检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：胥利中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)是危害养禽业发展的主要禽传染病病原之一。ILTV在上呼吸道急性感染后于三叉神经节建立潜伏感染,目前尚无有效的治疗方法将其从宿主体内彻底清除。当宿主免疫力低下时,... 详细信息

鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)是危害养禽业发展的主要禽传染病病原之一。ILTV在上呼吸道急性感染后于三叉神经节建立潜伏感染,目前尚无有效的治疗方法将其从宿主体内彻底清除。当宿主免疫力低下时,潜伏感染的病毒被激活,造成传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)疫情反复暴发。研究ILTV与宿主互作机制,有望建立不依赖于宿主免疫应答的治疗方法,为现有ILTV防控体系提供补充。P53是一种众所周知的肿瘤抑制因子,前期研究发现宿主p53是ILTV感染的关键调控因子,但具体机制不清楚。所以本研究详细探讨宿主p53对ILTV基因转录、基因组复制及其病毒颗粒形成各阶段的影响,并探究其机制。本研究以对ILTV感染敏感的鸡肝癌细胞系(LMH)为实验模型,设计并合成3对靶向鸡p53m RNA不同位点的si RNAs(sip53),将其转染到LMH细胞中,RT-q PCR和蛋白印迹检测显示所有si RNAs均有效降低了细胞中p53转录和蛋白表达水平。应用RT-q PCR对5个ILTV基因转录各阶段代表性基因的转录水平进行了检测,以此探究p53对鸡传染性喉气管炎病毒基因转录的影响,结果显示,这些病毒基因的转录均被p53敲低所显著抑制。通过应用p53抑制剂PFT-α进一步检测p53转录活性抑制对这些病毒基因转录水平的影响,结果显示PFT-α同样显著抑制上述基因的转录。又采用ILTV特异性RT-q PCR、TCID和噬斑试验检测宿主p53对病毒复制的影响,结果显示p53被si RNAs敲低或者被PFT-α抑制后,ILTV的基因组水平和感染性病毒粒子的形成均被显著抑制。上述结果说明p53对ILTV基因转录、复制和病毒颗粒的形成均有调控作用。本研究提取PFT-α或DMSO处理后ILTV感染细胞的RNA进行测序,进行全基因组转录谱分析来阐明p53抗病毒作用的分子机制。结合生物信息学分析,发现差异表达基因主要富集在代谢途径。然后,研究进一步对与鸡p53有结合位点的差异表达基因进行转录谱分析,探讨了PFT-α和宿主p53对ILTV感染影响之间的潜在联系,结果显示PFT-α处理的感染细胞中被广泛抑制的这些基因富集的通路也主要是代谢途径,尤其是核苷酸代谢、嘧啶代谢和嘌呤代谢。这表明代谢途径在p53抗病毒功能中起着重要作用。所以接下来进行了代谢组动力学分析,通过使用液相色谱-质谱(LC-MS)的非靶向代谢组学分析,结果表明核苷酸代谢和ATP合成是p53影响LMH细胞中ILTV复制的关键靶点。我们结合代谢组和转录组数据分析来筛选关键靶点的p53直接靶基因,筛选出18个假定的p53直接靶基因。从18个基因中随机选择8个基因进行Ch IP-q PCR和RT-q PCR验证,结果显示这些基因均被成功鉴定为p53直接靶基因。本研究结果首次揭示了p53调控ILTV感染的机制,同时也扩大了我们对核苷酸代谢和ATP合成相关的鸡p53靶基因的认识。

关键词：传染性喉气管炎病毒 P53 病毒复制核苷酸代谢 ATP合成

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传染性喉气管炎病毒LAMP检测试剂盒

传染性喉气管炎病毒LAMP检测试剂盒

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作者：于吉锋谢晶曹冶廖党金林毅叶勇刚李兴玉潘梦魏勇戴卓建康润敏 610066 四川省成都市锦江区牛沙路7号

