检索结果-内蒙古大学图书馆

药学学报 2022年第6期57卷 1825-1831页

作者：耿晶李新颖中国医学科学院医药生物技术研究所北京100050 军事医学研究院毒物药物研究所毒理学与医学对策国家重点实验室北京100850

作为人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR,HER1,ERBB)家族重要成员,人表皮生长因子受体3(HER3,ERBB3)是PI3K/AKT信号通路中关键的激活因子。近期研究发现,HER3与多种类型肿瘤的发生发展以及对EGFR和人表皮生长因... 详细信息

作为人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR,HER1,ERBB)家族重要成员,人表皮生长因子受体3(HER3,ERBB3)是PI3K/AKT信号通路中关键的激活因子。近期研究发现,HER3与多种类型肿瘤的发生发展以及对EGFR和人表皮生长因子受体2(HER2,ERBB2)疗法的获得性耐药密切相关;但利用靶向HER3的中和抗体治疗肿瘤的效果并不理想,这很可能是由于靶向HER3的中和抗体并不能完全阻断异源二聚体形成。抗体-化学药物偶联物(antibody-drug conjugates,ADCs)可通过抗体特异性结合靶细胞,从而定向发挥高细胞毒性化学药物对癌细胞高度杀伤的效果,已被广泛应用于临床治疗中。本研究通过计算机辅助分子模拟技术对HER3与前期获得的抗体LmAb3的复合物结构进行模拟优化,利用距离几何学、计算机图形学技术预测了LmAb3中参与抗原结合的关键位点,利用点突变技术获得了新型抗HER3高亲和力抗体FD001。亲和力测定结果显示,FD001、LmAb3与HER3结合的解离常数KD值分别为1.48E-11与2.46E-10,表明FD001具有更强的靶向结合HER3的能力。通过赖氨酸偶联技术将FD001与美登素(DM1)偶联获得抗体药物偶联物FD001-DM1。细胞实验结果显示,FD001-DM1能够有效抑制HER3阳性HT-29结肠癌细胞增殖,半数有效浓度(median effective concentration,EC_(50))为32.23 nmol·L^(-1)。利用建立的小鼠肿瘤模型进行抗肿瘤活性评价,实验结果显示FD001-DM1治疗组肿瘤体积约为对照组的25%,且组内小鼠体重无明显下降,FD001-DM1具有良好的体内外抗肿瘤活性及安全性。本研究为探寻基于HER3的新型ADCs药物提供了有效的帮助。本研究中的小鼠按照国际实验室动物护理和使用准则进行使用和治疗,并得到了军事医学研究院军事认知与脑科学研究所动物伦理委员会的批准。

关键词：人表皮生长因子受体家族 HER3 单克隆抗体抗体-药物偶联物计算机辅助分子模建

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七方胃痛颗粒对人胃腺癌细胞的抑制作用及可能机制

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广西医学 2023年第6期45卷 673-679页

作者：黄旭平黄菊芳黎敏航杨爽罗伟生广西中医药大学附属瑞康医院消化内科广西南宁市530011 广西中医药大学研究生院广西南宁市530001

目的探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌细胞的抑制作用及可能机制。方法用生理盐水将七方胃痛颗粒稀释并配制成浓度为2 g/mL的七方胃痛颗粒混悬溶液,对20只SD大鼠连续灌胃5 d后获取七方胃痛颗粒含药血清。将AGS细胞分为空白对照组、顺铂组、10... 详细信息

