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替加环素与临床常用抗生素对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌体外联合药敏试验

现代检验医学杂志 2021年第3期36卷 113-117页

作者：贾艳增时东彦河北医科大学第二医院检验科石家庄050017

目的研究替加环素与临床常用抗生素对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent and carbapenemresistant Klebsiella pneumonia,CR-HvKP)的体外联合抗菌活性。方法收集2017~2019年河北医科大学第二医院临床分离非重复性CR-HvKP共2... 详细信息

目的研究替加环素与临床常用抗生素对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent and carbapenemresistant Klebsiella pneumonia,CR-HvKP)的体外联合抗菌活性。方法收集2017~2019年河北医科大学第二医院临床分离非重复性CR-HvKP共20株。应用微量肉汤稀释法测定替加环素与5种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),采用棋盘稀释法检测替加环素与5种抗生素(多黏菌素、头孢哌酮钠/舒巴坦钠、美罗培南、阿米卡星、磷霉素钠)的联合药敏试验。结果20株CR-HvKP主要来源于呼吸ICU 13例(65%),均为ST11型,碳青霉烯酶基因均为KPC-2型。血清型12株(60%)为K2型,为主要的血清型,1株(5%)为K1型。拉丝试验及毒力基因rmpA2均为阳性。替加环素与多黏菌素出现协同作用,百分比为60%。替加环素与美罗培南、磷霉素钠、头孢哌酮钠/舒巴坦钠均未出现协同作用。结论替加环素与多黏菌素体外联合有协同作用,可供临床作为参考治疗CR-HvKP感染。

关键词：碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HvKP) 替加环素多黏菌素体外联合药敏试验

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5种抗菌药物与舒巴坦对临床分离鲍曼不动杆菌体外联合药敏试验

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临床检验杂志 2018年第1期36卷 22-24页

作者：周梦兰王瑶程敬伟徐志鹏徐英春赵玉沛中国医学科学院北京协和医院检验科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院研究生院北京100730 中国医学科学院北京协和医院基本外科北京100730

目的观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、黏菌素单药及其与舒巴坦联合用药对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用。方法选取2011-2012年抗菌药物耐药趋势监测研究(SMART)监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌2... 详细信息

目的观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、黏菌素单药及其与舒巴坦联合用药对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用。方法选取2011-2012年抗菌药物耐药趋势监测研究(SMART)监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌21株,采取棋盘稀释法进行联合药敏试验,计算部分抑菌浓度指数(FIC)判定联合效应。结果所有组合体外均未出现拮抗作用,头孢哌酮、替加环素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应以协同作用为主,FIC指数≤0.5的菌株分别达56.8%及50.0%;亚胺培南、黏菌素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应主要表现为协同和部分协同作用,FIC指数<1的菌株分别占61.4%和52.3%;头孢他啶和舒巴坦联合应用则主要表现为无关作用,FIC≥4的菌株占63.6%。结论 5种联合用药组合中,头孢哌酮与舒巴坦联合用药的体外协同作用效果最好,尤其对碳青霉烯敏感的鲍曼不动杆菌,可增强其体外抗菌活性;亚胺培南、替加环素与舒巴坦联合用药可增加对碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。临床对碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌引起的院内感染,可考虑联合应用亚胺培南/舒巴坦、替加环素/舒巴坦进行治疗。

关键词：鲍曼不动杆菌棋盘稀释法体外联合药敏试验舒巴坦

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5种抗菌药物与舒巴坦对临床分离44株鲍曼不动杆菌体外联合药敏试验

5种抗菌药物与舒巴坦对临床分离44株鲍曼不动杆菌体外联合药敏试验

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2017中国医师协会检验医师年会暨第十二届全国检验与临床学术会议

作者：周梦兰中国医学科学院北京协和医院

目的：观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、粘菌素单药及其与舒巴坦联合用药时对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用.方法：选取2011年-2012年SMART监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌21株,采取棋盘稀释法... 详细信息

目的：观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、粘菌素单药及其与舒巴坦联合用药时对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用.方法：选取2011年-2012年SMART监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌21株,采取棋盘稀释法进行联合药敏试验,计算部分抑菌浓度(FIC)指数判定联合效应.结果：所有联合用药效应均未出现拮抗作用,头孢哌酮、替加环素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应以协同作用为主,FIC指数＜=0.5的菌株分别达56.8％及50.0％;亚胺培南、粘菌素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应主要表现为协同和部分协同作用,FIC指数＜1的菌株分别占61.4％和52.3％;头孢他啶和舒巴坦联合应用则主要表现为无关作用,FIC＞=4的菌株占63.6％.

