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中国医学科学院学报 2008年第3期30卷 296-300页

作者：刘苏俊张彩萍周武庆陈敏林麟中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤病研究室南京210042

目的研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱。方法培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞... 详细信息

目的研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱。方法培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞和NHEK表面Toll样受体2和4蛋白的表达。结果HaCaT细胞、NHEK以及分离的表皮均有全部10种Toll样受体mRNA表达,其表达强弱各不相同。流式细胞仪检测显示HaCaT细胞和NHEK表面有Toll样受体4蛋白的表达,而Toll样受体2无明显表达。结论人表皮角质形成细胞中有Toll样受体1～10mRNA的组成性表达。

关键词：人表皮角质形成细胞 Toll样受体表达

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人表皮角质形成细胞Toll样受体的表达以及Toll样受体2功能的初步研究

人表皮角质形成细胞Toll样受体的表达以及Toll样受体2功能的初步...

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作者：刘苏俊中国协和医科大学

学位级别：博士

Toll样受体(TLR)是近年来发现的一组新的模式识别受体,在天然免疫和获得性免疫中均有重要作用。皮肤角质形成细胞(KC)是机体与外界环境接触的首要屏障细胞,易受各种微生物的侵袭,TLR在其中发挥重要作用。TLR在很多炎症性和感染性皮肤病... 详细信息

Toll样受体(TLR)是近年来发现的一组新的模式识别受体,在天然免疫和获得性免疫中均有重要作用。皮肤角质形成细胞(KC)是机体与外界环境接触的首要屏障细胞,易受各种微生物的侵袭,TLR在其中发挥重要作用。TLR在很多炎症性和感染性皮肤病中有一定作用。到目前为止,KC中TLR的表达仍未明确,KC的TLR调节和功能的研究不多。本课题拟检测KC的TLR表达谱,研究金黄色葡萄球菌肽聚糖(PGN)对KC部分TLR表达的影响,以及对KC分泌趋化因子的影响及TLR在其中的作用,为今后研究TLR在某些感染性和炎症性皮肤病中作用奠定基础。全文共分三部分。第一部分人表皮角质形成细胞Toll样受体表达的研究目的研究人表皮KC中TLR的表达谱。方法培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK)以及用分散酶分离表皮,分别用RT-PCR检测10种TLRmRNA表达。流式细胞仪检测HaCaT细胞和NHEK表面TLR2和TLR4蛋白的表达。结果HaCaT细胞、NHEK以及分离的表皮均有全部10种TLRmRNA表达,其表达强弱各不相同。流式细胞术检测显示HaCaT细胞和NHEK表面均有TLR4蛋白的表达,而TLR2无明显表达。结论人表皮KC有TLR1～10mRNA的组成性表达,细胞表面有TLR4蛋白的表达。第二部分金黄色葡萄球菌肽聚糖对HaCaT细胞Toll样受体2和4表达的影响目的研究病原体成分对HaCaT细胞TLR2和TLR4表达的调节。方法不同浓度的金黄色葡萄球菌胞壁成分PGN与HaCaT细胞共培养不同时间后,RT-PCR法检测TLR2和TLR4mRNA表达变化。流式细胞术检测HaCaT细胞表面TLR2和TLR4蛋白的表达。结果与30μg/ml PGN共培养6小时后,HaCaT细胞TLR2和TLR4mRNA表达明显升高。与100μg/ml PGN共培养24小时后,HaCaT细胞表面TLR2和TLR4蛋白表达量最高。结论PGN可以上调HaCaT细胞TLR2和TLR4的表达。第三部分金黄色葡萄球菌肽聚糖对正常人表皮角质形成细胞分泌趋化因子的影响及Toll样受体2的作用目的研究金黄色葡萄球菌PGN对NHEK分泌白介素—8(IL-8)、调节激活和正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)以及巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)的影响以及TLR2在其中的作用。方法不同浓度的金黄色葡萄球菌PGN与NHEK共培养不同时间后,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-8、RANTES以及MDC的浓度。预先加用功能性TLR2单克隆抗体处理培养细胞,再以100μg/ml PGN与NHEK共培养12小时,检测上述趋化因子的浓度。结果NHEK可以自发的分泌IL-8和RANTES。随共培养的PGN浓度的升高,培养时间的延长,IL-8分泌量逐渐增多,RANTES分泌量逐渐降低。TLR2单克隆抗体可以明显抑制PGN诱导的IL-8分泌,对RANTES分泌量无明显影响。未检测到NHEK自发或PGN刺激作用下产生MDC。结论PGN很可能通过激活TLR2途径诱导NHEK分泌IL-8。PGN能够抑制NHEK产生RANTES。

