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中国医学创新 2012年第29期9卷 75-76页

作者：郭玲郝凯军张增梅山东省潍坊市益都中心医院山东潍坊262500 山东省青州市荣军医院

人粒细胞无形体病（human granulocytie anaplasmosis,HGA）是一种新发的重要的人畜共患自然疫源性疾病,由嗜吞噬细胞无形体引起,主要侵犯人末梢血中性粒细胞,经蜱源传播的埃立克体疾病。临床表现以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功... 详细信息

人粒细胞无形体病（human granulocytie anaplasmosis,HGA）是一种新发的重要的人畜共患自然疫源性疾病,由嗜吞噬细胞无形体引起,主要侵犯人末梢血中性粒细胞,经蜱源传播的埃立克体疾病。临床表现以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损害为主,严重者可发生多脏器功能衰竭、

关键词：粒细胞多脏器功能衰竭人粒细胞无形体病

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人嗜吞噬细胞无形体Msp2、Ats-1蛋白与宿主细胞潜在蛋白互作研究

人嗜吞噬细胞无形体Msp2、Ats-1蛋白与宿主细胞潜在蛋白互作研究

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作者：王勇石河子大学

学位级别：博士

人粒细胞无形体病（Human granulocytic anaplasmosis，HGA）是一种新发蜱传人兽共患传染病，发病病原嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）是一种专性胞内寄生菌，革兰氏阴性，可寄居于哺乳动物细胞中,也可生活在硬蜱中并传... 详细信息

人粒细胞无形体病（Human granulocytic anaplasmosis，HGA）是一种新发蜱传人兽共患传染病，发病病原嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）是一种专性胞内寄生菌，革兰氏阴性，可寄居于哺乳动物细胞中,也可生活在硬蜱中并传播。人粒细胞是嗜吞噬细胞无形体生存、繁殖的重要场所。HGA临床表现有发热、头痛、肌痛、白细胞减少和血小板减少、肝酶活性水平升高等，与某些病毒性传染病极其相似，极易发生误诊，重症者可引起死亡。家畜（马、犬和反刍动物）粒细胞无形体病临床症状跟HGA基本相似。嗜吞噬细胞无形体经蜱叮咬进入机体后主要存在于粒细胞中，形成含菌包涵体，且不会被溶酶体融合，扰乱宿主细胞免疫功能，有利于胞内生长繁殖。嗜吞噬细胞无形体侵入粒细胞过程中，其表面膜蛋白最先与宿主细胞发生相互作用，完成细菌侵入机体的黏附内吞过程;嗜吞噬细胞无形体进入粒细胞后，一些分泌蛋白、包涵体膜蛋白等对病原的包内寄居有重要作用，但其分子致病机理尚不完全清楚。近年来粒细胞无形体病特别是HGA案例世界范围内有增加趋势，引起世界各国的广泛关注。我们对我国人粒细胞无形体病（HGA）流行病学进行了调查，临床表现为重症型。本文拟对我国部分地区无形体病流行情况进行调查，并对人粒细胞无形体致病过程中的表面蛋白、分泌蛋白作用进行了探讨。本研究开展如下工作： 1.了解云南曲靖、山西吕梁两省/市鼠传无形体流行特征。无菌条件下收集的鼠脾脏样本用组织破碎仪破碎后试剂盒抽提基因组，巢式PCR检测疑似阳性产物送测序并进行序列信息分析。研究结果表明，云南曲靖优势鼠种为褐家鼠和黄胸鼠，立克次体总阳性率为1.7%，细菌有立克次体属（Rickettsia）、埃立克体属（Ehrlichia）、无形体属（Anaplasma）、沃尔巴克体属（Wolbachia）等多个种属，提示中国云南曲靖鼠类自然感染病原种类较复杂，变异较大。山西吕梁优势鼠种为黑线姬鼠，立克次体总阳性率为5.9%，立克次体种类仅有查菲埃立克体（Ehrlichia chaffeensis）。由此得出结论是云南曲靖、山西吕梁两地区啮齿动物中存在立克次体自然感染现象，啮齿动物可能是该地区立克次体病原的一个自然疫源宿主。 2.构建人单核细胞白血病细胞（THP-1）cDNA文库。提取人单核细胞白血病细胞THP-1总RNA，反转录获得第一链cDNA, LD-PCR扩增获得双链cDNA，用CHROMASPIN+TE-400纯化柱纯化的双链cDNA与pGADT7-Rec载体共转化酿酒酵母Y187，构建cDNA文库。得到了人THP-1细胞cDNA文库的库容为4.0×106，重组率为96.1%，插入片段大小在100-3000bp，且片段条带丰度位于500-2000bp之间，已达到建库要求。为进一步筛选与嗜吞噬细胞无形体LZ-HGA-Agent MSP2蛋白、Ats-1蛋白相互作用的THP-1细胞潜在蛋白奠定了基础。 3.筛选与中国人源嗜吞噬细胞无形体分离株LZ-HGA-Agent Msp2、Ats-1相互作用的人THP-1细胞潜在靶蛋白，为无形体分子致病机理研究提供实验数据。以中国人源嗜吞噬细胞无形体分离株LZ-HGA-Agent表面膜蛋白Msp2、分泌蛋白Ats-1和人THP-1细胞为主要研究对象，通过生物信息学分析，选择编码Msp2蛋白完整开放阅读框、Ats-1蛋白部分开放阅读框作为克隆目标，通过引物设计，PCR扩增目的基因msp2、ats-1，连接等构建诱饵质粒pGBKT7-msp2、pGBKT7-ats-1并转化酵母Y2HGold菌株，最后经自激活检测和毒性检测证实成功构建含诱饵质粒的酵母转化子;采用研究蛋白-蛋白互作的酵母双杂交经典技术筛选互作蛋白。以上研究结果表明，筛选到与表面蛋白Msp2互作的THP-1细胞潜在蛋白主要有NADH脱氢酶（泛醌）1α亚体13（NDUFA13）、锌指蛋白36,C3H样2（ZFP36L2）、核糖体蛋白L11（RPL11）、前胸腺素α（PTMA）、Homo sapiens chromosome19open reading frame10（C19orf10）、组织蛋白酶G（CTSG）、核糖体蛋白S25（RPS25）七个阳性潜在蛋白，而与分泌蛋白Ats-1互作的THP-1细胞潜在蛋白主要有真核翻译延伸因子1α1亚基（EEF1A1）、金属蛋白酶抑制子1（TIMP1）、锌指蛋白36,C3H样2（ZFP36L2）、半乳糖凝集素1（LGALS1）、前胸腺素α（PTMA）、Homo sapiens Williams Beuren syndrome chromosome region22（WBSCR22）、吸引素（ATRN）七个阳性潜在蛋白。 4.鉴定与Msp2、Ats-1蛋白真正互作的

