检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张小荣扬州大学

学位级别：博士

禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属中的γ-冠状病毒,由该病毒感染引起的疾病称为禽传染性支气管炎(avian infectious bronchitis,IB),是一种对鸡危害非常严重的急性、高度传染性的... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属中的γ-冠状病毒,由该病毒感染引起的疾病称为禽传染性支气管炎(avian infectious bronchitis,IB),是一种对鸡危害非常严重的急性、高度传染性的病毒性呼吸道疾病,可导致鸡的增重和饲料报酬降低,也能引起蛋鸡产蛋量和蛋的品质下降等,因此具有重要的经济意义,免疫预防是目前控制该病的最为有效的手段。IBV的重要特点之一就是血清型众多,不同血清型之间交叉保护性较低甚至完全不能保护,因此在生产中必须选用与流行毒株血清型一致的疫苗才能取得良好的免疫保护效果。不同血清型的IBV具有典型的地域性流行特征,而且由于病毒基因组的突变和毒株间的重组使得新的血清型不断出现,使免疫预防日益复杂化。本研究的目的旨在通过系统的流行病学监测了解近年来不同基因型IBV在我国的流行状况,通过生物信息学分析阐明不同IBV基因型间遗传演化的规律和发展趋势,并针对流行的优势基因型毒株研制新型疫苗。 1、2009-2011年间国内IBV流行病学监测与流行株的遗传进化分析 2009-2011年间,共从国内主要养鸡省份分离到IBV流行毒株54株,其中肉鸡源毒株52株,蛋鸡源毒株2株。在肉鸡源毒株中我们发现存在较高比例的IBV与H9亚型AIV的混合感染(25/52),发生混合感染的鸡群往往发病更为严重,且混合感染样品对接种的鸡胚表现出更强的致病性,该结果提示这两种病毒之间可能存在一定程度的致病协同作用。对所有分离毒株S1基因进行克隆和基因测序,共发现4种不同的S1基因长度,分别为1611bp、1617bp、1620bp和1626bp,说明S1基因中碱基的插入和缺失是一种非常普遍的现象。将54个分离株S1基因序列和近年来在国内及周边国家和地区流行的13个基因型共57个参考毒株的S1基因序列用Mega4.1软件进行遗传进化分析,结果显示54个分离株可以分为QX型(42株)、HN-08型(5株)、LSC/991型(2株)、TW-I型(2株)、Mass型(1株)、793/B型(1株)和CHⅢ型(1株)等7个基因型。在所有分离株中,QX型分离株数量最多,占总数的77.8%(42/54)。从进化树中还可以看出,QX型分离株又可以进一步细分为两个不同的基因亚群-Cluster Ⅰ(21株)和Cluster Ⅱ(21株),经典的QX型参考毒株QXIBV和LX4株均属于Cluster Ⅰ亚群,而Cluster Ⅱ亚群中的毒株均在2010年才开始出现。为了更加系统地描述同期内国内不同基因型IBV的分布情况,我们将已经在GenBank发表全长S1基因序列的所有同时期分离株共296株合并进行遗传进化分析,结果显示,350个同时期分离株可分为19个基因型,其中11个基因型均能根据现有文献报道找到同源的参考毒株,根据各基因型中包含的毒株数量多少依次为：QX型(219株)、HN-08型(26株)、LSC/99I型(22株)、LDT3/03型(12株)、TW-I型(12株)、CH Ⅲ型(11株)、Mass型(10株)、LDL/971型(3株)、CH VI型(3株)、TW-Ⅱ型(2株)和793/B型(1株),此外还有8个基因型未能归入已被正式命名的已知基因型,因此暂定名为未定型Ⅰ～未定型Ⅷ。从分型结果可以看出,我国流行的IBV基因型具有典型的地域性分布特征,大多数在周边国家和地区广泛流行的基因型在我国并未发现。为阐明国内不同基因型毒株之间的遗传演化关系,根据遗传进化和基因分型的结果,从不同基因型中选择代表性毒株,用RDP3.31软件对S1基因进行重组分析。结果显示当前国内流行的毒株中存在广泛的重组现象,不同基因型间的重组事件不仅导致同一基因型内部发生分化,出现了不同基因亚群,而且经过多次的同源重组后可能会导致新的基因型毒株的出现。综合不同基因型间发生的系列重组事件,可以推断：QX型、LSC/991型、793/B型、LDL/971型、TW-Ⅰ型和TW-Ⅱ型是目前在我国流行的所有基因型毒株的原型毒株,除此以外的新出现的基因型均是在这6个基因型的基础上经过一次或多次的同源重组而产生的变异株。 2、Mass型H120活疫苗对当前流行的主要基因型代表毒株的免疫保护效力试验根据遗传进化分析的结果,从当前主要流行的三个IBV基因型中挑选出4个代表毒株：AH/2009/1(QX型Cluster Ⅰ亚群)、JS/2010/12(QX型Cluster Ⅱ亚群)、JS/2009/5(LSC/99I型)和JS/2010/6(HN08型),分别用Mass型IBV活疫苗(H120株)进行免疫保护效力试验,以评价现有疫苗对流行毒株的免疫保护状况。结果显示H120疫苗株对不同

