检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2002年第4期10卷 352-355页

作者：袁克湖张曼夫中国农业大学生物学院动物分子病毒研究室北京 100094 中国农业大学生物学院动物分子病毒研究室

传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ⅡTV)是一种能感染鸡(Gallina)群,导致产生急性上呼吸道感染的α-疱疹病毒。ILTV对鸡群的感染率约为100％,致死率约为40％。胸苷激酶(thymidinekinase,TK)基因是疱疹病毒的一个... 详细信息

传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ⅡTV)是一种能感染鸡(Gallina)群,导致产生急性上呼吸道感染的α-疱疹病毒。ILTV对鸡群的感染率约为100％,致死率约为40％。胸苷激酶(thymidinekinase,TK)基因是疱疹病毒的一个重要的毒力基因,该基因的删除有助于构建缺失tk基因的重组ILTV。为了得到缺失tk的重组ILTV病毒,报道了ILTV北京E2株的tk基因的克隆和测序,并分析了该序列与其它已经发表的其它ILTV毒株瞳基因之间的同源性。由DNA序列推导出TK的氨基酸序列,并将该序列与其它疱疹病毒TK氨基酸序列的同源性进行了分析,可以看到这些疱疹病毒TK氨基酸序列在某些区域出现较高的同源性。

关键词：传染性喉气管炎病毒胸苷激酶基因鸡

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传染性喉气管炎病毒(ILTV)gI-gE基因的PCR-RFLP分析

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 52-54页

作者：何召庆王云峰张绍杰孟松树童光志黄骏明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这 ... 详细信息

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这３对引物进行ＰＣＲ扩增，均获得了与预期片段大小一致的ＤＮＡ片段。然后，用４种限制性内切酶（Ａｖａ Ⅱ、ＨｉｎｆⅠ、ＤｄｅⅠ和ＨａｅⅢ）对所有ＰＣＲ产物进行ＲＦＬＰ分析。结果发现，ＨｉｎｆⅠ和ＤｄｅｌⅠ可以分别将８株ＩＬＴＶｇＥ基因的酶切图谱分为两类，ＨａｅⅢ可将８株ＩＬＴＶ的ｇＩ－ｇＥ基因连接部的酶切图谱分为两类。这表明不同的ＩＬＴＶ毒株的ｇＥ基因变异较大，而ｇＩ基因则相对比较保守。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gI-gE基因聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析

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传染性喉气管炎病毒gD、gE、gJ基因的表达与间接ELISA方法的建立

传染性喉气管炎病毒gD、gE、gJ基因的表达与间接ELISA方法的建立

引用

作者：何来中国农业科学院

学位级别：硕士

禽传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis，ILT）是鸡的一种以呼吸困难、咳出血样黏液、喉部和气管黏膜水肿出血并导致糜烂为主要特征的病毒性呼吸道传染病，可致感染鸡的死亡和产蛋下降，是危害养禽业的重要疫病之一。传染性... 详细信息

禽传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis，ILT）是鸡的一种以呼吸困难、咳出血样黏液、喉部和气管黏膜水肿出血并导致糜烂为主要特征的病毒性呼吸道传染病，可致感染鸡的死亡和产蛋下降，是危害养禽业的重要疫病之一。传染性喉气管炎病毒（ILTV）野毒和弱毒疫苗都可以造成潜伏感染，成为传染源，使本病持续存在，并形成区域流行。本研究通过表达ILTV三个重要结构蛋白并纯化和建立间接ELISA方法，以筛选合适的诊断抗原并建立间接ELlSA方法，用于ILTV野毒感染的血清学检测。本研究首先克隆和测序了ILTV WG株gJ基因，gJ完整开放阅读框大小为2988bp，比ILTVUSDA株多30bp，推测编码的氨基酸序列单独形成一个表位。随后，通过PCR扩增出ILTV三重要囊膜糖蛋白gD、gE和gJ的主要抗原性区域，连接到原核表达载体pET-32a（+）中，经IPTG诱导在*** BL21（DE3）中表达，三重组蛋白r-gD、r-gE和r-gJ都有可溶性蛋白存于上清中，经His单克隆抗体鉴定后，非变性条件下用Ni树脂纯化r-gD、r-gE和r-gJ，ILTV阳性血清和制备的兔抗r-gD、r-gE、r-gJ单因子血清证实r-gD、r-gE和r-gJ都保留了抗原性。然后，对纯化的r-gD、r-gE和r-gJ进行了间接ELISA条件的探索，优化抗原浓度，血清稀释度，酶标二抗稀释倍数和封闭液；根据36份SPF阴性血清，按阴阳性临界值=阴性血清OD405平均值+3×SD，确立了r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA判定标准；完成了特异性试验和符合性试验，r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA对139份血清样品的检测结果与全病毒间接ELISA的符合率分别为92.8％、77.0％和77.0％；对试验感染ILTV WG株的SPF鸡血清进行检测，r-gD、r-gE和r-gJ间接ELISA都能检测出明显的抗体变化曲线，其中r-gD间接ELISA能够更合理的反映ILTV感染后机体的体液免疫状况。根据试验结果，我们选择r-gD为ILTV野毒感染的血清抗体检测ELISA抗原，并确立了间接ELISA方法。本研究筛选r-gD为ELISA抗原，确立间接ELISA方法，为ILTV野毒感染与弱毒疫苗免疫的血清检测提供基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白gD 糖蛋白gE 糖蛋白gJ 间接ELISA