本实用新型涉及试剂管存储设备领域，尤其是传染性喉气管炎病毒LAMP检测试剂盒，该试剂盒包括盒体、盒盖和试剂管插板，盒体与盒盖铰连接，试剂管插板置于盒体内，滑板上设有卡槽，试剂管插板通过嵌入卡槽内与滑板固定连接，滑板与盒体... 详细信息

标准号: CN207725914U

本实用新型涉及试剂管存储设备领域，尤其是传染性喉气管炎病毒LAMP检测试剂盒，该试剂盒包括盒体、盒盖和试剂管插板，盒体与盒盖铰连接，试剂管插板置于盒体内，滑板上设有卡槽，试剂管插板通过嵌入卡槽内与滑板固定连接，滑板与盒体滑动连接，盒体内转动连接有齿轮，齿轮与转把相连，转把位于盒体外，滑板侧端设有与齿轮的外齿相配合的齿牙，盒盖内固定连接有防护层，盒体侧端设有卡位装置，卡位装置置于齿轮上相邻齿牙之间的凹槽内。本实用新型提供了一种传染性喉气管炎病毒LAMP检测试剂盒，通过可以调节高度的试剂管插板来保证不同尺寸的试剂管能够与防护层相贴合，从而增加了防护性。

关键词：试剂管盒体滑板齿轮插板盒盖传染性喉气管炎病毒本实用新型卡位装置防护层侧端转把体内存储设备滑动连接嵌入卡槽相邻齿牙转动连接防护性内固定试剂盒齿牙卡槽贴合外齿配合保证

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株gE基因的克隆及ILTV gI-gE基因的PCR-RFLP分析

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株gE基因的克隆及ILTV gI-gE基因...

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作者：何召庆中国农业科学研究院

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒引起的鸡的上呼吸道传染病,对养鸡业的危害十分严重.目前用于预防接种的弱毒疫苗毒力普遍偏强,限制了它们的应用.为了研究ILTV的毒力,并构建基因工程缺失标记疫苗,该研究完成了对ILTV王岗... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒引起的鸡的上呼吸道传染病,对养鸡业的危害十分严重.目前用于预防接种的弱毒疫苗毒力普遍偏强,限制了它们的应用.为了研究ILTV的毒力,并构建基因工程缺失标记疫苗,该研究完成了对ILTV王岗株gE基因的克隆,并对八株ILTV的毒力相关基因gI-gE进行了PCR-RFLP分析.

关键词：传染性喉气管炎病毒毒力 PCR-RELP gE基因 gI-gE基因鸡

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鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及初步应用

鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及初步应用

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作者：杨济胜扬州大学

学位级别：硕士

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不同新城疫骨架表达传染性喉气管炎病毒gB蛋白重组病毒的构建及其免疫效力评估

不同新城疫骨架表达传染性喉气管炎病毒gB蛋白重组病毒的构建及其...

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作者：王梓晨武汉轻工大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)的病原是传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis Virus,ILTV),主要导致呼吸困难、伸颈咳血、湿啰音、产蛋率下降甚至死亡。目前疫苗接种是防控该病的主要措施。为解决商品... 详细信息

