检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2023年第6期43卷 458-463页

作者：陈楠郝相君王晶陈国江乔春霞李新颖沈倍奋冯健男柴立辉肖鹤军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所北京100850 河南大学抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室开封475004

目的建立H5N1假病毒的体内感染模型,并对抗体FHA3的体内中和活性进行鉴定。方法依据A/Anhui/1/2005/H5N1毒株血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的序列信息,构建重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1,并与质粒***.R-E-共转染293T细胞制备H5N1假病毒上清,电镜观察上清中假病毒颗粒形态。假病毒上清感染MDCK细胞后,测定病毒滴度;经腹腔注射入BALB/c小鼠体内,在感染后2、5、8、12 d进行生物发光成像,检测假病毒体内感染情况。利用建立的小鼠感染模型,评价抗体FHA3的体内功能活性。结果重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1构建正确,与***.R-E-质粒共转染293T细胞可制备出高滴度的假病毒上清,电镜下可见圆形的病毒颗粒。H5N1假病毒感染后,小鼠体内发出较强的荧光,而攻毒前给予抗体FHA3处理可减弱其荧光信号。结论成功构建出H5N1假病毒体内感染模型,并证实抗体FHA3对假病毒的感染具有体内保护作用。

关键词：流感病毒假病毒体内模型中和试验

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SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价

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病毒学报 2007年第6期23卷 440-446页

作者：闫克夏谭文杰张相民王慧娟李岩阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 加拿大国家微生物实验室

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质... 详细信息

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。

关键词： SARS-CoV S蛋白假病毒中和试验

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中和试验对羊传染性脓疱皮炎抗体的检测

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甘肃畜牧兽医 1990年第2期 13-14页

作者：薛掌林薛双虎吕武夫赵立志王廷璞甘肃省畜牧兽医研究所

为检测羊传染性脓疱皮炎抗体,我们曾进行了血球凝集、补体结合和琼脂扩散等试验,但效果不佳,查不到抗体,后改用中和试验,查到了传染性脓疱皮炎抗体,现报告如下:一、材料与方法1.抗原制备取冻存的25和80代 HCE 细胞毒,在犊牛睾丸单层细... 详细信息

为检测羊传染性脓疱皮炎抗体,我们曾进行了血球凝集、补体结合和琼脂扩散等试验,但效果不佳,查不到抗体,后改用中和试验,查到了传染性脓疱皮炎抗体,现报告如下:一、材料与方法1.抗原制备取冻存的25和80代 HCE 细胞毒,在犊牛睾丸单层细胞上培养传至30和90代,细胞苗毒价(TCID)分别为10~4/0.1毫升和10/0.1毫升,-25℃冻存备用。2.试验动物临床健康无病,从未患过传染

关键词：中和试验皮炎 HCE 细胞毒毒素抗体滴度细胞苗

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脊髓灰质炎病毒假病毒中和试验测定血清中和抗体滴度的研究

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病毒学报 2020年第5期36卷 802-808页

作者：吴雅楠朱文勇周健刘泽马磊高菁霞廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650000

脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的持续监测在全球消灭脊髓灰质炎的最后阶段起着至关重要的作用,对易感人群的脊髓灰质炎中和抗体的监测,是疫苗强化免疫的重要数据支持。但是伴随着脊灰活病毒的大范围封存计划的实施,传统的病毒中和试验... 详细信息

脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的持续监测在全球消灭脊髓灰质炎的最后阶段起着至关重要的作用,对易感人群的脊髓灰质炎中和抗体的监测,是疫苗强化免疫的重要数据支持。但是伴随着脊灰活病毒的大范围封存计划的实施,传统的病毒中和试验将难以开展,为此本研究成功构建了SabinⅡ型PV假病毒,并将其运用到人群血清样本的中和试验进行验证。研究发现,PV假病毒具有型特异性,具有与脊灰病毒相似的电镜形态。所以本研究制备的脊灰假病毒能够满足人群血清中和抗体水平的检测要求,值得推广运用。

