检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞生物学杂志 2005年第6期27卷 662-666页

作者：王淳方文刚陈誉华中国医科大学发育生物学教研室

为研究大肠杆菌的脑微血管内皮细胞侵袭基因yijP的功能,将yijP基因(1.04kb)克隆到pQE30表达载体,构建表达产物为N末端带有6个组氨酸(His)序列的yijP汇合蛋白,以M15(pREP4)为受体菌,大量表达(His)6-yijP汇合蛋白,利用Ni-NTA亲和层析纯化... 详细信息

为研究大肠杆菌的脑微血管内皮细胞侵袭基因yijP的功能,将yijP基因(1.04kb)克隆到pQE30表达载体,构建表达产物为N末端带有6个组氨酸(His)序列的yijP汇合蛋白,以M15(pREP4)为受体菌,大量表达(His)6-yijP汇合蛋白,利用Ni-NTA亲和层析纯化汇合蛋白,将经透析法复性的一定浓度的(His)6-yijP蛋白加入到体外培养的人脑微血管内皮细胞中,结果显示yijP蛋白对人脑微血管内皮细胞有较强的细胞毒作用:在相差显微镜下可观察到细胞皱缩、胞膜呈泡状膨出,随着时间延长细胞逐渐脱落;荧光显微镜下可见细胞核呈现为致密团块状或圆形浓染颗粒状,呈凋亡样改变;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA阶梯状条带;流式细胞仪显示在正常二倍体峰之前出现一个亚二倍体峰;Western印迹可检测到caspase-3的活性片段。这些现象均出现在yijP蛋白作用于人脑微血管内皮细胞的16h之后,提示在大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞过程中,yijP蛋白可能起到诱导脑微血管内皮细胞迟发性凋亡的毒素作用。

关键词：大肠杆菌 yijP基因人脑微血管内皮细胞血脑屏障细胞凋亡

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内质网分子伴侣在大肠杆菌对人脑微血管内皮细胞侵袭过程中的变化

内质网分子伴侣在大肠杆菌对人脑微血管内皮细胞侵袭过程中的变化

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作者：任治远中国医科大学

学位级别：硕士

背景及目的新生儿细菌性脑膜炎是中枢神经系统最严重的疾病之一，大肠杆菌(Escherichia coli，***)是引起脑膜炎最常见的革兰氏阴性细菌。脑膜炎的发病率和致死率都很高，目前认为，***经血源播散人脑，但其如何穿过血脑屏障，迄今... 详细信息

背景及目的新生儿细菌性脑膜炎是中枢神经系统最严重的疾病之一，大肠杆菌(Escherichia coli，***)是引起脑膜炎最常见的革兰氏阴性细菌。脑膜炎的发病率和致死率都很高，目前认为，***经血源播散人脑，但其如何穿过血脑屏障，迄今尚不清楚。血脑屏障主要由脑微血管内皮细胞，内皮细胞间的紧密连接，以及包绕内皮细胞的基膜和星形胶质细胞的足突组成，以严格限制致病因子及细胞进入脑内。人脑微血管内皮细胞(HBMEC)是构成血脑屏障的主要成分之一，体外分离培养的HBMEC已被视为研究细菌穿过血脑屏障机理的理想模型。探讨***与脑微血管内皮细胞相互作用及***侵袭脑微血管内皮细胞机制可望为新生儿细菌性脑膜炎的防治提高新的干预靶点。我们设想，***的侵袭使人脑微血管内皮细胞处于应激状态，应激可能会使细胞内应激蛋白家族成员——内质网分子伴侣如葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)发生变化。鉴此，我们以血脑屏障的主要组成成分人脑微血管内皮细胞(HBMEC)为血脑屏障模型，检测了内质网分子伴侣在***侵袭HBMEC过程中的表达和分布情况，同时为了解内质网分子伴侣在***侵袭HBMEC过程中变化的意义，我们也初步检测了在***侵袭过程中与侵袭相关的发挥细胞粘附作用的骨架相关蛋白vinculin的变化，希望为探讨***的侵袭HBMEC机制和血脑屏障功能的研究积累科学资料。方法 1．利用RT-PCR方法检测***侵袭HBMEC过程中GRP78、GRP94 mRNA的表达变化。 2．应用蛋白质免疫印迹(Western Blot)方法检测***侵袭HBMEC过程中GRP78、GRP94蛋白的表达改变。 3．利用免疫荧光方法分析GRP78、GRP94蛋白在大肠杆菌侵袭后在 HBMEC中的分布情况。 4.应用蛋白质免疫印迹(Westem Blot)方法检测***侵袭HBMEC 过程中vinculin蛋白的表达改变。结果 1 .GRP78、GR即4在人脑微血管内皮细胞内存在基础表达。 2.人脑微血管内皮细胞在大肠杆菌州4侵袭前后，其细胞内GRr口8 的mRNA和蛋白水平无明显改变。 3.在大肠杆菌E44侵袭前后，人脑微血管内皮细胞内GRr94的表达存在明显的差异性，侵袭后较侵袭前GRP94的mRNA和蛋白水平下降，并且随着侵袭时间的延长，二者的表达量也随之减少。 4.免疫荧光结果显示，在正常的HBMEC中，GR种8和G印四4的免疫反应阳性信号主要分布在细胞浆中，当大肠杆菌D抖侵袭HBMEC后， GRP78的含量和分布未见明显变化，而GR即4的含量随着侵袭时间的延长逐渐减少，并且其分布向胞膜附近转移。 5.人脑微血管内皮细胞在大肠杆菌E闷4侵袭前后，其细胞内Vinculin 的表达存在明显的差异性，侵袭后较侵袭前vinc吐n的蛋白表达水平上升，并且随着侵袭时间的增加，表达量也随之上升。结论 1.’内质网分子伴侣GR即4涉及到大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞过程，其作用机制似与vinculin的表达相关。 2.内质网分子伴侣GRP78没有参与到大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞的过程。