关键词： PGN TLR HaCaT 细胞表达白细胞介素白介素人表皮角质形成细胞 RANTES 金黄色葡萄球菌样受体初步研究

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小分子化合物促进人表皮角质形成细胞重编程再生汗腺的实验研究

小分子化合物促进人表皮角质形成细胞重编程再生汗腺的实验研究

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作者：项江兵重庆大学

学位级别：硕士

汗腺再生对皮肤创伤的功能性修复具有重要意义。最近的研究表明,人表皮角质形成细胞(HEK)可以通过特定因子的异位表达重编程为汗腺样细胞(iSwGCs),但其临床应用会受到相关基因操作的限制。基于此,本研究拟通过化学重编程的方式将人表皮... 详细信息

汗腺再生对皮肤创伤的功能性修复具有重要意义。最近的研究表明,人表皮角质形成细胞(HEK)可以通过特定因子的异位表达重编程为汗腺样细胞(iSwGCs),但其临床应用会受到相关基因操作的限制。基于此,本研究拟通过化学重编程的方式将人表皮角质形成细胞重编程为汗腺样细胞。同时考虑到汗腺样细胞再生的能力有限,我们又进一步将HEK重编程为具有多潜能的肌上皮细胞(iMEC)。主要研究内容及结论如下:1.使用小分子将HEK重编程为iSwGCs本研究确定了小分子组合CHIR99021、BMP4蛋白、ISO、Parnate和EDA蛋白能促进HEK重编程为iSwGCs。通过形态学观察、RT-q PCR、免疫荧光和流式细胞术分析来表征iSwGCs的形态、表型和转化效率。结果证明iSwGCs具有类似于原代汗腺细胞的形态和分子表型,并且由导管细胞和腔细胞两群细胞组成。***的功能特性表征通过钙离子内流实验对加入乙酰胆碱进行刺激后的HEK、分化成熟的iSwGCs和原代汗腺细胞进行钙活性分析,实验结果证明成熟的iSwGCs具有与原代汗腺细胞相同的生理特征,同时iSwGCs能够在体外三维环境中形成汗腺类器官。***在体内促进汗腺再生本研究建立了BALB/c Nude小鼠脚掌烫伤模型,然后将iSwGCs移植到烫伤部位观察汗腺再生情况。移植一个月后,通过碘淀粉发汗实验、HE染色、组织免疫荧光等一系列分析证明iSwGCs能够在体内促进功能性汗腺再生。4.使用小分子将HEK重编程为iMEC本研究确定了小分子组合EGF、BMP4蛋白、SB431542、Parnate、CPT-α和VPA能促进HEK重编程为iMEC,通过形态学观察和免疫荧光分析证明了iMEC具有肌上皮细胞的形态和分子表型,并且小分子体系在人永生化表皮细胞Ha Ca T中同样适用。***的功能特性表征通过钙离子内流实验、凝胶收缩实验、类器官形成实验证明iMEC能够对神经递质激动剂作出反应,具有收缩特性,并且能够在体外形成类器官。在特定条件下,iMEC能够在体外分化为导管细胞和腔细胞。***在体内促进汗腺再生本研究建立了BALB/c Nude小鼠脚掌烫伤模型,然后将iMEC移植到烫伤部位、乳腺部和肩部观察汗腺再生情况。移植一个月后,碘淀粉发汗实验、HE染色、组织免疫荧光等实验结果证明iMEC只能在体内促进小鼠脚掌部的汗腺再生。结论:本研究开发了一种非病毒策略,使用小分子促进了人表皮角质形成细胞重编程为具有再生能力的汗腺样细胞和肌上皮细胞。小分子定向汗腺重编程为产生可用于汗腺再生的高质量、临床级细胞提供了一种非转基因和可控的策略,可用于治疗皮肤大量缺损的患者。