关键词： )鲍曼不动杆菌棋盘稀释法体外联合药敏试验舒巴坦

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5种抗菌药物与舒巴坦对临床分离44株鲍曼不动杆菌体外联合药敏试验

5种抗菌药物与舒巴坦对临床分离44株鲍曼不动杆菌体外联合药敏试验

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2016中国医师协会检验医师年会暨第十一届全国检验与临床学术会议

作者：周梦兰中国医学科学院北京协和医院检验科中国医学科学院北京协和医学院研究生院

目的：观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、粘菌素单药及其与舒巴坦联合用药时对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用.方法：选取201 1年-2012年SMART监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌21株,采取棋盘稀释... 详细信息

目的：观察头孢哌酮、头孢他啶、亚胺培南、替加环素、粘菌素单药及其与舒巴坦联合用药时对鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用.方法：选取201 1年-2012年SMART监测美罗培南耐药鲍曼不动杆菌23株、美罗培南敏感鲍曼不动杆菌21株,采取棋盘稀释法进行联合药敏试验,计算部分抑菌浓度(FIC)指数判定联合效应.结果：所有联合用药效应均未出现拮抗作用,头孢哌酮、替加环素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应以协同作用为主,FIC指数＜=0.5的菌株分别达56.8％及50.0％;亚胺培南、粘菌素与舒巴坦联合应用对鲍曼不动杆菌的抗菌效应主要表现为协同和部分协同作用,FIC指数＜1的菌株分别占61.4％和52.3％;头孢他啶和舒巴坦联合应用则主要表现为无关作用,FIC＞=4的菌株占63.6％.在对美罗培南耐药的鲍曼不动杆菌中,亚胺培南、替加环素与舒巴坦联合用药协同作用率较高,FIC指数＜=0.5的菌株分别达56.5％及69.6％.

关键词：鲍曼不动杆菌棋盘稀释法体外联合药敏试验舒巴坦

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阿莫西林与阿米卡星对沙门菌的体外联合药敏试验

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吉林医学 2014年第15期35卷 3246-3247页

作者：张载潜广东省五华县人民医院广东梅州514400

目的:探讨阿莫西林与阿米卡星联合抗菌效果及沙门菌耐药性。方法:采用微孔板将不同浓度阿莫西林及阿米卡星药物中分别加入100μg/ml稀释菌液,记录菌液对单一阿莫西林及阿米卡星及联合给药耐药性。结果:阿莫西林与阿米卡星联合给药后,沙... 详细信息

目的:探讨阿莫西林与阿米卡星联合抗菌效果及沙门菌耐药性。方法:采用微孔板将不同浓度阿莫西林及阿米卡星药物中分别加入100μg/ml稀释菌液,记录菌液对单一阿莫西林及阿米卡星及联合给药耐药性。结果:阿莫西林与阿米卡星联合给药后,沙门菌耐药性所需浓度远小于单一使用上述药物,对比结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:临床治疗沙门菌所致感染性疾病可采用阿莫西林联合阿米卡星给药方法,提高临床疗效,保障患者生活质量及生命安全,值得临床推广应用。

关键词：阿莫西林阿米卡星沙门菌体外联合药敏试验

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地锦草与5种抗菌药联用对猪链球菌的体外抑菌效果

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安徽农业科学 2019年第24期47卷 114-116页

作者：江超姚飞虹张之怡程庆罗稀楷李嗣忻舒宇王歧本湘南学院基础医学院湖南郴州423000 湘南学院药学院湖南郴州423000

[目的]探究地锦草与其他抗菌药物对猪链球菌的体外联合抗菌效果,达到有效防止猪链球菌的目的。[方法]采用琼脂稀释法、微量肉汤棋盘稀释法,分别测定了地锦草与庆大霉素、青霉素、头孢曲松、阿莫西林、硫酸链霉素对3株猪链球菌的最小抑... 详细信息

[目的]探究地锦草与其他抗菌药物对猪链球菌的体外联合抗菌效果,达到有效防止猪链球菌的目的。[方法]采用琼脂稀释法、微量肉汤棋盘稀释法,分别测定了地锦草与庆大霉素、青霉素、头孢曲松、阿莫西林、硫酸链霉素对3株猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)及分级抑菌浓度指数(FIC)。[结果]地锦草和5种抗菌药联用后对3株链球菌的MIC有不同程度的降低,联用后都表现为相加或协同效果。[结论]地锦草在体外与5种抗菌药联用可减少抗菌药物用量,增强药物对细菌的抑制作用。

关键词：地锦草抗菌药物体外联合药敏试验猪链球菌

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昆明地区三种马拉色菌皮肤病流行病学调查及山苍子油和抗真菌药物联合的体外药敏试验

昆明地区三种马拉色菌皮肤病流行病学调查及山苍子油和抗真菌药物...