关键词：传染性支气管炎病毒基因型进化分析重组马立克病毒免疫保护

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禽传染性支气管炎病毒N蛋白保守B细胞抗原表位的鉴定

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1406-1414页

作者：张冰莎张桃妮张愉刘玲范文胜任丽娜卢彦澎磨美兰广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西南宁530004 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004 广西高校动物疫病预防与控制重点实验室广西南宁530004

应用噬菌体随机十二肽库技术对针对IBV GX-YL5株N蛋白的单抗N2D5进行抗原表位的鉴定。将淘选得到的噬菌体随机十二肽库第3轮洗脱液进行二代测序,将测序结果中出现频率最高的3个十二肽序列合成肽后验证是否为模拟表位;根据获得的模拟表... 详细信息

应用噬菌体随机十二肽库技术对针对IBV GX-YL5株N蛋白的单抗N2D5进行抗原表位的鉴定。将淘选得到的噬菌体随机十二肽库第3轮洗脱液进行二代测序,将测序结果中出现频率最高的3个十二肽序列合成肽后验证是否为模拟表位;根据获得的模拟表位预测相应的天然表位序列并合成多肽和原核表达进行验证,同时对获得的天然表位进行保守性和交叉反应性分析。结果显示,第3轮筛选洗脱液测序出现频率最高的3个序列中有2个为模拟表位,即VVGRAMAYSTIP和DGVLLGTSGEST;预测天然表位序列为158IPLNRGRGGRST169;预测天然表位的合成肽的ELISA和Dot-blotting分析以及其原核表达蛋白的Western-blotting分析表明,158IPLNRGRGGRST169是IBV的一个天然表位序列;保守性和交叉反应性分析显示该天然表位具有高度保守性。结果表明,本研究成功鉴定出IBV GX-YL5 N蛋白上的一个高度保守的表位158IPLNRGRGGRST169,为IBV N蛋白的抗原结构和功能的研究及诊断试剂和表位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 N蛋白噬菌体随机十二肽库抗原表位交叉反应性

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鸡传染性支气管炎病毒国内分离株D971 mRNA_3和mRNA_4 cDNA的分子特征

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中国兽医学报 2004年第2期24卷 122-125页

作者：刘玉芬刘胜旺荣骏弓孔宪刚刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV)基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,经 RT-PCR扩增得到了 IBV国内分离株 D971约 1.3kb的片段 ,其中包含 3a、3b、E及 M蛋白基因的完整 ORF,并将该片段进行了克隆和序... 详细信息

参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV)基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,经 RT-PCR扩增得到了 IBV国内分离株 D971约 1.3kb的片段 ,其中包含 3a、3b、E及 M蛋白基因的完整 ORF,并将该片段进行了克隆和序列测定。与国内外部分 IBV毒株序列比较表明 :D9713a基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、GA/99和 UK/6 6的 3a基因核苷酸序列同源性在 83%～ 89%之间 ,氨基酸序列同源性为 77%～ 91% ,其中与 CU- T2毒株的同源性最低 (分别为 83%和 77% ) ;3b基因与上述毒株的对应核苷酸序列同源性在 85 %～ 95 %之间 ,氨基酸序列同源性为 72 %～ 96 % ,与 CU- T2的同源性最高 (分别为 95 %和 96 % ) ;E蛋白基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、Ark99、H5 2、Gray、GA/99和 UK/6 6的核苷酸序列同源性在 81%～ 86 %之间 ,氨基酸序列同源性为 74 %～ 80 %。不同毒株推导的 E蛋白 C末端表现不同特征 ,其中 D971E蛋白 C末端比 CU- T2的对应区多 9个氨基酸残基 ,而比本试验选用的其他参考毒株的相应区域短 5～ 7个氨基酸残基。M基因与 CU - T2、DE0 72、Gray、M4 1、H12 0、H5 2、SD/97/0 2、L X4及D4 1的 M基因核苷酸序列同源性在 86 %～ 91%之间 ,氨基酸序列同源性为 85 %～ 95 % ,其?

