检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王海艳内蒙古农业大学

学位级别：博士

近年来，随着细胞因子基因的克隆及基因工程技术的不断发展，细胞因子作为治疗剂在畜禽养殖业中的广泛应用变得更加可行。在本研究中，我们对重组鸡干扰素-γ（ChIFN-γ）、鸡白细胞介素-18(ChIL-18)和鸡白细胞介素-2(ChIL-2)进行了检... 详细信息

近年来，随着细胞因子基因的克隆及基因工程技术的不断发展，细胞因子作为治疗剂在畜禽养殖业中的广泛应用变得更加可行。在本研究中，我们对重组鸡干扰素-γ（ChIFN-γ）、鸡白细胞介素-18(ChIL-18)和鸡白细胞介素-2(ChIL-2)进行了检测。首先，我们检测了原核表达系统(***)表达的重组ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2的活性，具体方法是：将ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2基因分别亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上，构建真核转移载体pMelBacB-ChIFN-γ、pMelBacB- ChIL-18、pMelBacB-ChIL-2，经限制性内切酶消化、特异引物PCR鉴定和确证性序列测定，证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pMelBacB-ChIFN-γ、pMelBacB- ChIL-18、pMelBacB- ChIL-2质粒分别与杆状病毒DNA（Bac-N-BlueTM DNA）共转染sf9昆虫细胞，经三轮蓝斑筛选，获得了重组杆状病毒。提取病毒DNA经ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2特异引物及重组杆状病毒特异引物PCR鉴定，证明获得了纯化的重组杆状病毒，分别命名为rBaculovirus-ChIFN-γ、rBaculovirus-ChIL-18和 rBaculovirus- ChIL-2。用这些重组病毒接种sf9昆虫细胞，收获接种后不同时间的细胞进行SDS-PAGE。结果表明ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2基因在昆虫细胞中获得了表达，表达的重组蛋白分子量分别为19KDa、23KDa和16KDa。应用在大肠杆菌原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIFN-γ和 ChIL-2及豚鼠抗ChIL-18多克隆抗体进行Western blot分析，一方面，表明本研究真核系统表达了有活性的重组ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2蛋白，另一方面，表明前期原核系统表达的重组ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2蛋白是有活性的蛋白。为了研究ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2在体内的生物学作用,我们还用***系统表达的重组ChIFN-γ、ChIL-18和ChIL-2免疫鸡，在增重试验中，与阴性对照相比，重组ChIFN-γ、ChIL-18能促进生长，增长率最高可达6.1%,并且在传染性支气管炎病毒感染后，重组ChIFN-γ、ChIL-18能减少鸡的体重下降率并迅速恢复体重；在传染性支气管炎病毒感染后，重组ChIFN-γ、ChIL-18能使鸡血清中抗体滴度提高，抗体滴度最高可达1094.9，能够快速清除气管中病毒,还能减轻传染性支气管炎病毒对组织的病理损伤。在本试验中，重组ChIL-2的生物学活性表现得不明显。

关键词：昆虫细胞/杆状病毒重组蛋白重组ChIFN-γ 重组ChIL-18 重组ChIL-2 治疗剂传染性支气管炎病毒

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禽冠状病毒分离株的系统命名法及其种属地位

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国外畜牧学（猪与禽） 2004年第2期24卷 58-63页

作者： DaveCavanagh 莫胜兰刘惠莉覃矜不详英国Compton研究室家畜卫生研究所

目前,还没有针对家鸡(Gallus gallus domesticus)传染性支气管炎病毒(IBV)分离株的统一命名系统.为IBV分离株建立统一的、能反映多方面信息的命名体系是很有用的.此外,由于最近发现从火鸡(Meleagris galloopavo)和雉鸡(Pheasianuscolchi... 详细信息

目前,还没有针对家鸡(Gallus gallus domesticus)传染性支气管炎病毒(IBV)分离株的统一命名系统.为IBV分离株建立统一的、能反映多方面信息的命名体系是很有用的.此外,由于最近发现从火鸡(Meleagris galloopavo)和雉鸡(Pheasianuscolchicus)体内分离到的冠状病毒具有和IBV的非常相似的基因组结构和序列,所以建立一个统一的禽冠状病毒命名系统变得更加重要.至今为止一直没有发现冠状病毒分离株和雉鸡冠状病毒分离株具有独特的遗传特性可将其与IBV明确地区别开来.

关键词：禽冠状病毒分离株系统命名种属地位传染性支气管炎病毒

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冬春季谨防鸡呼吸道病

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兽医导刊 2004年第6期 24-26页

作者：张宏建山东省沂南县畜牧局

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IB-ELISA诊断试剂的研究

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实验动物科学与管理 2004年第3期21卷 20-23页

作者：刘钧陈福勇北京市动物检疫站北京100044 中国农业大学北京100094

目的　为鸡群日常监测传染性支气管炎病毒 (IBV)抗体提供一个方便、特异、快速的检测方法。方法　利用 9日龄SPF鸡胚尿囊腔接种培养IBV ,以及鸡胚成纤维细胞传代培养IBV ,经纯化后 ,测定蛋白含量 ,作为包被抗原 ,利用过碘酸盐法标记兔抗... 详细信息