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作者：许雪昆明医科大学

学位级别：硕士

目的1、了解昆明地区三种马拉色菌皮肤病即花斑癣、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎菌种分布情况和易感因素,为预防马拉色菌感染及减少发病率提供依据；2、研究山苍子油抗马拉色菌的活性及分别与氟康唑、伊曲康唑及酮康唑联合抗真菌效力,为... 详细信息

目的1、了解昆明地区三种马拉色菌皮肤病即花斑癣、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎菌种分布情况和易感因素,为预防马拉色菌感染及减少发病率提供依据；2、研究山苍子油抗马拉色菌的活性及分别与氟康唑、伊曲康唑及酮康唑联合抗真菌效力,为临床治疗马拉色菌引起的相关疾病选择新型高效低毒的治疗药物和治疗方案提供理论依据。方法1.收集临床典型、真菌镜检阳性的花斑癣、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎(头皮屑)的病例,并进行马拉色菌培养和鉴定,分析马拉色菌菌种构成情况,同时用自制调查表对入选病例进行易感因素调查。2.参照美国国家临床试验标准化委员会(NCCLS)提出的M27-A方案,测定山苍子油对临床分离优势菌株的最小抑菌浓度(MIC值)。3.同时测定了山苍子油与酮康唑、伊曲康唑、氟康唑分别联合抗马拉色菌的MIC值,对三种抗真菌药物与山苍子油联合用药前后的MIC值进行统计学分析比较。结果1.共收集158例病例,男104例,女54例,平均年龄29.4岁,多汗、油性皮肤患者所占比例均超过60%,培养到111株马拉色菌,分离出6个菌种：糠秕马拉色菌38株、合轴马拉色菌29株、厚皮马拉色菌20株、限制马拉色菌11株、斯洛菲马拉色菌7株、钝形马拉色菌6株,优势菌株87株。2.山苍子油对临床分离的87株马拉色菌的优势菌株(糠秕、合轴、厚皮)MIC值范围为625～20000μg/ml,MIC均值为3130.76±846.752μg/ml,合轴马拉色菌、厚皮马拉色菌、糠秕马拉色菌的MIC平均值存在差异,糠秕马拉色菌的MIC平均值明显低于合轴及厚皮马拉色菌,差异有统计学意义(p<0.05)；3.三种唑类抗真菌药对马拉色菌临床分离株的MIC值范围、MIC50和MIC90值有一定差别,三种唑类抗真菌药对马拉色菌敏感性由高到低分别为：伊曲康唑、酮康唑、氟康唑；4.山苍子油分别与酮康唑、伊曲康唑、氟康唑联合用药时各药物的MIC均值均比单用时有显著降低,具有统计学差异(P<0.01)；0.5联合应用有相加作用。结论1.马拉色菌感染好发于男性青壮年,油性皮肤及多汗的患者更易发生花斑癣及马拉色菌毛囊炎,糠秕、合轴、厚皮马拉色菌为本地区马拉色菌感染的优势菌种,各疾病的优势菌种及菌种分布间存在差异；2.山苍子油对马拉色菌有抗真菌作用；3.3种唑类抗真菌药对不同马拉色菌菌种的敏感性有所不同；4.山苍子油与氟康唑、伊曲康唑、酮康唑有联合抗真菌作用。

关键词：马拉色菌流行病学山苍子油抗真菌药物体外联合药敏试验

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粘质沙雷菌产酶性及抗菌药物的联合用药模式研究

粘质沙雷菌产酶性及抗菌药物的联合用药模式研究

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作者：王欣第四军医大学

学位级别：硕士

目的为了了解粘质沙雷菌的产酶性以及对抗菌药物的体外抗菌活性,探讨其耐药性,并为联合用药模式对临床产酶菌感染的治疗提供实验室依据。本试验第一部分对咸阳地区(陕西省核工业二一五医院、咸阳市第一人民医院、中铁二十局医院)从2009... 详细信息

