检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：胥翠萍张国中赵继勋中国农业大学动物医学院

2003年至2005年间,从中国各地不同的免疫发病鸡群分离到多株传染性支气管炎病毒(IBV)。选取其中的四个典型毒株对其S1基因进行了克隆和测序分析。四株分离毒S1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性介于88.98%和99.28%之间,与14株IBV标准株的... 详细信息

2003年至2005年间,从中国各地不同的免疫发病鸡群分离到多株传染性支气管炎病毒(IBV)。选取其中的四个典型毒株对其S1基因进行了克隆和测序分析。四株分离毒S1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性介于88.98%和99.28%之间,与14株IBV标准株的核苷酸和氨基酸序列同源性为70.06～81.40%。选取14株IBV标准株和2003～2005年已在GenBank上登录序列的其它31株中国分离株绘制的系统进化树显示,近几年中国IBV分离株可基本上划分成四个主要的基因群,中国分离株中61.29%属于第四基因群,该群与4/91株具有一定的相关性,尤其在免疫原性和中和位点上,是目前中国IBV流行的主要类型,揭示4/91型疫苗对中国养禽生产具有重要作用。

关键词：传染性支气管炎病毒分离株 S1基因序列分析

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鸡肾型传染性支气管炎病毒QD株S1基因的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 87-90页

作者：孙美玉陈冰邢婧珉王寿山吕茂杰何召庆杨保收天津瑞普生物技术股份有限公司、瑞普生物研究院生物制品研究中心天津300308

从某发病鸡场分离获得1株嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒（infectiousbronchitisvirus，IBV），命名为QD株，据GenBank发表的IBVS1基因序列设计1对特异性引物对QD分离株s1基因进行扩增、克隆及序列测定，并将其与国内流行株及参考毒株进行... 详细信息

从某发病鸡场分离获得1株嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒（infectiousbronchitisvirus，IBV），命名为QD株，据GenBank发表的IBVS1基因序列设计1对特异性引物对QD分离株s1基因进行扩增、克隆及序列测定，并将其与国内流行株及参考毒株进行比对。结果显示，IBVQD株S1基因全长为1620bp，S蛋白裂解识别位点为RRFRR。同源性分析结果表明，QD株与国内外疫苗毒株核苷酸同源性为78．8％～82．2％。遗传进化分析结果表明，QD株与国内外主要疫苗株亲缘关系较远，与近几年国内分离的肾型毒株亲缘关系最近。本试验结果表明IBV肾型毒株在中国广为流行，该毒株可作为肾型传染性支气管炎疫苗株的候选毒株。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1基因序列分析

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六株传染性支气管炎病毒的生物学特性鉴定及遗传进化分析

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动物医学进展 2012年第4期33卷 36-40页

作者：龚军郑俏伟王建华杨凤汪招雄廖明任涛华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室广东省动物源性人畜共患病预防与控制重点实验室广东广州510642

从华南地区疑似传染性支气管炎的病料中,分离到6株传染性支气管炎病毒并对这些分离株进行鸡胚矮小化试验、新城疫病毒干扰试验、血凝特性试验、鸡胚气管环感染试验、S1基因的克隆测序与序列分析。结果表明,各分离株均对鸡胚有明显的致... 详细信息

从华南地区疑似传染性支气管炎的病料中,分离到6株传染性支气管炎病毒并对这些分离株进行鸡胚矮小化试验、新城疫病毒干扰试验、血凝特性试验、鸡胚气管环感染试验、S1基因的克隆测序与序列分析。结果表明,各分离株均对鸡胚有明显的致矮小化作用;对新城疫病毒有明显的干扰作用;无直接血凝性,经10g/L胰酶处理后,可凝集鸡的红细胞;对鸡胚气管环有明显的感染致病变作用;利用RT-PCR方法,成功扩增出分离株的S1基因,与参考株S1基因序列比对,其中1株(GD-09II)属于Mass型,剩下5株与LX4型亲缘关系较近。

关键词：传染性支气管炎病毒生物学特性 S1基因序列分析

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广西鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析

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中国家禽 2009年第15期31卷 8-12页

作者：磨美兰李孟范文胜陈秋英黄柏成郎亚辉林俊韦平韦天超广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

