检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张新鹏佳木斯大学

学位级别：硕士

目的:胰腺癌（pancreatic cancer）在全球各国的发病率居高不下,且总体呈现较高的增长趋势,作为预后非常差的消化道肿瘤,临床诊治十分困难。中性粒细胞水平的增长以及由其产生的中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,N... 详细信息

目的:胰腺癌（pancreatic cancer）在全球各国的发病率居高不下,且总体呈现较高的增长趋势,作为预后非常差的消化道肿瘤,临床诊治十分困难。中性粒细胞水平的增长以及由其产生的中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）已被报道与多种肿瘤的增殖、侵袭有关,但其对胰腺癌患者的影响尚未明确。本研究旨在探讨胰腺癌患者中性粒细胞绝对值与各肿瘤标志物、肿瘤TNM分期、组织分化程度的相关性,以及NETs对胰腺癌细胞（PANC-1）的增殖、侵袭能力影响,以期望为胰腺癌患者的诊治提供新的靶点和思路。方法:收集2019年8月-2021年12月期间,就诊于佳木斯大学附属第一医院普外科并符合入组标准的23例胰腺癌患者及同时期健康体检者20例的一般情况,包括年龄、性别、血常规、肿瘤系列、肿瘤TNM分期、组织分化程度等相关信息,对数据进行归纳整理并分析;应用蛋白印迹实验（Western-Blot,WB）检测PANC-1细胞对中性粒细胞产生NETs的影响;应用CCK-8实验、平板克隆形成实验检测NETs对PANC-1细胞增殖能力的影响;应用侵袭实验（Transwell）检测NETs对PANC-1细胞侵袭能力的影响。结果:临床数据发现胰腺癌患者组白细胞计数、中性粒细胞绝对值、中性粒细胞百分比均高于健康体检者,具有统计学意义（P＜0.05）;胰腺癌患者组红细胞计数、血红蛋白含量、淋巴细胞百分比均低于健康体检者,具有统计学意义（P＜0.05）;年龄、性别、嗜酸性粒细胞百分比、嗜碱性粒细胞百分比、血小板计数在胰腺癌患者组和健康体检者两组之间的数据均没有明显差异,无统计学意义（P＞0.05）;高水平中性粒细胞绝对值的胰腺癌患者其CA19-9水平和肿瘤TNM分期明显大于低水平中性粒细胞绝对值的胰腺癌患者,具有统计学意义（P＜0.05）;高水平中性粒细胞绝对值的胰腺癌患者组的组织分化程度小于低水平中性粒细胞绝对值的胰腺癌患者组,具有统计学意义（P＜0.05）,而CEA水平在两组间没有明显差异,无统计学意义（P＞0.05）;PANC-1细胞与正常来源的中性粒细胞共培养后,可明显刺激中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）、瓜氨酸化组蛋白H3（guanylated histone H3,CIT-H3）和髓过氧化物酶（m yeloperoxidase,MPO）的产生,与对照组的数据相比有显著差异,具有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8实验、平板克隆形成实验发现NETs可反作用于PANC-1细胞,明显增强其增殖能力,具有统计学意义（P＜0.05）;侵袭实验（Transwell）发现NETs能够增强PANC-1细胞的侵袭能力,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:胰腺癌患者中性粒细胞水平明显高于健康体检者,且其水平随着CA19-9、肿瘤TNM分期以及组织分化恶性程度的上升而增高;胰腺癌细胞能够促进中性粒细胞产生更多的NETs;NETs能够增强胰腺癌细胞的增殖、侵袭能力。

关键词：胰腺癌中性粒细胞胞外诱捕网增殖侵袭

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中性粒细胞胞外诱捕网在炎症相关疾病及肿瘤中的作用

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生命科学 2024年第6期36卷 857-866页

作者：曾田一李丹常文科郝永伟杨志军解丽芹新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 新乡医学院第三附属医院新乡453003

当外源病原体入侵或机体自身发生某种炎症时,中性粒细胞会释放一种类似于纤维网状结构的物质,即中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。NETs在机体中发挥杀灭病原体及参与免疫应答的生理作用,同时在肿瘤发生发展... 详细信息

