检索结果-内蒙古大学图书馆

动物营养学报 2021年第12期33卷 6699-6708页

作者：胡胜兰肖昊王丽黄琳蒋宗勇广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

本试验旨在揭示大豆异黄酮对氧化应激条件下仔猪肠上皮细胞抗氧化能力和免疫性能的影响。试验在FeSO_(4)/H_(2)O_(2)建立仔猪肠上皮细胞氧化应激模型的基础上,分别加入不同浓度的大豆异黄酮处理48 h后,测定细胞内抗氧化酶活性、免疫细... 详细信息

本试验旨在揭示大豆异黄酮对氧化应激条件下仔猪肠上皮细胞抗氧化能力和免疫性能的影响。试验在FeSO_(4)/H_(2)O_(2)建立仔猪肠上皮细胞氧化应激模型的基础上,分别加入不同浓度的大豆异黄酮处理48 h后,测定细胞内抗氧化酶活性、免疫细胞因子分泌以及相关信号通路。试验同时设正常对照组和氧化对照组。结果表明:与氧化对照组相比,添加10~40μmol/L大豆异黄酮后显著提高了细胞增殖率(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率(P<0.05);与正常对照组相比,氧化处理显著提高了细胞内白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.05),显著降低了细胞内白细胞介素-4(IL-4)含量(P <0.05);10~80μmol/L大豆异黄酮组细胞内TNF-α含量显著低于氧化对照组(P<0.05);此外,氧化处理提高了细胞内核因子-κB(NF-κB)含量和Jun N-末端蛋白激酶(JNK)活性。添加20μmol/L大豆异黄酮对细胞内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、NF-κB蛋白的表达均有抑制作用。综上所述,添加大豆异黄酮可提高体外氧化应激仔猪肠上皮细胞的抗氧化能力,并通过调控NF-κB和JNK信号通路抑制氧化应激诱导的细胞炎症反应。

关键词：大豆异黄酮仔猪肠上皮细胞抗氧化炎症反应信号通路

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维生素C对β-伴大豆球蛋白诱导的仔猪肠上皮细胞炎性损伤的保护作用

引用

浙江农业学报 2021年第11期33卷 2017-2025页

作者：夏江英杨菊宋天浩庞莲凤叶婷任志华邓俊良四川农业大学动物医学院四川成都611130

为分析不同浓度维生素C(vitamin C,V_(C))对β-伴大豆球蛋白(7S)诱导的仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)炎性损伤的保护作用,取对数生长期的IPEC-J2用于试验,随机分为对照组、7S模型组(5 mg·mL^(-1)7S)和V_(C)(25、50、100、200、400、600... 详细信息

为分析不同浓度维生素C(vitamin C,V_(C))对β-伴大豆球蛋白(7S)诱导的仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)炎性损伤的保护作用,取对数生长期的IPEC-J2用于试验,随机分为对照组、7S模型组(5 mg·mL^(-1)7S)和V_(C)(25、50、100、200、400、600、800、1000μmol·L^(-1))保护组。细胞培养24 h后采用CCK-8法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化,ELISA法检测细胞上清液中LDH、ALP、DAO、IFABP1含量和IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10的分泌水平,用qRT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10 mRNA相对表达量。结果显示:7S可显著(P<0.01)降低IPEC-J2活力、破坏细胞膜完整性,上调细胞促炎性因子和下调抗炎因子的产生;与7S模型组相比,同时添加7S和V_(C)的试验组细胞活力增加,细胞上清液中LDH、ALP、DAO、IFABP1含量显著(P<0.01)降低,促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平降低,抗炎因子IL-4和IL-10的分泌水平升高。因此,不同浓度V_(C)均可保护由7S诱导引起的仔猪肠上皮细胞损伤,100μmol·L^(-1) V_(C)的修复和保护作用最佳。

关键词：维生素C β-伴大豆球蛋白仔猪肠上皮细胞膜完整性细胞因子

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中药单体组合对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞损伤的保护作用

中药单体组合对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞损伤的保护作用

引用

作者：吕玲四川农业大学

学位级别：硕士

断奶仔猪饲粮中含有大豆7S球蛋白,它是导致仔猪断奶后消化吸收功能下降而引起肠炎腹泻的主要过敏原,腹泻严重甚至会造成仔猪死亡。刺五加苷E、白头翁皂苷B4、连翘酯苷A、秦皮甲素等中药单体因具有较好的抗炎、抗氧化功能,且能增强肠道... 详细信息

