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达基因1287个,其中上调552个,下调735个;在40头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达基因1774个,其中上调777个,下调997个。两个处理组中都出现差异表达的基因共有138个,其中上调55个,下调83个。基于GO富集和KEGG富集分析,获得差异基因的分类功能和富集通路,鉴定与免疫相关基因,通过q RT-PCR分别验证了15个差异表达基因的相对表达趋势,结果有12个基因与转录组测序数据基本一致,说明转录组测序数据可靠。3、中华甲虫蒲螨寄生对草地贪夜蛾蛋白组表达水平的影响及免疫相关蛋白的筛查通过对被10头和40头中华甲虫蒲螨寄生24 h后的草地贪夜蛾5龄幼虫和无寄生组进行蛋白组测序,获得可定量蛋白4341个。对获得蛋白质进行差异分析,与对照组相比,在10头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达蛋白74个,其中上调有40个,下调有34个;在40头中华甲虫蒲螨寄生组中共鉴定到差异表达蛋白247个,其中上调有135个,下调有112个;两个处理组中都出现差异表达的蛋白共有97个,其中上调有51个,下调有46个。基于GO富集和KEGG富集分析,获得差异基因的分类功能和富集通路,鉴定与免疫相关蛋白。联合组学分析,与对照相比,10头中华甲虫蒲螨寄生组在两组学中共同上调的免疫蛋白为丝氨酸蛋白酶抑制剂-Z4,40头中华甲虫蒲螨寄生组在两组学中共同上调的免疫蛋白为小热激蛋白27.2,丝氨酸蛋白酶抑制剂77Ba,小热激蛋白,纤溶酶原激活物抑制剂2,巨噬细胞样,细胞色素P450和凝集素C型域。

关键词：草地贪夜蛾中华甲虫蒲螨免疫反应组学分析

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球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟幼虫联合杀虫作用研究

球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟幼虫联合杀虫作用研究

引用

作者：刘行东北林业大学

学位级别：硕士

冷杉梢斑螟（Dioryctria abietella）是针叶林的破坏性害虫,近年来,该害虫在我国东北大面积发生,严重危害红松（Pinus koraiensis）球果种实。球孢白僵菌（Beauveria bassiana）和中华甲虫蒲螨（Pyemotes zhonghuajia）作为重要的生物... 详细信息

冷杉梢斑螟（Dioryctria abietella）是针叶林的破坏性害虫,近年来,该害虫在我国东北大面积发生,严重危害红松（Pinus koraiensis）球果种实。球孢白僵菌（Beauveria bassiana）和中华甲虫蒲螨（Pyemotes zhonghuajia）作为重要的生物防治手段,被广泛应用。本研究通过球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟幼虫的毒（杀虫）力测定,球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨处理后冷杉梢斑螟幼虫的酶活性及营养物质含量变化,球孢白僵菌侵染冷杉梢斑螟幼虫体表和消化道的扫描电镜观察,球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨处理后冷杉梢斑螟幼虫的转录组学分析。为冷杉梢斑螟生物防治奠定理论依据。主要研究结果如下:（1）球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨对冷杉梢斑螟幼虫的毒（杀虫）力测定对TS370911、TS313128、CFCC81428、CFCC83116、CFCC83486这五株白僵菌进行毒力测定,发现CFCC81428对幼虫的毒力更强,其侵染幼虫第10d的LC25、LC50分别为2.04×10～4、7.24×10～5孢子/m L。110～8孢子/m L的CFCC81428菌株侵染幼虫后的LT50为5.36d。幼虫被浓度为110～8孢子/m L的CFCC81428菌株侵染10d后的累计校正死亡率为77.30%。孢子萌发率高于90%。中华甲虫蒲螨寄生幼虫第3d的LD25、LD50分别为16.60、25.12头。两者联合处理后幼虫的累计校正死亡率高于单独被中华甲虫蒲螨寄生后的累计校正死亡率。两者联合处理后幼虫的僵虫率高于单独感染球孢白僵菌的幼虫僵虫率。（2）球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨处理后冷杉梢斑螟幼虫的酶活性及营养物质含量变化研究发现球孢白僵菌侵染后幼虫的GSTs和ACh E这两种解毒酶活性高于对照组,处于被诱导状态。中华甲虫蒲螨寄生后幼虫的GSTs和ACh E活性在60h前高于对照组,处于被诱导状态,72h后低于对照组,处于被抑制状态。联合处理后幼虫的解毒酶活性与其它两个处理组相比呈现进一步下降趋势。幼虫PPO、SOD、CAT这三种保护酶活性,被球孢白僵菌侵染后除PPO和CAT活性在12h时低于对照组,其余取样时间均高于对照组,处于被诱导状态。中华甲虫蒲螨寄生后,幼虫这三种保护酶活性呈现先升高再降低的趋势。联合处理后,幼虫PPO和CAT活性与其它两个处理组相比呈现提前下降趋势。中华甲虫蒲螨寄生后冷杉梢斑螟幼虫总糖和蛋白质含量与对照组相比呈现逐渐下降趋势。（3）球孢白僵菌侵染冷杉梢斑螟幼虫体表和消化道的扫描电镜观察观察发现球孢白僵菌接种12h后,分生孢子附着在幼虫体壁不同区域,接种36h后,分生孢子以菌丝或芽管的形式侵入幼虫体壁,接种72h后,幼虫消化道外壁发生褶皱破裂、僵化易碎等病理变化,接种96h后,菌丝穿出幼虫体壁并在表面大量繁殖,接种120h后,菌丝体上长出新的分生孢子。（4）球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨处理后冷杉梢斑螟幼虫的转录组学分析本研究通过Illumina高通量测序平台对12个样品的转录组c DNA文库进行测序,共获得75.92Gb Clean Data。通过各大数据库注释,最终获得25636条有注释信息的基因。通过BLAST对比NR数据库共有24087条Unigenes匹配到了NR数据库。发现11172条Unigenes匹配到脐橙螟（Amyelois transitella）是冷杉梢斑螟匹配率最高的物种,占NR注释总数的46.38%。GO功能分类显示,共有18517条Unigenes注释到了生物过程、细胞组分、分子功能上,对成功注释的Unigenes进一步分类,获得59个功能亚类。通过幼虫抗逆抗氧化基因的筛选发现GST-2,ACh E-1,SOD2-2,GST-23等基因与幼虫解毒酶和保护酶相关性显著。球孢白僵菌处理组分析得到749个差异基因,其中上调基因有115个,下调基因有634个。通过GO注释,差异表达基因注释到了37个GO term中。将差异基因比对到COG数据库中进行注释,在COG数据库中,这些序列被注释到17个功能类别中。KEGG路径库富集分析,差异基因能够比对到137个代谢通路里。幼虫体内控制肽聚糖识别蛋白、热休克70kda蛋白1/2/6/8、自噬相关蛋白5等表达的相关免疫基因被激活,表现为基因表达量上调。中华甲虫蒲螨处理组分析得到79个差异基因,其中上调基因有33个,下调基因有46个。通过GO注释,差异表达基因注释到了33个GO term中。将差异基因比对到COG数据库中进行注释,在COG数据库中,这些序列被分别注释到9个功能类别中。KEGG路径库里富集分析差异表达基因能够比对到33个代谢通路里。控制CD63抗原、精胺氧化酶等表达的相关免疫基因被激活,表现为基因表达量上调。球孢白僵菌和中华甲虫蒲螨联合

关键词：冷杉梢斑螟球孢白僵菌中华甲虫蒲螨毒杀作用转录组

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