关键词：人表皮角质形成细胞汗腺再生肌上皮细胞细胞重编程

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异甘草酸镁对人外周血白细胞趋化功能、人表皮角质形成细胞IL-8和ICAM-1表达的影响

异甘草酸镁对人外周血白细胞趋化功能、人表皮角质形成细胞IL-8和...

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中国药学会应用药理专业委员会第三届学术会议、中国药理学会制药工业专业委员会第十三届学术会议暨2008生物医药学术论坛

作者：李新宇唐美育郑家润中国医学科学院皮肤病研究所

异甘草酸镁是第四代甘草酸制剂,具有更强的抗炎、保护肝细胞膜、抗生物氧化及改善肝功能的作用,是我国研制的国家一类抗肝炎新药。临床上有利用甘草酸制剂治疗皮肤病的相关经验,如用复方甘草酸铵(甘草甜素)注射液静脉滴注治疗湿疹,疗效... 详细信息

异甘草酸镁是第四代甘草酸制剂,具有更强的抗炎、保护肝细胞膜、抗生物氧化及改善肝功能的作用,是我国研制的国家一类抗肝炎新药。临床上有利用甘草酸制剂治疗皮肤病的相关经验,如用复方甘草酸铵(甘草甜素)注射液静脉滴注治疗湿疹,疗效优于对照组。口服

关键词：异甘草酸镁外周血白细胞皮肤病人表皮角质形成细胞细胞趋化人外周血 ICAM-1

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盐酸博宁霉素对人表皮角质形成细胞、人子宫颈鳞状上皮癌细胞和人表皮癌细胞增殖的影响

盐酸博宁霉素对人表皮角质形成细胞、人子宫颈鳞状上皮癌细胞和人...

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中国药学会应用药理专业委员会第三届学术会议、中国药理学会制药工业专业委员会第十三届学术会议暨2008生物医药学术论坛

作者：李新宇高纪伟徐兰芳郑家润陈汝贤许鸿章中国医学科学院医药生物技术研究所中国医学科学院皮肤病研究所

博宁霉素是从争光霉素素复合物中分离得到的一个新化合物,而争光霉素素的主要组分即平阳霉素已被确认与博来霉素A3相同,在临床上已广泛用作抗肿瘤药。尖锐湿疣系人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病。有报导,平阳霉素皮损内注射治疗... 详细信息

博宁霉素是从争光霉素素复合物中分离得到的一个新化合物,而争光霉素素的主要组分即平阳霉素已被确认与博来霉素A3相同,在临床上已广泛用作抗肿瘤药。尖锐湿疣系人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病。有报导,平阳霉素皮损内注射治疗尖锐湿疣取得

关键词：博宁霉素盐酸平阳霉素抑制作用化合物体外培养子宫颈鳞状上皮癌细胞增殖率人表皮角质形成细胞癌细胞增殖

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中波紫外线辐射人表皮角质形成细胞的核因子κB转录活性研究

中波紫外线辐射人表皮角质形成细胞的核因子κB转录活性研究

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中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议

作者：王平宋秀祖许爱娥毕志刚崔毓桂杭州市第三医院皮肤科杭州市第三医院皮肤科杭州市第三医院皮肤科南京医科大学第一附属医院皮肤科南京医科大学第一附属医院皮肤科

目的中波紫外线(UVB)是皮肤癌发生的主要原因,研究UVB辐射损伤角质形成细胞的分子机理,对阐明皮肤癌的发生机制具有重要意义。对表皮角质形成细胞而言,核因子κB(NF-κB)不仅对保持正常表皮的动态平衡具有重要意义,而且也是对UVB的应激... 详细信息