关键词：嗜吞噬细胞无形体 Msp2/Ats-1 人粒细胞无形体病酵母双杂交

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河西走廊区域牛、羊和蜱的嗜吞噬细胞无形体分子检测

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 164-169页

作者：孙明聂英王淑芳马超赵鑫刘玉秀张翠花赵燕姜金玲张伟赵生贤民勤县畜牧兽医工作站武威733000 天祝县动物疫病预防控制中心武威733000 酒泉市动物疫病预防控制中心酒泉735000

嗜吞噬细胞无形体是由媒介蜱传播引起人粒细胞无形体病的病原之一。目前,对甘肃省河西走廊区域内嗜吞噬细胞无形体病原在蜱体内和贮藏宿主体内感染流行情况的研究尚未开展。以采集到的123份抗凝血样品和357份蜱虫样品为研究对象,检测嗜... 详细信息

嗜吞噬细胞无形体是由媒介蜱传播引起人粒细胞无形体病的病原之一。目前,对甘肃省河西走廊区域内嗜吞噬细胞无形体病原在蜱体内和贮藏宿主体内感染流行情况的研究尚未开展。以采集到的123份抗凝血样品和357份蜱虫样品为研究对象,检测嗜吞噬细胞无形体在蜱体内和贮藏宿主体内的感染情况。在检测的样品中,共发现有28份样品中感染嗜吞噬细胞无形体,亚洲璃眼蜱、波斯锐缘蜱和草原革蜱均检测到嗜吞噬细胞无形体。结果表明,甘肃省河西走廊区域媒介蜱体内及其储藏宿主体内普遍存在无形体携带状况,进一步开展人群无形体病调查及分子流行病学研究十分必要。

关键词：嗜吞噬细胞无形体人粒细胞无形体病蜱流行

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中国小肠结肠炎耶尔森菌分布特征与旱獭携带嗜吞噬细胞无形体的调查研究

中国小肠结肠炎耶尔森菌分布特征与旱獭携带嗜吞噬细胞无形体的调...

