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传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达

中国兽医科学 2009年第1期39卷 35-40页

作者：王衡李广兴刘博奇任晓峰东北农业大学动物医学学院病理解剖教研室黑龙江哈尔滨150030

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体... 详细信息

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测。结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChIL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物。

关键词：传染性支气管炎病毒 S基因鸡IL-15基因瞬时表达融合基因

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传染性支气管炎病毒分离株的生物学特性鉴定及其遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 89-92页

作者：吴培培唐应华刘文博陈义平张小荣吴艳涛刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032

通过鸡胚矮小试验、鸡胚气管环组织培养试验、干扰新城疫病毒复制试验和动物回归试验，将2006-2007年在江苏省分离的7株鸡传染性支气管炎病毒（IBV）鉴定为嗜肾型毒株。采用RT-PCR扩增IBV分离株的S1基因，并进行克隆和序列分析。结果显... 详细信息

通过鸡胚矮小试验、鸡胚气管环组织培养试验、干扰新城疫病毒复制试验和动物回归试验，将2006-2007年在江苏省分离的7株鸡传染性支气管炎病毒（IBV）鉴定为嗜肾型毒株。采用RT-PCR扩增IBV分离株的S1基因，并进行克隆和序列分析。结果显示7个IBV分离株S1基因的核苷酸同源性为94．6％-99．4％，处于同一个群，分别属于3个亚群。这些毒株与大多数国内近年分离株的同源性较高，而与Massachusetts、T、4／91和793B血清型毒株（包括H120和H52疫苗毒株）的同源性较低。IBV流行毒株和疫苗毒株的差异是造成免疫鸡群发生传染性支气管炎的重要原因。

关键词：传染性支气管炎病毒生物学特性 S1基因 RT—PCR

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传染性支气管炎病毒S1基因的遗传多样性

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华北农学报 2010年第5期25卷 61-67页

作者：曲新泽袁小远王友令徐怀英秦卓明姜世金山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东农业科学院家禽研究所山东济南250023

为全面分析传染性支气管炎(IBV)流行株S1基因的遗传变异,结合1992-2008年间从山东乃至全国分离鉴定的IBV毒株,在进行抗原性研究的基础上,对17株IBV毒株分别进行了S1基因的克隆测序,并与GenBank中具有代表性的参考株进行同源比较,同时对... 详细信息

为全面分析传染性支气管炎(IBV)流行株S1基因的遗传变异,结合1992-2008年间从山东乃至全国分离鉴定的IBV毒株,在进行抗原性研究的基础上,对17株IBV毒株分别进行了S1基因的克隆测序,并与GenBank中具有代表性的参考株进行同源比较,同时对其高变区HVRⅠ氨基酸基序进行分析。根据系统发育树,结合病毒发生的年代、地域和临床病理,将58株IBV国内外毒株初步分为6个基因型,其中,国内流行株主要涵盖5种基因型,大部分流行株属于基因Ⅴ型(北方株为主)和基因Ⅳ型(南方株为主),两种类型毒株相互交织,呈现复杂的流行形式。对IBV高变区HVRⅠ氨基酸基序分析表明,多数毒株存在不同程度的点突变,尚有4株分离株在33位和34位之间有氨基酸残基的插入。S1基因的遗传变异具有多样性,与常规疫苗株和国外参考株相比,无论是核苷酸还是氨基酸均发生了较大的变异。不同IBV毒株S1基因片段与其全长之间遗传变异高度相关(r=0.968),但IBV流行株与疫苗株的遗传距离愈来愈远,彰显出IBV流行株在H120的免疫压力下,已经发生了较大程度的变异。

关键词：传染性支气管炎病毒遗传变异 S1基因基因分型

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传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2016年第1期46卷 52-57页

作者：李乐超石婷婷郎咸勇牟小东王丹丹周继勇廖敏浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发... 详细信息

以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发生良好反应。用纯化的重组nsp15蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。经过3轮有限稀释和筛选阳性克隆,最终获得3株稳定分泌nsp15蛋白抗体的细胞株,分别为1A6、2B6和4D7。Western-blot分析显示,3株单克隆抗体都与nsp15蛋白有很好的特异性反应。IFA检测显示,nsp15单克隆抗体与IBV感染的细胞和nsp15基因转染的细胞均出现明显的反应。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎流行病学的监测、鉴别诊断及对其蛋白功能的进一步研究奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒非结构蛋白15 单克隆抗体

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传染性支气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立

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食品科学 2012年第24期33卷 219-221页

作者：杜雄伟李叶张雪大连民族学院辽宁大连116600 辽宁出入境检验检疫局辽宁大连116001

建立特异、敏感、快速的传染性支气管炎病毒(IBV)实时荧光定量PCR检测方法。针对IBV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性的探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明所建立的IBV实时... 详细信息