当外源病原体入侵或机体自身发生某种炎症时,中性粒细胞会释放一种类似于纤维网状结构的物质,即中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。NETs在机体中发挥杀灭病原体及参与免疫应答的生理作用,同时在肿瘤发生发展的不同阶段也发挥着促进肿瘤细胞增殖或远端扩散的作用。本文综述了NETs的形成、NETs在炎症相关疾病及肿瘤发生发展过程中的作用机制的研究进展,并探讨了NETs作为靶点的治疗策略。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网炎症相关疾病肿瘤治疗靶点

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中性粒细胞胞外诱捕网在系统性红斑狼疮发病机制中作用的研究进展

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吉林大学学报（医学版） 2018年第4期44卷 886-890页

作者：林笑颖周明倩李海昌浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞受到刺激后释放产生的网状物,由DNA骨架、组蛋白、颗粒蛋白和胞浆蛋白组成。NETs可从多方面直接及间接地参与多种自身免疫病,如系统性红斑狼疮(SLE)。SLE患者体内NETs生成过多或(和)清除障碍,而... 详细信息

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞受到刺激后释放产生的网状物,由DNA骨架、组蛋白、颗粒蛋白和胞浆蛋白组成。NETs可从多方面直接及间接地参与多种自身免疫病,如系统性红斑狼疮(SLE)。SLE患者体内NETs生成过多或(和)清除障碍,而异常数量的NETs是SLE自身抗原和自身抗体的重要来源之一,且与疾病严重程度呈正相关关系。NETs不仅参与自身免疫病的病理过程,且与免疫调节有关,NETs可通过激活NOD样受体家族3(NLRP3)炎性小体、刺激低密度粒细胞(LDG)、促进浆样树突状细胞(pDC)合成高水平α-干扰素(IFN-α)等间接作用共同参与SLE的发病。对NETs的调节可能是SLE的潜在治疗途径之一。本文作者对NETs的形成及其在SLE发病机制中的作用及其潜在的治疗方向等进行综述。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网系统性红斑狼疮 NOD样受体家族3 低密度粒细胞浆样树突细胞

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基于“瘀毒”理论探讨中性粒细胞胞外诱捕网对肺纤维化的影响

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山东中医杂志 2025年第4期44卷 378-384页

作者：闫国涛徐飞刘骅漫张伟贾新华山东中医药大学山东济南250355 山东中医药大学附属医院山东济南250014

肺纤维化(PF)是一种慢性、进展性且不可逆的疾病,本文基于“瘀毒”理论,以中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)为切入点,从NETs可促进血管生成、增强凝血、促使血栓形成,以及驱动上皮损伤、促进成纤维细胞活化、激活炎症反应等方面,讨论NETs在P... 详细信息

肺纤维化(PF)是一种慢性、进展性且不可逆的疾病,本文基于“瘀毒”理论,以中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)为切入点,从NETs可促进血管生成、增强凝血、促使血栓形成,以及驱动上皮损伤、促进成纤维细胞活化、激活炎症反应等方面,讨论NETs在PF发生发展中的作用,总结NETs在PF“瘀毒”理论中的关键病机,探讨“瘀毒”对PF的影响,为中西医结合预防和治疗PF提供新思路。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网肺纤维化瘀毒血管新生纤溶失衡炎症免疫

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中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在银屑病中的作用及机制

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中国皮肤性病学杂志 2021年第12期35卷 1417-1421页

作者：李若琳王萍陈爱军重庆医科大学附属第一医院皮肤性病科重庆400016

银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,免疫系统异常在银屑病中占有重要地位。中性粒细胞作为固有免疫细胞中含量最多的细胞,在银屑病发生发展过程中亦起到了重要作用。中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)参与... 详细信息

银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,免疫系统异常在银屑病中占有重要地位。中性粒细胞作为固有免疫细胞中含量最多的细胞,在银屑病发生发展过程中亦起到了重要作用。中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)参与各种自身免疫性疾病,并通过不同机制参与银屑病的发生和发展。研究NETs在银屑病中的作用及机制有助于完善银屑病免疫学理论并指导开发新的治疗靶点。

关键词：银屑病中性粒细胞胞外诱捕网中性粒细胞共病

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中性粒细胞胞外诱捕网与急性ST段抬高型心肌梗死的相关性

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实用医学杂志 2016年第23期32卷 3898-3901页

