检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 99-104页

作者：黄素芳古良才毛启龙昌增益清华大学生命科学与技术系

小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp... 详细信息

小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp16 3及其L12 2A突变体蛋白为模型 ,采用高效液相分子筛层析、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和脲梯度凝胶电泳等方法进行研究 .结果表明 ,Hsp16 3在体外能自发地再组装成九聚体 .12 2位的亮氨酸残基对Hsp16 3体外再组装过程中的亚基相互作用有重要的影响 ,并且在Hsp16 3的组装过程中 ,亚基之间的相互识别是高度灵敏和特异的 ,野生型蛋白的亚基和L12 2A突变体蛋白的亚基并不能形成杂合体。

关键词：小分子热休克蛋白组装杂合中间体亚基相互作用亚基特异性识别 Leu122 Hsp16.3

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叶绿体ATP合酶CF_1与CF_0亚基间的相互作用

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科学通报 2001年第18期46卷 1550-1554页

作者：石晓冰魏家绵沈允钢中国科学院上海植物生理研究所上海200032

通过PCR的方法得到菠菜叶绿体ATP合酶9个亚基的编码序列, 分别克隆到质粒pGBT9和pGAD424, 双转化入酵母菌株HF7C和SFY526, 用酵母双杂交系统检测菠菜叶绿体ATP合酶各亚基间的相互作用. 同时用双杂交系统和体外结合实验检测 g 亚基与e亚... 详细信息

通过PCR的方法得到菠菜叶绿体ATP合酶9个亚基的编码序列, 分别克隆到质粒pGBT9和pGAD424, 双转化入酵母菌株HF7C和SFY526, 用酵母双杂交系统检测菠菜叶绿体ATP合酶各亚基间的相互作用. 同时用双杂交系统和体外结合实验检测 g 亚基与e亚基及e亚基突变体eDN21, eDC45之间的相互作用. 实验结果基本上支持目前关于细菌ATP合酶的结构模型. 与之不同的是, d 亚基与b, g, e 以及CF0的Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ亚基均有作用. 这些结果说明尽管叶绿体ATP合酶与细菌ATP合酶有着类似的亚基组成和空间结构, 但在亚基间的相互关系和催化过程中的构象变化上可能有所不同.

关键词： ATP合酶亚基相互作用酵母双杂交系统 δ亚基叶绿体 CF1亚基 CF0亚基

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大肠杆菌乙酰羟酸合成酶同功酶Ⅲ亚基间的相互作用

大肠杆菌乙酰羟酸合成酶同功酶Ⅲ亚基间的相互作用

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中国化学会第27届学术年会

作者：赵跃芳文欣渠晖牛聪伟席真南开大学元素有机化学国家重点实验室

＜正＞乙酰羟酸合成酶（acetohydroxyacid synthase（AHAS）,EC2.2.1.6）是支链氨基酸生物合成途径中的第一个关键性的酶[1],是重要的除草剂靶标。

关键词：乙酰羟基酸合成酶亚基相互作用突变

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大肠杆菌乙酰羟酸合成酶同功酶Ⅲ亚基间的相互作用

大肠杆菌乙酰羟酸合成酶同功酶Ⅲ亚基间的相互作用

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中国化学会第二十七届学术年会

作者：赵跃芳文欣渠晖牛聪伟席真南开大学元素有机化学国家重点实验室 300071天津

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大肠杆菌乙酰羟基酸合成酶Ⅰ和Ⅲ同源及异源催化亚基与调控亚基的相互作用

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中国科学（B辑） 2009年第9期39卷 985-985页

作者：牛聪伟冯葳周延菲文欣席真元素有机化学国家重点实验室南开大学化学生物学系天津300071

本文采用表面等离子体共振技术（SPR）对大肠杆菌来源的乙酰羟基酸合成酶（Acetohydroxyacid synthase，AHAS）Ⅰ和Ⅲ同源及异源催化亚基与调控亚基的相互作用进行了研究．研究结果表明。AHASI催化亚基与调控亚基的结合（Ko=1．13×... 详细信息