目的为了了解粘质沙雷菌的产酶性以及对抗菌药物的体外抗菌活性,探讨其耐药性,并为联合用药模式对临床产酶菌感染的治疗提供实验室依据。本试验第一部分对咸阳地区(陕西省核工业二一五医院、咸阳市第一人民医院、中铁二十局医院)从2009年1月至2012年12月临床分离出的106株粘质沙雷菌从临床的来源、感染特点及耐药情况进行了统计分析;第二部分实验,通过对ESBLs、Amp C酶和碳青霉烯酶的检测,了解本地区粘质沙雷菌的产酶特性,并对产酶菌株选择临床常用的抗菌药物进行体外联合药敏试验,检测其联合药物对产酶菌的体外抗菌活性特点,对其临床上感染的控制及耐药菌株的播散起到重要的指导作用。方法1.收集咸阳地区(陕西省核工业二一五医院、咸阳市第一人民医院、中铁二十局医院)从2009年1月至2012年12月临床分离出的106株粘质沙雷菌,对其临床分布情况、常见抗生素的耐药性以及重症医学科与普通病房的感染特点进行分析。***检测:在106株粘质沙雷菌中,用头孢噻肟或头孢他啶进行产ESBLs初筛试验,对耐药菌株采用双纸片协同确认试验(头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸,头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸)进行ESBLs的检测;PCR检测产ESBLs菌株的耐药基因。*** C酶检测:用头孢西汀纸片进行初筛试验,然后采用三维试验进行确证,PCR检测Amp C酶耐药基因。4.碳青霉烯酶的检测:应用改良Hodge试验对8株耐碳青霉烯酶类药物细菌筛选产酶株;PCR技术检测KPC型碳青霉烯酶耐药基因。5.联合药敏试验:采用棋盘稀释法对产酶粘质沙雷菌进行体外联合药敏试验,计算FIC指数,判断药物联合体外抗菌活性效果。6.统计学方法:采用X检验,P<0.05为具有统计学意义。结果1.菌株来源:从咸阳地区共分离获得106株粘质沙雷菌,其中以痰液标本最多,占84.1%(89/106),其次为分泌物、尿液和咽拭子,分别为4株、3株、3株;菌株来源科室主要为重症医学科(ICU)41.5%(44/106)株、呼吸内科15.1%(16/106)、神经外科13.2%(14/106)和肾内科9.4%(10/106)。2.临床药敏试验结果:106株粘质沙雷菌对一、二代头孢菌素的耐药率均在90%以上;对三、四代头孢菌素类药物耐药率在20%左右;对氨基糖甙类药物、氟喹诺酮类药物及碳青霉烯酶类药物的耐药率均在10%以下。3.重症医学科与普通病房菌株的耐药率结果:重症医学科和普通病房菌株的耐药率为氨曲南36.7%和11.3%、头孢吡肟为27.3%和8.1%、头孢他啶为29.5%和14.5%、头孢哌酮/舒巴坦为18.2%和8.1%、厄他培南为13.6%和3.2%,采用χ2检验,P<0.05,具有统计学意义;而对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南,重症医学科和普通病房的耐药率分别进行χ2检验,P>0.05,无统计学差别。4.产ESBLs的阳性率:106株粘质沙雷菌中ESBLs初筛试验阳性率34.9%(37/106),,22株耐头孢他啶,31株耐头孢噻肟,其中有16株细菌对头孢他啶和头孢噻肟同时耐药。经双纸片确证试验阳性为33株,总阳性率为31.1%(28/106)。应用PCR检测ESBLs耐药基因,共检出28株阳性菌株,阳性率26.4%(28/106),28株产ESBL耐药基因菌株中,CTX-M型75.0%(21/28),TEM型46.4%(13/28),SHV型10.7%(3/28)。21株产CTX-M型β-内酰胺酶菌株中,CTX-M-1型5株,占23.8%(5/21);CTX-M-2型8株,占38.1%(8/21);CTX-M-9型15株,占71.4%(15/21)。有16株粘质沙雷菌产两种或两种以上耐药基因,为57.1%(16/28)。5.产Amp C酶阳性率:Amp C酶初筛试验阳性率21.7%(23/106),三维确证试验阳性10株,总检出率9.4%(10/106)。PCR检测耐药基因阳性株有10株,与三维试验结果一致,EBC型Amp C酶耐药基因阳性株有6株,DHA型有3株,FOX型有1株,未检出MOX型与CIT型耐药基因。***型碳青霉烯酶阳性率:8株耐碳青霉烯酶类药物菌株在改良Hodge试验中,阳性率为75.0%(6/8),总阳性率为5.7%(6/106),应用PCR检测KPC型碳青霉烯酶耐药基因,阳性株为4株,均为KPC-2型耐药基因。7.常用抗菌药物体外联合药敏试验结果:对产ESBLs菌株,(哌拉西林/他唑巴坦)/阿米卡星、头孢吡肟/阿米卡星、(哌拉西林/他唑巴坦)/环丙沙星、美罗培南/环丙沙星及美罗培南/阿米卡星FIC指数<1的比率分别为32.2%、25.0%25.0%、25.0%和21.4%;对产Amp C酶菌株,(哌