作者：王西强杨丹丹白鸿远刘平西安交通大学第一附属医院心血管内科西安市710000 浙江大学第二附属医院心血管内科 310009 西安交通大学医学院第二附属医院心血管内科 710004

目的:中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)能够发挥强有力的促炎、促血栓形成、细胞毒作用,本研究旨在探索急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)与NETs的相关性。方法:随机入选发病12 h内入住西安交通大学第一附属医院CCU行急诊PCI的STEMI患者30例,抽... 详细信息

目的:中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)能够发挥强有力的促炎、促血栓形成、细胞毒作用,本研究旨在探索急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)与NETs的相关性。方法:随机入选发病12 h内入住西安交通大学第一附属医院CCU行急诊PCI的STEMI患者30例,抽取梗死相关冠状动脉血及外周动脉血;应用免疫荧光染色及免疫酶标法检测NETs及其相关结构,分析NETs及其相关结构与STEMI的相关性。结果:梗死相关冠状动脉血中可见NETs结构,外周动脉血中未有明显的NETs结构形成;梗死相关冠状动脉血中可见大量的NETs相关结构dsDNA生成,与外周动脉血相比差异具有统计学意义(P<0.05);梗死相关冠状动脉血与外周动脉血中NETs相关结构dsDNA呈正相关(Pearson′s P=0.479,P<0.05)。结论:NETs及其相关结构可能与急性ST段抬高型心肌梗死的发生相关。

关键词：中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网急性ST段抬高型心肌梗死

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中性粒细胞胞外诱捕网调控银屑病样皮肤炎症相关机制与二苯乙烯苷的干预研究

中性粒细胞胞外诱捕网调控银屑病样皮肤炎症相关机制与二苯乙烯苷...

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作者：张志宏延边大学

学位级别：硕士

目的:银屑病是一种由常驻皮肤细胞和免疫细胞交互对话形成炎症环路的复杂的自身免疫性皮肤病。在银屑病发展进程中,中性粒细胞被召集到皮损处并释放出中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。IL-36家族细胞因子,... 详细信息