关键词：脊髓灰质炎病毒假病毒中和试验中和抗体滴度

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肠道病毒68型新型中和试验方法的建立及其初步应用

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病毒学报 2017年第5期33卷 661-667页

作者：万俊凯王玮侯汪衡李姝璇赵欢郑清炳何水珍程通夏宁邵国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学生命科学学院厦门361102 分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门大学公共卫生学院厦门361102 厦门市疾病预防与控制中心厦门361021

针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为... 详细信息

针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为检测抗体,基于酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立EV-D68高效中和试验方法;进一步比较该方法与传统中和试验方法 Nt-CPE的一致性,并使用该方法对临床血清样本进行检测。共获得10株分泌抗EV-D68单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取一株性能最优的15C5进行生产纯化,鉴定其为IgG3亚型;以15C5为检测抗体,建立了快速检测EV-D68中和抗体的Nt-ELISPOT方法;与Nt-CPE方法比较,Nt-ELISPOT方法将检测时间由5~7d缩短至1d以内,并且两种方法检测结果一致性良好;应用所建立的Nt-ELISPOT方法对厦门地区146份人群血清样本进行检测,显示血清样本EV-D68中和抗体阳性率为98.6%(144/146),提示厦门地区可能存在过EV-D68的流行。本研究基于ELISPOT建立的新型EV-D68中和试验方法快速可靠,适合通量检测,可以应用于EV-D68中和抗体水平的血清学调查,为EV-D68感染的防控工作提供帮助。

关键词：肠道病毒68型(EV-D68) 中和试验中和抗体血清检测

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狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用

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中华检验医学杂志 2006年第6期29卷 554-557页

作者：张守峰曹亮张菲李海涛李清竹扈荣良军事医学科学院军事兽医研究所长春130062 新疆农业大学动物医学院沈阳农业大学畜牧兽医学院

目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备... 详细信息

目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体;以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11,以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后,通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量(TCID50);利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清,并以国际兽疫局标准品进行标定;参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法,确定中和试验程序,对51份样品血清进行测定,并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较,评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和MicrosoftExcel软件为基础,设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a;纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1∶400;CVS-11株的使用量为每孔100TCID50;本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致;自行设计的计算方法操作简便,计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。

关键词：狂犬病毒杂交瘤荧光抗体技术中和试验

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汉坦病毒76-118株假病毒的构建及其在中和试验中的应用

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中国生物制品学杂志 2018年第7期31卷 701-707页

作者：李燕邱野孙宏亮郝建丽安继新姜崴李玉华长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012 中国食品药品检定研究院北京100050

目的构建含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,并初步探讨双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever wiht renal syndrome,HFRS)灭活疫苗效价检测的新方法。方法提取汉坦病毒76-118株病毒RNA,PCR扩增获得M基因,将其插入真核表达质粒,获... 详细信息

目的构建含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,并初步探讨双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever wiht renal syndrome,HFRS)灭活疫苗效价检测的新方法。方法提取汉坦病毒76-118株病毒RNA,PCR扩增获得M基因,将其插入真核表达质粒,获得重组表达质粒Pc DNA3.1-M。将质粒Pc DNA3.1-M与HIV假病毒构建体系DMEM 1、Lenti-HG和HG transgene reagent瞬时共转染Vero-E6细胞,48 h后,收集假病毒上清,对其滴度、单轮感染性、蛋白量及中和活性进行检测,并应用于双价HFRS灭活疫苗抗血清的检测。结果质粒Pc DNA3.1-M经酶切及测序鉴定证明构建正确。假病毒对Vero-E6细胞的感染性滴度为8×10~7 TU/mL,能被76-118株抗血清中和,从而失去感染性,其中和活性与野生型病毒一致。基于假病毒的效价检测方法对效价合格血清进行再检测时结果均达到了预期要求。结论构建了含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,构建的假病毒可以应用于中和试验,并与野生病毒的检测结果具有高度相关性,为下一步检测双价HFRS灭活疫苗的效价提供了可能。

