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IL-37通过调控NF-κB通路抑制人主动脉血管平滑肌细胞成骨转化并参与抑制其钙化

中国免疫学杂志 2025年第2期41卷 304-309页

作者：马晨越贺琼逸王猛柴萌张海涛安徽医科大学空军临床学院安徽医科大学第五临床学院合肥230032 空军特色医学中心心内科北京100142 河北北方学院张家口075000 首都医科大学附属北京安贞医院心内科北京市心肺血管病研究所北京市冠状动脉粥样硬化疾病精准医学重点实验室首都医科大学冠心病临床中心北京100029

目的:研究IL-37对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-SMCs)钙化的作用及对模式识别受体(TLR)/核转录因子(NF-κB)通路和成骨转录因子的影响,探讨IL-37在钙化反应中的作用机制。方法:采用oxLDL诱导HA-SMCs钙化模... 详细信息

目的:研究IL-37对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-SMCs)钙化的作用及对模式识别受体(TLR)/核转录因子(NF-κB)通路和成骨转录因子的影响,探讨IL-37在钙化反应中的作用机制。方法:采用oxLDL诱导HA-SMCs钙化模型,模型组加入100 ng/ml IL-37或100μmol/L PDTC预处理,CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;茜素红染色检测钙化结节;qPCR检测平滑肌肌动蛋白(SMA)、骨形态发生蛋白(BMP2)、IL-37 mRNA水平;qPCR、Western blot检测TLR、NF-κB、p-NF-κB、RUNX相关转录因子(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、SMA、平滑肌22α(SM22α)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组相比,ox-LDL处理后细胞增殖活性增强并具有浓度依赖性(P<0.05),凋亡率升高,同时模型组产生明显的橘红色钙化结节,TLR、NF-κB等炎症因子mRNA及蛋白表达上调,IL-37、RUNX2、BMP2、ALP的mRNA表达上调,SMA、SM22α的mRNA表达下降,p-NF-κB、RUNX2的蛋白表达量明显升高;与造模组相比,IL-37预处理组细胞增殖率下降,凋亡率降低(P<0.05),钙化结节明显减少,TLR、NF-κB等炎症因子的mRNA及蛋白表达明显下降,RUNX2、BMP2、ALP的mRNA表达下调,SMA、SM22α的mRNA表达升高,p-NF-κB、RUNX2的蛋白表达量明显下降,与抑制剂PDTC组在细胞因子表达上呈现相同趋势。结论:IL-37可抑制HA-SMCs钙化,可能与抑制NF-κB通路及细胞成骨表型转化相关。

关键词： IL-37 人主动脉血管平滑肌细胞成骨转化 TLR/NF-κB通路

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促炎因子介导的体外培养人主动脉血管平滑肌细胞凋亡

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中国循环杂志 2003年第4期18卷 310-312页

作者：孟丽吉瑞瑞徐丽陈纪林中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院冠心病诊疗中心北京市100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院生化研究室北京市100037

目的 :探讨促炎因子对体外培养的人主动脉平滑肌细胞有无致凋亡作用。　　方法 :体外原代培养人主动脉平滑肌细胞 ,用免疫组化方法鉴定 ;肿瘤坏死因子 α (TNF α)和白细胞介素 1β (IL 1β)分别以浓度 2 0 μg/ml单独或二者共同与平... 详细信息

目的 :探讨促炎因子对体外培养的人主动脉平滑肌细胞有无致凋亡作用。　　方法 :体外原代培养人主动脉平滑肌细胞 ,用免疫组化方法鉴定 ;肿瘤坏死因子 α (TNF α)和白细胞介素 1β (IL 1β)分别以浓度 2 0 μg/ml单独或二者共同与平滑肌细胞培养 3 6h ,实验分 4组 :TNF α组 (T组 )、IL 1β组 (I组 )、TNF α+IL 1β组 (TI组 )及对照组 ,采用流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期。　　结果 :①细胞凋亡分析显示 :TI组两种因子的联合作用诱导人平滑肌细胞凋亡与对照组比明显增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而二者单独作用未能诱导人平滑肌细胞凋亡。②细胞周期分析发现TI组在TNF α +IL 1β刺激下 ,细胞增殖能力与其他组比有明显下降 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,生长逐渐停滞 ,而二者单独作用对细胞增殖有轻微刺激作用 ,但与对照组无显著性差异。　　结论 :促炎因子TNF α和IL 1β的相互作用 ,可以诱导人平滑肌细胞凋亡。