目的:银屑病是一种由常驻皮肤细胞和免疫细胞交互对话形成炎症环路的复杂的自身免疫性皮肤病。在银屑病发展进程中,中性粒细胞被召集到皮损处并释放出中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。IL-36家族细胞因子,尤其是IL-36γ,是驱动银屑病炎症反应发生的关键因素。二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxy stilbene-2-O-β-D-glucoside,2354Glu)被猜想可能召集NETs对抗银屑病,但未得到验证。本实验旨在探究NETs在以IL-36γ过度分泌为特征的ex vivo模型中的表达及其可能调控机制、2354Glu在NETs耗竭时对银屑病的干预作用和在不同应用时间下小鼠对咪喹莫特(imiquimod,IMQ)应答情况。方法:1.建立银屑病样皮肤炎症ex vivo模型。出生3天内的昆明乳鼠冷冻麻醉取相同大小的皮肤组织在体外进行培养。使用Poly(I:C)(25μg/m L)前一小时用Cl-amidine(200μM)、GSK 484(10μM)、DNase I(5μg/m L)预处理ex vivo组织,24 h后联合ATP(3 m M)处理30 min后收集上清液及皮肤组织。检测NETs的生成及IL-36γ、IL-36α、IL-36β、HMGB1等炎性细胞因子的表达。2.建立不同应用时间下小鼠对IMQ应答情况模型。将8～10周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成5组,涂抹62.5 mg 5%咪喹莫特乳膏的天数分别为0、2、4、6、8天,收集皮肤、血清、肝脏、脾脏等。通过免疫组织化学染色标记keratin 1、keratin 14、keratin 17和PCNA的表达;利用蛋白印迹法、RT-q PCR、免疫荧光等检测皮肤中IL-36γ、HMGB1等蛋白或m RNA的表达;用ELISA法测定小鼠血清中产生的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)-DNA复合物的表达情况。3.建立NETs耗竭时2354Glu干预小鼠银屑病炎症模型。将8～10周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为6组,分别为正常组、IMQ组、IMQ+100 mg/kg 2354Glu组、IMQ+25 mg/kg 2354Glu组、IMQ+25 mg/kg 2354Glu+10 mg/kg Cl-amidine组、IMQ+10 mg/kg Cl-amidine组。每日早上9点腹腔注射2354Glu(100 mg/kg、25mg/kg)或皮下注射10 mg/kg Cl-amidine连续8天,自第5天起涂抹62.5 mg 5%咪喹莫特乳膏,第9天收集皮肤、血清。通过ELISA检测血清中IL-36γ、MPODNA复合物的表达;通过免疫组织化学染色标记小鼠皮肤中keratin 1、keratin 17和PCNA的表达;利用蛋白印迹法、RT-q PCR、免疫荧光等检测皮肤中IL-36γ、IL-36β等蛋白或m RNA的表达。结果:***(I:C)/ATP诱导ex vivo模型中IL-36γ及NETs的过度分泌。Cl-amidine、GSK 484、DNase I将在不同程度上抑制ex vivo模型中NETs的形成、减少炎症因子HMGB1、IL-36γ等产生、减少MPO、F4/80在皮肤中的浸润。2.咪喹莫特诱导下,小鼠背部皮肤增厚并产生鳞屑及红斑。IL-36γ、IL-36β、IL-36α、HMGB1等炎症细胞因子在咪喹莫特诱导下逐步富集在银屑病皮损处。同时,中性粒细胞、巨噬细胞在咪喹莫特诱导下被激活并逐步向表皮层迁移形成中性粒细胞微脓肿。咪喹莫特刺激角质形成细胞发生过度增殖和异常分化。且上述现象在一周后减轻。3.2354Glu改善咪喹莫特诱导产生的鳞屑、红斑,抑制银屑病样皮肤炎症中IL-36家族细胞因子的表达、改善角化不全标志物keratin 1、过度角化标志物keratin 14、异常增殖标记物PCNA的表达。而耗竭NETs加重了银屑病样皮肤表征、上调IL-36、TNF-α等炎症细胞因子的表达、加重角质形成细胞的异常分化与增殖。结论:Poly(I:C)作为ds RNA识别TLR3,与ATP联合诱导ex vivo模型中IL-36γ、NETs的分泌;NETs调控ex vivo模型中IL-36γ、IL-1β、HMGB1等炎症细胞因子的分泌;NETs通过调控炎症因子的分泌改善ex vivo模型中免疫细胞的浸润;咪喹莫特刺激角质形成细胞异常分化和增殖,诱导中性粒细胞、巨噬细胞在银屑病皮损中浸润;咪喹莫特对小鼠IL-36γ、HMGB1等炎症细胞因子的诱导作用只能维持一周,使其应用受到限制;低剂量2354Glu对银屑病的保护作用依赖于NETs,在此过程中NETs有积极且有益的作用。

关键词：银屑病咪喹莫特炎症浸润中性粒细胞胞外诱捕网二苯乙烯苷

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中性粒细胞胞外诱捕网在SLE中的作用

中性粒细胞胞外诱捕网在SLE中的作用

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作者：蒋秋梅川北医学院

学位级别：硕士

研究背景:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统、多器官的自身免疫病,以抗核抗体产生和免疫复合物聚集为特征。中性粒细胞是机体的第一道免疫防线,数量多,寿命短。生理情况下,凋亡是主要的中性粒细胞死... 详细信息