关键词：大肠杆菌血脑屏障人脑微血管内皮细胞葡萄糖调节蛋白78、94 vinculin

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神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号交互作用机制

神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号交互作...

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作者：刘雅琦宁夏医科大学

学位级别：硕士

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,具有死亡率高治愈率低的特点。据统计,恶性胶质瘤患者的中位生存期仅为17.9个月,而侧脑室旁胶质瘤预后更差仅能生存5.7-17.5个月。胶质瘤的发生是一个多因素参与、多基因改变、多步骤演进... 详细信息

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,具有死亡率高治愈率低的特点。据统计,恶性胶质瘤患者的中位生存期仅为17.9个月,而侧脑室旁胶质瘤预后更差仅能生存5.7-17.5个月。胶质瘤的发生是一个多因素参与、多基因改变、多步骤演进复杂过程,胶质瘤患者预后不良的原因与脑胶质瘤生物学行为有关,因此,研究胶质瘤恶性行为及其相关分子生物学机制具有重要的意义。但大部分研究都停留在肿瘤细胞内部的信号传递及肿瘤微环境营养成分的改变对肿瘤细胞产生的影响,从而忽视了微环境中的一个重要组成成分即微血管内皮细胞。在肿瘤的增生侵袭过程中,微血管内皮细胞起了重要的作用,因此,研究微血管内皮细胞和肿瘤细胞之间的交互作用具有重要的理论意义和现实意义。近年来研究比较多的一条肿瘤细胞信号通路IL-6/STAT3很可能在这过程中起了桥梁作用,因此本课题选择该通路来研究神经胶质瘤细胞(A172/U251)与人脑微血管内皮细胞之间的信号Crosstalk机制。本课题采用以下实验技术方法来证明神经胶质瘤细胞(A172/U251)与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号Crosstalk机制。应用Elisa法分别检测24h,48h,72h神经胶质瘤细胞及其分泌因子VEGF对内皮细胞分泌细胞因子IL-6量的影响;应用western blotting检测30min时内皮细胞及其分泌因子IL-6对胶质瘤细胞Stat3蛋白及其磷酸化状态的影响;应用CCK-8法检测24h,48h,72h内皮细胞及其分泌因子IL-6对神经胶质瘤细胞增殖情况影响;应用Transwell小室检测24h,48h,72h内皮细胞及其分泌因子IL-6对胶质瘤细胞侵袭状态的影响。所取得的实验结果如下:实验结果:***(50 ***-1)组和共培养组(人脑微血管内皮细胞分别和A172,U251细胞共培养)的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。2.30min时IL-6(50 ***-1)组,共培养组及(共培养+AZD1480)组的胶质瘤细胞STAT3/P-STAT3蛋白的表达能力明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的胶质瘤细胞STAT3/P-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。***-6(50 ***-1)组,共培养组及(共培养+AZD1480)组的细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论:1)人脑微血管内皮细胞(HBMEC)及其分泌因子IL-6明显促进神经胶质瘤细胞(A172/U251)增殖水平及侵袭能力。2)人脑微血管内皮细胞(HBMEC)及其分泌因子白细胞介素-6能够促进神经胶质瘤细胞(A172/U251)P-STAT3蛋白的表达。3)神经胶质瘤细胞(A172/U251)及其分泌因子VEGF能够促进人脑微血管内皮细胞(HBMEC)分泌细胞因子白细胞介素-6。