应用RT-PCR方法扩增了广西1985～2008年的24株传染性支气管炎病毒(IBV)分离株的核(N)蛋白基因,并对此24株IBV的N蛋白基因进行了克隆、序列测定及分析。结果发现24株IBV分离株N蛋白均含有一个长1230bp的开放阅读框,编码由409个氨基酸残... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增了广西1985～2008年的24株传染性支气管炎病毒(IBV)分离株的核(N)蛋白基因,并对此24株IBV的N蛋白基因进行了克隆、序列测定及分析。结果发现24株IBV分离株N蛋白均含有一个长1230bp的开放阅读框,编码由409个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的缺失和插入,但存在较多点突变现象。与疫苗株H120核蛋白的3个保守碱性氨基酸区序列进行比较分析发现,大多数毒株在183～232位存在较多的氨基酸替代现象,部分毒株在334～363位也存在较多的氨基酸替代现象。与GenBank中的13个IBV参考毒株N蛋白基因序列进行比较分析,发现2004～2008年的21个分离株中有19个分布于第Ⅰ群中;1985～1988年的3个分离株之间N蛋白核苷酸及其推导氨基酸的同源性均达99%以上,均属于第Ⅲ群中,可见广西不同时期的IBV分离株在N基因进化关系上形成了自己独立的进化群。同时研究还发现GX-NN5分离株可能为基因重组病毒。以上结果表明了广西IBV毒株存在基因突变和基因重组现象。

关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因基因突变基因重组

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鸡传染性支气管炎病毒SX01株的分离鉴定及M基因序列分析

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中国畜牧兽医 2014年第12期41卷 89-93页

作者：朱海侠陈雷曾亮明傅星源张蕴冰俞建萍翁燕梅潘海城张渊魁福州大北农生物技术有限公司福建福州350014

本试验通过鸡胚矮小试验、血凝试验和RT-PCR等方法,从华北地区某鸡场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群分离了1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为SX01株。结果显示该分离株能引起鸡胚典型的临床症状;经1%胰酶处理后的尿囊液可凝集鸡红... 详细信息

本试验通过鸡胚矮小试验、血凝试验和RT-PCR等方法,从华北地区某鸡场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群分离了1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为SX01株。结果显示该分离株能引起鸡胚典型的临床症状;经1%胰酶处理后的尿囊液可凝集鸡红细胞,而未处理的则无血凝活性;利用RT-PCR对分离株M基因序列测定分析结果显示,SX01株的M基因核苷酸序列与GX-GL分离株同源性高达99.4%,与QX基因型毒株SDZB0808核苷酸同源性高达99.1%,与H120株同源性仅为90.0%,与BJ/00/02株M基因核苷酸同源性较低,为90.6%。遗传进化分析结果显示,该分离株与中国地方型分离株(GX-GL、SDZB0808、CK/CH/LJL/110302、DY07、IBVSX7)亲缘关系较近,位于同一进化分支;与H120代表的Mass型疫苗株的亲缘关系较远,是一株肾型传染性支气管炎病毒毒株。

关键词：传染性支气管炎病毒病毒分离序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒分离株（QX-Type）的分子特性和致病力研究

鸡传染性支气管炎病毒分离株（QX-Type）的分子特性和致病力研究

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作者：顾朗（Ghulam Abbas）东北农业大学

学位级别：博士

传染性支气管炎(IB)是由禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起家禽的一种重要呼吸道传染病,已在全球范围内造成重大经济损失。IBV是冠状病毒科γ冠状病毒属的原型病毒,它与导致人类COVID-19的β冠状病毒——严重急性呼吸系统综合症冠状病毒-2(... 详细信息