关键词：粘质沙雷菌 ESBLs AmpC酶碳青霉烯酶 PCR 抗菌药物体外联合药敏试验

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两种钙调磷酸酶抑制剂联合常用抗真菌药物对马尔尼菲青霉酵母相体外药敏的研究

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广西医科大学学报 2015年第2期32卷 169-172页

作者：李强国李昕曹存巍广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021

目的:探讨两种钙调磷酸酶抑制剂联合常用抗真菌药物,对20株马尔尼菲青霉(PM)酵母相体外药敏的作用。方法:参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)M27-A3方案并做适当修改,采用棋盘格微量稀释法对20株PM酵母相进行钙调磷酸酶抑制剂环孢素A(C... 详细信息

目的:探讨两种钙调磷酸酶抑制剂联合常用抗真菌药物,对20株马尔尼菲青霉(PM)酵母相体外药敏的作用。方法:参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)M27-A3方案并做适当修改,采用棋盘格微量稀释法对20株PM酵母相进行钙调磷酸酶抑制剂环孢素A(CsA)、他克莫司(FK506)与5种常用抗真菌药物联合的体外药敏实验。结果:CsA与两性霉素B(AmB)、伊曲康唑(ITC)、氟康唑(FLC)联合时,各药的最低抑菌浓度(MIC)值均比单用时明显降低(均P<0.05)。CsA与AmB、ITC、FLC联合,分别有17株(85%)、13株(65%)、6株(30%)的菌株显示协同作用;而CsA与米卡芬净(MCFG)、卡泊芬净(CPFG)联合所有菌株均表现为无关联作用。FK506与以上5种抗真菌药联合时,各药物的MIC值较单用时无明显变化,联合时呈无关联作用。在所有受试PM酵母相中,CsA及FK506与以上5种抗真菌药物联合均未出现拮抗作用。结论:体外药敏研究显示,CsA与FK506在体外联合药敏中作用不同,CsA可增强AmB、ITC、FLC对PM酵母相的抗真菌活性;但FK506则无此作用。

关键词：钙调磷酸酶抑制剂体外联合药敏试验马尔尼菲青霉抗真菌药物

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耐伊曲康唑申克孢子丝菌体外药敏和分子生物学特性研究

耐伊曲康唑申克孢子丝菌体外药敏和分子生物学特性研究

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作者：黄怀球中山大学

学位级别：博士

孢子丝菌病是流行于热带及亚热带地区由申克孢子丝菌引起的皮肤、皮下组织及其附近淋巴系统的亚急性和慢性感染,可累及脏器,具有一定致残、致死率。根据《美国传染病协会2007版申克孢子丝菌病临床治疗指南》推荐,伊曲康唑为非系统性孢... 详细信息