关键词：促炎因子人主动脉血管平滑肌细胞细胞凋亡流式细胞术体外培养免疫组化方法肿瘤坏死因子-α

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DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化中的作用

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中国现代医学杂志 2023年第16期33卷 36-42页

作者：范志娟刘树业田亚琼刘爽天津市第三中心医院检验科天津300170

目的明确DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HVSMC)钙化过程中的作用。方法将HVSMC培养分为对照组、模型组、共济失调毛细血管扩张突变激酶(iATM)组、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(iPARP)组,培养12 d。茜素红-S染... 详细信息

目的明确DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HVSMC)钙化过程中的作用。方法将HVSMC培养分为对照组、模型组、共济失调毛细血管扩张突变激酶(iATM)组、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(iPARP)组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测4组细胞钙化情况,彗星实验检测DNA损伤,Western blotting和免疫荧光方法检测组蛋白γH2AX磷酸化水平,酶联免疫吸附试验检测8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHDG)水平,NucleoCounterNC-3000^(TM)高级细胞分析仪分析4组细胞的存活率。结果光学显微镜和茜素红S染色发现第9天开始,与对照组相比,模型组出现细胞内钙质沉积,第12天钙质沉积明显。对照组与模型组分别在第3、6、9、12天培养状态下Ca^(2+)/蛋白比较,结果:(1)不同时间点Ca^(2+)/蛋白有差异(F=168.970,P=0.000);(2)模型组与对照组Ca^(2+)/蛋白有差异(F=203.040,P=0.000),模型组Ca^(2+)/蛋白较高,钙化明显;(3)两组Ca^(2+)/蛋白变化趋势有差异(F=13.213,P=0.000)。培养12 d时,茜素红S染色发现模型组比对照组钙化程度高,iATM组和iPARP组比模型组钙化程度低。σ-甲酚酞试验发现,iATM组和iPARP组Ca^(2+)/蛋白低于模型组(P <0.05)。彗星试验发现,对照组比较,模型组第9天开始出现更多数量的DNA受损细胞。对照组与模型组分别在第3、6、9、12天培养状态下“彗星细胞”比较,结果:(1)不同时间点“彗星细胞”有差异(F=13.141,P=0.000);(2)模型组与对照组“彗星细胞”有差异(F=121.521,P=0.000),模型组“彗星细胞”百分比较高,DNA损伤明显;(3)模型组与对照组“彗星细胞”变化趋势有差异(F=89.290,P=0.000)。模型组γH2AX蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05)。对照组、模型组分别在第3和12天免疫荧光显微镜下观察> 3个γH2AX病灶百分比,结果:(1)不同时间点> 3个γH2AX病灶百分比有差异(F=168.970,P=0.000);(2)模型组与对照组> 3个γH2AX病灶百分比有差异(F=203.040,P=0.000),模型组> 3个γH2AX病灶百分比较高,DNA损伤明显;(3)模型组与对照组> 3个γH2AX病灶百分比变化趋势有差异(F=153.410,P=0.000)。模型组8-OHDG水平高于对照组(P <0.05)。模型组细胞存活率低于对照组、iATM组、iPARP组(P <0.05);iATM组、iPARP组与对照组细胞存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高Ca^(2+)/P环境激活DNA损伤应答信号通路,诱导HVSMC坏死,进而形成钙化。

关键词： DNA损伤应答钙磷失衡人主动脉血管平滑肌细胞钙化

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透明质酸对游离脂肪酸引起的人主动脉血管平滑肌细胞表达IL-6、IL-8和TNF-α的影响

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中国动脉硬化杂志 2017年第2期25卷 115-121页

作者：杨兴文李伟华李元董莉权金星韩平治宁夏医科大学临床医学院检验系宁夏银川市750003 甘肃省人民医院中心实验室甘肃省兰州市730000 甘肃省人民医院内分泌科甘肃省内分泌代谢病重点实验室甘肃省兰州市730000 甘肃省人民医院临床检验中心甘肃省兰州市730000

目的探讨透明质酸(HA)对游离脂肪酸(FFA)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)表达白细胞介素6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法培养HA-VSMC,用不同浓度(0、100、200、400μmol/L)FFA和不同浓度FFA+高分子量HA(HMW-... 详细信息