本文采用表面等离子体共振技术（SPR）对大肠杆菌来源的乙酰羟基酸合成酶（Acetohydroxyacid synthase，AHAS）Ⅰ和Ⅲ同源及异源催化亚基与调控亚基的相互作用进行了研究．研究结果表明。AHASI催化亚基与调控亚基的结合（Ko=1．13×101mol／L）比AHASIII的亚基结合要强（KD=5．29×10^-7mol／L）．在异源的催化亚基和调控亚基间观察到很强的结合作用，并且调控亚基对异源催化亚基的活性也有激活作用．SPR与酶动力学研究结果表明，异源重组酶的动力学性质与同源重组酶的性质相似．这表明AHAS Ⅰ的调控亚基可以用ALIAS Ⅲ的调控亚基替换，反之亦然．本文的研究工作有助于更深入理解AHAS的调控机制．

关键词：乙酰羟基酸合成酶亚基相互作用表面等离子体共振

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大肠杆菌乙酰羟基酸合成酶的亚基间相互作用研究

大肠杆菌乙酰羟基酸合成酶的亚基间相互作用研究

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作者：冯葳南开大学

学位级别：硕士

乙酰羟基酸合成酶(Acetohydroxyacid synthase[AHAS],EC2.2.1.6)是支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)生物合成途径中的第一个关键性的酶。如果支链氨基酸的生物合成受阻,将导致生物体内蛋白质合成停止,由于植物体离不开蛋白质,因此... 详细信息

乙酰羟基酸合成酶(Acetohydroxyacid synthase[AHAS],EC2.2.1.6)是支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)生物合成途径中的第一个关键性的酶。如果支链氨基酸的生物合成受阻,将导致生物体内蛋白质合成停止,由于植物体离不开蛋白质,因此植物生长会受损甚至死亡。大多数除草剂正是通过对乙酰羟基酸合成酶的抑制来发挥其除草活性的。但是由于除草剂的广泛使用,出现了很多对AHAS酶为靶标的除草剂有抗性的杂草。\n 几乎所有来源的AHAS酶都由催化亚基和调控亚基组成。在大肠杆菌中,存在三种AHAS同功酶(即AHASⅠ、Ⅱ和Ⅲ),都是由催化亚基和调控亚基按1:1的比例组成,即由分子量大约为60 kDa的催化亚基和分子量大约为9-18 kDa的调控亚基组成。一般认为,催化亚基含有全部的酶催化机制；调控亚基授予酶对支链氨基酸反馈抑制的敏感性,影响催化亚基稳定性并能稳定催化亚基的活性构象。\n 大肠杆菌AHASⅠ或AHASⅢ的催化亚基单独存在时具有的活性较低,全酶的活性可以通过催化亚基和调控亚基的重组来实现。Chipman,Barak等人的文献中报道,不同源的同功酶的催化亚基和调控亚基的重组没有引起催化亚基活性的增加。催化亚基和调控亚基间的结合是可逆的,解离常数为10-7M。2008年,Mitra和Sarma等人通过多维NMR技术证明了大肠杆菌AHASⅠ的调控亚基是通过与FAD的催化亚基结合结构域相互作用来实现激活的。\n 本文采用SPR技术对AHAS亚基相互作用的进行实时检测,AHASⅠ的催化亚基与调控亚基的结合比AHASⅢ的紧密,KD均在10-7M左右。此外,活性测定结果还表明,不同源的同功酶之间,调控亚基可以激活异源的催化亚基。热稳定性结果表明,调控亚基具有稳定同源或异源催化亚基活性构像的作用。我们还设计了破坏AHASⅡ催化亚基之间相互作用的突变体,得到了产生催化亚基单体的突变。

关键词：乙酰羟基酸合成酶表面等离子谐振亚基相互作用催化亚基调控亚基

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酵母RNA聚合酶Ⅱ羧基端结构域激酶CTDK-Ⅰ及其亚基的结构与功能

