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中华口腔医学杂志 2024年第7期59卷 721-725页

作者：王铖开王辉武冰清刘怡罗振华首都医科大学口腔医学院牙周科北京100050 首都医科大学口腔医学院黏膜科北京100050

牙周炎是由菌斑生物膜引起的牙周组织慢性感染性疾病,可导致牙龈出血、牙齿松动并最终脱落。在牙周炎的过程中,中性粒细胞发挥着双重作用,既可以保护牙周组织免受病原体的侵害,也可能对牙周组织产生破坏性影响。本文从呼吸爆发、中性粒... 详细信息

牙周炎是由菌斑生物膜引起的牙周组织慢性感染性疾病,可导致牙龈出血、牙齿松动并最终脱落。在牙周炎的过程中,中性粒细胞发挥着双重作用,既可以保护牙周组织免受病原体的侵害,也可能对牙周组织产生破坏性影响。本文从呼吸爆发、中性粒细胞细胞外诱捕网、脱颗粒作用以及吞噬作用等4个方面介绍中性粒细胞在牙周炎中的保护和破坏牙周组织的双重作用机制,以期深入阐述中性粒细胞在牙周炎中的作用,有助于临床医师更好地了解牙周炎的发生和发展机制,为牙周炎的预防和治疗提供新思路。

关键词：牙周炎中性粒细胞呼吸爆发中性粒细胞细胞外诱捕网细胞脱颗粒吞噬作用

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NETs通过调控细胞骨架和黏着斑形成抑制子痫前期胎盘中滋养细胞的迁移

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中国病理生理杂志 2025年

作者：叶迅伽庸安露庾洁盈鲁馨瑶李瑞满杨雪松宛硕王广暨南大学基础医学与公共卫生学院组织学与胚胎学系暨南大学基础医学与公共卫生学院病理生理学系国家中医药管理局病理生理实验室暨南大学附属第一医院妇产科暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的：探讨胎盘中中性粒细胞细胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）在子痫前期（preeclampsia, PE）发生中可能的作用机制。方法：通过胎盘转录组测序数据分析中性粒细胞在子痫前期和正常孕妇胎盘中的浸润差异，通过胎... 详细信息

目的：探讨胎盘中中性粒细胞细胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）在子痫前期（preeclampsia, PE）发生中可能的作用机制。方法：通过胎盘转录组测序数据分析中性粒细胞在子痫前期和正常孕妇胎盘中的浸润差异，通过胎盘单细胞测序数据（GSE173193）分析PE胎盘中NETs形成相关基因的表达。免疫荧光染色和ELISA检测NETs在胎盘组织中的水平，以及通过体外诱导NETs产生，与人绒毛外滋养细胞株HTR8/Svneo细胞共培养，结合RNA-seq技术，揭示NETs调控滋养细胞功能的潜在信号通路。结果：子痫前期胎盘中中性粒细胞浸润与NETs形成相关基因MPO和ELANE表达相较于对照组胎盘显著增加，对临床胎盘样本进行检测验证，结果显示子痫前期胎盘中NETs水平相较于正常组胎盘增加；NETs显著抑制HTR8/Svneo细胞的迁移；在NETs处理24 h后的HTR8/Svneo细胞中观察到F-actin排列紊乱，聚集体形成以及paxillin表达减少。胎盘单细胞测序分析结果显示中应力纤维和黏着斑通路在PE胎盘的绒毛外滋养细胞（extravillous trophoblast, EVT）下调。结论：中性粒细胞浸润和NETs形成相关代表性基因表达在PE胎盘中增加，NETs可能通过诱导EVT应力纤维解体及下调paxillin表达，进而破坏细胞骨架和黏着斑形成来抑制绒毛外滋养细胞迁移。

关键词：子痫前期中性粒细胞细胞外诱捕网滋养细胞细胞迁移应力纤维黏着斑

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Dnase1干预NETs对富血小板血浆加速糖尿病创面愈合相关机制的初步研究

Dnase1干预NETs对富血小板血浆加速糖尿病创面愈合相关机制的初步...