传染性支气管炎(IB)是由禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起家禽的一种重要呼吸道传染病,已在全球范围内造成重大经济损失。IBV是冠状病毒科γ冠状病毒属的原型病毒,它与导致人类COVID-19的β冠状病毒——严重急性呼吸系统综合症冠状病毒-2(SARS Co V-2)相关。冠状病毒(Co V)具有广泛的宿主范围,包括人、动物、鸟类和啮齿动物。在过去的十年中,疾病大流行病毒,即SARS-Co V-2、SARS-Co V和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)已导致哺乳动物和鸟类大量死亡。刺突糖蛋白S具有非常重要的生物学功能,并且在S基因分析的基础上已对Co Vs变异株进行了分型研究。IBV作为一种RNA病毒,容易发生突变和重组而导致不同血清型的出现,这使得IB的诊断和控制越来越困难。因此,本研究旨在评估IBV分离株HH06的分子和致病特征、其进化和重组机制。此外,我们进行了系统发育、基序和重组网络分析,以比较包括SARS-Co V-2 Wuhan-Hu-1毒株和IBV HH06毒株等4个属的Co Vs。通过目前的研究,我们可以更好地认识IBV分离株的流行演变、新出现病毒的病理生物学机制和组织嗜性,为开发更有效的疫苗提供理论依据。在本研究中,我们首先分离并鉴定了一株IBV毒株HH06。简而言之,分离株的纯化和繁殖是通过9日龄SPF鸡胚(ECE)在尿囊腔中的3次传代,可观察到IBV的典型病变,如胚胎的侏儒化、出血、卷曲或发育迟缓。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),设计3套引物扩增完整S基因,对其S基因进行系统发育、重组网络、进化机制、组织病理学和免疫组化(IHC)分析。系统发育分析结果显示HH06在基因型QX(G1-19)分支中,并与G1-18(LDT3-A)和G1-22(LSC/991)密切相关,而与经典毒株和疫苗毒株(如M41、H120和4/13毒株)距离远。重组网络树分析表明HH06与G1-18和TW-1型病毒密切相关,这些毒株之间可能发生重组。选择压力分析表明,有35个正选残留位点,并主要归因于到净化选择。考虑到当前大流行的SARS-Co V-2,对Co Vs进行了生物信息学的进一步研究,我们从4个属(Alphacoronaviruses(Alpha-Co Vs)、Betacoronaviruses(Beta-Co Vs),Gamacoronaviruses(Gamma-Co Vs)和Deltacoronaviruses(Delta-Co Vs))中选择了111个Co Vs毒株,此外,在之前的可用序列数据中,我们还选择了禽源IBV分离株HH06。在S糖蛋白基因、系统发育、基序确定的基础上,进行重组网络和选择压力分析。系统发育上,禽源Co Vs的IBV-HH06与鸭Co V和鹧鸪S14、LDT3(野鸭和鸡宿主)密切相关。雉鸡和鸽子来源的禽源Co V(Ph-Co V和Pi-Co V)在同一分支中。白鲸Co V(SW1)和宽吻海豚Co Vs哺乳动物起源分支远离其他动物起源病毒,并与禽类Co Vs组合成Gamma-Co Vs。SARS-Co Vs-2、SARS-Co Vs与Bat-Co Vs和Beta-Co Vs(C)的MERS-Co V密切相关。基序分析表明S蛋白上的保守结构域在同一系统发育类别中相似,并且在不同来源的不同结构域中是可变的。鸡在14日龄时感染IBV HH06和M41株,每天检查2次记录临床症状,在感染后第1、3、5、7、10和14天,每组捕杀5只鸡,观察其病理学变化。采集不同的病理材料(气管、肺、肾、法氏囊、脾、心脏和肝脏)用于苏木精和伊红(H&E)染色;气管、肺、肾、法氏囊和脾脏用于免疫组织化学染色(IHC);气管、肺和肾脏以实时荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测IBV的含量和分布。结果表明,两个IBV毒株显示不同的病理变化特征,与M41株感染组相比,HH06株可引起临床早期发病。2个感染组均表现抑郁、气管和肺部有轻微罗音,感染鸡昏昏欲睡,不愿活动,羽毛逆立,发病高峰期有水样腹泻。感染HH06鸡分别在感染后第5天和第6天各死亡1只,而M41导致2只鸡分别在感染后第6天和7天死亡。剖检鸡在气管和肺可见充血和多量黏液,同时也可见肾脏充血肿胀。与M41感染组相比,IBV HH06株可引起严重的肾损伤并伴有肾炎。组织学评估表明,HH06和M41毒株在不同器官中引起严重的组织病理学变化,并观察到广泛的组织嗜性。病变随时间的进展可分为退行性、增生性和恢复性阶段。在气管和肺,与HH06感染组鸡相比,M41组的病变严重程度更高。与呼吸器官相比,IBV-HH06能更有效地到达肾脏并进行复制。尽管IBVs(HH06和M41)在气管和肺导致典型的病理变化,但肾脏出现了更严重的变化,包括肾小管上皮变性坏死、炎症细胞浸

关键词：冠状病毒传染性支气管炎病毒 S基因 QX基因型遗传进化组织嗜性

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鸡传染性支气管炎病毒SD03株N基因的克隆、序列分析及N蛋白理化性质分析

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中国畜牧兽医 2014年第12期41卷 67-73页

作者：邢婧珉陈冰李云霞付立辉张立霞李亚杰郁宏伟杨保收天津瑞普生物技术股份有限公司瑞普研究院生物制品研究中心天津300308 瑞普(天津)生物药业有限公司天津300300

