检索结果-内蒙古大学图书馆

热带医学杂志 2018年第2期18卷 139-142,170页

作者：何宇婷马幸延曾建明鲁洋陈茶黄彬中山大学附属第一医院检验医学部广东广州510080 广东省中医院检验医学部广东广州510120

目的探究抗生素作用下细菌传代次数对接合频率的影响及其可能机制。方法将本实验室构建的携带庆大霉素(GM)抗性基因的质粒p UCP24T转入*** SM10λpir获得重组菌*** SM10λpir(p UCP24T)。将重组菌在含30μg/m L GM的琼脂平板上不断传代... 详细信息

目的探究抗生素作用下细菌传代次数对接合频率的影响及其可能机制。方法将本实验室构建的携带庆大霉素(GM)抗性基因的质粒p UCP24T转入*** SM10λpir获得重组菌*** SM10λpir(p UCP24T)。将重组菌在含30μg/m L GM的琼脂平板上不断传代,每次挑取单个菌落传代,获得第50代和100代的*** SM10λpir(p UCP24T)。分别以铜绿假单胞菌PAO1、大肠埃希菌EC600和肺炎克雷伯菌A10为受体菌,第1、50、100代*** SM10λpir(p UCP24T)为供体菌进行接合实验,计算接合频率。采用微量肉汤稀释法检测第1、50、100代*** SM10λpir(p UCP24T)对GM的最低抑菌浓度(MIC)值。分别提取第1、50、100代*** SM10λpir(p UCP24T)的全基因组DNA,构建DNA文库并进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果成功获得重组菌*** SM10λpir(p UCP24T)。第50、100代*** SM10λpir(p UCP24T)与三种受体菌的接合频率较第1代均显著增高(P<0.05),第100代菌株对GM的MIC值大于2 048μg/m L,较第1和第50代菌株对GM的MIC值1 024μg/m L升高。第1、50、100代*** SM10λpir(p UCP24T)重组菌中携带GM抗性基因的p UCP24T质粒的拷贝数分别为601.3、1 808.2及9 190.5,呈现增高的趋势。结论在抗生素持续作用下,*** SM10λpir(p UCP24T)通过增加耐药质粒拷贝数使接合频率及MIC值升高,以适应抗生素的持续作用。

关键词：细菌接合频率传代次数抗生素

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传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响

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分子影像学杂志 2017年第2期40卷 202-206页

作者：王济舟曾宇宋烨漆松涛南方医科大学南方医院广东广州510515

目的探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。方法以两种不同传代次数的U87(I)、U87(II)为研究对象,使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能... 详细信息

目的探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。方法以两种不同传代次数的U87(I)、U87(II)为研究对象,使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力;使用Western Blot技术检测U87(Ⅰ)及U87(Ⅱ)的CTHRC1,FOXM1,PLOD2,MMP9,TGF-β,E-cadherin,Slug,Snail,Vimentin,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt的表达量差异。结果 U87(Ⅰ)较U87(Ⅱ)更容易形成网状结构,有更强的侵袭能力,但在增殖和迁移能力上二者无明显差异。在EMT相关蛋白表达水平上,U87(Ⅰ)中的Snail、Vimentin的表达量较U87(Ⅱ)的高,而E-Cadherin、Slug则较低;在PI3K/Akt通路蛋白表达水平上,U87(Ⅰ)的p-Akt,Akt的表达量均低于U87(II),而p-PI3K的表达量却高于U87(II),两者在PI3K的表达量上无明显差异;除此之外,U87(I)中PLOD2、CTHRC1及MMP9的表达量也明显高于U87(II),而TGF-β的表达量则低于后者。结论随着传代次数的增加,U87细胞在侵袭能力以及多个促癌基因表达上发生了变化,这可能造成分子机制研究的前后结果不一致,降低结果的可信程度,因此研究人员在进行细胞系实验时,应尽可能在短时间内,使用同一批次细胞完成生物学特性、分子机制研究,以减少传代次数对肿瘤细胞系生物学特性以及基因表达的影响。

关键词：胶质瘤 U87 传代次数侵袭能力

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固定剂和传代次数对线粒体荧光质粒pDsRed2-Mito荧光强度的影响

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河南大学学报（自然科学版） 2016年第6期46卷 670-673页

作者：张丽丽耿慧霞石贞玉邓锦波王来河南大学护理学院河南开封475004 河南大学生命科学学院河南开封475004

采用标记线粒体的荧光质粒pDsRed2-Mito转染PC12细胞,分别以95%乙醇、甲醇、丙酮和4%多聚甲醛作为固定剂对筛选后的细胞进行固定,最后在激光共聚焦显微镜下观察不同固定剂对荧光质粒荧光强度的影响.结果表明,95%乙醇或甲醇作为固定剂固... 详细信息