目的探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌细胞的抑制作用及可能机制。方法用生理盐水将七方胃痛颗粒稀释并配制成浓度为2 g/mL的七方胃痛颗粒混悬溶液,对20只SD大鼠连续灌胃5 d后获取七方胃痛颗粒含药血清。将AGS细胞分为空白对照组、顺铂组、10%含药血清组、20%含药血清组、30%含药血清组,各组细胞给予相应药物干预48 h。采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,采用Western blot检测人表皮生长因子受体(HER)信号通路相关蛋白及其下游磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白的表达水平,采用实时荧光定量PCR检测上述蛋白对应基因的mRNA表达水平。结果与空白对照组相比,20%含药血清组AGS细胞的中晚期凋亡率升高,30%含药血清组AGS细胞的中晚期凋亡率及总凋亡率升高,4个给药组AGS细胞的G_(0)/G_(1)期比例提高,S期比例降低(均P<0.05)。与空白对照组比较,10%含药血清组AGS细胞的HER4蛋白表达水平下降,20%含药血清组AGS细胞的表皮生长因子受体(EGFR)、HER4蛋白表达水平均下降,顺铂组和30%含药血清组AGS细胞的EGFR、HER2、HER3、HER4、AKT、PI3K蛋白表达水平均下降(均P<0.05)。与空白对照组比较,4个给药组AGS细胞的EGFR、HER2、HER3、HER4、PI3K、AKT的mRNA表达水平下降(均P<0.05)。结论七方胃痛颗粒能促使AGS细胞发生中晚期凋亡,使细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期,其可能通过抑制HER信号通路及下游PI3K/AKT信号通路的激活,起到抑制AGS细胞增殖的作用。

关键词：胃腺癌七方胃痛颗粒细胞增殖细胞凋亡细胞周期人表皮生长因子受体家族磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶信号通路细胞实验

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99mTc标记靶向肽GE11对EGFR阳性非小细胞肺癌显像的实验研究

99mTc标记靶向肽GE11对EGFR阳性非小细胞肺癌显像的实验研究

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作者：焦红蕾河北医科大学

学位级别：博士

目的：肺癌仍然是全球最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内发病率和死亡率最高。近年来对肺癌的机制的了解以及相关的靶向治疗大大提高了肺癌患者的治疗效果并减轻了其系统毒性，完善其分子检测以明确分子突变表型后对于治疗方案制定的... 详细信息