目的探讨透明质酸(HA)对游离脂肪酸(FFA)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)表达白细胞介素6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法培养HA-VSMC,用不同浓度(0、100、200、400μmol/L)FFA和不同浓度FFA+高分子量HA(HMW-HA)或低分子量HA(LMW-HA)处理细胞24、48 h。噻唑蓝法检测FFA和FFA+HA对HA-VSMC存活率的影响;Ed U染色检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测培养上清IL-6、IL-8和TNF-α含量;实时荧光定量PCR和Western blot检测IL-6、IL-8和TNF-αmRNA及蛋白表达水平。结果(1)FFA在400μmol/L内呈浓度依赖性诱导HA-VSMC增殖;(2)HMW-HA、LMW-HA均对FFA诱导的HA-VSMC增殖有抑制作用,且HMW-HA抑制作用强于LMW-HA;(3)FFA显著促进HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的分泌,且有明显的时间和浓度依耐性;HA可以抑制上述作用;(4)实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,FFA+HMWHA组、FFA+LMW-HA组IL-6、IL-8、TNF-αmRNA及蛋白表达水平均低于FFA组(均P<0.01),其中FFA+HMW-HA组又低于FFA+LMW-HA组(P<0.01)。结论 (1)FFA诱导HA-VSMC IL-6、IL-8、TNF-αmRNA和蛋白表达升高;(2)HA对FFA引起的HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的表达有抑制作用,且HMW-HA抑制效果强于LMW-HA。

关键词：透明质酸游离脂肪酸人主动脉血管平滑肌细胞白细胞介素6 白细胞介素8 肿瘤坏死因子α

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晚期糖基化终末产物通过AKT信号通路促进人主动脉血管平滑肌细胞钙化

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实用医学杂志 2017年第19期33卷 3169-3173页

作者：侯青春曾宏孙晓磊何虎强张雷袁罡刘勇西南医科大学附属医院血管外科四川省泸州市646000

目的探讨蛋白激酶B在晚期糖基化终末产物(AGEs)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化中的作用。方法体外培养HASMCs,随机分为对照组、DMSO组、AGEs组和AGEs+LY294002组,冯库萨染色检测各组钙化情况;Western blot检测相关蛋白的表... 详细信息

目的探讨蛋白激酶B在晚期糖基化终末产物(AGEs)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化中的作用。方法体外培养HASMCs,随机分为对照组、DMSO组、AGEs组和AGEs+LY294002组,冯库萨染色检测各组钙化情况;Western blot检测相关蛋白的表达。结果与对照组相比,AGEs组钙化相关蛋白骨形成蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)表达量明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;与对照组相比,AGEs组P-AKT表达量明显升高(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性;与AGEs组相比,AGEs+LY294002组钙化相关蛋白BMP-2、OPG的表达量明显降低(P<0.01)。结论 AKT信号通路在AGEs引起的HAVSMCs钙化中可能起重要作用。

关键词：人主动脉血管平滑肌细胞晚期糖基化终末产物血管平滑肌细胞钙化 AKT

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高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

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山东医药 2016年第47期56卷 61-63页

作者：刘晴汤潜王莎莎韩彦弢王春波青岛大学医学部药学院药理学系山东青岛266000 青岛大学附属医院中心实验室青岛大学药学院

目的观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组,实验组包括实验1、2、3组,另设空白对照组。对照组常规培养;实验1、2、3组分别加入10%、15%、20%浓度的高... 详细信息

目的观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组,实验组包括实验1、2、3组,另设空白对照组。对照组常规培养;实验1、2、3组分别加入10%、15%、20%浓度的高脂血清培养;空白对照组仅加培养基无细胞。继续培养6、12、24、48 h,用CCK-8法测算实验组HASMC细胞增殖率;培养24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组HASMC中GRIM-19和p-STAT3 mRNA,采用Western blotting法检测GRIM-19和p-STAT3蛋白。结果相同时间点细胞增殖率实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均<0.05。随着高脂血清培养时间增加,各组HASMC细胞增殖率呈递增趋势,P均<0.05。培养24 h时HASMC中GRIM-19 mRNA和蛋白实验3组低于实验2组,实验2组低于实验1组,P均<0.05;HASMC中p-STAT3 mRNA和蛋白实验3组高于实验2组,实验2组高于实验1组,P均<0.05。结论高脂血清可以促进HASMC增殖。与10%、15%的高脂血清相比,20%高脂血清促进HASMC增殖的效果最为明显。其作用机制可能与GRIM-19下调p-STAT3表达有关。

关键词：人主动脉血管平滑肌细胞细胞增殖维甲酸干扰素诱导凋亡相关基因转录信号转导子与激活子3

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二肽基肽4激活ERK1/2NF-KB信号通路诱导人主动脉血管平滑肌细胞钙化的研究

二肽基肽4激活ERK1/2NF-KB信号通路诱导人主动脉血管平滑肌细胞钙...