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作者：郭正东广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景:糖尿病足部溃疡是糖尿病患者发生率最高的并发症之一,治疗难度大。研究发现,富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)中含有多种高浓度的生长因子,其在促进创面愈合等方面发挥重要作用。但糖尿病创面存在大量的蛋白酶、炎症因... 详细信息

研究背景:糖尿病足部溃疡是糖尿病患者发生率最高的并发症之一,治疗难度大。研究发现,富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)中含有多种高浓度的生长因子,其在促进创面愈合等方面发挥重要作用。但糖尿病创面存在大量的蛋白酶、炎症因子,能够降解PRP中的生长因子和细胞因子,导致PRP的作用效果大为降低。近几年来,有学者报道中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)在糖尿病创面中起到举足轻重的作用。高浓度的NETs,其组分MPO、NE、组蛋白等,能够降解创面组织中的细胞外基质,加重创面炎症反应,延缓了糖尿病创面愈合。如果我们先减少糖尿病创面NETs的形成,再注射PRP治疗,效果会不会更佳呢?目前还没有相关的报道。目的:探讨脱氧核糖核酸酶1(deoxyribonuclease 1,Dnase1)注射糖尿病创面降解NETs后,再联合注射PRP,观察创面愈合有何影响,并探讨及机制。方法:在糖尿病大鼠上建立4个溃疡创面模型,随机分成4组:A组(Dnase+PRP组)、B组(PRP组)、C组(Dnase组)、D组(对照组)。A组(Dnase+PRP组):生理盐水冲洗创面,按照15 mg/kg的标准配好每只大鼠注射Dnase1总量,并平均分成8等份,选取大鼠创面边缘的8个等分点,用1ml注射器均匀皮下注入每等份Dnase1。同时选取创面边缘两个Dnase1注射点中间,作为PRP注射点,共8个,每个点均匀注入PRP 0.1ml,包覆凡士林油纱,医用半透明膜固定。B组(PRP组):生理盐水冲洗创面,相同方法于创面边缘8个点皮下均匀注射PRP,凡士林油纱包覆,医用半透明膜固定。C组(Dnase组):生理盐水冲洗创面,相同方法注射Dnase1,灭菌凡士林油纱包覆,医用半透膜固定。D组(对照组):生理盐水冲洗创面,再按注射PRP方法于创面均匀皮下注射生理盐水,灭菌凡士林油纱包覆,医用半透膜固定。分别于第5天、第14天各取12只大鼠,观察创面恢复情况、愈合程度、肉芽组织生长情况,切取创面组织,用石蜡包埋法制成切片,用HE染色免疫组化法对切片进行染色处理,在显微镜下观察新血管生成、成纤维细胞生长、炎症细胞浸润情况;检测和比较组织生长因子、炎性因子及NETs相关指标。结果:1)治疗5天、14天后,Dnase+PRP组创面可见较多的新鲜肉芽组织生长,新生血管形成、成纤维细胞明显增多;而中性粒细胞浸润减少。2)第14天创面愈合率统计:Dnase+PRP组、PRP组、Dnase组、对照组分别为92.59±2.13%、76.23±3.72%、70.34±5.79%、55.68±3.29%。对比结果显示创面愈合率最高的为Dnase+PRP组(P<0.05)。3)Dnase+PRP组、PRP组创面血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)浓度较另外两组高,差异显著(P<0.05)。4)Dnase+PRP组、Dnase组创面组织中,中性粒细胞胞外诱捕网形成的标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、弹性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)生成较少(P<0.05),促炎因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放减少(P<0.05),抗炎因子如白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)的释放增加(P<0.05)。结论:***1能够降低糖尿病大鼠创面肉芽组织中的NETs水平;***在糖尿病大鼠创面组织中的NETs水平降低后,有助于促进肉芽组织生长、创面上皮化;***1和PRP联合注射能够产生协同作用:降低糖尿病大鼠创面促炎因子水平,改善创面慢性持续炎症状态;同时提高生长因子浓度,促进细胞增殖、血管新生,从而促进创面愈合。

关键词：富血小板血浆糖尿病创面中性粒细胞细胞外诱捕网生长因子

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抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎发病机制及治疗的研究进展

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中华肾脏病杂志 2020年第5期36卷 412-416页