研究背景:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统、多器官的自身免疫病,以抗核抗体产生和免疫复合物聚集为特征。中性粒细胞是机体的第一道免疫防线,数量多,寿命短。生理情况下,凋亡是主要的中性粒细胞死亡方式。但除了发生凋亡外,中性粒细胞还可以发生NETosis。NETosis是在2004年首次被发现的一种中性粒细胞不同于凋亡和坏死的死亡形式。中性粒细胞发生NETosis时产生NETs(neutrophil extracellular traps,中性粒细胞胞外诱捕网),NETs是由DNA、组蛋白、抗菌肽及弹性蛋白酶等形成的网状结构。有研究表明,NETs产生过程中因核物质以及蛋白质暴露在细胞表面,可能成为自身抗原,引起自身抗体的产生,形成免疫复合物,并且刺激某些炎性细胞因子的分泌,因而NETs可能与SLE的发病机制密切相关。目的:分析SLE患者是否存在NETs水平异常,以及SLE患者血浆内环境对NETs形成的影响,并分析NETs与SLE临床指标的相关性及NETs在SLE致炎细胞因子分泌中的作用,从而明确NETs在SLE病理过程中的可能作用。方法:1.收集44例女性SLE患者空腹外周静脉血,肝素抗凝,无菌分离中性粒细胞(polymorphonuclear leucocyte,PMN),血浆冻存于-80℃备用,同时收集SLE患者的临床资料。以42例年龄性别相匹配的健康体检者作为健康对照(healthy control,HC)组。***检测:一部分pmn用荧光光度法定量测定nets形成率,分析nets在sle患者组和对照组之间是否有差异,并分析nets水平与esr、crp、抗dsdna抗体、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体和sledai评分等临床指标的相关性。另一部分pmn用细胞间接免疫荧光法检测nets组分之一的中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase,ne),同时用dapi标记细胞核,利用激光共聚焦显微镜观察nets的形态结构。3.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)测定血浆中ne的浓度,分析其在sle组和hc组之间是否存在差异,以及ne浓度与esr、crp、抗dsdna抗体、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体和sledai评分等临床指标的相关性。4.收集30例活动期sle及健康对照者的血浆分别制备成混合血浆,处理33例健康者的外周血白细胞24h后,收集培养上清和细胞。培养上清用于检测il-17、il-6和ifn-α浓度,采用荧光光度法检测pmn的nets形成率。分析两组之间的差异。5.用浓度分别为0、12.5、25和50nm的佛波酯刺激健康者的pmn(产生的nets随佛波酯浓度增加而增加),分别用以刺激外周血单个核细胞24、48h,收集培养上清检测il-17、il-6和ifn-α浓度,分析nets在不同水平和不同处理时间对外周血单个核细胞分泌il-17、il-6和ifn-α等细胞因子的影响。结果:1.女性sle患者组与健康对照组比较,nets荧光强度为[(240.82±139.20)vs(172.57±134.61),p=0.002],sle组nets水平显著增高。***患者nets水平与sledai呈正相关(r=0.402,p=0.020),与crp(r=0.122,p=0.504)、esr(r=0.291,p=0.101)、抗dsdna抗体(r=-0.065,p=0.675)、抗组蛋白抗体(r=0.034,p=0.827)、抗核小体抗体(r=-0.268,p=0.078)均无明显相关性。***组与健康对照组比较,血浆中ne浓度为[(102.02±47.02)vs(61.76±22.25),p=0.000],sle组ne水平显著高于对照组。***患者血浆中ne水平与sledai呈正相关(r=0.341,p=0.032),与crp(r=-0.437,p=0.07)、esr(r=-0.021,p=0.926)、抗dsdna抗体(r=0.177,p=0.409)、抗组蛋白抗体(r=-0.291,p=0.167)、抗核小体抗体(r=0.202,p=0.343)无明显相关性。5.外周血白细胞经sle混合血浆和健康对照混合血浆培养24h后,(1)两组间nets荧光强度比较:[(88.06±47.01)vs(63.89±50.49),p=0.000],有显著差异。结果表明,经sle混合血浆处理的pmn,其nets水平增加。(2)两组间致炎细胞因子浓度比较:il-17浓度为[5.77(2.42,12.11)pg/mlvs2.99(1.82,3.87)pg/ml,p=0.002)],il-6浓度为[606.6

关键词：系统性红斑狼疮中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网细胞因子

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中性粒细胞胞外诱捕网在卵巢早衰中过度活化的研究

中性粒细胞胞外诱捕网在卵巢早衰中过度活化的研究

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作者：梁晓晨海南医学院

学位级别：硕士

目的:研究中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellulartraps,NETs)在卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)中的过度活化,为POF的早期诊断和治疗新靶点提供实验数据。方法:1、临床收集符合本研究纳入排除标准的POF患者与健康体... 详细信息