关键词：神经胶质瘤细胞人脑微血管内皮细胞 STAT3/P-STAT3 增生侵袭

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内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中的表达

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细胞生物学杂志 2005年第2期27卷 191-195页

作者：王大鹏李波方文刚陈誉华宋今丹中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

为观察内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子的表达情况,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的人脑微血管内皮细胞,建立内质网应激模型,采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学的方法检测了细胞内血管内皮细胞生长因子的表达。结果... 详细信息

为观察内质网应激条件下血管内皮细胞生长因子的表达情况,用不同浓度的衣霉素处理体外培养的人脑微血管内皮细胞,建立内质网应激模型,采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学的方法检测了细胞内血管内皮细胞生长因子的表达。结果发现血管内皮细胞生长因子在人脑微血管内皮细胞中存在一定的表达;内质网应激可诱导血管内皮细胞生长因子表达升高,随着衣霉素浓度的增高,血管内皮细胞生长因子的表达逐渐增加,与mRNA水平相比,血管内皮细胞生长因子蛋白量的增加更明显。实验结果提示人脑微血管内皮细胞中存在血管内皮细胞生长因子自分泌,血管内皮细胞生长因子可能是内质网应激的靶基因。

关键词：内质网应激血管内皮细胞生长因子人脑微血管内皮细胞血脑屏障基因表达自分泌系统

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脑心通对人脑微血管内皮细胞的影响

脑心通对人脑微血管内皮细胞的影响

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作者：薛妍北京中医药大学

学位级别：硕士

背景动脉粥样硬化是严重危害人类健康的一种常见病。在我国,尤其是近年来,本病的发病率有明显增加的趋势,其治疗方法的研究也成为了当务之急。当内皮细胞损伤和灶状脱落,即导致血管壁通透性升高,血浆脂蛋白得以进入内膜,其后引起巨噬细... 详细信息