关键词：鸡传染性支气管炎病毒国内分离株 mRNA cDNA 分子特征

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表达鸡γ-干扰素重组鸡传染性支气管炎病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 167-171页

作者：姜逸唐梦君程旭沈欣悦李建梅尤素兰赵宝华戴亚斌周生中国农业科学院家禽研究所江苏扬州225003

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究以IBV疫苗株H120为病毒载体,在其非结构蛋白5a编码区上游插入鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因,通过反向遗传操作技术构建重组病毒。经RT-PCR和测序鉴定表明拯救获得重... 详细信息

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究以IBV疫苗株H120为病毒载体,在其非结构蛋白5a编码区上游插入鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因,通过反向遗传操作技术构建重组病毒。经RT-PCR和测序鉴定表明拯救获得重组病毒(r H120-c IFNγ/5a)。生物学特性研究结果表明,r H120-c IFNγ/5a感染鸡胚后能够引起特征性病变,但与其亲本病毒株H120相比,病毒的毒价及其在鸡胚中的复制能力有所下降。将r H120-c IFNγ/5a在鸡胚中连续传代,采用RT-PCR进行检测,结果表明Ch IFN-γ基因在病毒传至第9代时仍保持稳定,至第12代Ch IFN-γ基因出现部分或完全丢失现象。本研究结果为进一步研制以IBV为载体的新型基因重组疫苗奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒干扰素-γ 反向遗传技术重组病毒

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鸡传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971)株S2基因的克隆及序列分析

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中国兽医学报 2001年第6期21卷 540-542页

作者：沈行燕周继勇丁红梅吴建祥严庆丰浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

采用特异性引物对鸡传染性支气管炎病毒 (IBV )嗜腺胃毒株 (ZJ971毒株 )进行 RT- PCR扩增 ,将扩增到的 S2基因 c DNA克隆入 p Bluescript SK质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 ZJ971毒株 S2基因全长为 1872 nt,编码 1条由 5 3... 详细信息

采用特异性引物对鸡传染性支气管炎病毒 (IBV )嗜腺胃毒株 (ZJ971毒株 )进行 RT- PCR扩增 ,将扩增到的 S2基因 c DNA克隆入 p Bluescript SK质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 ZJ971毒株 S2基因全长为 1872 nt,编码 1条由 5 30个氨基酸组成的多肽 ,与 Beaudette株、M41株、Ark99株比较 ,其核苷酸同源性分别为 97.34 %、97.72 %、96 .30 % ;3′端核苷酸相对于 5′端保守 ,在 5′端第 184～ 2 83位之间的核苷酸为高可变区。同时 ,IBV - ZJ971株S2基因第 16 2 1位的碱基由 G突变为 T,导致

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S2基因基因克隆序列分析

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我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株S1基因的分离及初步鉴定

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华南农业大学学报 2001年第1期22卷 78-80页

作者：游洪王林川华南农业大学动物医学系广东广州510642

根据IBVBeaudette株全基因组序列 ,借助基因分析软件自行设计合成了 3条引物 (you1+、you2 -、youM +) ,引物you1+和you2 -在S1基因两侧 ,跨幅为 16 11bp ,引物you2 -和youM +在S1基因的 3’端 ,跨幅为 5 35bp 用引物you1+和you2 -对 5... 详细信息

根据IBVBeaudette株全基因组序列 ,借助基因分析软件自行设计合成了 3条引物 (you1+、you2 -、youM +) ,引物you1+和you2 -在S1基因两侧 ,跨幅为 16 11bp ,引物you2 -和youM +在S1基因的 3’端 ,跨幅为 5 35bp 用引物you1+和you2 -对 5个IBV地方分离株 (HN2、HN4、JX1、SC2和SC4)进行RT PCR ,均成功地扩增出预期大小的目的片段用另 1对引物 (you2 -和youM +)对各毒株的RT PCR产物再进行PCR扩增 ,均得到一条约 5 30bp的目的片段 ;对RT PCR产物用限制性内切酶PstⅠ进行酶切分析 ,结果酶切产物中得到 2条条带 ,大小分别为 5 6 0和 10 5 0bp ,与GeneBank中 11株已发表的S1基因分析结果一致初步鉴定结果显示 ,已经成功分离得到了IBV S1基因 .