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作者：穆慧宁夏医科大学

学位级别：硕士

第一部分中国小肠结肠炎耶尔森菌分布特征目的通过对中国1980-2019年不同地区小肠结肠炎耶尔森菌的病原学与PFGE型别特征分析,为小肠结肠炎耶尔森菌病的防控提供依据。方法对中国不同区域、不同来源标本分离到的6847株小肠结肠炎耶尔森... 详细信息

第一部分中国小肠结肠炎耶尔森菌分布特征目的通过对中国1980-2019年不同地区小肠结肠炎耶尔森菌的病原学与PFGE型别特征分析,为小肠结肠炎耶尔森菌病的防控提供依据。方法对中国不同区域、不同来源标本分离到的6847株小肠结肠炎耶尔森菌,进行血清型别、生化表型、毒力基因分布研究,对致病性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别聚类分析。结果1.本研究中分离到的6847株小肠结肠炎耶尔森菌主要来源于动物(88.36%,6050/6847),其次是腹泻病人(6.44%,441/6847)、食品(4.76%,326/6847)及外环境(0.44%,30/6847)。在动物源菌株中,以猪源株占比最高(43.24%%,2616/6050),其次为啮齿类(27.69%,1675/6050)。2.小肠结肠炎耶尔森菌中致病性菌株2047株、非致病菌4800株。致病性菌株仅存在O:3和O:9两种血清型,O:3占比88.96%(1821/2047)、O:9占比11.04%(226/2047)。18个省市自治区的致病株以O:3血清型为主,宁夏回族自治区以O:9血清型为主。非致病菌在调查的22个省份均有分布,血清型众多,普遍比致病株具有更多的阳性生化反应。3.致病株共有两种组合,其中Ⅰ型占92.67%(1897/2047),携带ail、ystA、yadA和virF基因,Ⅱ型占7.33%(150/2047),为丢失毒力质粒的致病菌。非致病株以携带ystB基因的Ⅲ型和所有毒力基因均不携带的Ⅳ型占比较高,分别占62.83%(3016/4800)、36.19%(1737/4800)。上述四种典型的基因型别(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)在所有调查的22个省份大多数省份有分布。此外,非致病株还存在仅携带ail基因(Ⅵ型)或同时携带ail和ystB基因(V型)的菌株分布于个别省份。4.1821株O:3致病株分为93个PFGE型别,分布19个省市自治区,其中K6GN11C30021、K6GN11C30012为优势带型分别占比46.35%、22.5%,75.38%的人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致;226株O:9致病株共分为14个PFGE型别,分布于8个省市自治区,77.78%人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致。结论1.我国小肠结肠炎耶尔森菌分布广泛、宿主众多,致病株仅有两个血清型,非致病株血清型众多,可能比致病株具有更强的生化代谢能力与环境适应力。2.非致病菌株普遍比致病性菌株具有更多的阳性生化反应,表明其可能具有更强的生化代谢能力与环境适应力。致病株中,O:3血清型与O:9血清型的主要生化编码亦不存在交叉,表明二者可能具有不同的生化分解能力与生态位。3.致病性菌株PFGE优势带型相对集中,地域分布广泛,多数人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致,应警惕通过家畜家禽、食品及外环境等多种来源感染人的风险。第二部分旱獭携带嗜吞噬细胞无形体的调查研究目的了解鼠疫自然疫源地中旱獭携带嗜吞噬细胞无形体的情况,为无形体病与鼠疫的防控提供科学依据。方法1.对采集到的旱獭标本检测嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因与groESL基因,对巢式序列进行测序比对;2.以嗜吞噬细胞无形体阳性的旱獭组织研磨液感染BALB/c小鼠及L929细胞,检测嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因与groESL基因并测序。结果1.从2019年至2020年在中国甘肃省肃北县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地共采集到212只旱獭,总阳性率为20.75%(44/212),其中被捕获的活体旱獭的嗜吞噬细胞无形体阳性检出率为19.21%(29/151),自毙旱獭检出率为24.59%(15/61)。分布于旱獭的心、肝、脾、肺、骨髓中。2.旱獭来源的嗜吞噬细胞无形体的16S rRNA基因序列、groEL核苷酸序列,GroEL氨基酸序列与嗜吞噬细胞无形体参考菌株HZ(CP000235.1)的同源性分别为99.52%(1463/1470),94.07%(1173/1247)和99.52%(413/415)。3.旱獭组织中的嗜吞噬细胞无形体成功感染BALB/c小鼠及L929细胞,可从小鼠中及L929细胞再次检测到嗜吞噬细胞无形体。结论1.本研究首次发现旱獭携带嗜吞噬细胞无形体,具有较高的携带率,并分布于全身多个脏器。2.旱獭可能是嗜吞噬细胞无形体的储存宿主。