传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis,ILT)的病原是传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis Virus,ILTV),主要导致呼吸困难、伸颈咳血、湿啰音、产蛋率下降甚至死亡。目前疫苗接种是防控该病的主要措施。为解决商品化活疫苗副作用大、容易毒力反强等问题,载体疫苗被广泛研发,如:新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)载体。NDV拥有多种基因型的载体,利用不同载体获得的重组病毒间的免疫效力具有差异,本研究以NDV不同毒株为载体构建表达ILTVWG株gB蛋白的重组病毒,测定了其生物学特性,通过动物实验评估其免疫保护效果以及作为疫苗使用的效果,筛选出免疫保护效力最佳的重组病毒疫苗候选株。主要研究内容及结果如下: 1.不同NDV载体重组病毒的构建拯救及其生物学特性检测利用LaSota、Mukteswar(简称M)的反向遗传操作系统,将ILTVWG株的gB基因插入到NDV的P和M基因之间,拯救获得两株重组病毒rLS-gB和rM-gB。间接免疫荧光(Immunofluorescent Assay,IFA)和蛋白免疫印迹(Western-blot,WB)结果显示两株重组病毒感染BHK-21细胞均能成功表达gB蛋白。rLS-gB、rM-gB和rTS-gB(本实验室先前以NDV耐热毒株TS09-C株为载体获得)的生物学特性、热稳定试验以及生长曲线测定结果显示不同重组病毒均与亲本株保持相似特性。其中rTS-gB耐热特性最好,在42℃ 7d、56℃ 15min处理后仍具有一定血凝活性。 ***-gB、rLS-gB、rM-gB在SPF鸡上的免疫保护实验为了评估比较三株重组病毒rTS-gB、rLS-gB、rM-gB的免疫原性,将3株重组病毒分别滴鼻点眼免疫7日龄SPF鸡,连续3周采集血清评估NDV抗体滴度和ILTV的抗体水平。结果显示,3种重组病毒rTS-gB、rLS-gB、rM-gB免疫后均可产生NDV抗体以及ILTV抗体,rM-gB组的NDV抗体最高,rTS-gB组的ILTV抗体最高。在免疫后21天,以ILTV WG株进行攻毒,攻毒后第3、5、7天采集拭子检测排毒,每天观察鸡群发病症状并打分、称重,在攻毒后第4天取喉头气管观察病变并进行组织切片评估。结果显示,rTS-gB、rLS-gB、rM-gB免疫后对ILTV强毒株的攻击均能提供一定保护,在攻毒后第3天,rTS-gB组比rLS-gB、rM-gB组的喉气管排毒减少约10倍,并且其喉头气管病理变化上无明显出血点,病理切片上纤毛腺体完整,体重变化和评分的结果与商品活疫苗免疫组相似。所以rTS-gB的免疫保护效果最佳,可作为疫苗候选株。 ***-gB在商品鸡上的免疫保护实验确定rTS-gB为免疫保护效力最佳的重组病毒后,继续在存有母源抗体的商品鸡上评估了其保护效力。将rTS-gB滴鼻点眼免疫1日龄商品鸡,连续四周每周采集血清,评估NDV和ILTV的抗体水平。结果显示,在母源抗体的存在下,rTS-gB组和PBS组的NDV和ILTV抗体水平有显著性差异。在免疫21天后,以ILTV WG株进行攻毒,攻毒后第3、5、7天采集拭子检测排毒,每天观察鸡群发病症状并打分、称重,在攻毒后第4天取喉头气管观察病变并进行组织切片评估。结果显示,在攻毒后第3天rTS-gB组比PBS组的排毒减少10倍以上,并且喉头气管病理变化上无明显出血点,病理切片上纤毛腺体完整,体重变化和评分的结果也显示rTS-gB能够提供保护,所以rTS-gB可作为滴鼻点眼免疫保护商品鸡免受ILTV攻击的疫苗候选株。 ***-gB在商品鸡上雾化免疫保护实验随着养殖场的规模化,免疫方式逐渐向高效便捷化发展,所以继续评估了rTS-gB进行雾化免疫的保护效果。将重组病毒rTS-gB雾化免疫1日龄商品鸡,连续4周每周采集血清且在免疫后8周采集血清,测定NDV抗体滴度和ILTV的抗体水平。结果显示,NDV和ILTV抗体水平与滴鼻点眼免疫商品鸡相似,重组病毒rTS-gB雾化免疫抗体水平均显著高于PBS组抗体水平。在免疫21天后,以ILTVWG株进行攻毒,攻毒后每天观察鸡群发病症状,在攻毒后第4天取喉头气管观察病变并进行组织切片评估。结果显示,攻毒后rTS-gB组比PBS组的发病率少1倍左右,其喉头气管病理变化上无明显出血点,病理切片上纤毛腺体完整。所以rTS-gB可作为通过雾化免疫的疫苗候选株。本研究首先构建拯救获得rLS-gB和rM-gB,与本实验室保存的rTS-gB一起测定其生物学特性,通过在SPF鸡上的免疫保护实验筛选出了保护效果最佳的重组病毒rTS-gB,通过在商品鸡上的滴鼻点眼免疫保护实验确定rTS-gB在商品鸡上

