检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张蕾华中农业大学

学位级别：博士

本文研究了灰葡萄孢菌弱毒菌株CanBc-1的生物学特性、致病力衰退相关RNA病毒(Botrytis cinerea debilitation related RNA virus,简称BcDRV)的基因组结构及其分类属性、致病力衰退的分子机理。最后还以弱毒将菌株CanBc-1及其恢复致病力... 详细信息

本文研究了灰葡萄孢菌弱毒菌株CanBc-1的生物学特性、致病力衰退相关RNA病毒(Botrytis cinerea debilitation related RNA virus,简称BcDRV)的基因组结构及其分类属性、致病力衰退的分子机理。最后还以弱毒将菌株CanBc-1及其恢复致病力的单分生孢子后代CanBc-1c-66为材料,初步分析了菌株CanBc-1中差异表达的基因。取得了如下研究结果：首先,对源于6个地区和14种寄主植物的23个灰葡萄孢菌菌株进行了生物学特性分析。鉴定出一个异常菌株CanBc-1,其生长缓慢、菌丝异常分枝、仅产生少量分生孢子和菌核、完全丧失了致病能力。在菌株CanBc-1菌丝中检测到一种3.0 kb大小的dsRNA分子。通过对菌株CanBc-1单分生孢子后代的致病力,发现该菌株单分生孢子后代的致病力发生分化,有强毒后代出现。通过对不同类型杀菌剂的抗性测定,发现弱毒菌株CanBc-1对多菌灵、菌核净、农利灵等具有抗性。其次,对灰葡萄孢菌弱毒菌株CanBc-1中的致病力衰退相关RNA病毒(Botrytis cinerea-debilitation related RNA virus,缩写为BcDRV)基因组的分子生物学特性进行了研究。通过cDNA克隆和RT-PCR技术获得了BcDRV基因组的全长序列,共2806 bp,GC含量为33.3%。通过与网上已知序列的分析比对,确定CanBc-1中的dsRNA分子是一个线粒体病毒,属于裸露病毒科(Narnaviridae)、线粒体病毒属(Mitovirus)。此外,还对灰葡萄孢菌菌丝的超微结构进行了透射电镜观察,发现弱毒菌株CanBc-1菌丝线粒体出现异常,包括皱缩、溃解、内部没有瘠等特征。可见,BcDRV可能以灰葡萄孢菌的线粒体作为攻击目标。再次,对灰葡萄孢菌弱毒菌株CanBc-1的致病力衰退机制进行了研究。通过对不同灰葡萄孢菌菌株的侵染结构、果胶酶、植物毒素次生代谢产物、酸类物质和漆酶等致病相关因子的研究,发现弱毒菌株CanBc-1能够正常的分泌果胶酶、漆酶和植物性毒素物质,RT-PCR结果也证实弱毒菌株CanBc-1的果胶酶基因(Bcpg1-6)、漆酶基因(Bclcc1,Bclcc2)和毒素合成相关基因(Bcbot1)均能正常表达；但是通过对侵染结构的观察,发现弱毒菌株CanBc-1的菌丝顶端不能正常的形成侵染结构。因此,导致弱毒菌株CanBc-1致病力衰退机理包括：菌丝线粒体发生畸变,菌丝顶端不能正常产生侵染垫结构。最后,对弱毒菌株CanBc-1和强毒菌株CanBc-1c-66(可视为菌株CanBc-1的近等基因系)在转录水平上的差异表达基因进行了分析。采用基因表达谱分析的方法,共得到了2288个差异表达的基因。在弱毒菌株CanBc-1中,1392个基因上调表达,896个基因下调表达。根据KEGG基因功能分类,表明差异表达的基因的功能涉及到糖类代谢(8%)、脂质代谢(5%)、核苷代谢(2%)、氨基酸代谢(4%)、多糖的生物合成与代谢(1%)、辅助因子和维生素代谢(2%)、能量代谢(3%)、聚酮化合物和萜类化合物的生物合成(1%)、外源物质的生物降解(1%)、酶类家族(10%)、转录(2%)、翻译(2%)、聚集和降解(2%)、复制和修复(2%)、膜运输(5%)、信号转导(1%)、配体受体的相互作用(3%)、细胞内加工处理(3%)和未分类蛋白(43%)等19类。其中,可能与灰葡萄孢菌和其它病原菌致病过程相关的差异表达基因有12个。上述结果为进一步挖掘灰葡萄孢菌致病相关基因奠定了基础。