断奶仔猪饲粮中含有大豆7S球蛋白,它是导致仔猪断奶后消化吸收功能下降而引起肠炎腹泻的主要过敏原,腹泻严重甚至会造成仔猪死亡。刺五加苷E、白头翁皂苷B4、连翘酯苷A、秦皮甲素等中药单体因具有较好的抗炎、抗氧化功能,且能增强肠道免疫力、维护肠道健康,在临床上常用于炎性相关的肠道疾病的治疗。本试验目的在于探索以上四种中药单体不同浓度的不同组合对于大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞损伤的保护作用,并初步探究其机制,寻找到有效治疗大豆7S球蛋白引起IPEC-J2细胞损伤的最优中药单体组合,为中药单体组合用于防控大豆蛋白引起的断奶仔猪腹泻提供一定的参考价值。试验一:四种中药单体不同浓度的不同组合对大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞损伤的研究 (1)采用CCK-8法检测刺五加苷E、白头翁皂苷B4、连翘酯苷A、秦皮甲素不同浓度正交试验下的不同组合对IPEC-J2细胞存活率的影响,筛选出三个能显著提高细胞存活率的中药单体组合,检测其对5 mg/mL大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞存活率的影响。结果显示,在5 mg/ml大豆7S球蛋白作用下,组合I(刺五加苷E 100 mg/L、白头翁皂苷B4 100 mg/L、连翘酯苷A 80 mg/L、秦皮甲素20 mg/L)、组合VI(刺五加苷E 50 mg/L、白头翁皂苷B4 25 mg/L、连翘酯苷A 80 mg/L、秦皮甲素20 mg/L)、组合VIII(刺五加苷E 25 mg/L、白头翁皂苷B450 mg/L、连翘酯苷A 80 mg/L、秦皮甲素10 mg/L)均可极显著提高IPEC-J2细胞的存活率(P<0.01),用于后续实验。 (2)将大豆7S球蛋白(5 mg/mL)分别与以上三个组合共同处理IPEC-J2细胞24h,通过ELISA法测定细胞上清液中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-4、IL-10的含量以及SOD、CAT、T-AOC、GSH-Px和氧化产物MDA的含量;采用RT-qPCR检测紧密连接相关蛋白Claudin-1、ZO-1和Occludin的mRNA表达量。结果显示,IPEC-J2细胞过氧化产物及促炎因子的含量在大豆7S球蛋白(5 mg/mL)的诱导下极显著增加(P<0.01),另一方面,抗氧化酶活性以及抗炎因子的含量在其诱导下极显著下降(P<0.01),同时,紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1和Claudin-1的mRNA表达量也显著下降(P<0.01)。以上三个组合处理后的PEC-J2细胞中促炎因子含量、过氧化产物的含量,与大豆7S球蛋白模型组相比显著降低(P<0.01)。此外,抗炎因子的含量、抗氧化酶的活性,与大豆7S球蛋白模型组相比显著升高(P<0.01),同时,ZO-1、Occludin和Claudin-1的mRNA表达量显著增加(P<0.01)。由此说明,5 mg/mL大豆7S球蛋白可通过促进IPECJ2细胞炎性因子的释放、降低抗氧化酶的活性以及促进氧化产物的生成,导致IPEC-J2细胞炎性损伤,且破坏肠道紧密连接,而以上三个组合均能减轻5 mg/mL大豆7S球蛋白造成的IPEC-J2细胞的炎性损伤,增强细胞机械屏障的保护功能,提升与紧密连接相关的蛋白基因mRNA的表达水平。其中中药单体组合VI(刺五加苷E 50 mg/L、白头翁皂苷B4 25 mg/L、秦皮甲素20 mg/L、连翘酯苷A 80 mg/L)效果最佳(即本试验确定的最优组合)。试验二:基于NF-κB/MAPK通路探究最优组合对大豆7S球蛋白诱导的IPECJ2细胞损伤保护作用的机制 (1)探究最优组合对7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞中NF-κB/MAPK信号通路相关蛋白基因mRNA表达量的影响。RT-qPCR检测IPEC-J2细胞NF-κB p65、P38 MAPK、JNK和iNOS的mRNA表达量。结果显示,与对照组比较,IPEC-J2细胞在5 mg/mL大豆7S球蛋白作用下,其NF-κB p65、P38 MAPK、JNK和iNOS的mRNA表达量显著升高(P<0.01),提示5 mg/mL大豆7S球蛋白可以激活NF-κB/MAPK信号通路。而与大豆7S球蛋白组相比,添加最优组合后,能显著下调细胞内NF-κB p65、P38 MAPK、JNK和iNOS的mRNA表达量(P<0.01)。 (2)探究最优组合对7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞中NF-κB/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。Western Blot测定细胞内P38 MAPK、NF-κB p65、JNK和iNOS蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比较,大豆7S球蛋白5 mg/mL能够显著上调NF-κB p65、P38 MAPK、JNK和iNOS的蛋白表达量(P<0.01)。而与大豆7

关键词：仔猪肠上皮细胞大豆7S球蛋白中药单体组合炎性损伤

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白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素抗大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞炎性损伤和凋亡的研究

白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素抗大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞炎性损...