关键词：传染性喉气管炎病毒新城疫病毒重组载体疫苗免疫保护实验

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禽传染性喉气管炎病毒gJ蛋白的原核表达及单克隆抗体的研制与标准抗原抗体的制备

禽传染性喉气管炎病毒gJ蛋白的原核表达及单克隆抗体的研制与标准...

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作者：张美红扬州大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由疱疹病毒科传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis virus, ILTV)引起的鸡的一种呼吸道传染病。主要临床症状为咳出含有血液的渗出物并伴发高死亡率,引起流鼻涕、结膜... 详细信息

传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由疱疹病毒科传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis virus, ILTV)引起的鸡的一种呼吸道传染病。主要临床症状为咳出含有血液的渗出物并伴发高死亡率,引起流鼻涕、结膜炎、体重和产蛋下降。本病自1925年首次报道以来,现已遍布各养禽国家和地区,我国主要呈地方流行。本研究利用原核表达系统成功表达重组蛋白His-gJ,并研制了3株针对ILTV gJ蛋白的单克隆抗体。同时以ILTV王岗(WG)株免疫SPF鸡制得多抗血清,对ILTV抗原和抗血清进行一系列标定,获得了ILTV的标准抗原和标准血清,为ILTV的诊断和防治提供了有效的方法和材料。1、抗禽传染性喉气管炎病毒酣蛋白原核表达与单克隆抗体的研制根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒gJ全基因序列设计gJ编码区(445-745位氨基酸)的特异性引物,上下游引物分别引入酶切位点BamHI和Xho I,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆并连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-gJ并转化到BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为55KD的重组蛋白His-gJ。并利用亲和柱对重组蛋白His-gJ进行纯化,SDS-PAGE和Western-Blot结果表明,融合蛋白His-gJ具有良好的抗原性；利用获得的ILTV重组蛋白His-gJ为抗原,建立检测ILTV抗体的ELISA方法。以ILTV WG株全病毒作为免疫原,按照常规程序免疫6-8周龄Balb/c小鼠,取脾细胞与S/P20细胞融合,利用重组蛋白His-gJ进行间接酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选阳性细胞株,最终得到3株分泌针对ILTV gJ蛋白单克隆抗体的阳性细胞株,分别命名为：ILTV-gJ-4C6、ILTV-gJ-5B8、ILTV-gJ-6B6。Western-Blot与间接免疫荧光(IFA)鉴定结果表明,所得三株单抗均能与ILTV WG株天然病毒发生特异性反应。3株单克隆抗体的抗体亚类均为IgG1,Kappa链。利用亲和层系技术分别纯化了3株单抗腹水,获得了高纯度的单克隆抗体,为今后建立ILTV检测技术提供了良好的试剂材料。2、禽传染性喉气管炎病毒标准抗原及血清的制备本研究用SPF鸡胚扩增禽传染性喉气管炎病毒WG株,对收集的传染性喉气管炎病毒进行了病毒含量测定分析,结果该材料中病毒为10-49ELD50/0.2mL。血凝试验(HA)、聚合酶链式反应(PCR)及ELISA实验技术进一步鉴定了该病毒无传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、小鹅瘟病毒(GPV)、马立克氏病病毒(MDV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、鸡产蛋下降综合症(EDS-76)、禽白血病病毒(ALV)等外源性病毒污染,无菌检验也证明该病毒材料无菌生长、无支原体污染。将该ILTV全病毒抗原经一系列标定,加入1%BSA冻存保护剂,分装,冻干,并进行物理性状和无菌检验及支原体污染检验,最后获得了ILTV的标准抗原。将ILTV WG株多次免疫SPF鸡,制得了抗ILTV多抗血清,用重组融合蛋白酣进行间接ELISA检测,结果表明该血清的ELISA效价为1：1200。利用HI、IFA实验技术鉴定该多抗血清抗体,证明该血清与上述其他病毒多抗血清无交叉反应性,仅与ILTV反应,特异性良好；无菌检验、支原体检验合格。经一系列标定后,在血清中加入万分之一的硫柳汞防腐剂,分装,冻干,并进行物理性状的检查以及均一性、稳定性、长期保存性的鉴定,最终获得了高质量的标准血清。通过标定阳性及弱阳性血清,对目前市场上常用的商品化检测ILTV抗体的ELISA试剂盒可靠性进行了测定,证明所试两种商品化ELISA试剂盒可用于临床样品检测。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gJ蛋白单克隆抗体标准抗原标准血清 ELISA

