检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：齐华张娟丽 450001 河南省郑州市高新区翠竹街1号109号

本发明涉及生物技术领域，具体公开人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株、人雌激素受体α亚型单克隆抗体、制备方法、应用。本发明人雌激素受体α亚型杂交瘤细胞株经过人乳腺癌ERα阳性组织蜡块免疫组化验证筛选获得，分泌抗体能... 详细信息

标准号: CN106399258A

本发明涉及生物技术领域，具体公开人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株、人雌激素受体α亚型单克隆抗体、制备方法、应用。本发明人雌激素受体α亚型杂交瘤细胞株经过人乳腺癌ERα阳性组织蜡块免疫组化验证筛选获得，分泌抗体能力强，分泌的抗体效价高、特异性强。本发明单克隆抗体，可通过免疫组化方法，应用于评价乳腺癌等病变组织中雌激素受体α亚型的表达情况，对于后续的临床检验分析提供指导。同时，本抗体可制备用于检测雌激素受体α亚型的免疫检测工具。本发明抗体可与人雌激素受体α亚型蛋白反应，与人雌激素受体β亚型及细胞内其它蛋白无交叉，显著提高了人雌激素受体α亚型免疫检测的特异性、准确性与可靠性。

关键词：人雌激素受体雌激素受体α 单克隆抗体亚型杂交瘤细胞株免疫检测免疫组化抗体分泌制备蛋白生物技术领域病变组织抗体能力抗体效价临床检验人乳腺癌特异性强阳性组织乳腺癌蜡块应用验证筛选细胞检测分析

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一种乳腺细胞免疫化学染色试剂盒及检测方法

一种乳腺细胞免疫化学染色试剂盒及检测方法

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作者：黄小军朱峻 518072 广东省深圳市南山区桃源街道龙珠三路南山睿园9栋4楼401

本发明公开了一种乳腺细胞免疫化学染色试剂盒及检测方法，所述检测方法包括以下步骤：步骤1.染色液配置；染色剂1：PBS液，第一抗体为兔抗人雌激素受体、兔抗人孕激素受体、均为细胞核着色，兔抗人CerbB‑2单克隆抗体，为细胞膜着色，... 详细信息

标准号: CN118091127A

本发明公开了一种乳腺细胞免疫化学染色试剂盒及检测方法，所述检测方法包括以下步骤：步骤1.染色液配置；染色剂1：PBS液，第一抗体为兔抗人雌激素受体、兔抗人孕激素受体、均为细胞核着色，兔抗人CerbB‑2单克隆抗体，为细胞膜着色，第二抗体为快捷免疫细化Elivision试剂盒，DAB试剂盒；染色剂2：氮基三乙酸、葡萄糖酸、山梨糖醇、氨基醇、多聚甲醛、KC1及缓冲液；步骤2.组织切片：取受检者乳腺标本，经浓度为10％的中性甲醛进行固定，取病变组织，经酒精梯度脱水。本发明减少血清中的干扰物质产生假阳性影响，提高检测的准确性和特异性，提高检测灵敏度检测准确性高、假阴性率低，染色方法操作简便、染色结果清晰可见、易判读。

关键词：试剂盒兔抗检测染色剂着色细胞膜免疫化学染色人雌激素受体细胞核单克隆抗体氮基三乙酸检测灵敏度孕激素受体病变组织第二抗体多聚甲醛干扰物质葡萄糖酸染色结果乳腺细胞山梨糖醇梯度脱水组织切片氨基醇缓冲液假阳性假阴性染色液乳腺血清染色抗体判读细化甲醛酒精标本配置

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GFP-hERα重组质粒的构建及蛋白表达和细胞内定位的研究

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解剖科学进展 2011年第2期17卷 140-143页

作者：刘芙蓉李彦姝张红艳李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hERα真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以pcDNA3.1-flag-hERα重组质粒(*** M馈赠)为模板,PCR扩增hERα全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体。将构建的重组质粒测序并转染到乳腺癌细胞MCF-7中,提取细胞... 详细信息