背景动脉粥样硬化是严重危害人类健康的一种常见病。在我国,尤其是近年来,本病的发病率有明显增加的趋势,其治疗方法的研究也成为了当务之急。当内皮细胞损伤和灶状脱落,即导致血管壁通透性升高,血浆脂蛋白得以进入内膜,其后引起巨噬细胞的清除反应和血管平滑肌细胞增生,并形成斑块,这是引起动脉粥样硬化的重要因素。脑心通对治疗心脑血管疾病具有较好的效果,但尚未见其应用在由氧化低密度脂蛋白损伤的内皮细胞修复实验上。目的从ET-1,6酮前列腺素的蛋白含量的角度,观察脑心通对人脑微血管内皮细胞的抗氧化应激作用,探讨脑心通修复被氧化低密度脂蛋白损伤的人脑微血管内皮细胞的作用机制。方法 1人脑微血管内皮细胞的培养：通过对人脑微血管内皮细胞的复苏、培养和传代的方法,建立起一个稳定的细胞实验平台。 2脑心通对正常培养的人脑微血管内皮细胞的细胞增殖实验：通过MTT法对细胞数量进行检测,观察正常培养下的人脑微血管内皮细胞经过不同浓度和时间的脑心通进行处理后,细胞的增殖情况,借以对安全有效并且无损伤的实验用药浓度进行确定。 3氧化低密度脂蛋白对人脑微血管内皮细胞的损伤实验：通过MTT法检测细胞数量的变化,观察由不同浓度氧化低密度脂蛋白经不同时间对人脑微血管内皮细胞的损伤情况,以确定造模浓度。 4脑心通对由氧化低密度脂蛋白损伤的人脑微血管内皮细胞的保护实验：通过MTT法检测细胞数量,应用2,3步实验结果得出的脑心通和氧化低密度脂蛋白浓度,测定脑心通高、中、低浓度药物组在不同时间段由氧化低密度脂蛋白损伤的人脑微血管内皮细胞的保护作用。 5脑心通对由氧化低密度脂蛋白损伤的人脑微血管内皮细胞分泌的ET-1、6酮前列腺素蛋白含量的影响：通过酶联免疫吸附法测定脑心通对上述两种蛋白含量的影响。结果 1复苏后的人脑微血管内皮细胞胞体肥厚、透明,呈菱形或多角形,核小而圆,细胞单层生长呈铺路石样,符合内皮细胞的特征。 2脑心通溶液作用24、48、72小时,浓度为187.5μg/ml以下,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,与正常对照组比较有统计学差异,P<0.05。 3氧化低密度脂蛋白在浓度为75、100、150μg/ml作用24、48、72小时后抑制细胞生长,与正常对照组比较有统计学差异,P<0.05。 4人脑微血管内皮细胞在氧化低密度脂蛋白作用24、48、72小时后,数量明显减少,与正常对照组比较有统计学差异,P<0.05。在加入氧化低密度脂蛋白的同时,加入脑心通溶液,作用24、48、72小时,93.75、46.88、23.44、11.72、5.86μg/ml这五组对氧化低密度脂蛋白损伤组比较有统计学差异,P<0.05。 5酶联免疫吸附法测定ET-1在48、72小时时,与正常组比较,损伤组ET-1含量显著升高,P<0.05。与损伤组比较,脑心通5.86、11.72、23.44μg/ml浓度组及普伐他汀组ET-1含量显著降低,P<0.05。酶联免疫吸附法测定6酮前列腺素在48、72小时时,与正常组比较,损伤组6酮前列腺素含量显著降低,P<0.05。与损伤组比较,脑心通5.86、11.72、23.44μg/ml浓度组及普伐他汀组6酮前列腺素含量显著升高,P<0.05。结论 1在一定剂量范围内,脑心通可促进正常培养下的人脑微血管内皮细胞的增殖。 2在一定浓度范围作用下,氧化低密度脂蛋白可损伤人脑微血管内皮细胞。 3脑心通对由氧化低密度脂蛋白损伤的人脑微血管内皮细胞ET-1和6酮前列腺素蛋白含量有影响,可以降低ET-1蛋白含量,提高6酮前列腺素蛋白含量,从而起到对人脑微血管内皮细胞的保护作用。通过这项研究,验证了脑心通在一定剂量范围内,对由氧化低密度脂蛋白损伤的体外培养的原代人脑微血管内皮细胞具有保护作用。其作用机制与促进细胞增殖、降低ET-1蛋白含量以及提高6酮前列腺素蛋白含量有关。

关键词：人脑微血管内皮细胞脑心通氧化低密度脂蛋白内皮素-16酮前列素

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二苯乙烯苷通过抑制NF-κB信号通路减轻TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

二苯乙烯苷通过抑制NF-κB信号通路减轻TNF-α诱导的人脑微血管内...

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作者：何邵波南华大学

学位级别：硕士

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)对TNF-α诱导人脑微血管内皮细胞(HBMECs)损伤的保护作用,并初步探讨NF-κB信号通路在其中发挥的作用机制。以期能为临床脑卒中的预防和治疗提供理论依... 详细信息

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)对TNF-α诱导人脑微血管内皮细胞(HBMECs)损伤的保护作用,并初步探讨NF-κB信号通路在其中发挥的作用机制。以期能为临床脑卒中的预防和治疗提供理论依据。方法:体外培养HBMECs,先用不同浓度的TSG直接处理细胞,通过CCK-8法检测TSG对其是否存在毒性作用。随后用浓度为2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L的TSG预处理HBMECs1h后用60 ng/ml TNF-α继续刺激细胞24h,通过CCK-8法检测细胞活力;Western-blot检测细胞中NF-κB p65、caspase-3、I-κB MMP-2、MMP-9以及iNOS的表达水平;ELISA法检测HBMECs分泌MMP-2以及MMP-9的水平。用不同浓度(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理1h后用60 ng/ml TNF-α继续刺激细胞24h,CCK-8法检测细胞活力。结果:1.细胞毒性实验结果显示:浓度为0～20.0μmol/L的TSG对HBMECs基本不存在细胞毒性(P>0.05)。***-α能够诱导HBMECs发生细胞损伤,而不同浓度TSG则能够显著抑制TNF-α诱导的细胞损伤(P<0.05),但由于TSG浓度为10.0μmol/L和20.0μmol/L时细胞活力无显著差异(P>0.05),因此选用10μmol/L为TSG的最佳处理浓度。***-blot结果显示,TNF-α能够诱导HBMECs中NF-κB p65、caspase-3表达显著上升(较空白对照组P<0.05),而当用浓度为10.0μmol/L的TSG预处理后,HBMECs中NF-κB p65、caspase-3的表达水平均出现明显下降(P<0.05)。***-κB抑制实验结果显示,当PDTC处理浓度为20μmol/L、40μmol/L时细胞活力无显著差异,而当处理浓度为80μmol/L、160μmol/L时细胞活力显著上升(P<0.05)。***结果显示,TNF-α能够诱导HBMECs中MMP-2以及MMP-9分泌增加,而用浓度为2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L的TSG预处理后,MMP-2以及MMP-9分泌水平均显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。***-blot结果显示浓度为2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L的TSG能够显著降低HBMECs中MMP-2、MMP-9以及iNOS的表达水平。结论:二苯乙烯苷能够通过抑制NF-κB信号通路减轻TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