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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的研究

鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的研究

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作者：张红梅山东师范大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种α-疱疹病毒,它可以引起鸡急性上呼吸道感染,具有很高的传染性.用PCR方法检测感染鸡的喉气管组织并与病毒分离(VI)方法进行比较.PCR方法和病毒分离方法均能在人工感染病毒2-8天后检出ILTV,但是VI必须要5... 详细信息

传染性喉气管炎病毒(ILTV)是一种α-疱疹病毒,它可以引起鸡急性上呼吸道感染,具有很高的传染性.用PCR方法检测感染鸡的喉气管组织并与病毒分离(VI)方法进行比较.PCR方法和病毒分离方法均能在人工感染病毒2-8天后检出ILTV,但是VI必须要5天以上的时间,而PCR仅需几个小时即可以得到结果;对12份临床样品的检测结果表明:PCR可检出8份阳性,而病毒分离方法只能检出4份阳性.可见PCR方法较病毒分离方法敏感、准确、快速.因此,PCR是诊断ILTV感染有效的检测系统.研究小组以人工感染6天后所取的喉气管组织、肝、肺、脾和肾的DNA为模板进行PCR扩增,对肝、肺、脾和肾的扩增结果为阴性,表明这些器官中不含有ILTV,由此研究小组推断喉和气管是ILTV的主要繁殖场所.

关键词：传染性喉气管炎病毒 PCR诊断病毒分离

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表达传染性喉气管炎病毒gB、gD基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗毒株构建及其免疫效力试验

表达传染性喉气管炎病毒gB、gD基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗毒株构...

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作者：孙燕扬州大学

学位级别：硕士

传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis, ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus, ILTV)所引起的一种鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病,给世界范围内的养鸡业造成了巨大经济损失。目前,国内外预防本... 详细信息

