检索结果-内蒙古大学图书馆

生理学报 2000年第5期52卷 355-359页

作者：叶红郝天玲金咸瑢同济医科大学病理生理学教研室武汉430030

用噻唑蓝比色法 (MTT法 )、H3 胸腺嘧啶核苷 (H3 TdR)掺入法和流式细胞术 ,观察红细胞生成素 (EPO)3’端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖的影响。结果为 :(1)低氧 2 4h后PASMCs明... 详细信息

用噻唑蓝比色法 (MTT法 )、H3 胸腺嘧啶核苷 (H3 TdR)掺入法和流式细胞术 ,观察红细胞生成素 (EPO)3’端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖的影响。结果为 :(1)低氧 2 4h后PASMCs明显增殖 ,转入野生型EPO3’端增强子片段可被抑制 ,而转入突变型片段无此作用 ;(2 )肺动脉内皮细胞 (PAECs)低氧 2 4h ,其条件培养液有明显的促PASMCs增殖作用 ,将野生型EPO3’端增强子片段先转入PAECs,此作用明显减弱 ,而转入突变型片段则无明显影响。提示 :(1)PAECs低氧条件培养液可促进PASMCs增殖 ,PASMCs也可直接感受低氧而增殖 ,PAECs和PASMCs的低氧反应均被外源性EPO3’增强子片段抑制 ;(2 )由于EPO3’增强子上有低氧诱导因子 1(HIF 1)结合位点 ,PAEC和PASMC低氧反应可能是通过HIF

关键词： PASMCs PAECs EPO3'端增强子低氧性增殖

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红细胞生成素3'端增强子在肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖中作用的研究

红细胞生成素3'端增强子在肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖中作用的研...

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作者：叶红华中科技大学

学位级别：硕士

该研究用噻唑蓝比色实验(MTT法)、H-胸腺嘧啶核苷(H-TdR)掺入法、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学和流式细胞术,研究合成的红细胞生成素(EPO)3'端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性... 详细信息

该研究用噻唑蓝比色实验(MTT法)、H<'3>-胸腺嘧啶核苷(H<'3>-TdR)掺入法、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学和流式细胞术,研究合成的红细胞生成素(EPO)3'端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖、DNA合成和细胞周期的影响,结果提示:(1)PAEC低氧条件培养液可促进PASMC增殖,PASMC也可直接感受低氧而增殖,EC和SMC的低氧反应均被外源性EPO3'增强子片段抑制;(2)由于EPO3'增强子上有HIF-1结合位点,EC和SMC低氧反应可能是通过HIF-1低氧信号转导的共同通路;(3)EPO3'增强子中的HIF-1结合位点的核心序列为CGT;(4)低氧引起肺动脉的平滑肌增殖可以因PAEC旁分泌的促增殖作用,也可因平滑肌本身感受低氧而产生促增殖因子作用于自身而引起,但不能排除还有其它机制.

关键词：肺动脉内皮细胞平滑肌细胞红细胞生成素3'增强子低氧性增殖低氧诱导因子-1

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红景天苷通过线粒体凋亡途径调节PASMCs的低氧增殖

红景天苷通过线粒体凋亡途径调节PASMCs的低氧增殖

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作者：虞晓明温州医科大学

学位级别：硕士

目的： 　　以小鼠离体肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)为研究对象，探索红景天苷(Salidroside，Sal)对肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖、线粒体途径凋亡的影响及其可能的调节机制。&am... 详细信息

目的： 　　以小鼠离体肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)为研究对象，探索红景天苷(Salidroside，Sal)对肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖、线粒体途径凋亡的影响及其可能的调节机制。 　　方法： 　　采用本研究室建立的胶原酶Ⅰ消化结合血清铺底法，离体原代培养BALB/c小鼠肺动脉平滑肌细胞。用免疫化学染色法和免疫荧光染色法鉴定小鼠PASMCs确定纯度并传代。用CCK-8染色法测定常氧及72小时低氧情况下小鼠PASMCs的活性，及不同浓度红景天苷（100μM，200μM，400μM，800μM，1600μM）对低氧小鼠PASMCs活性的抑制，并选择合适浓度。实验分4组:常氧对照(Normoxiccontrol，N)组、低氧(hypoxia，H)组、H+CGS（CGS-21680-A2AR激动剂，CGS）组、H+Sal(Salidroside，Sal)组。所有低氧组均在低氧培养箱中按照5％CO2，7％O2，88％N2的条件，37℃培养72小时。CCK-8染色法检测各组PASMCs增殖情况。TUNEL法检测各组PASMCs凋亡情况。免疫荧光染色法检测各组PASMCs的Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达。Western-Blot法检测各组PASMCs的A2AR蛋白、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达。 　　结果： 　　1.与常氧小鼠PASMCs比较，72小时低氧情况下PASMCs CCK-8的A值显著升高(P＜0.05);红景天苷浓度为100μM时，低氧PASMCs的A值开始下降，但未达到统计学意义(P＞0.05);浓度在200μM-1600μM之间，A值较单纯低氧组明显下降(P＜0.05)，并呈量效关系;而与红景天苷浓度为800μM的低氧组相比，红景天浓度为1600μM低氧组的A值没有统计学意义(P＞0.05)。 　　2.各组CCK-8的吸光度(absorbance，A)值:低氧组较对照组升高(P＜0.05)，H+CGS组和H+Sal组均较低氧组下降（P均＜0.05）。表明CGS和红景天苷均可显著抑制低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。 　　3.各组Tunel的凋亡指数(apoptosis index，AI):低氧组较对照组降低(P＜0.01)，H+CGS组和H+Sal组均较低氧组升高（P均＜0.01)。表明肺动脉平滑肌细胞低氧情况下凋亡减少，CGS和红景天苷均可以明显增加肺动脉平滑肌细胞低氧情况下的凋亡。 　　4.各组Bax、Bcl-2蛋白荧光强度(fuorescence intensity，FI):与对照组相比，低氧组Bax蛋白荧光强度降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白荧光强度升高(P＜0.01);H+CGS组和H+Sal组Bax、Bcl-2蛋白荧光强度均较低氧组升高（P均＜0.01）。 　　5.各组Bcl-2/Bax蛋白荧光强度比值:低氧组Bcl-2/Bax蛋白荧光强度比值较对照组升高(P＜0.01)，H+CGS组和H+Sal组Bcl-2/Bax蛋白荧光强度比值较低氧组均降低（P均＜0.01）。 　　6.各组A2AR蛋白表达:低氧组A2AR蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.01)，而H+CGS组和H+Sal组A2AR蛋白表达均较低氧组明显升高（P均＜0.01）。 　　7.各组Bax、Bcl-2蛋白表达:与对照组相比，低氧组Bax蛋白表达降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01); H+CGS组和H+Sal组Bax、Bcl-2蛋白表达均较低氧组升高（P均＜0.01）。 　　8.各组Bcl-2/Bax蛋白表达比值:低氧组Bcl-2/Bax蛋白表达比值较对照组升高，H+CGS组和H+Sal组Bcl-2/Bax蛋白表达比值较低氧组均降低（P均＜0.01）。 　　结论： 　　红景天苷可抑制小鼠离体肺动脉平滑肌细胞的低氧性增殖，上调A2AR、增加线粒体途径凋亡可能是其重要机制，红景天苷有望成为治疗肺动脉高压的新药物。

关键词：红景天苷肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖线粒体细胞凋亡蛋白表达

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