目的　为鸡群日常监测传染性支气管炎病毒 (IBV)抗体提供一个方便、特异、快速的检测方法。方法　利用 9日龄SPF鸡胚尿囊腔接种培养IBV ,以及鸡胚成纤维细胞传代培养IBV ,经纯化后 ,测定蛋白含量 ,作为包被抗原 ,利用过碘酸盐法标记兔抗鸡IgG作为酶结合物 ,用TMB作为显色剂 ,建立起酶联免疫吸附试验 (ELISA)技术 ,检测血清样品中传染性支气管炎抗体。结果　上述两种方法制备的抗原皆可用于此试验 ,与NDV、MDV、IBDV、AIV、APIV、REV、ILTV、IC、MG、MS等抗血清无交叉反应 ,与IDEXXIB ELISA比较 ,结果吻合较好。结论　本研究制备的IB ELISA诊断试剂。

关键词：传染性支气管炎病毒酶联免疫吸附试验鸡冠状病毒诊断试剂

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传染性支气管炎病毒RT-PCR方法的建立

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中国兽医学报 2000年第6期20卷 617-618页

作者：陈德胜潘杰彦陈溥言蔡宝祥贾立群南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095 新疆畜牧兽医总站新疆乌鲁木齐830000

传染性支气管炎病毒(IBV)的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白S、膜蛋白M和核蛋白N.S蛋白由 S1和S2 2部分组成,其中S1蛋白的进化最为活跃,是IBV具有众多血清型的基础.S1蛋白的活泼表现源于S1基因容易发生插入、缺失和不同毒株基因间重组.

关键词：传染性支气管炎病毒 RT-PCR S1基因

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传染性支气管炎病毒地方分离毒株S1基因的RT-PCR方法研究

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南京农业大学学报 2000年第3期23卷 85-88页

作者：陈德胜潘杰彦贾立群戴亚斌蔡宝祥陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 新疆畜牧兽医总站乌鲁木齐830000

以传染性支气管炎病毒 (IBV)标准毒株M41为材料 ,根据Genbank公开序列自行合成一对特异引物 ,用于扩增IBV的完整S1基因。建立了针对IBV基因组RNA特点的RT PCR方法。对反应体系中的重要反应物Mg2 +、dNTP和引物浓度进行优化 ,确定其浓度... 详细信息

以传染性支气管炎病毒 (IBV)标准毒株M41为材料 ,根据Genbank公开序列自行合成一对特异引物 ,用于扩增IBV的完整S1基因。建立了针对IBV基因组RNA特点的RT PCR方法。对反应体系中的重要反应物Mg2 +、dNTP和引物浓度进行优化 ,确定其浓度值分别为 1 5mmol/L ,2 0 0 μmol/L和 40 μmol/L。使用此反应体系对国内IBV地方分离毒株JS/95 / 0 3 ,SD/ 97/ 0 1等 10多个毒株的S1基因进行扩增 ,均扩增出预期 1 7kb的完整S1基因。

关键词：传染性支气管炎病毒地方分离株 S1基因鸡

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传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因的T/A载体克隆策略

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畜牧与兽医 2000年第5期32卷 1-3页

作者：陈德胜潘杰彦戴亚斌蔡宝祥陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

参考Genbank收录的IBV纤突蛋白 (S1)基因序列 ,自行设计合成一对引物 ,对传染性支气管炎病毒 (IBV)江苏省地方分离毒株 (JS/95/0 3)RNA进行RT PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,呈现一条 1716bp的条带 ,将其克隆入T/A质粒pMD18 T载体... 详细信息

参考Genbank收录的IBV纤突蛋白 (S1)基因序列 ,自行设计合成一对引物 ,对传染性支气管炎病毒 (IBV)江苏省地方分离毒株 (JS/95/0 3)RNA进行RT PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,呈现一条 1716bp的条带 ,将其克隆入T/A质粒pMD18 T载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,挑选阳性克隆 ,用质粒少量提取法提取重组质粒 ,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切对重组克隆质粒进行鉴定 ,然后进行序列测定 ,证实为S1基因。将此重组质粒命名为pMDJS950 3S。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1基因 T/A载体基因克隆

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复合新城疫+减蛋+传支多价三联蜂胶灭活疫苗中NDV和EDSV HI抗体的消长规律

复合新城疫+减蛋+传支多价三联蜂胶灭活疫苗中NDV和EDSV HI抗体的...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：赵蕾沈志强刘吉山吴信明王艳苗立中李昆林山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中心山东省滨州畜牧兽医研究所(滨州)

以血凝抑制(HI)试验测定复合新城疫+减蛋+传支多价三联蜂胶灭活疫苗的NDV和EDSV HI抗体的消长规律及其稳定性,即对用不同批号的该疫苗免疫后不同时间段的鸡群分别进行新城疫(ND)和减蛋综合症(EDS)的抗体水平常规监测.试验结果表明,60日... 详细信息

以血凝抑制(HI)试验测定复合新城疫+减蛋+传支多价三联蜂胶灭活疫苗的NDV和EDSV HI抗体的消长规律及其稳定性,即对用不同批号的该疫苗免疫后不同时间段的鸡群分别进行新城疫(ND)和减蛋综合症(EDS)的抗体水平常规监测.试验结果表明,60日龄鸡接种后,两种抗体均在5-7天即可产生坚强免疫力,均在免疫后30天抗体水平进入高峰期.ND维持在12Log2以上可达4个多月;EDS维持在10Log2以上可达4个多月.免疫期分别长达6个月、7个月以上.且三个不同批号的疫苗中ND和EDS抗体的消长水平差异不显著(p>0.05),说明该疫苗中的ND和EDS抗原具有高度的稳定性,两种抗原无干扰现象.与传统的油乳剂疫苗相比,具有快速、高效、持久等特点.