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作者：罗未聃西南医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨可溶性二肽基肽4(soluble Dipep-tidyl peptidase 4,sDPP4)促进人主动脉平滑肌细胞(Human aortic smooth muscle cells,HASMCs)钙化的机制。方法:在这项研究中,我们通过茜素红及Von kossa染色探索了DPP-4对人血管平滑肌细胞(HVSMC)的钙化影响。随后,将人主动脉血管平滑肌细胞随机分为对照组(正常培养),阳性对照组(β-甘油磷酸),低浓度干预组(25ng/ml,DPP4),高浓度干预组(200ng/ml,DPP4),高浓度+阳性对照组(DPP4+β-甘油磷酸),检测各组细胞钙化蛋白表达,最后再随机分为对照组(正常培养),干预组(200ng/ml,DPP4),JNK抑制剂组(SP600125)、P38抑制剂组(SB203580)、ERK1/2抑制剂组(PD98059)和NF-KB抑制剂组(BAY11-7082)后,Western-blot法检测各组细胞OPG,OPN,BMP2,RUNX2蛋白表达水平;最后通过检测ERK1/2和NF-KB磷酸化时间,得出检测相关通路的关系。结果:茜素红染色及及Von kossa染色结果显示,与正常对照组相比,DPP4干预组钙化结节明显增多,且与钙化组相当;且DPP4组OPG,OPN,RUNX2,BMP2蛋白表达水平成浓度,时间依赖性,DPP4干预下在15Min,500ng/ml时,P-ERK1/2表达明显增高(P<0.05);抑制剂组与DPP4组与相比,抑制剂组OPG,OPN,RUNX2,BMP2表达均明显降低(P<0.05)。sDPP4组较对照组钙化结节明显增多;ERK1/2抑制剂组(PD98059)和NF-KB抑制剂组(BAY11-7082)较阳性对照组的OPG(38.41%,18.41%),OPN(41.81%,61.58%),RUNX2(44.21%,59.4%),BMP2(48.3%,52.19%)蛋白表达水平明显降低;400 ng/ml s DPP4干预15min,P-ERK1/2表达明显增高(548.28%,372.55%);400 ng/ml sDPP4干预60 min,P-NF-κB表达明显增高(431.83%,207.63%);sDPP4处理60min时,sDPP4+ERK1/2组P-NF-κB明显降低(45.45%),且N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组P-ERK1/2(0.03%)和P-NF-KB(48.15%)均下降。结论:DPP4促进人VSMC钙化的钙化,其可能的作用机制是激活了ERK1/2-NF-KB信号信号通路。

关键词：二肽基肽4(DPP4) 人主动脉血管平滑肌细胞钙化 ERK1/2-NF-KB信号通路活性氧

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黄连素通过MAPK信号通路抑制AGEs诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化

黄连素通过MAPK信号通路抑制AGEs诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙...

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作者：张鑫鹏西南医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨黄连素通过MAPK信号通路途径对AGEs诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化的影响及机制。本实验主要通过体外实验方法验证黄连素是否抑制AGEs诱导的HASMCs钙化,进一步验证AGEs是否通过激活ERK1/2、P38、JNK MAPK信号通路促进HASMC... 详细信息