目的：肺癌仍然是全球最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内发病率和死亡率最高。近年来对肺癌的机制的了解以及相关的靶向治疗大大提高了肺癌患者的治疗效果并减轻了其系统毒性，完善其分子检测以明确分子突变表型后对于治疗方案制定的重要性。人表皮生长因子受体家族（HumanEpidermalGrowthFactorReceptor，HER），参与调节重要的致瘤过程，包括增殖，凋亡，血管生成和侵袭，并且常在非小细胞肺癌的发生和发展中过度表达。GE11具有高EGFR靶向亲和力和适宜的分子量，比传统的大分子量抗体表现出更有利的药代动力学。本研究通过制备核素锝标记的EGFR的分子探针，对EGFR阳性非小细胞肺癌进行分子显像，探讨其标记方法及标记分子探针用于EGFR阳性非小细胞肺癌SPECT显像的价值。随后，为探索新型靶向策略的可能性，我们将EGFR和HER2靶向肽与化疗药物培美曲塞偶联，并将偶联后的两种螯合物进行99mTc标记，以评估新型螯合物的特性以及作为新型SPECT显像剂的可能性。　　方法：　　1.应用Fmoc/tBu多肽固相合成法合成EGFR靶向肽GE11，在EGFR肽向肽GE11的C端引入短肽螯合基团甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸（-Gly-Gly-Gly-Cys），其可形成N3S结构可与99mTc螯合，应用配体交换法进行99mTc放射性核素标记，制备EGFR靶向肽GE11分子探针（99mTc-peptide-GE11），并应用实时高效液相色谱法（RP-HPLC）测定标记分子探针的标记率。将标记分子探针分别在生理盐水及血清中孵育观察其放射化学纯度随时间变化以了解其体外稳定性。应用EGFR阳性及EGFR阴性两种非小细胞肺癌NSCLC细胞（A549：EGFR+，HER2+;H23：EGFR-,HER2-）进行锝标记分子探针的细胞摄取、内化、滞留及阻断实验，观察分子探针被EGFR阳性非小细胞肺癌细胞摄取特性及特异性。并在EGFR阳性非小细胞肺癌细胞中通过饱和结合试验评估EGFR靶向肽GE11分子探针与EGFR受体的亲和力。　　2.应用SPF级BALB/c-nude雌性裸鼠建立EGFR阳性A549和EGFR阴性H23的非小细胞肺癌荷瘤裸鼠肿瘤模型。将标记好的99mTc-EGFR靶向肽GE11通过荷瘤裸鼠尾静脉注射到EGFR阳性非小细胞肺癌A549细胞荷瘤裸鼠体内，留取30分钟的尿液进行RP-HPLC分析，评估99mTc-靶向肽GE11分子探针在荷瘤裸鼠体内的稳定性。随机选取具有可比性的EGFR阳性非小细胞肺癌A549和EGFR阴性H23非小细胞肺癌荷瘤裸鼠各5只。分别经尾静脉注射标记探针后的2、4小时，处死EGFR阳性荷瘤裸鼠，分离其重要器官，洗净、称量并使用γ计数仪测量其放射性计数计算每克组织中放射性计数与标准源的比值（%ID/g）值。同样的方式处理注射探针后2小时的EGFR阴性H23非小细胞肺癌荷瘤裸鼠，观察分子探针的体内分布。　　3.随机选取小鼠一般情况、肿瘤大小具有可比性的A549、H23荷瘤小鼠各5只。将标记好的99mTc靶向肽GE11通过荷瘤裸鼠尾静脉分别注射到A549和H23细胞荷瘤裸鼠体内，并在注射分子探针后的1、2和4小时进行荷瘤裸鼠SPECT显像。　　4.应用Fmoc/tBu多肽固相合成法合成两种HER家族受体靶向肽螯合物即靶向EGFR受体的GE11-培美曲塞及靶向HER2受体的ZHER2:V2-培美曲塞。应用配体交换法进行99mTc放射性核素标记，制备EGFR靶向肽GE11分子探针（99mTc-peptide-GE11），并应用实时高效液相色谱法（RP-HPLC）测定标记分子探针的标记率。将标记好的两种分子探针分别在生理盐水及血清中孵育测量其放射化学纯度随时间变化以了解其体外稳定性。应用两种非小细胞肺癌NSCLC细胞（A549：EGFR+，HER2+;H23：EGFR-,HER2-）进行标记探针的细胞摄取、内化及阻断实验，观察分子探针摄取特性及特异性。并在两种细胞的荷瘤裸鼠模型上进行SPECT显像以评估其作为显像剂的可行性。　　结果：　　1.通过ESI-MS及RP-HPLC分析，确定peptide-GE11成功合成，且合成物纯度为97.34%。对新合成的EGFR靶向结合肽进行99mTc标记，从而成功制备分子探针99mTc-peptide-GE11。经RP-HPLC分析结果显示，99mTc-peptide-GE11的放射峰呈单峰，平均放射峰保留时间约13.6min。　　2.99mTc-peptide-GE11的标记率为(98.40±1.00)%（n=3)，且标记分子探针在生理盐水及血清孵育4小时分别为96.79%和97.34%，8小时其放射化学纯度仍可达在90%以上。EGFR阳性非小细胞肺癌细胞A549对标记分子探针的摄取在各

关键词：非小细胞肺癌 SPECT显像表皮生长因子受体 99mTc 人表皮生长因子受体家族

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采用外周血进行肿瘤分子诊断的转化医学研究

采用外周血进行肿瘤分子诊断的转化医学研究

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作者：刘毅中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：博士

背景目的：恶性肿瘤是我国城市居民和农村居民死亡率最高的疾病，与其他常见病种所不同的是，同样的治疗方案在不同肿瘤患者之间的疗效差异巨大，造成这一现象的根本原因在于各个患者之间的分子分型存在很大的差异。因此，通过分子诊断... 详细信息