关键词：二苯乙烯苷人脑微血管内皮细胞 TNF-α NF-κB

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大肠杆菌侵袭基因缺失突变株与人脑微血管内皮细胞的相互作用

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细胞生物学杂志 2005年第3期27卷 329-333页

作者：陈冬松方文刚陈誉华宋今丹辽宁大学生命科学系沈阳110036 中国医科大学发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

ibeA、ibeB、ibeC是与大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)密切相关的基因,但迄今各基因的功能并不清楚。应用侵袭分析和免疫荧光技术分析了各基因的缺失突变型及野生型大肠杆菌对HBMEC的侵袭、细胞骨架与细胞间紧密连接的影响。结... 详细信息

ibeA、ibeB、ibeC是与大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)密切相关的基因,但迄今各基因的功能并不清楚。应用侵袭分析和免疫荧光技术分析了各基因的缺失突变型及野生型大肠杆菌对HBMEC的侵袭、细胞骨架与细胞间紧密连接的影响。结果显示:野生型菌大肠杆菌侵袭率为3.46%,而ibeA、ibeB、ibeC缺失突变株分别为0.54%、0.82%和0.73%;ibeA缺失突变型与野生型大肠杆菌作用相似,可引起HBMEC的细胞骨架蛋白分布改变,在细胞膜处呈明显的聚集,而ibeB和ibeC缺失突变株并未引起细胞骨架的明显改变;野生型和ibeA缺失突变型大肠杆菌可引起紧密连接结构的明显改变,而ibeB和ibeC缺失突变株对紧密连接结构的影响不明显。这些观察到的结果提示:ibeB和ibeC基因产物可能在调节细胞骨架和影响细胞紧密连接中起重要作用,而ibeA基因产物在其中的作用较小。

关键词：大肠杆菌基因缺失突变株人脑微血管内皮细胞相互作用细胞骨架细胞间紧密连接新生儿细菌性脑膜炎

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基于CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞系

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中国中西医结合儿科学 2021年第4期13卷 286-291页

作者：李雯卉刘辉李泽烨韦佳祎陈誉华中国医科大学沈阳110032 中国医科大学生命科学学院发育细胞生物学教研室

目的利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型。方法针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型。方法针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转染人脑微血管内皮细胞,嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选成功转染细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测敲除靶基因的mRNA和蛋白,显微镜下观察细胞形态变化。结果构建了靶向Atg7的CRISPR/Cas9质粒;通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色检测,结果表明单克隆筛选获得了Atg7稳定敲除的人脑微血管内皮细胞系;光镜下观察未发现Atg7敲除后细胞形态出现明显改变。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Atg7基因稳定敲除的人脑微血管内皮细胞,将有利于脑血管的发育和血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究。

关键词：人脑微血管内皮细胞 Atg7基因 CRISPR/Cas9技术基因敲除

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circSEC24A靶向miR-152-3p调控ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

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立体定向和功能性神经外科杂志 2022年第2期35卷 100-106页

作者：黄财城陈媚丽黄国堡陈菲宁德师范学院附属宁德市医院神经内科宁德352100 宁德师范学院附属宁德市医院肿瘤外科宁德352100

目的探讨circSEC24A对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞HBMEC建立细胞氧化损伤模型,用脂质体转染法将si-NC、si-circSEC24A、miR-NC、miR-152-3p mi... 详细信息