孢子丝菌病是流行于热带及亚热带地区由申克孢子丝菌引起的皮肤、皮下组织及其附近淋巴系统的亚急性和慢性感染,可累及脏器,具有一定致残、致死率。根据《美国传染病协会2007版申克孢子丝菌病临床治疗指南》推荐,伊曲康唑为非系统性孢子丝菌病的首选单独治疗药物。我们在临床上发现3例对伊曲康唑治疗不敏感的皮肤型孢子丝菌病患者,从中首次分离出4株申克孢子丝菌临床耐药株,但申克孢子丝菌的耐药研究还是空白。本研究通过对这4株耐药株进行形态学、双相型转化试验、扫描电镜、ITS序列、体外单药药敏和联合药敏试验研究,同时采用RAPD技术进行临床耐药株和敏感株的基因型差异分析,探讨申克孢子丝菌耐药株和敏感株在表型、基因型和药物敏感性等方面的差异;同时获取了其编码细胞色素P-450羊毛固醇14-α-脱甲基酶的耐唑类抗真菌药物相关基因的表达序列片段,为分子耐药机制研究打下基础。　　目的:　　 1.明确耐伊曲康唑申克孢子丝菌临床株的形态学表型、基因型和体外药敏的特性;2.探讨申克孢子丝菌临床耐药株和敏感株的基因型差异,获取其耐唑类抗真菌药物相关基因的表达序列片段,为分子耐药机制研究打下基础。　　方法:　　 1.通过真菌镜检、培养、小培养、双相转化试验和扫描电镜技术对所分离临床耐药株进行形态学鉴定;2.采用真菌通用引物ITS4、ITS5进行PCR扩增申克孢子丝菌临床耐药株的rDNA ITS区序列,产物经纯化、测序后进行分子生物学鉴定;3.应用M38-A方案和改良M27-A2药敏试验方案对申克孢子丝菌临床耐药株进行菌丝相和酵母相的体外药敏试验。活化菌株,分别制备菌丝相和酵母相菌悬液,菌丝相浓度调整至5×104CFU/ml(2倍终浓度),酵母相调整至2.5×103CFU/ml(2倍终浓度);采用微量液基稀释法加样制板后,菌丝相置26℃,酵母相置35℃孵育,第5d观察结果。结果判断标准为各药的MIC终点为100％生长抑制,联合用药效果评价采用分数抑菌浓度指数评价;4.采用OPBG14和OPBG19两条引物进行RAPD,PCR扩增4株临床耐药株及46株临床非耐药株及1株标准株。对扩增的RAPD带型进行分析采用BioNumerics v.4.61软件统计出各菌株的欧式遗传距离,并按照Ward's algorithm with Jaccad's coefficient法进行聚类分析,绘出亲缘关系树状图。　　 5.提取申克孢子丝菌总RNA,逆转录后采用针对耐唑类抗真菌药物相关基因——编码细胞色素P-450羊毛固醇14-α-脱甲基酶基因片段的引物进行PCR扩增。　　结果:　　 1.4株耐伊曲康唑申克孢子丝菌临床株经真菌培养、小培养、双相转化试验和扫描电镜技术鉴定符合申克孢子丝菌的真菌学特征;2.临床耐药株均能扩增出400～600bp左右的rDNA ITS区域片段,所有片段的测序结果经序列比对,与申克孢子丝菌的模式菌株具有99％～100％同源性;3.临床耐药株在酵母相的伊曲康唑单药药敏结果显示较高的MIC值,均达到2μg/ml。临床耐药株与敏感株两组在酵母相的伊曲康唑单药药敏MIC值比较有统计学差异(P=0.02),而菌丝相则无差异(P=0.119>0.05);两组的特比萘芬单药药敏结果无论酵母相和菌丝相均无差异;4.联合药敏MIC值均明显低于单药药敏MIC值。两药联合药敏结果显示在菌丝相耐药株和非耐药株均无相关作用,在酵母相中有2株菌的FICI结果显示联合用药具有协同作用,其余则表现为无相关作用和拮抗作用。其中临床耐药株SUMS0382在酵母相的伊曲康唑和特比萘芬联合药敏FICI为0.375,显示了两种药物的协同作用并与临床疗效一致。　　 5.采用BioNumerics v.4.61软件应用Jaccard和Dice方法对OPBG14和OPBG19引物扩增的所有申克孢子丝菌菌株的RAPD带型进行聚类分析,结果显示国内不同地区来源的申克孢子丝菌基因带型呈现多样性,临床耐药株与敏感株在RAPD带型及分组上未发现明显聚类现象;不同临床类型及不同部位分离的申克孢子丝菌其带型及分组无明显的聚类现象;6.通过PCR方法采用所设计的引物扩增获得与耐唑类药物基因相关的申克孢子丝菌编码细胞色素P-450羊毛固醇14α-脱甲基酶的基因序列片段,与白念珠菌ERG11基因的序列片段比对结果显示具有高度一致的同源性。　　结论:　　 1.从伊曲康唑治疗失败的孢子丝菌病患者皮损中分离的4株临床耐药株经真菌形态学特征、转化实验、电镜和rDNA ITS序列分析鉴定为申克孢子丝菌;2.采用M38-A方案和改良M27-A2药敏试验方案进行的申克孢子丝菌菌丝相和酵母相体外单药药敏和联合药敏试验中临床耐药株在致病相酵母相对伊曲康唑高MIC结果证明其耐药性;3.申克孢子丝菌耐药株的伊曲康唑和特比

关键词：孢子丝菌病申克孢子丝菌体外联合药敏试验分子生物学特性耐药机制临床疗效

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