试验旨在确定国内鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)流行毒株核蛋白N与市场上现用疫苗株、近年国内外分离株的差异性。本研究利用自山东某鸡场病鸡肾脏组织分离获得、经PCR鉴定为IBV阳性的毒株(命名为SD03株),参考NCBI上部分IBV毒株N基因... 详细信息

试验旨在确定国内鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)流行毒株核蛋白N与市场上现用疫苗株、近年国内外分离株的差异性。本研究利用自山东某鸡场病鸡肾脏组织分离获得、经PCR鉴定为IBV阳性的毒株(命名为SD03株),参考NCBI上部分IBV毒株N基因的保守区域设计引物,进行RT-PCR扩增,构建重组pMD18-T-N/DH5α菌,测序获得N基因序列。与参考株进行了核苷酸及氨基酸同源性分析,结合DNAStar软件与http://***/网站对该基因编码的蛋白进行理化性质分析。结果显示,SD03株为IBV肾型毒株,与LDT3、partridge/GD/S14/2003毒株(肾型)核苷酸及氨基酸同源性均在99.0%以上。与其他国内外肾型经典毒株Ma5、W93、Gray、Holte株氨基酸同源性为90.0%~94.6%,与国内外呼吸型疫苗株H120、H52、M41氨基酸同源性为89.7%~91.0%。本研究深入分析了当前流行株SD03株N蛋白的理化特性,为N蛋白亚单位疫苗在不同系统中表达及蛋白纯化提供了理论依据,为中国现阶段IBV的防控奠定了一定的理论基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 RT-PCR N基因 N蛋白同源性系统发生树 N蛋白理化性质

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鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定

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安徽农业大学学报 2012年第1期39卷 1-6页

作者：王新卫王川庆赵军陈陆杨霞王泽霖姚惠霞河南农业大学禽病研究所郑州450002

为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒(Jin13株)进行定型鉴定,作者采用气管环(TOC)中和试验、血凝抑制(HI)试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环(TOC)中和试验和血凝抑制(HI)试验表明Ji... 详细信息

为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒(Jin13株)进行定型鉴定,作者采用气管环(TOC)中和试验、血凝抑制(HI)试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环(TOC)中和试验和血凝抑制(HI)试验表明Jin13病毒只与M41阳性血清反应,而与其它ND、EDS76、H9AI、IBD标准阳性血清不发生反应,序列分析证实该分离毒Jin13株是IBV。在交叉气管环(TOC)中和试验和交叉血凝抑制(HI)试验中Jin13株与肾变型Y株不交叉(R≤0.25),而与马萨株血清型的M41株和H52株有明显交叉(0.25≤R≤0.8);单抗交叉ELISA结果显示Jin13株与针对M41株的J1单抗有很好的反应(≥640～1 280),而与针对肾变型Y株的单抗C2几乎不反应(≤40),这进一步证实了Jin13与呼吸型M41株、H52株属同一血清型。与M41株相比较,Jin13株S1氨基酸序列在第126,386,390,461位出现了突变,又在S1基因第1 166位出现一个新Aiu I酶切位点,是M41株的一个变异株。对Jin13株纯化后原代毒进行免疫效力检测证实其免疫原性优于M41株和H52株。Jin13毒株是一株免疫原性良好的IBV地方流行毒株。

关键词：传染性支气管炎病毒 Jin13株分离鉴定

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BF2/肽四聚体的构建及其在传染性支气管炎病毒特异性T细胞反应评价中的应用

BF2/肽四聚体的构建及其在传染性支气管炎病毒特异性T细胞反应评...

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作者：刘光亮中国农业科学院

学位级别：博士

MHCⅠ类分子/肽四聚体技术是1996年建立的一种检测特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxicT lymphocytes，CTLs）的方法，该方法已在人类及模式动物的相关领域得到较为广泛的研究和应用，然而在兽医学相关研究中只有近年来往猪和马上有了... 详细信息