目的中波紫外线(UVB)是皮肤癌发生的主要原因,研究UVB辐射损伤角质形成细胞的分子机理,对阐明皮肤癌的发生机制具有重要意义。对表皮角质形成细胞而言,核因子κB(NF-κB)不仅对保持正常表皮的动态平衡具有重要意义,而且也是对UVB的应激性保护反应(诱导凋亡),以及皮肤癌发生(促进恶性转化)的重要分子。本研究通过免疫印迹、电泳迁移率变更分析方法(EMSA),检测不同剂量UVB辐射角质形成细胞后,NF-κB的时相性变化和转录情况,并通过检测NF-κB抑制物I κ B-a的表达情况,探究

关键词：人表皮角质形成细胞皮肤癌 UVB 中波紫外线辐射核因子活性研究

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辣椒素受体介导热休克诱导人表皮角质形成细胞金属蛋白酶1的表达

辣椒素受体介导热休克诱导人表皮角质形成细胞金属蛋白酶1的表达

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2006中国中西医结合皮肤性病学术会议

作者：李文海 Young Mee LEE Jee Youn KIM Seokwon KANG Jin Ho CHUNG 北京大学人民医院皮肤科 Department of Dermatology Laboratory of Cutaneous Aging Research Clinical Research Institute Seoul National University Hospital Seoul Korea Department of Dermatology Laboratory of Cutaneous Aging Research Clinical Research Institute Seoul National University Hospital Seoul Korea Department of Dermatology Laboratory of Cutaneous Aging Research Clinical Research Institute Seoul National University Hospital Seoul Korea Department of Dermatology Laboratory of Cutaneous Aging Research Clinical Research Institute Seoul National University Hospital Seoul Korea

背景:金属蛋白酶1(MMP-1)是炎症反应中降解胶原的主要内肽酶。近来发现辣椒素受体(TR- PV1,一种非特异性离子通道)存在于人类角质形成细胞上,表皮的辣椒素受体激活后可以释放炎症前介质,然而在生理活动和病理状态下皮肤辣椒素受体的调... 详细信息

背景:金属蛋白酶1(MMP-1)是炎症反应中降解胶原的主要内肽酶。近来发现辣椒素受体(TR- PV1,一种非特异性离子通道)存在于人类角质形成细胞上,表皮的辣椒素受体激活后可以释放炎症前介质,然而在生理活动和病理状态下皮肤辣椒素受体的调节功能所知甚少。

关键词：热休克 MMP 人表皮角质形成细胞金属蛋白酶受体介导

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氨基糖甙类体外抑制人表皮角质形成细胞tRNA的生物合成过程

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国外医学（皮肤性病学分册） 2004年第4期30卷 208-208页

作者：冯华

病原体对抗生素逐步增长的耐药现象以及缺乏强效的抗菌药成为感染性疾病治疗中的主要问题，因而有必要进一步了解抗生素在分子水平上的作用机制。以往的证据表明RNA是抗细菌和抗病毒药作用的关键靶点，而氨基糖甙类抗生素除了可以抑制... 详细信息

病原体对抗生素逐步增长的耐药现象以及缺乏强效的抗菌药成为感染性疾病治疗中的主要问题，因而有必要进一步了解抗生素在分子水平上的作用机制。以往的证据表明RNA是抗细菌和抗病毒药作用的关键靶点，而氨基糖甙类抗生素除了可以抑制病原体的核糖体功能，抑制蛋白质合成，还有报道可干扰各种RNA分子并在体外能抑制人角质形成细胞的增殖。

关键词：氨基糖甙类人表皮角质形成细胞 tRNA 生物合成抗生素

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基于Notch信号通路探讨银屑平丸含药血清对TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞相关蛋白及炎症因子的影响