采用标记线粒体的荧光质粒pDsRed2-Mito转染PC12细胞,分别以95%乙醇、甲醇、丙酮和4%多聚甲醛作为固定剂对筛选后的细胞进行固定,最后在激光共聚焦显微镜下观察不同固定剂对荧光质粒荧光强度的影响.结果表明,95%乙醇或甲醇作为固定剂固定细胞后易导致荧光猝灭,而丙酮或4%多聚甲醛固定细胞后,对质粒荧光强度没有显著影响.不同传代次数对pDsRed2-Mito质粒的荧光强度也没有显著影响.因此,在选择pDsRed2-Mito质粒标记线粒体时,不用考虑传代次数的影响,宜选择丙酮或4%多聚甲醛作为固定剂才能最大化的保持质粒的荧光强度.

关键词：线粒体质粒荧光强度固定剂传代次数

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种子液传代次数对益生菌FGM株发酵黄芪转化多糖的影响

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中国畜牧兽医 2014年第6期41卷 136-139页

作者：尚利明秦哲张景艳王旭荣王磊孔晓军陈婕杨志强王学智李建喜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省中兽药工程技术研究中心农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

益生菌FGM株发酵黄芪后,产物粗多糖得率显著提高。为进一步提高FGM株发酵黄芪转化多糖的稳定性,本试验将连续传代的FGM株种子液接种黄芪进行液体发酵,采用细菌平板计数法和苯酚—硫酸法分别测定发酵前、后的细菌总数和发酵后黄芪多糖的... 详细信息

益生菌FGM株发酵黄芪后,产物粗多糖得率显著提高。为进一步提高FGM株发酵黄芪转化多糖的稳定性,本试验将连续传代的FGM株种子液接种黄芪进行液体发酵,采用细菌平板计数法和苯酚—硫酸法分别测定发酵前、后的细菌总数和发酵后黄芪多糖的含量,并对结果进行了统计学分析。结果表明菌种在多次连续传代后会产生菌种退化现象,发酵产物中多糖含量与种子液细菌总数呈极显著相关(P=0.007),其中第4代种子液发酵黄芪转化多糖的性能最高。

关键词：菌种FGM株传代次数发酵菌落数多糖含量

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供核细胞对绵羊体细胞克隆效率的影响

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新疆农业科学 2020年第1期57卷 190-196页

作者：郭延华徐方野李迎利张译元王立民唐红皮文辉周平省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000 石河子市兽医卫生检疫所新疆石河子832000

【目的】在制作克隆胚胎时,供核细胞直接制约着重构胚的融合数量和发育潜力。研究供核细胞对绵羊体细胞对克隆效率的影响。【方法】从供核细胞的静置时间,研究传代次数与周期处理,供核细胞不同克隆株,不同羊源细胞等,以重构胚融合率和... 详细信息

【目的】在制作克隆胚胎时,供核细胞直接制约着重构胚的融合数量和发育潜力。研究供核细胞对绵羊体细胞对克隆效率的影响。【方法】从供核细胞的静置时间,研究传代次数与周期处理,供核细胞不同克隆株,不同羊源细胞等,以重构胚融合率和囊胚发育率为检测指标,判定单因素供核细胞对克隆胚胎的影响。【结果】在供核细胞静置时间方面,供核细胞静置15~30 min内完成重构胚制作的融合率极显著高于静置2 h左右的供核细胞组(90.10%vs 78.84%)(P<0.01),但囊胚率差异不显著(15.58%vs 14.65%)(P>0.05);在供核细胞传代次数(d1~d3)和汇合期生长时间方面(24 and 48 h),各组的融合率差异不显著(70.37%、76.03%、71.92%vs 72.97%)(P>0.05),但囊胚率有增高的趋势(5.96%、9.06%、15.85%vs 20.16%);在同一供核细胞不同克隆株方面,供核细胞对融合率和囊胚率存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的影响;在不同个体方面,供核细胞株对融合率和囊胚率存在极显著的影响(P<0.01)。【结论】15~30 min内的静置供核细胞、传代3次并延长汇合期细胞生长时间(48 h),多选细胞株更有利于克隆胚的制作。