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传染性喉气管炎病毒形态发生学及其抗原与DNA定位的研究

传染性喉气管炎病毒形态发生学及其抗原与DNA定位的研究

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作者：黄金华中国农业科学研究院

学位级别：硕士

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传染性喉气管炎病毒gC基因在大肠杆菌中的高效表达

传染性喉气管炎病毒gC基因在大肠杆菌中的高效表达

引用

作者：郑玉姝沈阳农业大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎(Infectious Laryngotrcheitis,ILT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病.病鸡以呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物,发病快、死亡率高、产蛋率下降为特征.对于严重感染ILT的急性病例,通过典型的症状和特征性病变不难作出诊断.但... 详细信息

传染性喉气管炎(Infectious Laryngotrcheitis,ILT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病.病鸡以呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物,发病快、死亡率高、产蛋率下降为特征.对于严重感染ILT的急性病例,通过典型的症状和特征性病变不难作出诊断.但近年来,随着国内鸡病疫情的复杂化,出现了大量温和型病例,其症状和病变与其它呼吸道疾病无明显区别,需借助实验室方法才能够确诊.由于活疫苗的普通使用,对新诊断方法的特异性要求已不单只限于区别其它病原,而且要求能区分野毒株和疫苗株.另外,现在已经开始商品化应用的表达传染性喉气管炎病毒gG基因重组鸡痘载体疫苗给本病的防制带来了契机,但是在实际应用过程中需要鉴别诊断方法.所以,研制一种敏感有效的鉴别诊断试剂已成为当务之急.GC是ILTV的一个重要的糖蛋白,它对于病毒在体外的复制是非必需的.根据已经发表的ILTV的gC基因序列,设计了一对特异性引物,然后通过PCR方法扩增了ILTV的gC基因,序列分析结果表明克隆的PCR片段含有1242gp,编码414个氨基酸,其N末端有疏水信号序列,C末端存在跨膜和胞浆部分序列,有5个潜在的N-连接糖基化位点.

关键词：传染性喉气管炎传染性喉气管炎病毒大肠杆菌 gC蛋白基因工程 gB基因

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传染性喉气管炎病毒田间分离株与疫苗株的遗传进化关系分析

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中国家禽 2015年第12期37卷 18-21页

作者：吴天琪程小果郭建友侯玉超陈天骜张小荣扬州大学兽医学院江苏扬州225009

采用PCR方法扩增了22个传染性喉气管炎病毒（ILTV）田间分离株的ICP4基因片段，并与GenBank收录的部分鸡胚源（CEO）弱毒疫苗毒株、细胞培养源（TCO）弱毒疫苗毒株和国内分离强毒株进行了序列比较。结果显示：所有田间分离株和国内近期... 详细信息

采用PCR方法扩增了22个传染性喉气管炎病毒（ILTV）田间分离株的ICP4基因片段，并与GenBank收录的部分鸡胚源（CEO）弱毒疫苗毒株、细胞培养源（TCO）弱毒疫苗毒株和国内分离强毒株进行了序列比较。结果显示：所有田间分离株和国内近期分离的LJS09毒株所测定，C刚基因片段均为676bp；与国内早期分离的王岗（wG）株7LTCO疫苗株相比，田间分离株和CEO疫苗株在ICP4基因的272～283nt部位均存在12个碱基的缺失；遗传进化树显示，田间分离株与CEO疫苗株的距离较近，处于同一个大分支上，而与TCO疫苗株及WG株的距离相对较远，处于不同分支上。上述结果表明，我国ILTV田间分离株的遗传特性与CEO疫苗株接近。

关键词：传染性喉气管炎病毒分离株疫苗株 ICP4基因

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传染性喉气管炎病毒内蒙98a株TK基因的克隆、序列分析及核酸探针的研究

传染性喉气管炎病毒内蒙98a株TK基因的克隆、序列分析及核酸探针...