作者：胡剑高春林张沛夏正坤南京医科大学金陵临床医学院(东部战区总医院)儿科南京210002

抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性血管炎(AAV)主要以小血管壁的炎性反应和纤维素样坏死为病理表现,伴随血清ANCA阳性,累及全身多系统的自身免疫性疾病。主要临床表现包括:显微镜下多血管炎(MPA),肉芽肿性多血管炎(GPA),嗜酸性肉芽肿性... 详细信息

抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性血管炎(AAV)主要以小血管壁的炎性反应和纤维素样坏死为病理表现,伴随血清ANCA阳性,累及全身多系统的自身免疫性疾病。主要临床表现包括:显微镜下多血管炎(MPA),肉芽肿性多血管炎(GPA),嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)等。最常见累及器官包括呼吸道及肾脏,病情凶险,死亡率高。本文旨在综述AAV发病机制及治疗方法的最新研究进展。

关键词：抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎治疗补体系统蛋白质类病因抗中性粒细胞胞质抗体中性粒细胞细胞外诱捕网

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M2型巨噬细胞外泌体包载DNase 1治疗缺血性脑卒中并重塑血脑屏障的研究

M2型巨噬细胞外泌体包载DNase 1治疗缺血性脑卒中并重塑血脑屏障...

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作者：青洪锐西南交通大学

学位级别：硕士

脑卒中是全球范围内成年人致残和致死的首位病因,由脑动脉血栓栓塞引起的缺血性脑卒中是最常见的卒中类型。缺血性脑卒中的治疗受限于血脑屏障(BBB)的阻碍,BBB隔绝了绝大多数药物进入脑内,大大削弱了治疗效果。尽管缺血发生后内皮细胞... 详细信息

脑卒中是全球范围内成年人致残和致死的首位病因,由脑动脉血栓栓塞引起的缺血性脑卒中是最常见的卒中类型。缺血性脑卒中的治疗受限于血脑屏障(BBB)的阻碍,BBB隔绝了绝大多数药物进入脑内,大大削弱了治疗效果。尽管缺血发生后内皮细胞的损伤导致BBB通透性提高,然而其开放程度仍不足以使达到有效浓度的药物进入。此外,BBB的损伤会引发有害物质进入到脑实质内部,进一步加重脑损伤。纳米给药系统作为一种药物递送方式,能够显著提高药物的靶向能力,使其更多地向病灶区域富集。因此,我们希望利用载体系统在提高药物对于BBB穿透能力的同时并修复损伤BBB,提高缺血性脑卒中的治疗效果。在本研究中,我们设计制备一种载脱氧核糖核苷酸酶1(Deoxyribonuclease 1,DNase 1)的M2型巨噬细胞外泌体(M2-type macrophage exosomes,M2exo)载体系统。巨噬细胞外泌体作为巨噬细胞天然分泌的通讯小体,表面具备多种跨膜蛋白,能够显著提高DNase 1的生物相容性和梗死区域的靶向能力,并且M2型外泌体能够调节促炎M1型小胶质细胞向抗炎M2型转换,生成抗炎因子从而减轻神经炎症。DNase 1能够抑制中性粒细胞胞外诱捕网络(Neutrophil extracellular traps,NETs)生成,减少血脑屏障损伤,对血脑屏障起到保护作用。首先,我们利用白介素4(IL-4)与巨噬细胞共孵育,通过细胞因子试剂盒、流式细胞仪检测巨噬细胞的表型。收集培养基上清液,通过高速离心法分离得到M2exo,利用电穿孔技术制备得到M2exo@DNase 1,并通过透射电子显微镜、动态光散射粒度仪、考马斯亮蓝、SDS-PAGE凝胶电泳、酶标仪检测M2exo@DNase 1的形貌、粒径、蛋白含量、蛋白分布和酶稳定性。其次,将M2exo@DNase 1与小胶质细胞共孵育,通过流式细胞仪检测小胶质细胞的M1和M2表型占比。从小鼠胫骨中提取中性粒细胞,诱导生成NETs,将M2exo@DNase 1与其共孵育,通过荧光显微镜、elisa试剂盒检测其对NETs的抑制作用。最后,我们在C57BL/6小鼠上建立了大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,通过小动物活体成像系统、激光散斑成像系统、TTC染色、核磁共振成像系统、病理染色、行为学测试、免疫荧光切片染色、双光子显微镜活体成像、透射电镜、WB、elisa试剂盒等检测了M2exo@DNase 1对缺血性脑卒中的靶向能力、减少梗死面积效果、行为学恢复情况以及对BBB的重塑效果。