关键词：供核细胞静置时间传代次数细胞株克隆胚胎

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破解家畜干细胞不能承受长周期、多次基因编辑难题 006

破解家畜干细胞不能承受长周期、多次基因编辑难题

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科技日报

作者：马爱平

家畜干细胞在生命科学基础研究、细胞培养人造肉生产和优良品种培育等方面具有巨大应用前景。自1981年小鼠胚胎干细胞（mESCs）培育成功以来，国内外科学家一直试图建立稳定的、可长期传代的大型家畜胚胎多能干细胞系，但始终未获得成... 详细信息

家畜干细胞在生命科学基础研究、细胞培养人造肉生产和优良品种培育等方面具有巨大应用前景。自1981年小鼠胚胎干细胞（mESCs）培育成功以来，国内外科学家一直试图建立稳定的、可长期传代的大型家畜胚胎多能干细胞系，但始终未获得成功。近日，中国农业大学韩建永教授团队

关键词：基因编辑长周期胚胎干细胞上胚层异种器官移植传代次数干细胞系克隆猪种子细胞细胞培养猪胚胎

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不同传代次数的酿酒酵母细胞壁蛋白组学分析

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微生物学通报 2013年第11期40卷 1962-1969页

作者：姚继兵祖国仁朴永哲成建国赵长新大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034 大连民族学院生命科学学院辽宁大连116600

【目的】探讨酿酒酵母衰老过程中细胞壁蛋白变化,从蛋白水平上解释酿酒酵母衰老的原因。【方法】以酿酒酵母FFC2146为研究对象,采用显微镜观察法比较了经2、10、15次连续传代酿酒酵母的细胞形态;用计算细胞沉降速率的方法考查酵母凝絮性... 详细信息

【目的】探讨酿酒酵母衰老过程中细胞壁蛋白变化,从蛋白水平上解释酿酒酵母衰老的原因。【方法】以酿酒酵母FFC2146为研究对象,采用显微镜观察法比较了经2、10、15次连续传代酿酒酵母的细胞形态;用计算细胞沉降速率的方法考查酵母凝絮性;通过3,5-二硝基水杨酸法测定降糖速率来表征酵母代谢活力;采用二硫苏糖醇溶解法结合苯酚萃取法抽提不同传代次数的酿酒酵母细胞壁蛋白;并且通过双向电泳进行差异性分析。【结果】结果显示随着传代次数的增加酿酒细胞个体表面变得粗糙,凝絮能力明显增强,降糖能力明显减弱,表明多次传代后的酵母体现出衰老现象。双向电泳结果共得到309个胞壁蛋白点,其中11个蛋白质点存在明显差异。6个蛋白质点在第15代丰度小于第2代丰度2倍以上,4个蛋白质点只在第15代酵母细胞壁中出现,1个蛋白质点只在第2代酵母细胞壁中出现。【结论】酿酒酵母FFC2146经过15次连续传代培养后11个细胞壁蛋白丰度发生明显变化,此11个细胞壁蛋白的表达水平与酿酒酵母衰老相关。

关键词：酿酒酵母酵母衰老传代次数细胞壁蛋白双向电泳

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传代次数及bFGF对oESC-like的影响与小鼠四倍体胚胎的制备

传代次数及bFGF对oESC-like的影响与小鼠四倍体胚胎的制备

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作者：周川新疆农业大学

学位级别：硕士

已报道的家畜ESC-like均无法实现长期培养,制约了家畜ESC的研究。利用本实验室建系的oESC-like,探究导致oESC-like无法持续培养的原因。实验观察了oESC-like形态变化,检测了AKP的表达,使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、O... 详细信息