目的:探讨黄连素通过MAPK信号通路途径对AGEs诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化的影响及机制。本实验主要通过体外实验方法验证黄连素是否抑制AGEs诱导的HASMCs钙化,进一步验证AGEs是否通过激活ERK1/2、P38、JNK MAPK信号通路促进HASMCs钙化,并探究黄连素是否具有下调ERK1/2、P38、JNK MAPK信号通路作用,为未来寻找临床治疗药物作用新靶点提供新的理论依据。方法:(1)培育4-10代人主动脉血管平滑肌细胞,动态观察细胞形态并应用免疫荧光方法进行细胞鉴定;(2)运用CCK-8法测定不同浓度黄连素对HASMCs存活率影响,以小于IC50(细胞半抑制浓度)为标准,确定黄连素适宜浓度(10、25、50μM/L)。利用AGEs建立人主动脉血管平滑肌细胞钙化模型,即AGEs-BSA(100mg/L)干预7天,并分别予以不同浓度(10、25、50μM/L)黄连素同时干预7天,随后提取细胞总蛋白,Western Blot检测各组细胞OPG、BMP2、OPN蛋白表达量。用Von Kossa染色、茜素红染色观察细胞钙化程度,染色鉴定时AGEs-BSA(100mg/L)干预14天。细胞内钙含量试剂盒测定钙含量,ELISA测定HASMCs内ALP活性。用免疫荧光法观察各组细胞内α-SMA、F-actin、Runx2表达差异。实验分组如下:对照组、β-GP组、DMSO组、AGEs组、AGEs+(10、25、50)μM/LBBR组。(3)第一部分,应用ERK1/2 MAPK特异性抑制剂PD98059,P38 MAPK特异性抑制剂SB203580,JNK MAPK特异性抑制剂SP600125处理HASMCs 15min后提取细胞总蛋白,Western Blot检测各组细胞P-ERK1/2、ERK1/2、P-P38、P38、P-JNK、JNK蛋白表达量;为验证ERK1/2、P38、JNK MAPK信号通路对HASMCs钙化影响及不同浓度黄连素对AGEs诱导的磷酸化MAPK信号通路表达量影响。实验分组如下:对照组、100mg/L AGEs、100mg/L AGEs+(10、25、50)μM/LBBR。第二部分,验证抑制MAPK信号通路对AGEs诱导的HASMCs钙化影响,应用抑制剂(PD98059、SB203580、SP600125)预处理HASMCs 6小时后,加入100mg/L AGEs干预7天后提取细胞总蛋白,Western Blot检测各组细胞OPG、BMP2、OPN表达量;用Von Kossa染色、茜素红染色观察细胞钙化程度,染色检测AGEs-BSA(100mg/L)干预14天。细胞内钙含量试剂盒测定钙含量,ELISA测定HASMCs内ALP活性。用免疫荧光法观察各组细胞内Runx2表达差异。实验分组如下:对照组、DMSO组、PD98059组、SB203580组、SP600125组、AGEs组、AGEs+(50μM/L)BBR组、AGEs+PD98059组、AGEs+SB203580组、AGEs+SP600125组、AGEs+PD98059+(50μM/L)BBR组、AGEs+SB203580+(50μM/L)BBR组、AGEs+SP600125+(50μM/L)BBR组。(4)探索下游因子ATF4在AGEs诱导的HASMCs钙化中的作用以及MAPK与ATF4因子之间关系。加入ATF4 si RNA于HASMCs干预24h后,再加入100mg/L AGEs干预7天,Western Blot检测各组细胞OPG、BMP2、OPN表达量。Western Blot检测P-ERK1/2、ERK1/2、P-P38、P38、P-JNK、JNK蛋白表达量。结果:1、经过HASMCs专用培养基培养2d观察,HASMCs紧贴培养板生长,呈梭形,具有典型“波峰波谷”形态,通过激光共聚焦显微镜可见,细胞经染色处理后,绿色荧光染色为HASMCs特异表型蛋白α-SMA。2、黄连素作用HASMCs192h(8天)时IC50=129.32μM/L,因此选择黄连素浓度梯度为10、25、50μM/L,连续作用时间7天。3、黄连素能抑制AGEs诱导的血管平滑肌细胞钙化,且呈浓度依赖性。AGEs组细胞内钙含量、ALP活性较对照组明显增多(P<0.01),相较于AGEs组,不同浓度黄连素呈浓度依赖性减少人主动脉血管平滑肌细胞钙含量、ALP活性(P<0.01);AGEs组细胞内OPG、BMP2、OPN表达量较对照组明显增多(P<0.01),相较于AGEs组,不同浓度黄连素呈浓度依赖性减少人主动脉血管平滑肌细胞内OPG、BMP2、OPN表达量(P<0.01)。AGEs组冯库萨、茜素红染色钙化程度较对照组增强,而不同浓度黄连素呈浓度依赖性减少人主动脉血管平滑肌细

关键词：黄连素血管钙化晚期糖基化终末产物人主动脉血管平滑肌细胞 MAPK通路激活转录因子-4

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AGEs诱导自噬促进人主动脉血管平滑肌细胞钙化

AGEs诱导自噬促进人主动脉血管平滑肌细胞钙化

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作者：伍成文西南医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨细胞自噬在晚期糖基化终末产物(advance glycation end products,AGEs)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HAVSMCs)钙化中的作用机制。方法:在此项研究中,选用第5-8代人主动脉血管平滑肌细胞进... 详细信息