目的构建hERα真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以pcDNA3.1-flag-hERα重组质粒(*** M馈赠)为模板,PCR扩增hERα全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体。将构建的重组质粒测序并转染到乳腺癌细胞MCF-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-hERα在MCF-7细胞内定位。结果 hERα全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1800bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为95KD,pEGFP-hERα在乳腺癌细胞MCF-7细胞内定位于细胞核内。结论成功的构建了hERα全长基因真核表达载体pEGFP-hERα,融合蛋白定位于乳腺癌细胞核内。

关键词：人雌激素受体乳腺癌 Western blot

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食品中潜在环境内分泌干扰物的受体通道研究

食品中潜在环境内分泌干扰物的受体通道研究

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作者：焦健河南工业大学

学位级别：硕士

本文旨在通过运用分子对接技术初步筛选可能与受体hERα、hERRγ、hVDR结合的食品中广泛使用和存在的潜在EDCs,再构建hERα、hERRγ、hVDR三种重组质粒,原核表达hERα、hERRγ、hVDR这三种受体蛋白,建立探索食品中潜在EDCs与重组受体蛋... 详细信息

本文旨在通过运用分子对接技术初步筛选可能与受体hERα、hERRγ、hVDR结合的食品中广泛使用和存在的潜在EDCs,再构建hERα、hERRγ、hVDR三种重组质粒,原核表达hERα、hERRγ、hVDR这三种受体蛋白,建立探索食品中潜在EDCs与重组受体蛋白结合活力的磷酸对硝基苯酚法,探索可能通过hERα、hERRγ、hVDR受体通道而对人体产生危害的物质。通过从H295R细胞克隆hERRγ基因,从Caco-2细胞克隆hVDR基因,分别构建重组质粒pGEX-4T -1-hERRγ、pGEX-4T-1-hVDR。重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α,经过蓝白斑筛选、酶切验证、测序等证明hERRα、hVDR已成功克隆和转化。原核表达并纯化了GST-hERRγ、GST-hVDR融合蛋白,同时表达并纯化了实验室已构建的重组菌pGEX-4T -1-hERα、pET28-TIF2-BAP的GST-hERα、TIF2-BAP融合蛋白。建立了hERα结合活性的磷酸对硝基苯酚法、hERRγ结合活性的磷酸对硝基苯酚法、hVDR结合活性的磷酸对硝基苯酚法。运用分子对接技术,初步筛选出可能具有hERα、hERRγ、hVDR结合活性的六大类食品中广泛存在的潜在EDCs,分别为:对羟基苯甲酸甲酯类、水杨酸酯类、邻苯二甲酸酯类、双酚A及其类似物、异黄酮类、重金属类。采用重组受体蛋白结合活性的磷酸对硝基苯酚法,测定了对羟基苯甲酸酯类、水杨酸酯类、邻苯二甲酸酯类、双酚A及其类似物、异黄酮类、重金属类这六大类物质与受体hERα、hERRγ、hVDR的结合活性,并进行了比较分析。结果表明,对羟基苯甲酸酯类物质与hERα、hERRγ均有结合活性,水杨酸酯类物质除水杨酸苯酯与hERRγ几乎没有结合活性外,其他水杨酸酯类物质都与hERα、hERRγ有结合活性。邻苯二甲酸类物质与hERα均有结合活力,但是仅邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二乙酯与hERRγ有微弱活性,EC50分别为2.77×10-4mol/L、3.07×10-3mol/L。双酚A及其类似物中,4,4-联苯二酚与hERα具有很强的结合活性,EC50达到6.80×10-6mol/L,四溴双酚A仅与hERRα具有结合活性,EC50达到3.11×10-5mol/L。异黄酮类、重金属类物质与hERα、hERRγ均有一定的活性。hVDR受体仅与重金属具有活性。运用分子对接模拟技术,对采用重组受体蛋白结合活性的磷酸对硝基苯酚法测定出的典型EDCs进行进一步打分验证,结果表明,分子对接模拟结果与基于重组受体蛋白结合活性的磷酸对硝基苯酚法测定出的结果一致。