背景目的：恶性肿瘤是我国城市居民和农村居民死亡率最高的疾病，与其他常见病种所不同的是，同样的治疗方案在不同肿瘤患者之间的疗效差异巨大，造成这一现象的根本原因在于各个患者之间的分子分型存在很大的差异。因此，通过分子诊断来明确患者的基因表型，进而根据这种分子表型为患者制定个体化的治疗方案，这样一种观念越来越成为肿瘤治疗的共识。人表皮生长因子受体（HER）家族在肿瘤的发生发展过程中具有重要的作用，该家族成员的分子分型是肿瘤治疗所关注的焦点。但是，由于在临床上实时获取患者的肿瘤组织是不现实的，因此很难实现对患者基因表型的动态实时观测，这在某种程度上影响了患者个体化治疗方案的制定。相反，在肿瘤患者的外周血中有来自于肿瘤组织的核酸物质以及循环肿瘤细胞，这些材料的获取相对微创和方便，被认为是进行分子诊断的理想材料来源。但是，通过外周血进行分子诊断的流程还不够标准和完善，其临床相关性也有待于进一步的考察。本研究将以临床常见的肺癌和乳腺癌为主要的研究对象，通过外周血的核酸检测、循环肿瘤细胞的检测和分型来回答和解决临床治疗中的问题，为合理、有效开展肿瘤患者的个体化治疗提供有益的帮助。材料方法： 1、采用体液（胸水和血浆）检测NSCLC患者EGFR突变：从采用体液（胸水、血浆）进行常规EGFR测序检测的患者中选择适合的样本，采用敏感性更高的ARMS法对样本进行复检，结合患者使用TKI药物的临床治疗情况，分析并讨论外周血EGFR突变检测的可行性方案。 2、肺癌患者循环肿瘤细胞（CTC）的检测及分子分型：采用CellSearch系统分别检测NSCLC和SCLC患者外周血中CTC的数目。对于NSCLC患者，提取CTC的DNA，进行EGFR测序检测。对于SCLC患者，在CellSearch系统检测过程中，加入IGF-1R抗体，检测该抗体在CTC上的表达情况。 3、循环肿瘤细胞（CTC）检测对乳腺癌患者预后的判断：采用CellSearch系统检测转移性乳腺癌患者外周血中CTC的数目，根据CTC的数目进行Kaplan-Meier生存曲线分析，采用log-rank检验对曲线进行对比。分别采用单变量和多变量Cox回归分析来评价CTC的预后价值。 4、乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）分型检测预测靶向治疗疗效：采用CellSearch系统检测HER2阳性乳腺癌患者外周血中CTC的数目并检测其HER2表达状态，根据基线时CTC的水平以及CTC的HER2状态分别进行Kaplan-Meier生存曲线分析，采用log-rank检验对曲线进行对比。采用McNemar’s检验分析HER2状态在CTC和组织学结果之间的差别。研究结果： 1、采用体液（胸水和血浆）检测NSCLC患者EGFR突变：与直接测序法相比，ARMS法确认了16例突变阳性和另外23例突变阴性标本，另有11例之前阴性的标本（6例胸水，5例血浆）被重新判定为阳性，这11例患者均取得了较好的临床疗效（7PR,3SD,1PD）。突变阳性患者的ORR非常显著，对于胸水标本，直接测序法和ARMS法分别是81.3%和72.7%，对于血浆标本为80%（ARMS法）。值得注意的是，即使采用敏感性更高的ARMS法，突变阴性患者的ORR仍然较高，胸水标本为60%，而血浆标本为46.2%。 2、肺癌患者循环肿瘤细胞（CTC）的检测及分子分型：一线NSCLC患者CTC的检出率为44.6%（25/56），二线NSCLC患者CTC的检出率有所提高，为55.8%（24/53）。其中1例患者完成了EGFR的突变检测，结果显示为19外显子缺失。SCLC患者CTC的检出率高达81.3%（26/32），明显高于NSCLC。不管是何时检测，CTC上均未发现IGF-1R蛋白的表达。 3、循环肿瘤细胞（CTC）检测对乳腺癌患者预后的判断：基线完成有效检测294例，CTC的检出率为61%（179/294），CTC≥5的患者有115例（39%）。不论是基线时检测还是在3-4周、6-8周检测，CTC均可以较好的预测患者的PFS和OS。而在治疗过程中CTC数目的降低可以预示患者治疗的获益。单变量和多变量的Cox回归分析均显示，CTC数值对于PFS和OS来说都是独立的预后因素。 4、乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）分型检测预测靶向治疗疗效： HER2阳性MBC患者的CTC检出率为45%（27/60），以1个CTC为界对患者进行分组，两组患者之间中位PFS存在显著性差异（2.5比7.5个月, P=0.0125）。我们提出了一种CTC HER2阳性的标准，即大于30%的CTC过表达HER2（

关键词：外周血肿瘤分子诊断转化医学循环肿瘤细胞人表皮生长因子受体家族

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