传染性喉气管炎(Infectious laryngotracheitis, ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus, ILTV)所引起的一种鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病,给世界范围内的养鸡业造成了巨大经济损失。目前,国内外预防本病主要依靠弱毒疫苗,但弱毒疫苗的毒力偏强,接种后往往出现不良反应；另外,由于ILTV可以潜伏感染,弱毒疫苗在鸡群传播过程中会发生毒力返强。对国内部分地区ILT的流行病学研究发现,ILT的暴发可能与弱毒疫苗有关。因此,研制安全有效的基因工程疫苗已成为人们的共识。本研究以ILTV Anhui-2011株为模板扩增gB、gD基因,然后分别将其克隆至含有火鸡疱疹病毒(HVT) FC-126疫苗毒株基因组US2序列的转移载体(pUp-Down)中,构建转移质粒pUp-gB-Down、pUp-gD-Down。随后将含有LTR启动子和EGFP报告基因的表达盒分别克隆至上述转移质粒中,构建HWT转移载体pHVT-gB、pHVT-gD。采用磷酸钙转染法将转移载体与HVT基因组共转染CEF次代细胞,获得带有绿色荧光标记的重组病毒。提取重组病毒基因组,用Cre重组酶敲除EGFP报告基因,通过再次转染CEF次代细胞,获得仅带有LTR启动子和目的基因的重组病毒rHVT-gB、rHVT-gD。通过PCR和Western-Blot试验对重组病毒进行鉴定,结果表明目的基因gB、gD成功插入HVT基因组中,并能正确表达gB、gD蛋白。重组病毒对ILT的免疫保护试验：将90只1日龄SPF鸡随机分为5组,第1、2组为重组病毒免疫组,第3组为攻毒对照组,第4组为弱毒活疫苗对照组,第5组为空白对照组。弱毒疫苗免疫3周后,除空白对照组,各试验组均气管内接种105EID50ILTV强毒,继续观察10天。统计分析各组临床症状、攻毒前后鸡体增重、发病率死亡率、抗体消长及病理组织学变化。结果显示：攻毒后第二天即有鸡发病,临床症状高峰期出现于攻毒后第四天。重组病毒rHVT-gB的发病率为20%,死亡率为5%,免疫保护高于弱毒苗组,差异显著(p<0.05)；重组病毒rHVT-gD的发病率为30%,死亡率为15%,免疫保护高于弱毒苗组,但差异不显著(p>0.05)。结果表明,1日龄SPF鸡接种重组病毒后能建立起针对ILT强毒株的有效保护,且rHVT-gB明显比rHVT-gD组免疫保护效果好。重组病毒对MD的免疫保护试验：将60只1日龄SPF鸡随机分为4组,第1、2组分别为重组病毒免疫组,第3组为FC-126疫苗组,第4组为攻毒对照组。免疫1周后,各试验组均腹腔接种5000 PFU MDV超强毒株RB1B。攻毒后每天观察鸡群至90日龄。结果显示,重组病毒与亲本毒株FC-126均可对MD超强毒株的攻击产生有效免疫保护,说明外源基因的插入并不影响亲本毒株的免疫保护效力。

关键词：传染性喉气管炎病毒重组病毒火鸡疱疹病毒免疫保护效力

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鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与鉴定

引用

中国兽医科技 2000年第11期30卷 3-5页

作者：任红梅钱凤琴李爱芹庄文忠山东省农业科学院生命科学研究中心山东济南250100

根据鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)TK基因的核苷酸序列 ,设计并合成了 1对引物 ,利用该对引物扩增出了长180 0bp的TK基因核苷酸片段。将该基因克隆入PGEM T载体后 ,对其进行酶切分析和序列测定。结果表明 ,扩增片段与发表的ILTV的TK基因... 详细信息

根据鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)TK基因的核苷酸序列 ,设计并合成了 1对引物 ,利用该对引物扩增出了长180 0bp的TK基因核苷酸片段。将该基因克隆入PGEM T载体后 ,对其进行酶切分析和序列测定。结果表明 ,扩增片段与发表的ILTV的TK基因核苷酸序列一致。以ILTV、正常绒毛尿囊膜组织、鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)、鸡新城疫病毒 (NDV)感染鸡胚的尿囊膜DNA为模板进行PCR反应 ,结果该PCR反应体系对ILTV是特异的。敏感性试验表明 ,该PCR系统能检出 5 0 pg的ILTV感染尿囊膜的DNA。

关键词：传染性喉气管炎病毒 TK基因鸡克隆鉴定

来源：评论

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宿主SRC在鸡传染性喉气管炎病毒感染中作用的研究

宿主SRC在鸡传染性喉气管炎病毒感染中作用的研究

引用

作者：王凤杰中国农业科学院

学位级别：硕士

鸡传染性喉气管炎(AILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染引发的一种鸡的呼吸系统疾病。ILTV属于疱疹病毒科(Herpesviridae family)传喉炎病毒属(Iltovirus genus)。不同病毒株依据其毒力不同可以造成鸡不同程度的上呼吸道疾病,对世界... 详细信息