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微生物学报 2018年第10期58卷 1701-1710页

作者：朱文俊毛雪玲邱晓挺宁波大学海洋学院应用海洋生物技术教育部重点实验室浙江宁波315211

RNA聚合酶Ⅱ最大亚基Rpb1的羧基端结构域(carboxyl-terminal repeat domain,CTD)是RNA聚合酶Ⅱ发挥转录延伸功能所必需的,对其执行精确的转录调节功能至关重要。酵母细胞周期蛋白依赖性激酶CTDK-Ⅰ (carboxyl-terminal repeat domain ki... 详细信息

RNA聚合酶Ⅱ最大亚基Rpb1的羧基端结构域(carboxyl-terminal repeat domain,CTD)是RNA聚合酶Ⅱ发挥转录延伸功能所必需的,对其执行精确的转录调节功能至关重要。酵母细胞周期蛋白依赖性激酶CTDK-Ⅰ (carboxyl-terminal repeat domain kinase,CTDK-Ⅰ)由CTK1、CTK2和CTK3组成,作用于RNA聚合酶Ⅱ羧基端结构域,动态磷酸化CTD的七肽重复序列(YSPTSPS)来调控转录和翻译。酵母中的特异性蛋白CTK3与特殊的细胞周期蛋白CTK2结合形成异二聚体,再与CTDK-Ⅰ的催化亚基CTK1结合以调节其活性。CTK1作为细胞周期蛋白CDK (cyclin dependent kinase,CDK)的同源蛋白,其结构与功能的研究可拓展人们对CDK蛋白家族的认识;CTK2-CTK3复合物对CTK1调控机制的研究也可为细胞周期蛋白抑制剂的研发提供新的思路。本文简述了酵母CTDK-Ⅰ的功能特点及其亚基的结构与功能以及亚基间的相互作用,并展望了CTDK-Ⅰ复合物的研究前景。

关键词：细胞周期蛋白依赖性激酶磷酸化转录调控亚基相互作用

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大鼠P2X2离子通道跨膜区氨基酸残基相互作用的研究

大鼠P2X2离子通道跨膜区氨基酸残基相互作用的研究

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作者：梁欣中国科学院大学

学位级别：博士

P2X受体(P2X receptor)是ATP激活的非选择性阳离子通道，在人体各类细胞上均有表达。因此P2X受体介导人体多种生理和病理过程，从神经突触传导到味觉和骨质形成、疼痛信号传导到免疫系统。现已公认，P2X受体是开发镇痛、消炎等药物的有... 详细信息