引用

作者：付丽佳四川农业大学

学位级别：硕士

大豆7S球蛋白作为断奶仔猪日粮中的主要过敏原,会引起断奶仔猪过敏性肠炎,导致仔猪消化吸收功能下降甚至腹泻而死亡。白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素均在临床用于治疗炎性相关的肠道疾病,具有良好的抗炎抗氧化效果,能提高肠道免疫力、维护... 详细信息

大豆7S球蛋白作为断奶仔猪日粮中的主要过敏原,会引起断奶仔猪过敏性肠炎,导致仔猪消化吸收功能下降甚至腹泻而死亡。白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素均在临床用于治疗炎性相关的肠道疾病,具有良好的抗炎抗氧化效果,能提高肠道免疫力、维护肠道健康。本试验目的在于探究白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素能否用于治疗大豆7S球蛋白引起的断奶仔猪过敏性肠炎,并初步探究其机制,为临床中药单体用于防控大豆蛋白引起的断奶仔猪过敏性肠炎具有重要意义。试验一三种中药单体对大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞炎性损伤的影响(1)通过CCK-8法测定不同浓度的白藜芦醇、槲皮素、秦皮甲素对IPEC-J2细胞存活率的影响,每种中药筛选出三种浓度检测其对5 mg/m L大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞存活率的影响。结果表明,0.156 mg/L、0.313 mg/L、0.625 mg/L白藜芦醇,0.625 mg/L、1.25 mg/L、2.5 mg/L槲皮素,10 mg/L、15 mg/L、20 mg/L秦皮甲素均能显著提高5 mg/m L大豆7S球蛋白作用下IPEC-J2细胞的存活率,用于后续试验。(2)将不同浓度的上述三种药物分别与5 mg/m L大豆7S球蛋白共同培养IPECJ2细胞24 h后,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10和i NOS含量,微量法检测细胞因子NO和氧化产物MDA含量以及抗氧化酶GSH和SOD活性。结果表明:5 mg/m L大豆7S球蛋白能显著升高细胞促炎因子和过氧化产物的含量,显著降低抗炎因子的含量和抗氧化酶活性(P<0.01)。与大豆7S球蛋白组相比,不同浓度的上述三种药物均能显著提高细胞存活率,显著降低促炎因子和过氧化产物含量,显著提高抗炎因子的含量和抗氧化酶活性(P<0.01),由此说明5 mg/L大豆7S球蛋白能通过降低细胞活性,调控IPEC-J2细胞炎性因子的分泌、氧化产物的合成以及抗氧化酶活性对IPEC-J2细胞造成炎性损伤,而不同浓度的上述三种药物均能缓解5 mg/m L大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞的炎性损伤,其中0.625 mg/L白藜芦醇、2.5 mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素效果最佳。试验二基于NF-κB/MAPK通路探究三种中药单体对大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎性损伤的影响试验分为对照组,7S模型组(5 mg/m L)和不同药物(0.625 mg/L白藜芦醇、2.5mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素)与大豆7S球蛋白共同添加组。(1)探究白藜芦醇、槲皮素和秦皮甲素对大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测细胞ROS水平和细胞凋亡率,采用RT-q PCR检测促凋亡基因Caspase-3和Bax以及抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果表明与对照组相比5mg/m L大豆7S球蛋白能够显著提高IPEC-J2细胞凋亡率和细胞内ROS水平,显著促进凋亡基因表达、抑制抗凋亡基因表达(P<0.01)。而添加0.625 mg/L白藜芦醇、2.5 mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素后,能显著下调细胞内ROS水平和细胞凋亡率,显著抑制促凋亡基因、促进抗凋亡基因的表达(P<0.01)。(2)探究白藜芦醇、槲皮素和秦皮甲素对大豆7S球蛋白诱导的IPEC-J2细胞NF-κB/MAPK信号通路的调节作用。通过RT-q PCR和Western Blot检测细胞P65NF-κB、P38 MAPK和JNK的m RNA水平和蛋白表达及磷酸化水平。结果表明,5mg/m L大豆7S球蛋白能激活NF-κB/MAPK信号通路,显著上调P65 NF-κB、P38MAPK和JNK的m RNA水平和蛋白表达量及其磷酸化水平(P<0.01)。添加0.625mg/L白藜芦醇、2.5 mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素能显下调上述蛋白m RNA水平和蛋白表达量及其磷酸化水平(P<0.01)。因此,5 mg/m L大豆7S球蛋白可能通过激活NF-κB/MAPK信号通路引起IPEC-J2细胞炎性损伤,而0.625 mg/L白藜芦醇、2.5 mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素能通过影响NF-κB/MAPK信号通路的激活缓解5mg/m L大豆7S球蛋白引起的IPEC-J2细胞的炎性损伤。结论:5 mg/m L大豆7S球蛋白能通过诱导IPEC-J2细胞氧化应激,激活NF-κB/MAPK信号通路并且调控凋亡基因的表达,引起IPEC-J2细胞炎性损伤和凋亡。0.625 mg/L白藜芦醇、2.5 mg/L槲皮素、20 mg/L秦皮甲素可以通过影响NF-κB/MAPK信号通路的激活显著缓解大豆7S球蛋白引起的细胞炎性损伤和凋亡。这三种中药有望用于大豆蛋白日粮引起的断奶仔

关键词：大豆7S球蛋白仔猪肠上皮细胞中药单体炎性损伤细胞凋亡

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