建立特异、敏感、快速的传染性支气管炎病毒(IBV)实时荧光定量PCR检测方法。针对IBV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性的探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明所建立的IBV实时荧光定量PCR检测方法,引物和探针特异性良好,组间组内重复性良好,检出IBV DNA最小拷贝数为5拷贝。因此,本研究建立IBV特异、敏感、快速的实时荧光PCR检测方法,为IBV的诊断奠定基础。

关键词：传染性支气管炎病毒实时荧光PCR

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传染性支气管炎病毒TY1株结构蛋白基因部分片段的表达

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中国兽医科学 2006年第2期36卷 103-106页

作者：贾鸿莲孙效彪杨子森山西省家畜疫病防治站山西太原030024 山西省畜禽繁育工作站山西太原030001

根据已报道的传染性支气管炎病毒S基因序列设计了1对引物,利用从传染性支气管炎病毒TY1株中提取的RNA,经PCR扩增获得了300 bp的产物;序列测定与分析表明,所扩增产物是传染性支气管炎病毒结构蛋白基因的部分片段。将扩增片段插入pET32a... 详细信息

根据已报道的传染性支气管炎病毒S基因序列设计了1对引物,利用从传染性支气管炎病毒TY1株中提取的RNA,经PCR扩增获得了300 bp的产物;序列测定与分析表明,所扩增产物是传染性支气管炎病毒结构蛋白基因的部分片段。将扩增片段插入pET32a构建表达载体,并于大肠埃希氏菌BL21中进行表达;结果表明,该片段在大肠埃希氏菌中成功表达,产物为30 ku、以可溶性形式存在的蛋白。Western-blotting分析表明,该蛋白可与传染性支气管炎病毒TY1株阳性血清发生反应。

关键词：传染性支气管炎病毒结构蛋白基因表达

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传染性支气管炎病毒S1蛋白在Vero细胞的表达与分布

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 437-440页

作者：胡金强蔡月琴李益飞郭军庆孙文博周继勇浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

将传染性支气管炎病毒(IBV)ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组表达质粒pEGFP-ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1-GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细... 详细信息

将传染性支气管炎病毒(IBV)ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组表达质粒pEGFP-ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1-GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细胞化学染色(ICC)结果显示,抗ZJ971 S1D蛋白单克隆抗体和鸡抗IBV ZJ971全病毒血清特异性识别了S1基因转染细胞,表明S1蛋白在Vero细胞中得到有效表达。荧光显微镜观察和ICC均表明,S1表达蛋白主要分布在转染细胞的胞浆内,而胞核中未见分布,提示IBV S1蛋白内可能存在与病毒装配相关的细胞定位信号。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1蛋白 Vero细胞

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传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)基质蛋白、5a、5b蛋白基因的克隆和序列分析

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中国兽医学报 2002年第2期22卷 108-110页

作者：潘杰彦陈德胜戴亚斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列... 详细信息

参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列分析显示 ,M蛋白基因与其他 IBV相应的基因同源性在 90 .33%～ 92 .75 %之间 ,氨基酸序列比较 ,同源性在 89.82 %～ 94.2 5 %之间 ;5 a基因与其他 IBV的基因同源性在 84.34 %～ 87.37%之间 ,氨基酸同源性在 81%～82 %;5 b基因与其他 IBV的基因同源性在 91%～ 92 %之间 ,氨基酸同源性在 93%左右。

关键词：传染性支气管炎病毒腺胃株基质蛋白序列分析 5a蛋白质 5b蛋白质

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传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)S2蛋白基因的序列测定和分析

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病毒学报 2001年第4期17卷 356-359页

作者：潘杰彦陈德胜戴亚斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTA... 详细信息

根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTAR和网上的BLAST软件进行分析 ,结果表明 ,S2基因比S1基因相对来说更保守 ,位于氨基酸第 5 6 0～ 6 0 0位很可能是与囊膜锚着的部位 ,而S2与S1的交界处以HRRRR为特征 ,这不同于常规的RRF/SRR。

关键词：传染性支气管炎病毒腺胃分离株基因序列分析 S2蛋白鸡病毒

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传染性支气管炎病毒RT-PCR方法的建立

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中国兽医学报 2000年第6期20卷 617-618页

作者：陈德胜潘杰彦陈溥言蔡宝祥贾立群南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095 新疆畜牧兽医总站新疆乌鲁木齐830000

传染性支气管炎病毒(IBV)的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白S、膜蛋白M和核蛋白N.S蛋白由 S1和S2 2部分组成,其中S1蛋白的进化最为活跃,是IBV具有众多血清型的基础.S1蛋白的活泼表现源于S1基因容易发生插入、缺失和不同毒株基因间重组.

关键词：传染性支气管炎病毒 RT-PCR S1基因

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