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 RT-PCR S1基因鉴定分离地方毒株

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鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的构建和表达

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中国兽医学报 2009年第6期29卷 691-695页

作者：田浪王红宁鲁丹张云飞王霆康润敏四川农业大学动物医学院四川雅安625014 四川大学生命科学学院四川成都610064

通过文献报道和计算机软件分析筛选出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)结构蛋白基因S1、S2、N基因的T、B细胞的优势抗原表位共7段,采用人工合成及PCR方法将各抗原表位以柔性氨基酸(GP/GA)作为接头串联成一条全新的多表位嵌合基因F,并定向克隆... 详细信息

通过文献报道和计算机软件分析筛选出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)结构蛋白基因S1、S2、N基因的T、B细胞的优势抗原表位共7段,采用人工合成及PCR方法将各抗原表位以柔性氨基酸(GP/GA)作为接头串联成一条全新的多表位嵌合基因F,并定向克隆入真核表达质粒pVAX1,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒。阳性质粒pVAX-F通过脂质体转染COS-7细胞进行表达研究。提取转染细胞总RNA,RT-PCR方法检测到目的基因的转录;间接免疫荧光试验(IFA)检测到特异性荧光存在。表明表达产物能与相应抗体特异性结合,证明了具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗IBV的核酸疫苗。

关键词：传染性支气管炎病毒抗原表位嵌合基因真核表达

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

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中国兽医学报 1999年第5期19卷 421-424页

作者：宋延华刘福安华南农业大学动物医学系广东广州510642

将鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｓ１基因ｃＤＮＡ克隆至含有起始密码ＡＴＧ的转移载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４，构建成重组转移质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４ Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ，再与粉纹夜... 详细信息

将鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｓ１基因ｃＤＮＡ克隆至含有起始密码ＡＴＧ的转移载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４，构建成重组转移质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４ Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ，再与粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ＯＣＣ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，经空斑纯化得到已插入Ｓ１基因并能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ（Ｘ３／４）Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ ＯＣＣ＋。以重组毒株感染Ｔｎ５Ｂ１细胞，在不同时间收取感染了病毒的细胞进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ与Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测。ＴｎＮＰＶ（Ｘ３／４）Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ ＯＣＣ＋在感染的细胞中高效表达了Ｓ１基因，表达产物为约１０００００的融合蛋白，与预计的表达修饰后的产物大小相符，推测此蛋白已糖基化。ＳＤＳ ＰＡＧＥ凝胶薄层色谱分析结果显示，感染病毒后４８、７２、９６ｈ，Ｓ１蛋白分别占细胞内总蛋白量的２８７％、３５８％、３７１％。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 IBV 昆虫细胞传染性支气管炎病毒 S1基因杆状病毒表达

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传染性支气管炎病毒抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示

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生物技术通讯 2008年第3期19卷 401-403页

作者：安烨王宏俊徐慧龚玉梅张培君北京市农林科学院畜牧兽医研究所

目的:进一步验证通过噬菌体肽库筛选得到的2个传染性支气管炎病毒(IBV)抗原模拟表位在脱离噬菌体后仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。方法:应用基因工程技术合成2个IBV抗原模拟表位(KSPKHSSSALHF和SⅡQMNLHR PTS)的编码碱基序列,将其... 详细信息

目的:进一步验证通过噬菌体肽库筛选得到的2个传染性支气管炎病毒(IBV)抗原模拟表位在脱离噬菌体后仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。方法:应用基因工程技术合成2个IBV抗原模拟表位(KSPKHSSSALHF和SⅡQMNLHR PTS)的编码碱基序列,将其分别插入质粒pFliTrx,构建重组展示载体p1和p2,并分别转化大肠杆菌GI826,形成展示IBV模拟抗原表位肽的重组菌F1和F2,进行体外抗原抗体反应。结果:体外抗原抗体反应试验表明,重组菌F1与F2可以与IBV阳性鸡血清特异性结合。结论:提示得到的2个抗原模拟表位在脱离噬菌体后,仍具有与IBV抗体结合的生物学活性,在研制IBV新型疫苗和诊断试剂方面具有潜在的应用价值。

关键词：传染性支气管炎病毒抗原表位大肠杆菌鞭毛展示

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传染性支气管炎病毒的鉴定

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家禽科学 2010年第12期 14-16页

作者：杨娜潘玲曾明华王桂军安徽农业大学动物科技学院合肥230036

试验采用鸡胚接种和气管环培养相结合的方法,对IBV毒株进行培养鉴定,IBV经鸡胚传一代后再上鸡胚气管环培养可引起气管环纤毛运动停止,应用此法可以快速地进行IBV检测。

关键词：传染性支气管炎病毒鸡胚接种气管环培养纤毛运动停止

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