关键词：药物传递系统缺血性脑卒中中性粒细胞细胞外诱捕网细胞外泌体

来源：评论

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中性粒细胞在温热治疗孢子丝菌病中的作用研究

中性粒细胞在温热治疗孢子丝菌病中的作用研究

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作者：王亚兰中国医科大学

学位级别：硕士

背景:孢子丝菌病是中国北方地区常见的真菌病,主要通过接触芦苇和玉米秆时感染球型孢子丝菌引起。孢子丝菌病临床表现多样,包括皮肤播散型、真菌血症、内脏器官播散型、固定型和皮肤淋巴管型,固定型和皮肤淋巴管型是最主要的两种类型。... 详细信息

背景:孢子丝菌病是中国北方地区常见的真菌病,主要通过接触芦苇和玉米秆时感染球型孢子丝菌引起。孢子丝菌病临床表现多样,包括皮肤播散型、真菌血症、内脏器官播散型、固定型和皮肤淋巴管型,固定型和皮肤淋巴管型是最主要的两种类型。尽管伊曲康唑是治疗孢子丝菌病的首选治疗方案,但治疗花费较高,副作用较大。局部温热也被用于皮肤淋巴管型及固定型孢子丝菌的治疗。对于不能安全接受其他治疗方案的患者,如孕妇和哺乳期妇女,局部热疗是治疗固定型孢子丝菌病较好的选择。尽管局部温热被推荐用于固定型及皮肤淋巴管型孢子丝菌病的治疗,但尚缺乏随机安慰剂对照试验或与其他治疗方法的比较试验,以评估该疗法的有效性和安全性。尤其是一些孢子丝菌病患者有自愈性,更需要证据明确局部热疗是否有效。在孢子丝菌病患者皮损的真皮层及皮下组织有化脓性及肉芽肿性炎症反应,组织病理学检查发现常伴有小脓肿。中性粒细胞是主要的浸润细胞之一,但中性粒细胞在孢子丝菌病的发病机制中的作用尚不清楚。有报道在一些孢子丝菌病的病灶组织中观察到中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的形成。NETs是染色质的修饰形式,保持着核小体间隔的周期性,颗粒状蛋白以球状形式与NETs相结合结合。许多真菌,比如构巢曲霉、白色念珠菌、杜氏假丝酵母及新型隐球菌都表现出对NETs的敏感性,然而仍不清楚NETs是否有杀伤球形孢子丝菌的作用。本研究旨在评估热疗在孢子丝菌病小鼠模型中的治疗作用,并初步探讨中性粒细胞及NETs是否与孢子丝菌的清除有关。报道如下。材料与方法1、实验对象人中性粒细胞分离自10个健康志愿者的静脉血。静脉血的采集及随后的实验获得中国医科大学附属第一医院机构审查委员会批准,并符合赫尔辛基宣言。球形孢子丝菌菌株来源于一个固定型孢子丝菌病患者,并经ITS测序鉴定为球形孢子丝菌。孢子丝菌病小鼠模型为6-8周周龄、体重19-20g,经皮下注射0.1ml 108/ml的球形孢子丝菌酵母细胞的1周后的BALB/C雌性小鼠。2、温热治疗方案孢子丝菌病小鼠模型治疗方法:采用定制的温热仪器及水球,加热小鼠皮损至41℃。加热期间,用温度计监测小鼠皮肤温度,温度波动于40-41℃。小鼠每天温热治疗30分钟,连续治疗4周。而对照组小鼠不进行温热处理。细胞温热:水浴锅调整至实验设定的温度(37℃和41℃)后,将细胞接种于24孔板中,将24孔板放于水浴锅的水面加热30分钟,30分钟后将细胞重新放于37℃培养箱中培养。3、温热处理后皮损的变化观察并记录治疗前及每治疗1周后小鼠皮损的变化,比较两组皮损宽度的变化。4、免疫组化检测组织中中性粒细胞细胞外诱捕网的形成小鼠温热治疗治疗1周后,处死留取皮疹组织。将组织切片黏附于多聚赖氨酸包被的载玻片上,进行免疫组化染色(SP法),通过检测弹性蛋白酶来观察中性粒细胞细胞细胞外诱捕网是否形成。5、糖原染色检测温热处理对皮损中孢子数量的影响小鼠造模1周后,温热治疗1周后及温热治疗3周后,处死小鼠并留取皮损组织。将组织切片(3um)黏附于载玻片上,用高碘酸-雪夫试剂染色,苏木素复染,在40倍物镜下随机选取多个视野,计数视野内脓腔中孢子的数量,测量脓腔的面积,并计算单位像素面积下脓腔中孢子的数量。6、免疫荧光检测中性粒细胞细胞外诱捕网的形成采用免疫荧光的方法检测中性粒细胞与孢子在不同温度条件下共培养时,中性粒细胞细胞外诱捕网的形成情况。计数中性粒细胞和NETs的数量,并计算NETs的百分率。7、杀伤实验将不同处理后的孢子培养液涂布平板,计数不同组间的集落形成单位数量。计数并比较各组14天后的集落形成单位的数量。8、统计学分析采用SPSS 22软件对数据进行统计分析,利用GraphPad Prim软件进行统计作图。利用Office 2016软件绘制统计表,数据表示为均数±标准差。用重复测量方差分析对治疗期间皮疹的宽度变化的进行统计分析。用Fisher确切概率法比较温热组和对照组小鼠皮损的清除率。温热治疗第三周时,小鼠皮损脓腔中单位像素面积的孢子数量不满足正态分布,因此采用Mann-Whitney test,数据用中位数表示。温热治疗第一周时,小鼠皮疹脓腔中单位像素面积的孢子数量满足正态分布,采用独立样本t检验,但数据仍用中位数表示。采用独立样本t检验来评估体外实验时,不同处理后球形孢子丝菌的存活状态及细胞外诱捕的形成率的差异,数据表示为均数±标准误。P<0.05表示差异具有统计学意义。实验结果:1、温热对孢子丝菌病小鼠皮损的影响温热组小鼠与对照组小鼠的皮疹直径的差值(皮疹宽度差值=治疗前皮疹宽度-治疗期间的皮疹宽度)随着治疗时间的延长不断增大,P<0.05;且温热组小鼠皮疹宽度的差值与对照组小鼠皮疹宽度的差值在治疗期间不同,P<0.05,温热组小鼠皮疹宽度的差