关键词：小肠结肠炎耶尔森菌 PFGE 血清型致病菌株人粒细胞无形体病嗜吞噬细胞无形体 16s rRNA基因 groESL基因

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黑龙江林区出入境人员嗜吞噬细胞无形体血清抗体检测

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中国国境卫生检疫杂志 2010年第4期33卷 221-223页

作者：丁大伟付维明黄玉明梁慧杰王延禄杨春江王晓杰黑龙江出入境检验检疫局哈尔滨150001 黑龙江省皮肤病防治研究所哈尔滨150001

〔目的〕了解东北林区出入境人员嗜吞噬细胞无形体抗体水平。评估我国东北林区出入境人员嗜吞噬细胞无形体感染的潜在公共卫生危害,为人粒细胞无形体病的防控提供流行病学资料。〔方法〕采用间接免疫荧光检测方法对东北林区出入境体检... 详细信息

〔目的〕了解东北林区出入境人员嗜吞噬细胞无形体抗体水平。评估我国东北林区出入境人员嗜吞噬细胞无形体感染的潜在公共卫生危害,为人粒细胞无形体病的防控提供流行病学资料。〔方法〕采用间接免疫荧光检测方法对东北林区出入境体检人群血清嗜吞噬细胞无形体抗体进行检测,并对检测结果进行统计分析。〔结果〕共检测243份血清,其中阳性8份,阳性率为3.29%,1份抗体滴度达到1:320。〔结论〕我国东北林区人群中可能存在嗜吞噬细胞无形体既往感染。

关键词：人粒细胞无形体病嗜吞噬细胞无形体间接免疫荧光法血清抗体出入境人员林区

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嗜吞噬细胞无形体aph0653的克隆表达及重组蛋白的抗原性分析

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现代生物医学进展 2017年第1期17卷 20-23页

作者：徐文婷贺美玲张磊黄瑞牛华苏州大学医学部江苏苏州215123

目的:克隆表达嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,AP)APH0653基因,并对表达产物进行抗原性分析。方法:以嗜吞噬细胞无形体基因组DNA为模板,使用特异性引物,PCR扩增APH0653基因并克隆入原核表达载体进行表达。使用镍柱亲和层... 详细信息

目的:克隆表达嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,AP)APH0653基因,并对表达产物进行抗原性分析。方法:以嗜吞噬细胞无形体基因组DNA为模板,使用特异性引物,PCR扩增APH0653基因并克隆入原核表达载体进行表达。使用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,并应用免疫印迹方法检测APH0653与嗜吞噬细胞无形体感染血清的免疫反应性。结果:菌落PCR、DNA测序和SDS-PAGE蛋白凝胶电泳表明APH0653基因已成功克隆入原核表达载体,并可诱导表达重组蛋白。免疫印迹实验表明AP阳性血清可识别重组蛋白APH0653,并产生明显的特异性条带。结论:嗜吞噬细胞无形体APH0653蛋白可在原核表达系统中高效表达,且重组蛋白具有较好的抗原性。

关键词：人粒细胞无形体病嗜吞噬细胞无形体 APH0653 抗原性

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三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究

三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：张殿卿姚娜赵庆亮黄林盛金良孟庆龄陈创夫新疆石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