目的:研究中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellulartraps,NETs)在卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)中的过度活化,为POF的早期诊断和治疗新靶点提供实验数据。方法:1、临床收集符合本研究纳入排除标准的POF患者与健康体检女性的外周血各23例,提取中性粒细胞,免疫荧光双染检测NETs的主要成分髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)、瓜氨酸化组蛋白 3(Citrullination Histon3,Cit-H3)的存在。2、选择满足实验条件的balb/c小鼠40只,以透明带糖蛋白3肽(peptide of zonapellucida3,pZP3)腹腔注射构建POF小鼠动物模型,记录小鼠一般情况、实验前后体重变化、动情周期变化,检测雌二醇(E2)含量、促卵泡素(FSH)含量、卵巢细胞凋亡情况、Cit-H3及MPO生成情况。3、选择满足实验条件的balb/c小鼠20只,pZP3注射建立POF小鼠模型,随机分为POF+抑制剂组(10只)、POF+NS组(10只),前者随即按5mg/kg·只腹腔注射NETs抑制剂脱氧核糖核酸酶Ⅰ(Deoxyribonuclease Ⅰ,DN aseⅠ),后者腹腔注射等量NS溶液,检测小鼠各项指标的变化。结果:1、POF患者外周血中性粒细胞MPO、Cit-H3平均荧光强度较对照组增强(P<0.0001)。2、造模后 POF 组体重(17.53±0.55)g 比对照组(19.01±0.26)g 降低(P<0.001)、动情周期(8.50±1.05)d 比对照组(4.35±0.31)d 延长(P<0.05)、E2(50.90±8.59)mIU/mL 比对照组(90.44±14.45)mIU/mL 降低(P<0.05)、FSH(22.45±0.96)pg/mL L比对照组(17.85±1.03)pg/mL升高。POF组小鼠卵巢形态符合卵巢早衰的卵巢特征,POF组各级发育卵泡比对照组减少、闭锁卵泡数比对照组明显增加(P<0.05)。POF组卵巢组织内可见大量绿色标记的凋亡细胞,卵巢组织及骨髓中性粒细胞中MPO、Cit-H3含量升高、平均荧光强度增强(P<0.0001),且发生了共定位现象。3、造模后 POF+抑制剂组体重(17.69±0.0.14)g 比 POF+NS 组(17.21±0.31)g 上升(P<0.001)、动情周期(6.20±0.53)d 比 POF+NS 组(8.55±0.36)d 缩短(P<0.05)、E2(75.18±3.42)mIU/mL 比POF+NS 组(56.96±3.66)mIU/mL 升高、FSH(20.78±1.28)mIU/mL 比 POF+NS 组(22.55±1.05)mIU/mL 降低。POF+NS组小鼠卵巢形态符合POF小鼠的卵巢特征,POF+抑制剂组各级发育卵泡比POF+NS组增多、闭锁卵泡数比对照组明显减少(P<0.05)。POF+抑制剂组卵巢组织绿色标记的凋亡细胞减少,组卵巢组织中MPO、Cit-H3含量降低、平均荧光强度减弱(P<0.0001),共定位现象减少。结论:1、卵巢早衰患者外周血中性粒细胞共定位表达MPO、Cit-H3,初步表明NETs存在于卵巢早衰患者;2、pZP3可成功制备出免疫性卵巢早衰小鼠模型,实验结果证实卵巢早衰小鼠体内存在NETs的过度活化;3、NETs抑制剂DNase Ⅰ可缓解卵巢早衰小鼠各项指标,有效减轻卵巢组织损伤。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网卵巢早衰髓过氧化物酶瓜氨酸化组蛋白3 脱氧核糖核酸酶Ⅰ

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中性粒细胞胞外诱捕网与类风湿关节炎发病机制研究

中性粒细胞胞外诱捕网与类风湿关节炎发病机制研究

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作者：陈本露安徽医科大学

学位级别：硕士

目的：比较类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者和正常对照组外周血中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 (peptidylarginine deiminase 4, PAD4)的表达、单个核细胞(PBMCs)组蛋白(H4R3)瓜氨酸化水平,血清中性粒细胞胞外诱捕网(neut... 详细信息