关键词：汉坦病毒假病毒质粒效价中和试验

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水貂阿留申病毒体外中和试验的研究

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病毒学报 1994年第4期10卷 334-338页

作者：吴威聂金珍中国农业科学院特产研究所

首次应用乙醚处理的阿留申病毒（Ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＡＤＶ）Ｇ株（ＡＤＶ－Ｇ）与阿留申病毒阳性血清进行体外中和试验获得成功。试验证明，经乙醚处理后ＡＤＶ抗原决定簇充分暴露，使ＡＤＶ能有效地被特异性... 详细信息

首次应用乙醚处理的阿留申病毒（Ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＡＤＶ）Ｇ株（ＡＤＶ－Ｇ）与阿留申病毒阳性血清进行体外中和试验获得成功。试验证明，经乙醚处理后ＡＤＶ抗原决定簇充分暴露，使ＡＤＶ能有效地被特异性抗体中和。水貂在感染ＡＤＶ１０天即可产生中和抗体，６０天中和抗体滴度高达１２８００。乙醚处理的ＡＤＶ－Ｇ可被兔抗ＡＤＶ结构蛋白标准阳性血清和纯化的抗ＡＤＶＦａｂ片段所中和，说明ＡＤＶ中和抗原决定簇主要位于结构蛋白上。比较了对流免疫电泳（ＣＩＥＰ）、免疫组织化学法（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｔｒｙ，ＩＨＣ）和γ－球蛋白含量测定的结果，证明中和试验是诊断阿留申病最敏感的方法。同时，阐明了各检测方法间的相关性。

关键词：水貂阿留申病毒中和试验

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消毒剂中和试验中若干问题的研究

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中国消毒学杂志 1993年第3期10卷 147-152页

作者：袁朝森梁道保张敏丽军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 河南省卫生防疫站

以洗必泰与金黄色葡萄球菌为例,对中和试验中经常遇到的几个问题进行了试验观察。结果表明,不同中和剂对洗必泰的中和作用不一致,消毒剂加中和剂再加菌液与消毒剂加菌后再加中和剂,所获结果可能不同。检验中和完全程度,可用不同中和剂... 详细信息

以洗必泰与金黄色葡萄球菌为例,对中和试验中经常遇到的几个问题进行了试验观察。结果表明,不同中和剂对洗必泰的中和作用不一致,消毒剂加中和剂再加菌液与消毒剂加菌后再加中和剂,所获结果可能不同。检验中和完全程度,可用不同中和剂作比较,并辅以接种不同稀释度样液的方法鉴别。有的复方中和剂在压力蒸汽灭菌后性能可发生变化。中和剂用量与中和消毒剂量间有较密切的关系。

关键词：中和试验消毒剂

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猪胸膜肺炎放线杆菌ApxI毒素中和试验的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 158-164页

作者：胡耀方吴昊江昌盛库旭钢孙琪于学祥何启盖华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心湖北武汉430070

为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4%猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用... 详细信息

为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4%猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD_(540nm)值判断溶血程度,计算出能够保护50%红细胞不发生溶血的最低血清稀释倍数,即为该血清的中和效价。利用该方法进一步检测了副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌等阳性血清,无交叉反应,表明该方法特异性较强;利用该方法最高能够检测到中和效价为1:1580的APP ApxI毒素抗体阳性的猪血清,表明建立的中和试验具有较高的敏感性;以BALB/c小鼠为模型的感染试验结果表明,当其血清中ApxI毒素抗体的中和效价达到1:20时能够为小鼠提供有效保护。采用建立的方法检测临床采集的103份猪血清样品,能够有效检测其中和抗体,表明该方法可以应用于临床检测可分泌ApxI毒素的APP的感染和含ApxI毒素的亚单位疫苗免疫效果评估,为评价亚单位疫苗的免疫效果和猪传染性胸膜肺炎的诊断提供了技术支持。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素中和试验

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