关键词：人雌激素受体人雌激素相关受体人维生素D受体原核表达环境内分泌干扰物结合活性

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酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母

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生态毒理学报 2008年第1期3卷 21-26页

作者：李剑马梅饶凯锋王子健中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085

应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类/抗雌激素化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ER LBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的... 详细信息

应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类/抗雌激素化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ER LBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGAD424-GRIP1和pGAD424-SRC1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,分别构建两种ER双杂交酵母ER+GRIP1和ER+SRC1.考察双杂交酵母与不同激素:17β-雌二醇(E2)、二氢睾酮(DHT)、孕酮(PG)以及三碘甲状腺原氨酸(T3)的结合情况,并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(4-OHT)与酵母的相互作用.结果表明:ER+GRIP1和ER+SRC1酵母均能够专一性的和E2结合,并存在显著的剂量-效应关系,E2对ER+GRIP1和ER+SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7.3×10-11mol·L-1和1.5×10-10mol·L-1,其中ER+GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER+SRC1酵母细胞.4-OHT能够抑制E2诱导ER+GRIP1酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,IC50值为1.0×10-7mol·L-1.表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.

关键词：酵母双杂交人雌激素受体重组基因酵母类抗雌激素活性

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16α取代雌二醇衍生物的三维定量构效关系和分子对接研究

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计算机与应用化学 2008年第12期25卷 1511-1516页

作者：钱力沈勇王亚学郑康成中山大学化学与化学工程学院广东广州510275

采用比较分子力场方法(CoMFA)及分子对接方法对一系列雌二醇衍生物的3D-QSAR及其与受体作用方式进行研究,建立了3D-QSAR的CoMFA模型,获得了化合物的相对亲合力RBA(Relative Binding Affinity)与静电场及立体场分布之间的关系;CoMFA模型... 详细信息

采用比较分子力场方法(CoMFA)及分子对接方法对一系列雌二醇衍生物的3D-QSAR及其与受体作用方式进行研究,建立了3D-QSAR的CoMFA模型,获得了化合物的相对亲合力RBA(Relative Binding Affinity)与静电场及立体场分布之间的关系;CoMFA模型的统计学参数为:q^2=0.667,r^2=0.939,SD=0.280,F=49.033,立体场与静电场的贡献分别为56.8%和41.6%。相对亲合力小的化合物一般带有较大的取代基,其对接能量得分较低;相对亲合力大的化合物一般带有较小的取代基,其对接能量得分较高。化合物的对接能量得分和相对亲合力之间有良好的线性关系,其线性相关系数R为0.890。活性口袋周围的环境也与3D-QSAR的立体场分布相匹配。对接结果还显示这类化合物和雌激素的结合主要是通过氢键作用来实现,即3-OH与R394上的氨基以及17-OH与受体残基H524咪唑环上的氮形成的氢键。

关键词：雌二醇衍生物人雌激素受体 3D—QSAR 分子对接

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DDT类农药的拟雌激素活性研究

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环境与健康杂志 2007年第9期24卷 664-669页

作者：陈秀云祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金扬州大学医学院预防医学教研室江苏扬州225001 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州250009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

目的研究DDT类农药(p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE)的拟雌激素活性。方法用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W303-1A-hER-ERE-LacZ)评价DDT类农药的拟雌激素活性。将终浓度为10-9～10-15mol/L的17β-雌二醇、终浓度为1... 详细信息