目的：比较类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者和正常对照组外周血中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 (peptidylarginine deiminase 4, PAD4)的表达、单个核细胞(PBMCs)组蛋白(H4R3)瓜氨酸化水平,血清中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)水平,同时分析类风湿关节炎中性粒细胞PAD4mRNA、血清中dsDNA/NETs, PBMCs组蛋白瓜氨酸化及临床相关指标相关性,以探讨三者在类风湿关节炎发病中可能存在的作用及相互之间的关系。方法选取88例类风湿关节炎患者作为实验组,20例健康体检者作为对照组,应用PicoGreen dsDNA Quantitation Kits (Invitrogen)测其血清中游离dsDNA/NETs。43例RA及对照20例对照用中性粒细胞分离液分离其外周血中性粒细胞,用Trizol法提中性粒细胞总RNA,然后逆转录成为cDNA,运用实时荧光定量聚合酶反应(real-time PCR)的方法检测RA中性粒细胞PAD4mRNA表达水平；同时提取28例RA及20例对照组外周血PBMCs,应用半定量Western blot方法检测其组蛋白(H4R3)瓜氨酸化水平。收集RA组相关临床及实验室资料,包括：抗环瓜氨酸(CCP)抗体、类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)、疾病活动指数DAS28评分、C反应蛋白(CRP)、年龄及病程等,同时分析三者之间、相关临床及实验室指标相关性。数据分析采用SPSS13.0统计学软件处理。两组比较使用t检验或秩和检验,相关性分析用Pearson相关或Spearman相关分析,符合正态用均数±标准差,不符合正态用M(P25,P75)表示。结果(1)类风湿关节炎组外周血中性粒细胞PAD4mRNA 1.493(0.831,2.607)表达水平高于健康对照组0.631(0.358,1.489),差异有统计学意义(z=-2.07,p=0.039),使用DMARDs (31例)1.293(0.576,2.430)低于未用DMARDs(12例)1.978(1.407,5.646),差异无统计学意义(z=-1.19,p=0.234)(2)RA患者血清中dsDNA/NETs的浓度0.436(0.330,0.611) ug/ml高于健康对照组0.240(0.140,0.325) ug/ml,差异有统计学意义(z=-4.86,P<0.001),使用DMARDs(52例)0.423 (0.317,0.594) ug/ml低于未使用DMARDs(36例)0.433 (0.321,0.730) ug/ml,差异无统计学意义(z=-0.76,P=0.448)；(3)类风湿关节炎患者外周血PBMCs组蛋白瓜氨酸化(H4R3)(0.731±0.214)高于健康对照组(0.547±0.204),差异有统有统计学意义(t=-2.95,p=0.005),使用DMRDs组(20例)(0.683±0.220)低于未使用组(8例)(0.823±0.160),差异无统计学意义(t=-0.83,p=0.415)；(4)相关性分析：①中性粒细胞PAD4mRNA表达与血清dsDNA/NETs的含量正相关(r==0.42,P=0.017),与组蛋白(H4R3)瓜氨酸化、ESR、CRP、DAS28、抗CCP抗体、病程、年龄均无相关性(r=0.181, p=0.553; r=0.256, p=0.239; r=0.239, p=0.284; i=0.341, p=0.111; r=0.170, p=0.515; r=0.238, p-0.273; r=0.099, p=0.529);②RA组患者血清dsDNA/NETs的含量与DAS28评分, ESR, CRP呈正相关(r=0.36, P=0.036; r=0.345, P=0.042; r=0.36, P=0.043),而与抗CCP抗体、H4R3瓜氨酸化、病程、年龄无相关性(r=0.277, P=0.154; r=-0.275, p=0.157; r=0.286,p=0.096; r=-0.087, p=0.423);③组蛋白(H4R3)瓜氨酸化与ESR、CRP、DAS28、病程、年龄均无相关性(r=-0.169, p=0.390; r=-0.149, p=0.582; r=-0.135, p=0.493; r=-0.256, p=0.276; r=-0.004, p=0.985)结论(1)RA病人外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达显著增高,其可能可能在RA的发病和病理过程中起重要作用；(2)RA患者血清中dsDNA/NETs的浓度高于健康对照组,中性粒细胞

关键词：类风湿关节炎肽酰基精氨酸脱亚胺酶-4 中性粒细胞胞外诱捕网组蛋白瓜氨酸化组蛋白4精氨酸3

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