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中药新药与临床药理 2023年第9期34卷 1171-1178页

作者：沈乐乐李淼彭子怡刘婉虹舒琪席建元湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410000

目的基于调节Notch信号通路探讨银屑平丸含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人表皮角质形成细胞相关蛋白及炎症因子的影响。方法根据中药血清药理学方法制备银屑平丸含药血清、阿维A含药血清,将血清分为5%、10%、20%3个浓度对人表... 详细信息

目的基于调节Notch信号通路探讨银屑平丸含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人表皮角质形成细胞相关蛋白及炎症因子的影响。方法根据中药血清药理学方法制备银屑平丸含药血清、阿维A含药血清,将血清分为5%、10%、20%3个浓度对人表皮角质形成细胞进行干预,采用CCK-8试剂筛选含药血清最佳作用浓度;建立TNF-α诱导的银屑病细胞损伤模型,设置空白组、模型组、银屑平丸含药血清组、阿维A组、模型+γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组、银屑平丸含药血清+DAPT组。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)水平,采用Real-timePCR法检测Notch信号通路Notch1,Jagged-1表达,免疫荧光法检测各组细胞内皮蛋白(Involucrin)表达水平。结果TNF-α最佳作用浓度为10 ng·mL^(-1),银屑平丸含药血清最佳作用浓度为20%。与空白组比较,模型组可使各组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平升高(均P<0.0001),Notch1、Jagged-1表达上调(均P<0.0001),并使细胞Involucrin荧光表达增强(P<0.0001);与模型组比较,银屑平丸含药血清组可使细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.05,P<0.01),使Notch信号通路Notch1、Jagged-1表达下调(均P<0.0001),并使细胞Involucrin荧光表达减弱(P<0.05);与银屑平丸含药血清组比较,银屑平丸含药血清+DAPT组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.0001,P<0.05,P<0.01),Notch1、Jagged-1表达下调(均P<0.0001),细胞Involucrin荧光表达减弱(P<0.05)。结论银屑平丸含药血清可抑制TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞增殖,降低炎症因子表达水平及人表皮角质形成细胞相关蛋白表达,其机制可能与调节Notch信号通路有关。

关键词：银屑病银屑平丸 Notch信号通路人表皮角质形成细胞细胞增殖炎症因子

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基于NLRP3/Caspase-1通路探讨银屑平丸含药血清对TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞焦亡的影响

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湖南中医药大学学报 2024年第10期44卷 1787-1793页

作者：沈乐乐陈邦弟席建元湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的探讨银屑平丸含药血清通过调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱天蛋白酶-1(cysteine aspartate-specific proteinase-1,Caspase-1)信号通路改善肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人表皮角质形成细胞焦亡的作用机制。方法制备银屑平丸含药血清、阿维A含药血清及空白血清,采用CCK-8试剂检测空白血清对人表皮角质形成细胞存活率的影响;体外常规培养人表皮角质形成细胞,使用TNF-α诱导人表皮角质形成细胞建立体外银屑病损伤模型,设置正常组、模型组、空白血清组、银屑平丸含药血清组、阿维A含药血清组;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;RT-PCR检测各组细胞NLRP3,功能蛋白D(gasdermin D,GSDMD)、Caspase-1 mRNA表达;Western blot法检测各组细胞NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白的表达。结果与正常组比较,空白血清干预后细胞存活率无明显改变。与正常组比较,模型组和空白血清组细胞上清中IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.01),且NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,银屑平丸含药血清组及阿维A含药血清组细胞上清IL-1β、IL-18蛋白及mRNA水平明显下降(P<0.01),NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白及mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论银屑平丸含药血清可下调TNF-α诱导的人表皮角质形成细胞NLRP3、GSDMD、Caspase-1蛋白及mRNA表达,降低炎症因子表达水平,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1通路有关。

关键词：银屑病银屑平丸含药血清 NLRP3/Caspase-1通路人表皮角质形成细胞细胞焦亡

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