目的探讨circSEC24A对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞HBMEC建立细胞氧化损伤模型,用脂质体转染法将si-NC、si-circSEC24A、miR-NC、miR-152-3p mimics、si-circSEC24A与anti-miR-NC、si-circSEC24A与anti-miR-152-3p分别转染至HBMEC后用ox-LDL处理24h;qRT-PCR法检测circSEC24A和miR-152-3p的表达量;利用试剂盒检测MDA的水平与SOD、CAT的活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circSEC24A与miR-152-3p的靶向调控作用。Western blot法检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达量。结果ox-LDL诱导的HBMEC中circSEC24A的表达量升高(P<0.05),MDA的水平、细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平升高(P<0.05),miR-152-3p的表达量降低(P<0.05),SOD、CAT的活性降低(P<0.05);转染si-circSEC24A或转染miR-152-3p mimics均可降低ox-LDL诱导的HBMEC中MDA的水平(P<0.05),并可降低细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平(P<0.05),而SOD、CAT的活性升高(P<0.05);circSEC24A靶向调控miR-152-3p的表达;共转染si-circSEC24A与anti-miR-152-3p后MDA的水平升高(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleavedcaspase9蛋白水平升高(P<0.05),而SOD、CAT的活性降低(P<0.05)。结论干扰circSEC24A表达可靶向调控miR-152-3p表达而抑制细胞氧化应激及凋亡从而减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

关键词：人脑微血管内皮细胞氧化型低密度脂蛋白 circSEC24A miR-152-3p 氧化应激凋亡

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基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响

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解剖学研究 2024年第4期46卷 330-336,342页

作者：张磊高倩李欣舒吴桥县人民医院河北沧州061800

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响。方法采用随机数字表法,将HBMEC分为对照组(Control组)、糖氧剥夺组(OGD组)、丁苯酞低、中、高剂量组(NBP-L、M、H组)和丁苯酞高剂量+p... 详细信息

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨丁苯酞对氧糖剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响。方法采用随机数字表法,将HBMEC分为对照组(Control组)、糖氧剥夺组(OGD组)、丁苯酞低、中、高剂量组(NBP-L、M、H组)和丁苯酞高剂量+pcDNA3-TLR4组(NBP-H+pcDNA3-TLR4组)。采用CCK-8、Transwell法和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;ELISA检测细胞中氧化应激指标(SOD、MDA)和炎症因子水平(IL-6、IL-8、TNF-α);蛋白质印迹法检测细胞中TLR4、MyD88、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达。结果和Control组相比,OGD组细胞存活率(41.26%±3.78%)、侵袭细胞数(95.36±7.81)、划痕愈合率(41.16%±3.21%)、细胞中SOD活性(8.71±0.69)均明显降低,细胞中MDA含量(65.42±5.69)、IL-6(89.41±7.52)、IL-8(83.91±7.86)、TNF-α(95.67±8.62)含量明显升高(P<0.05);和OGD组相比,NBP-L、M、H组细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、细胞中SOD活性均明显增加,细胞中MDA含量、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显降低,且呈剂量依赖(P<0.05);和NBP-H组相比,NBP-H+pcDNA3-TLR4组细胞存活率(46.34%±3.89%)、侵袭细胞数(101.43±8.02)、划痕愈合率(45.33%±3.46%)、细胞中SOD活性(9.40±0.73)均明显降低,细胞中MDA含量(59.16±5.43)、IL-6(80.89±7.41)、IL-8(80.51±7.46)、TNF-α含量(90.81±7.40)明显升高(P<0.05)。和Control组相比,OGD组细胞中TLR4(1.45±0.14)、MyD88蛋白(1.32±0.14)表达及p-NF-κB/NF-κB比值(1.18±0.12)均明显升高(P<0.05);和OGD组相比,NBP-L、M、H组细胞中TLR4、MyD88蛋白表达及p-NF-κB/NF-κB比值均含量明显降低,且呈剂量依赖(P<0.05);NBP-H+pcDNA3-TLR4组细胞中TLR4(1.39±0.13)、MyD88蛋白(1.26±0.13)表达及p-NF-κB/NF-κB比值(1.02±0.11)明显高于NBP-H组(P<0.05)。结论丁苯酞可改善氧糖剥夺诱导的HBMEC损伤,其作用机制可能和调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

关键词：丁苯酞氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路

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