已报道的家畜ESC-like均无法实现长期培养,制约了家畜ESC的研究。利用本实验室建系的oESC-like,探究导致oESC-like无法持续培养的原因。实验观察了oESC-like形态变化,检测了AKP的表达,使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、Oct-4蛋白的表达,并计算蛋白表达水平。结果显示,oESC-like在长期培养过程中其形态具备ESC的典型形态特征；AKP持续表达；Sox-2和Oct-4的表达有不同程度的提高,增殖能力无明显变化；Bax表达水平逐代提高,Bcl-2的表达水平在5、10代显著高于Bax的表达水平可抑制Bax的活化,而从15代开始Bcl-2表达水平下降,低于Bax的表达水平,不能有效地抑制Bax的活化；Bcl-2/Bax表达水平的比值逐代下降,说明oESC-like在长期培养过程中逐渐走向凋亡。碱性成纤维细胞生长因子可以促进胚胎干细胞的增殖能力,维持胚胎干细胞的未分化状态。在现有体系提高碱性成纤维细胞生长因子的浓度,明显提高了5、10、15、20代绵羊类胚胎干细胞PCNA的表达水平(P<0.05),增强了绵羊类胚胎干细胞的增殖能力；提高碱性成纤维细胞生长因子的浓度后,Bax的表达水平在5、10、15、20代绵羊类胚胎干细胞均显著提高(P<0.05),Bcl-2的表达水平在5代无显著变化(P>0.05),而在10、15、20代显著提高(P<0.05),提高碱性成纤维细胞生长因子的浓度后,Bcl-2/Bax的比值在5、10代低于现有体系下的Bcl-2/Bax比值,在15、20代高于现有体系下的Bcl-2/Bax比值,维持比较稳定的状态。提高碱性成纤维细胞生长因子的浓度对AKP的表达无明显影响,显著提高了Oct-4和Sox-2的表达水平(P<0.05)。四倍体胚胎在研究哺乳动物配子发生、发育、四倍体的发生、遗传、免疫机制等方面具有重要作用,因此提高融合及发育效率至关重要。为找出适合小鼠2-细胞胚胎融合的最佳方案,实验采用两种融合液——0.3M甘露醇溶液和0.3M蔗糖溶液,两种融合液均采用了120V/mm,20μs×2、100V/mm,40μs×2、80V/mm,80μs×2三种电融合参数。其中采用0.3M甘露醇溶液作为融合液且融合参数采用80V/mm,80μs×2获得了92.5%的融合率和90.6%的囊胚率,是小鼠2-细胞胚胎融合的最佳方案。

关键词：传代次数 bFGF 凋亡增殖多能性四倍体胚胎

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针对代次较多的3T3-L1细胞诱导分化法的改良

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实验科学与技术 2016年第4期14卷 34-36页

作者：向俊蓓陈强万谦四川护理职业学院科研处成都610100 四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心成都610036

小鼠前脂肪细胞3T3-L1被广泛应用于相关脂肪代谢、肥胖、糖尿病等的研究,诱导其分化为成熟脂肪细胞成为研究起点,但不少实验室采用经典诱导法时遭遇失败。为此改良经典诱导法,以提高分化成功率。首先,启动诱导的时机改变在细胞汇合度达... 详细信息

小鼠前脂肪细胞3T3-L1被广泛应用于相关脂肪代谢、肥胖、糖尿病等的研究,诱导其分化为成熟脂肪细胞成为研究起点,但不少实验室采用经典诱导法时遭遇失败。为此改良经典诱导法,以提高分化成功率。首先,启动诱导的时机改变在细胞汇合度达到70%的时候,而不是达到100%再融合2 d的时候;然后,对细胞孔进行前期的明胶处理。结果表明,采用改良方法后,分化成功率大幅提高。改良后的方法至少适用于传代次数约在10代左右的3T3-L1细胞。

关键词： 3T3-L1细胞诱导分化传代次数

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梅山猪耳组织成纤维细胞及其处理对核移植重组胚发育的影响

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华中农业大学学报 2015年第6期34卷 78-82页

作者：华再东徐国旗毕延震肖红卫华文君刘西梅郑新民湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 青海大学农牧学院西宁810016

为研究供体细胞不同处理方法对核移植重构胚发育能力的影响,分别用血清饥饿不同时间和传代次数的供体细胞进行核移植,比较重组胚的卵裂率和囊胚率。结果发现,饥饿0、2、4、8d的核供体细胞,重组胚在卵裂率上没有表现显著的差异,而饥饿2d... 详细信息

为研究供体细胞不同处理方法对核移植重构胚发育能力的影响,分别用血清饥饿不同时间和传代次数的供体细胞进行核移植,比较重组胚的卵裂率和囊胚率。结果发现,饥饿0、2、4、8d的核供体细胞,重组胚在卵裂率上没有表现显著的差异,而饥饿2d和4d试验组的囊胚率却显著高于其他组;以传代0、2、4、8代的细胞作为供体细胞进行核移植,未经传代的细胞直接作为核供体卵裂率为57.69%,明显低于经过传代的细胞;细胞的传代次数在重组胚卵裂率上并未表现出明显的不同,但传至第4代细胞构成重组胚的卵裂率和囊胚率最高(86.29%和23.36%)。试验选取饥饿处理2d、传4代的成纤维细胞作为核移植的供体,挑选发育良好的重组胚移植到6头代孕母猪体内,3头代孕母猪在第1到第3个情期相继返情,1头在胚胎移植45d流产;2头没有返情,B超检查受孕,其中1头代孕母猪到预产期顺利产下6头健康胎儿。

关键词：供体细胞重组胚核移植猪血清饥饿传代次数

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