目的研究DDT类农药(p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE)的拟雌激素活性。方法用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W303-1A-hER-ERE-LacZ)评价DDT类农药的拟雌激素活性。将终浓度为10-9～10-15mol/L的17β-雌二醇、终浓度为10-3～10-9mol/L的p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE加入酵母细胞培养液,作用4h,通过定量测定β-半乳糖苷酶的活力表达DDT类农药的雌激素作用强度。结果DDT类农药能像配体一样与hER结合,发挥雌激素效应,并具有剂量-效应关系;o,p′-DDT雌激素活性较强,EC50为5.30×10-7mol/L,p,p′-DDE雌激素活性较弱,EC50为9.28×10-5mol/L,同分异构体间(o,p′-DDT、p,p′-DDT)雌激素活性具有协同效应,联合效应相加指数(AI)为1.5;同系物间(p,p′-DDD、p,p′-DDE)雌激素活性具有拮抗效应,AI=-1.38;4种DDT类农药联合雌激素效应呈协同作用,回归方程为y^=2.6006x2-28.079x-21.757,EC50为2.57×10-8mol/L,AI=0.83。结论DDT类农药是经雌激素受体(ER)介导的环境雌激素,p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE联合效应拟雌激素活性呈协同激活作用。

关键词：农药酵母细胞人雌激素受体联合效应

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DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应

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环境与职业医学 2006年第6期23卷 469-473页

作者：陈秀云陈春波祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金江苏扬州大学医学院预防医学教研室扬州225001 江苏扬州大学兽医学实验动物专业扬州225009 江苏扬州大学动物科学与技术学院扬州250009

[目的]研究DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应。[方法]用重组人雌激素受体（hER）基因酵母细胞（W303—1A／hER—ERE—LacZ）评价DDT农药同分异构体和同系物的雌激素活性。将终浓度为10^-4-10^-15的17β-雌二醇、终浓度为10^... 详细信息

[目的]研究DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应。[方法]用重组人雌激素受体（hER）基因酵母细胞（W303—1A／hER—ERE—LacZ）评价DDT农药同分异构体和同系物的雌激素活性。将终浓度为10^-4-10^-15的17β-雌二醇、终浓度为10^-3-10^-9的p，p＇-DDT、o，p＇-DDT和p，p＇-DDD、p，p＇-DDE加入酵母细胞培养液，作用4h，通过定量测定β-半乳糖苷酶的活性表示DDT农药的雌激素作用强度。[结果]o，p-DDT和p，p＇-DDD能像配体一样与hER结合，发挥雌激素效应，并且具有剂量效应关系，回归方程分别为^y=1．4553x^2＋47．366x＋333．31和^y=-0．1658x^3．6506x^2—23．176x-25．809。同分异构体间比较，o，p＇-DDT相对雌激素活性较强，EC50为2．04×10^-7mol／L，而p，p-DDT的EC50为3．71×10^-4mol／L，两者雌激素作用呈协同效应，联合效应相加指数（AI）=0.74（〉0）；同系物间比较，P，P＇-DDD雌激素活性明显较强，EC50为2．78×10^-7mol／L，而p，p＇-DDE的EC50为5．88×10^-5mol／L，两种同系物的雌激素作用呈拮抗效应．AI=-1．13（〈0）。[结论]o，p-DDT和p，p＇-DDD是经雌激素受体（ER）介导的环境雌激素，o，p-DDT与p，p＇-LDDT同分异构体间雌激素活性具有协同效应，p，p-DDD和p，p-DDE同系物间雌激素活性呈拮抗效应。

关键词： DDT农药酵母细胞评价人雌激素受体

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人泡沫逆转录病毒bel1及人雌激素受体融合蛋白功能的诱导表达

人泡沫逆转录病毒bel1及人雌激素受体融合蛋白功能的诱导表达

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中国微生物学会基础与临床病毒学会议

作者：杨频 R.M.Fluegel 大学生命科学院病毒系肿瘤研究中心应用肿瘤病毒部

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人雌激素受体在大肠杆菌的高效表达及其抗体的制备与应用

人雌激素受体在大肠杆菌的高效表达及其抗体的制备与应用

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作者：乔立艳内蒙古医科大学

学位级别：硕士

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