本文探索了人源无形体不同分离株AnkA蛋白免疫原性存在的差异，并进一步揭示这些蛋白质间可能存在结构及免疫表位差异以及可能相关的与宿主细胞作用蛋白谱差异。本研究成功原核表达并纯化了三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白，重组蛋白与中... 详细信息

本文探索了人源无形体不同分离株AnkA蛋白免疫原性存在的差异，并进一步揭示这些蛋白质间可能存在结构及免疫表位差异以及可能相关的与宿主细胞作用蛋白谱差异。本研究成功原核表达并纯化了三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白，重组蛋白与中国无形体病人阳性血清存在免疫反应。三株嗜吞噬细胞无形体AnkA重组蛋白与免疫小鼠多克隆抗体之间存在交叉反应，通过Western blot和ELISA方法得到人源无形体不同分离株AnkA蛋白质之间的免疫原性差异不显著，表明它们之间的空间结构及其相似，抗原表位差异较小。

关键词：人粒细胞无形体病嗜吞噬细胞蛋白原核表达免疫原性

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无形体病11例

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中华传染病杂志 2012年第4期30卷 250-252页

作者：赫兢张丽娟周越塑禹惠兰孟玉华王誓文王圆圆李跃旗解放军第三0二医院门诊部北京100039

目前，已将马埃立克体和人粒细胞埃立克体合并为无形体属，同时将人粒细胞埃立克体病更名为人粒细胞无形体病Ⅲ。无形体病（Anaplasmosis）是一类新发人兽共患自然疫源性疾病，

关键词：人粒细胞无形体病人粒细胞埃立克体病自然疫源性疾病人兽共患

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湖北省动物携带嗜吞噬细胞无形体感染的初步调查

湖北省动物携带嗜吞噬细胞无形体感染的初步调查

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第3届全国人畜共患病学术研讨会

作者：张令要湖北省疾病预防控制中心

人粒细胞无形体病(HGA)是由对人类致病的蜱源嗜吞噬细胞无形体引起的,主要侵犯人末梢血中性粒细胞,临床表现以发热,伴白细胞和血小板减少,以及多器官功能衰竭为特征。2006年,我国首次在安徽省发现人嗜吞噬细胞无形体病病例,该病临床症... 详细信息

人粒细胞无形体病(HGA)是由对人类致病的蜱源嗜吞噬细胞无形体引起的,主要侵犯人末梢血中性粒细胞,临床表现以发热,伴白细胞和血小板减少,以及多器官功能衰竭为特征。2006年,我国首次在安徽省发现人嗜吞噬细胞无形体病病例,该病临床症状与某些病毒性疾病相似,容易发生误诊,严重者可导致死亡,近年来我国的安徽、山东等地也相继发现人嗜吞噬细胞无形体病病例。2005年,湖北省咸宁市报告一例不明原因出

关键词：嗜吞噬细胞无形体基因片段发热伴血小板减少综合征人粒细胞无形体病湖北省初步调查

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中国人粒细胞无形体人与人传播院内感染事件引发的公共卫生思考

中国人粒细胞无形体人与人传播院内感染事件引发的公共卫生思考

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2009海峡两岸传染病防治研讨会

作者：张丽娟中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206

2008年美国医学会著名杂志JAMA 300期19卷发表了由中国疾病预防控制中心传染病所等国内外7家专业机构共同发表的研究论文—题目为“中国人粒细胞无形体院内传播感染”。这是世界范围内首次报告的人粒细胞无形体病发生在人与人之间相互... 详细信息

2008年美国医学会著名杂志JAMA 300期19卷发表了由中国疾病预防控制中心传染病所等国内外7家专业机构共同发表的研究论文—题目为“中国人粒细胞无形体院内传播感染”。这是世界范围内首次报告的人粒细胞无形体病发生在人与人之间相互传播的事件，也是中国第一次报道的人粒细胞无形体感染确诊病例。同期，美国纽约洲医学院著名流行病学与公共卫生学专家Peter *** and Gary ***教授对该文做了充分的肯定并发表了重要述评。做为该项研究的第一完成单位及作者，就中国人粒细胞无形体院内感染事件引发的公共卫生问题与广大临床工作者与疾病监测工作者做借鉴式的探讨。

关键词：流行病学院内感染公共卫生人粒细胞无形体病

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