目的:探讨细胞自噬在晚期糖基化终末产物(advance glycation end products,AGEs)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HAVSMCs)钙化中的作用机制。方法:在此项研究中,选用第5-8代人主动脉血管平滑肌细胞进行实验。将人主动脉血管平滑肌细胞分为对照组及钙化组,钙化组使用40mg/L AGEs诱导4天。使用Western Blot检测两组细胞中OPG、OPN、LC3II、Beclin1、P62蛋白的表达水平。按AGEs干预细胞的时间不同将实验分组为A1组(40mg/L AGEs干预1天)、A2组(40mg/L AGEs干预2天)、A3组(40mg/L AGEs干预3天)、A4组(40mg/L AGEs干预4天),分别使用Western Blot检测各组细胞中OPG、LC3II、Beclin1、P62蛋白的表达水平,再使用免疫荧光法检测各组细胞内LC3表达差异。ELISA法检测各组细胞内ALP活性。然后,将实验分为对照组、自噬抑制组及钙化组,自噬抑制组使用1μmol/L渥曼青霉素(Wortmannin)+40mg/L AGEs干预4天,钙化组仍以40mg/L AGEs干预4天。Western Blot检测各组细胞中OPG、OPN、RUNX2、LC3II蛋白的表达水平。ELISA法检测各组细胞内ALP活性。冯-库萨染色法检测细胞钙化程度。为探索相关信号通路与自噬的关系,使用Western Blot法分别对照组与AGEs组中PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR蛋白的表达水平进行检测。结果:1.钙化组OPG、LC3II、Beclin1、P62蛋白的表达水平相较对照组明显增高(P<0.05)。2.A1组、A2组、A3组、A4组中OPG、LC3II、Beclin1、P62蛋白水平依次升高(P<0.05),ALP活性也依次升高(P<0.05)。各组细胞内LC3II荧光斑点也随干预时间增加而增加。3.自噬抑制组的OPG、OPN、RUNX2、LC3II蛋白表达水平相较于钙化组降低,而相较于对照组增高(P<0.05)。ALP活性及冯-库萨染色检测的细胞钙化程度也呈此趋势。4.相较于对照,AGEs组的PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平增高(P<0.05)。结论:***诱导人主动脉血管平滑肌细胞钙化与自噬,且呈时间依耐性。2.自噬促进AGEs诱导人主动脉血管平滑肌细胞钙化。***可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进自噬从而促进人主动脉血管平滑肌细胞钙化。

关键词：自噬晚期糖基化终末产物血管钙化人主动脉血管平滑肌细胞

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myocardin通过激活miR-93-5p促进人主动脉血管平滑肌细胞分化

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天津科技大学学报 2019年第2期34卷 19-24页

作者：史丹阳刘美玲刘翔张建张同存王楠工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院天津300457

myocardin是促进平滑肌细胞分化的重要转录因子.微小RNA(microRNAs,miRNA)在近年来已经证实参与多种生物学过程,包括平滑肌的表型转化.然而在平滑肌分化过程中myocardin与哪些microRNA具有相关性仍有待于阐明.通过将外源性myocardin转... 详细信息

myocardin是促进平滑肌细胞分化的重要转录因子.微小RNA(microRNAs,miRNA)在近年来已经证实参与多种生物学过程,包括平滑肌的表型转化.然而在平滑肌分化过程中myocardin与哪些microRNA具有相关性仍有待于阐明.通过将外源性myocardin转入人主动脉血管平滑肌细胞(human aortal vascular smooth muscle cells,HA-VSMCs)中,利用免疫印迹(Western blot)检测分化标志基因肌动蛋白α2(actin alpha2,ACTA2)和肌动蛋白相关蛋白(smooth muscle 22 alpha,SM22α)的表达;利用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测过表达或敲低myocardin对miR-93-5p水平的影响;构建miR-93-5p启动子的荧光素酶报告质粒,利用荧光素酶报告分析证实myocardin对mi R-93-5p启动子的转录激活作用.上述结果证实myocardin可能通过激活miR-93-5p的转录,上调其表达,进而促进血管平滑肌细胞的分化.

关键词： myocardin 人主动脉血管平滑肌细胞表型转化 miR-93-5p

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