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作者：田双喜内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本研究采用鸡胚绒毛尿囊膜接种培养的方法，对ILTV-NM98a株和ILTV-王岗株进行增殖。根据已发表的ILTV TK基因的核苷酸序列设计一对PCR引物，以增殖的两株ILTV的DNA为模板，分别对它们的TK基因进行PCR扩增。将回收的PCR产物连接到适当的... 详细信息

本研究采用鸡胚绒毛尿囊膜接种培养的方法，对ILTV-NM98a株和ILTV-王岗株进行增殖。根据已发表的ILTV TK基因的核苷酸序列设计一对PCR引物，以增殖的两株ILTV的DNA为模板，分别对它们的TK基因进行PCR扩增。将回收的PCR产物连接到适当的质粒载体上，转化感受态大肠杆菌，通过筛选对ILTV TK基因的阳性克隆进行扩增培养。利用适当的限制性内切酶回收TK基因片段，并用地高辛进行标记，制备成核酸探针。本研究中首次对ILTV-NM98a株的TK基因进行了克隆和序列分析，结果表明：ILTV-NM98a株TK基因的核苷酸序列与已发表的ILTV TK基因的核苷酸序列具有高度的同源性，两者之间仅相差4个核苷酸，同源性高达99.7％，从而证实了ILTV TK基因是高度保守的，为ILTV TK基因核酸探针的制备提供了有力的依据。采用斑点杂交的方法，对ILTV TK基因核酸探针进行特异性和敏感性检测。结果表明：该种核酸探针具有高度的特异性，它仅与ILTV的DNA呈现阳性反应，而与新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒的核酸等均呈阴性反应。该种探针具有高度的敏感性，能够检测到20pg的ILTV的DNA。

关键词：传染性喉气管炎病毒 TK基因 PCR 克隆核酸探针序列分析

来源：评论

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传染性喉气管炎病毒gB基因片段的高效表达及tgB-ELISA方法的建立

传染性喉气管炎病毒gB基因片段的高效表达及tgB-ELISA方法的建立

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作者：张晶内蒙古农业大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis，ILT）是鸡的一种病毒性呼吸道传染病，可引起鸡死亡或者产蛋下降而造成生产的严重损失。对传染性喉气管炎病毒（ILTV）的gＢ蛋白进行抗原性分析，设计引物扩增免疫原性较强片段，并在片... 详细信息

传染性喉气管炎（Infectious Laryngotracheitis，ILT）是鸡的一种病毒性呼吸道传染病，可引起鸡死亡或者产蛋下降而造成生产的严重损失。对传染性喉气管炎病毒（ILTV）的gＢ蛋白进行抗原性分析，设计引物扩增免疫原性较强片段，并在片段上引入EcoRI、SalI酶切位点。将目的片段分别插入表达载体pET30a(+)后，得到重组表达质粒pET-tgB,再将其转化大肠杆菌BL21中，经过IPTG诱导后分子量约为37ku的带有6个His标签的融合蛋白His-tgB得到了高水平的表达,薄层扫描确定融合蛋白His-tgB的表达量约为菌体蛋白的40.6%,Western blotting检测表明，His-tgB具有免疫学反应性。用纯化后的His-tgB蛋白免疫4月龄健康新西兰兔，制备了多克隆血清。对重组蛋白His-tgB过柱纯化后，作为抗原包被聚苯乙烯微量反应板，初步建立了ILTV抗体的间接ELISA检测法，其抗原最适包被量为5μl/ml。血清最适工作浓度为1:100。在最适工作条件下检测90份SPF鸡血清，统计学分析后确定本试验的判定标准为OD值≥0.15时，即判定为阳性。用该方法检测SPF鸡血清及其它鸡疫病阳性血清均为阴性。用该方法对传染性喉气管炎全病毒处理的阳性血清在1∶100稀释时，测定OD值下降了47.2%；而且，对其他疾病阳性血清的检测全部为阴性，证明该方法与其他疾病血清没有交叉反应性。该方法与ILTV全病毒抗原ELISA共同检测已知样品，其结果显示二者的符合率可达99.6%。目前，我们对400多份临床样品进行了检测，结果表明该方法可以检测免疫后的抗体变化曲线，因而可以用于ILTV感染的诊断和疫苗免疫后的抗体监测。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gB基因原核表达 tgB-ELISA

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传染性喉气管炎病毒(ILTV)中国王岗株gB基因的克隆、鉴定与表达

传染性喉气管炎病毒(ILTV)中国王岗株gB基因的克隆、鉴定与表达

引用

作者：张伟华哈尔滨医科大学

学位级别：硕士

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表达鸡新城疫病毒F、HN基因和传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其特性研究

引用

生物工程学报 2006年第6期22卷 931-939页

作者：孙惠玲王云峰苗得园张培君智海东徐灵龙王玫童光志汪明中国农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 北京市农业科学院畜牧兽医研究所北京100094 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室北京市农业科学院畜牧兽医研究所

利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌... 详细信息

利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒,称为rFPV-F/HN/gB/LacZ。经PCR方法证明rFPV-F/HN/gB/LacZ基因组中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因;间接免疫荧光试验和Western-blot试验表明NDV的F、HN蛋白和ILTVgB蛋白在rFPV-F/HN/gB/LacZ感染的CEF细胞中获得表达。与亲本毒相比,重组病毒在病毒的复制和致鸡胚成纤维细胞的病变方面无显著不同。这证明了在鸡痘病毒载体的一个复制非必需区可以同时插入多个禽类病原的多个外源基因,为制备多价基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：重组鸡痘病毒新城疫病毒传染性喉气管炎病毒 F基因 HN基因 gB基因

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