鸡传染性喉气管炎(AILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染引发的一种鸡的呼吸系统疾病。ILTV属于疱疹病毒科(Herpesviridae family)传喉炎病毒属(Iltovirus genus)。不同病毒株依据其毒力不同可以造成鸡不同程度的上呼吸道疾病,对世界养禽业造成巨大经济损失。当前,AILT防治主要依赖于疫苗接种引发的机体免疫应答发挥作用。然而,由于免疫接种不能清除宿主细胞中潜伏感染的病毒和抑制病毒在细胞内的复制,难以长效防控疫情。因此,探索新策略对AILT的防控具有重要意义。本研究用感染了ILTV LJS09毒株的LMH细胞作为体外实验的模型,探讨了宿主细胞应答ILTV感染的分子机制。为了更好的阐述病毒感染宿主细胞的相关分子事件,本试验首先通过ILTV特异性实时定量PCR和TCID50等方法对感染LMH细胞过程中ILTV LJS09的生物学特性进行了测定。然后,通过基因芯片技术在全基因组范围内检测了宿主基因的转录水平,并结合生物信息学分析预测宿主SRC在LMH细胞应答ILTV感染的过程中可能发挥重要作用。SRC是第一个被鉴定的原癌基因,可以参与真核生物细胞粘附、增殖、骨架重建、细胞分裂及凋亡等多种生命活动。蛋白免疫印迹结果显示,在ILTV感染后第二天LMH细胞中SRC的磷酸化作用增强,说明ILTV感染可以活化宿主细胞SRC。而LMH细胞的生长曲线显示在病毒感染后第三天,病毒感染组的细胞数量大大减少。鉴于SRC被广泛报道可以影响细胞增殖,我们用流式细胞术对细胞周期做了分析,发现随着感染时间的增加,病毒感染使处于G1期的宿主细胞显著减少,凋亡细胞不断增加,然而进入S/M期和G2期的细胞比例并没有降低。为了深入了解SRC在ILTV感染中的具体作用,本研究应用小分子抑制剂和特异性靶向鸡SRC基因的小干扰片段对SRC在LMH细胞应答ILTV侵染过程中的生物学功能进行了检测。ILTV特异性实时定量PCR检测显示,SRC被抑制后LMH细胞中的病毒含量显著降低。流式细胞术结果表明,SRC抑制可以促进病毒介导的细胞死亡。因此,SRC对维持病毒的增殖是不可或缺的,但ILTV介导的细胞死亡并不依赖SRC。以上结果提示,SRC在ILTV感染的细胞中是病毒毒力和复制的关键决定因素,ILTV感染后,宿主细胞通过SRC提高病毒诱发细胞死亡的阈值进而延缓宿主细胞的死亡。通过检测SRC特异性小分子抑制剂处理的SPF鸡胚接种ILTV后的死亡情况和尿囊膜及尿囊液中的病毒含量,我们在鸡胚试验中也证实了SRC对ILTV感染的影响。为了探究SRC影响ILTV感染LMH细胞的生物学机制,我们进一步分析了转录组学的数据并构建了表达差异基因的蛋白质互作网络。分析结果预测局部粘着斑激酶(FAK)可能也参与了SRC调节LITV感染的过程。应用小分子抑制剂和RNA干扰等功能学研究,我们在细胞和鸡胚中同时证实了这一推论,并进一步发现SRC与FAK间存在蛋白磷酸化的正反馈调节作用。随后的功能学研究显示这一过程对于SRC调节ILTV感染至关重要。本研究初步探讨了宿主细胞应答ILTV感染的分子机制,拓展了当前对于ILTV与宿主互作分子机制的认知,也为建立更为安全、长效的AILT防治方法提供一定的理论支持。

关键词：传染性喉气管炎病毒 SRC FAK 病毒与宿主互作鸡

来源：评论

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