关键词：温热球形孢子丝菌孢子丝菌病中性粒细胞细胞外诱捕网

来源：评论

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肽酰基精氨酸脱亚胺酶4在ANCA相关性小血管炎中的作用探讨

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中华肾脏病杂志 2014年第5期30卷 327-331页

作者：王增玲李海娜崔莉邢广群青岛大学附属医院黄岛院区肾病科 266555

目的通过检测肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）在ANCA相关性小血管炎（AAV）患者血清中的水平，探讨其在AAV发病中的作用及意义。方法收集13例AAV患者发作期与缓解期血清，11例原发性慢性肾脏病患者的血清，12例健康对照的血清。用酶联免... 详细信息

目的通过检测肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）在ANCA相关性小血管炎（AAV）患者血清中的水平，探讨其在AAV发病中的作用及意义。方法收集13例AAV患者发作期与缓解期血清，11例原发性慢性肾脏病患者的血清，12例健康对照的血清。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测PAD4的水平，分析其与AAV患者BVAS评分的关系。结果（1）在AAV组，PAD4在发作期与缓解期的水平明显高于健康对照组；而在慢性肾脏病患者组中，PAD4水平与健康对照相比无显著差异。（2）AAV组有肾损害的患者PAD4水平，无论发作期还是缓解期，均高于慢性肾脏病组患者的PAD4水平。（3）AAV肾损害组患者发作期的PAD4水平与BVAS评分呈显著正相关（r=0．71，P=0．02）。结论PAD4参与了AAV的发生和发展。

关键词：血管炎抗体抗中性白细胞胞质中性粒细胞细胞外诱捕网肽酰基精氨酸脱亚胺酶4

来源：评论

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