MHCⅠ类分子/肽四聚体技术是1996年建立的一种检测特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxicT lymphocytes，CTLs）的方法，该方法已在人类及模式动物的相关领域得到较为广泛的研究和应用，然而在兽医学相关研究中只有近年来往猪和马上有了初步的研究，目前该项技术在禽类的研究尚属空白。为了构建鸡的MHC/肽四聚体，本实验从SPF莱航鸡全血克隆了鸡MHCⅠ重链α（BF2）和β2微球蛋白（Chβ2m）全基因，经系统进化分析表明本实验所获得的BF2基因为B15单倍型。然后利用软件分析了其各自的信号肽序列及BF2的跨膜区，利用引物分别缺失了这两段基因的信号肽序列以及BF2的跨膜区，并在BF2基因的3’端融合了BirA底物肽（BSP）序列。将经改造的两段基因分别克隆至融合蛋白重组表达载体中，分别命名为pET-BF2-BSP和pET-Chβ2m，并将其分别转化至大肠杆菌感受态BL21（DE3）中进行诱导表达，获得了包涵体表达的重组蛋白，表达产物溶解于8M脲中，经SDS-PAGE分析，结果表明所得融合目的蛋白分别约为38kD和15kD，Western-blot结果显示该重组蛋白均成功融合了6×His标签。为了获得大量的目的蛋白，优化了诱导剂浓度、起始诱导菌体浓度及诱导时间等表达条件。此外，建立了重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在变性状态下通过镍柱亲和层析纯化包涵体的方法，获得了高纯度的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m。根据文献所报道，合成了鸡传染性支气管炎病毒（IBV）核蛋白N71-78T细胞表位肽，将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性。复性后在快速蛋白液相色谱仪（FPLC）上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物。将该单体复合物在体外进行生物素化，其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物；通过链霉亲和素迁移实验检测体外生物素化效率，然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白（PE）标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体。为了检测所制备BF2/肽四聚体的功能，采用105.5EID50的IBV H52株接种一周龄SPF鸡，10d后采抗凝血用淋巴细胞分离液分离PBMC，调整细胞浓度后取1×10～6个细胞进行抗鸡CD8单抗和BF2/肽四聚体双色荧光染色，采用流式细胞术检测并分析染色结果，结果表明所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBV N蛋白特异性T淋巴细胞，检测一周龄SPF鸡接种H52后10d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65％。为了探讨SPF鸡在感染IBV后体内抗体水平及针对N蛋白特异性的T淋巴细胞的动态变化，将125羽SPF鸡随机分为三组分别作为接种免疫组、攻毒对照组和空白对照组。采用IBV H52标准毒株对其通过滴鼻方式进行免疫，之后每3天剖杀5羽观察各脏器的病理学变化、检测血清抗体效价并采用BF2/肽四聚体评价其N蛋白特异性T细胞的比例；免疫15d时采用IBV M41对免疫组和攻毒对照组进行攻毒，同样检测上述指标。最后综合评价IBV在免疫及攻毒后血清抗体和 N蛋白特异性T细胞的动态变化趋势及两者之间的相互关系。检测结果表明H52滴鼻免疫后特异性T细胞免疫的产生早于血清抗体IgG的出现，攻毒结果显示在SPF鸡未产生坚强的体液免疫时仍能抵抗同型强毒的攻击，提示特异性T细胞在抵抗IBV早期感染免疫反应过程中可能起着重要作用。

关键词：鸡MHC1类分子 BF2-BSP 鸡β2m微球蛋白 BF2/肽四聚体传染性支气管炎病毒核蛋白

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鸡传染性支气管炎病毒0801株的分离鉴定及S1基因序列分析

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动物医学进展 2011年第8期32卷 1-6页

作者：刘巍孔义波张兴晓柴同杰山东农业大学动物医学院山东泰安271018 山东省动物用生物制剂工程技术中心山东烟台264003

2008年1月,河北沧州某产蛋鸡场鸡群出现呼吸道症状,少数鸡只出现死亡,剖检发现鸡只肾脏肿大,呈"花斑肾"样,收集患病鸡只肾脏、气管等组织,进行病毒分离培养。经新城疫病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验、鸡胚交叉中和试... 详细信息

2008年1月,河北沧州某产蛋鸡场鸡群出现呼吸道症状,少数鸡只出现死亡,剖检发现鸡只肾脏肿大,呈"花斑肾"样,收集患病鸡只肾脏、气管等组织,进行病毒分离培养。经新城疫病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验、鸡胚交叉中和试验及分子生物学鉴定,证实分离到一株鸡传染性支气管炎病毒,并命名为0801;鸡胚交叉中和试验结果表明,0801株与疫苗Ma5株中和指数最高,为同一血清亚型;对其S1基因进行克隆、序列测定与分析,表明0801株的S1基因全长1 620 bp,核苷酸序列与Massachusetts型疫苗株相似性在75%左右,氨基酸牙似性亦在75%左右。

关键词：传染性支气管炎病毒交叉中和试验 S1基因序列分析

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