P2X受体(P2X receptor)是ATP激活的非选择性阳离子通道，在人体各类细胞上均有表达。因此P2X受体介导人体多种生理和病理过程，从神经突触传导到味觉和骨质形成、疼痛信号传导到免疫系统。现已公认，P2X受体是开发镇痛、消炎等药物的有效靶点。\n 2009年斑马鱼P2X4受体(zfP2X4 receptor)晶体结构的出现，证明了P2X受体是通过亚基-亚基间相互作用组成的圣杯型三聚体离子通道。这也进一步证实了多年来大量基于突变实验的猜测及P2X受体的功能数据。虽然ATP激活状态下的晶体结构展现了受体跨膜区存在相互作用，但是在开放状态和关闭状态下，跨膜区1和跨膜区2的哪些氨基酸具有相互作用？存在于斑马鱼P2X4受体跨膜区间的相互作用是否存在于其他种属其他亚型受体中？它们是如何稳定和影响孔道的开放关闭过程的？这些问题仍然不清楚。本论文采用半胱氨酸突变法结合膜片钳技术和rP2X2同源模型发现并研究跨膜区相互临近的氨基酸残基，并进一步探究这些氨基酸残基是如何影响rP2X2受体从关闭状态到开放状态的转变过程。实验通过检测细胞在二硫苏糖醇孵育前后的ATP电流改变来研究通道功能的改变。\n 主要研究结果总结如下:\n (1)发现三十五对半胱氨酸双突变体都具有正常的通道功能，但是没有一个突变体可以形成二硫键，实验结果表明关闭状态下的rP2X2受体中不存在亚基-亚基间氨基酸相互作用。\n (2) H33C/S345C经二硫苏糖醇还原后导致电流增加2至3倍，表明H33C和S345C在空间距离上足够近可以形成二硫键。Western blot以及双突变循环分析进一步证明His33和Ser345的相互作用存在于亚基内部。\n (3) H33C/S345C和V48C/I328C在二硫苏糖醇孵育前EC50分别比孵育后高出～2倍和～4倍，二硫苏糖醇还原使得两个突变体的EC50降至野生型水平。结果表明H33C和S345C在空间距离上足够近可以形成二硫键，同时也为证明在P2X通道开放过程中亚基-亚基间相互作用比亚基内部相互作用具有更重要的作用提供了依据。\n (4) Cd2+金属架桥形成实验表明，两个S345C和一个His33可以与Cd+形成较为稳定的、偏离孔道中心轴的金属架桥，证明Ser345和His33在开放状态下孔道的狭窄区域内距离足够近（约为4.5(A)）。\n (5)阳离子通透实验初步表明，跨膜区1上的Tyr43通过协同跨膜区2上的Ser340部分脱去水合阳离子的水分子控制离子进出孔道，从而调控Ca2+电流。\n 综上所述，大鼠P2X2受体跨膜区氨基酸残基相互作用的研究提供了孔道分子空间结构的新数据，为进一步研究P2X受体孔道开放机制提供了新的思路，也为以P2X受体为靶标的药物开发提供新的理论依据。

关键词： P2X受体离子通道跨膜区间氨基酸残基亚基相互作用膜片钳药物开发

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高等植物叶绿体ATP合酶亚基结构与功能研究

高等植物叶绿体ATP合酶亚基结构与功能研究

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作者：石晓冰中国科学院上海生命科学研究院

学位级别：博士

FFATP合酶存于多种生物体内、是能量代谢的关键酶.在线粒体内膜、类囊体膜和细菌的质膜上,ATP合酶利用跨膜的质子动力势合成生物体的能量通货—***合酶是亚基复合物,叶绿体ATP合酶可以根据亚基在膜上的位置及功能的不同分成CF和CF两部分... 详细信息

F<,1>F<,O>ATP合酶存于多种生物体内、是能量代谢的关键酶.在线粒体内膜、类囊体膜和细菌的质膜上,ATP合酶利用跨膜的质子动力势合成生物体的能量通货—***合酶是亚基复合物,叶绿体ATP合酶可以根据亚基在膜上的位置及功能的不同分成CF<,1>和CF<,O>两部分.CF<,O>位于膜内,形成跨膜的质子通道,并为CF<,1>提供膜上的结合位点;ATP合酶合成或水解ATP在CF<,1>部分进行.该文实验工作主要集中在叶绿体ATP合酶合成或水解ATP在CF<,1>部分进行.该文实验工作主要集中在叶绿体ATP合酶的亚基相互作用、ε亚基的结构与功能研究以及ATP合酶与光系统Ⅱ水氧化释放质子之间的关系等方面.1、应用酵母双杂交系统检测ATP合酶亚基间的相互作用;2、亚基的缺失突变对结构与功能的影响;3、ATP合酶与光系统II水氧化释放质子之间的关系.

关键词： ATP合酶 ε亚基酵母双杂交系统缺失突变亚基相互作用毫秒延迟发光

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生物物理所CRISPR系统中Cascade复合物结构解析获进展

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中国科学院院刊 2014年第5期29卷 647-648页

中科院生物物理所王艳丽研究组通过深入研究,获得了分辨率为3.05的X射线晶体结构（详见右图）。该结构显示,61个核苷酸的crRNA横跨Cascade的11个亚基,并与6个CasC亚基相互作用,5＇和3＇末端分别被CasD和CasE锚定。

关键词： Cascade 结构解析生物物理复合物亚基相互作用 X射线晶体结构系统 CasE

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