关键词：灰葡萄孢菌真菌病毒弱毒菌株 dsRNA 线粒体病毒侵染结构表达谱

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蒙古沙冬青根系深色有隔内生真菌共生及分离培养特征研究

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河北农业大学学报 2014年第5期37卷 18-24页

作者：陈严严贺学礼李宝库程春泉姜桥陈伟燕河北大学生命科学学院河北保定071002

2013年7月选取宁夏银川、沙坡头和甘肃民勤3个样地,分0-10,10-20,20-30,30-40,40-50cm5个土层采集蒙古沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）根围土壤样品,系统研究了蒙古沙冬青根系深色有隔内生真菌（DSE）侵染率、空间分布和分离培养特... 详细信息

2013年7月选取宁夏银川、沙坡头和甘肃民勤3个样地,分0-10,10-20,20-30,30-40,40-50cm5个土层采集蒙古沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）根围土壤样品,系统研究了蒙古沙冬青根系深色有隔内生真菌（DSE）侵染率、空间分布和分离培养特征,以便阐明DSE与蒙古沙冬青共生关系,为利用DSE资源促进蒙古沙冬青生长和荒漠植被恢复提供依据。结果表明：蒙古沙冬青根系能被DSE高度侵染,并发育形成典型的有隔菌丝和微菌核结构,银川样地微菌核以离散型分布为主,聚合型少见;沙坡头和民勤样地聚合型分布比例增加;微菌核数/根段长度比值,银川和沙坡头样地差异显著;微菌核/根段面积比值,仅10-20cm土层沙坡头与银川和民勤差异显著。菌丝侵染率最大值在0-20cm土层,民勤显著低于银川和沙坡头;微菌核侵染率20-30cm土层较高;总侵染率和定殖强度最大值在0-30cm土层,同一土层民勤与银川和沙坡头差异显著。共分离10株DSE菌株,5株产孢,5株不产孢,不产孢菌株多分离自0-10cm土层,而产孢菌株多分离自20-30cm和40-50cm土层。

关键词： DSE 侵染结构分离培养蒙古沙冬青荒漠环境

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希金斯刺盘孢己糖转运蛋白和环状RNA的功能研究

希金斯刺盘孢己糖转运蛋白和环状RNA的功能研究

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作者：袁勤峰华中农业大学

学位级别：博士

由希金斯刺盘孢（Colletotrichum higginsianum）侵染引起的十字花科植物炭疽病是一类重要的植物真菌病害。本文对希金斯刺盘孢的6个己糖转运蛋白的功能进行了研究,重点对Ch Hxt6从糖利用角度解析其参与希金斯刺盘孢的致病机制;另外,从... 详细信息

由希金斯刺盘孢（Colletotrichum higginsianum）侵染引起的十字花科植物炭疽病是一类重要的植物真菌病害。本文对希金斯刺盘孢的6个己糖转运蛋白的功能进行了研究,重点对Ch Hxt6从糖利用角度解析其参与希金斯刺盘孢的致病机制;另外,从全基因组水平对希金斯刺盘孢的环状RNA（circ RNA）进行了鉴定,并进一步解析了非编码区来源的circ RNA在希金斯刺盘孢生长发育过程中的调控作用。主要研究结果如下:（1）随机插入突变体G256的T-DNA插入破坏一个己糖转运蛋白,从希金斯刺盘孢中鉴定到6个己糖转运蛋白Ch Hxt1-Ch Hxt6,均含有保守结构域Sugar＿tr,通过系统发育分析发现己糖转运蛋白Ch Hxt6可能是一种新的己糖转运蛋白。Ch Hxt6蛋白具有12个跨膜结构域,在跨膜结构之间存在对转运活性十分重要的胞内环状结构。这6个Ch Hxt基因在希金斯刺盘孢侵染过程中都能表达,Ch Hxt4在活体营养阶段显著上调表达,而Ch Hxt6在活体营养和死体营养阶段均显著上调表达,说明Ch Hxt4和Ch Hxt6可能与希金斯刺盘孢的致病相关。对Ch Hxt1～Ch Hxt6分别进行敲除。所有敲除突变体的菌落形态和分生孢子萌发与野生型菌株无明显变化,而敲除突变体ΔCh Hxt4和ΔCh Hxt6对拟南芥叶片的致病力显著降低。显微观察发现ΔCh Hxt4和ΔCh Hxt6的次生菌丝形成率与野生型相比分别下降了43%和62%,表明己糖转运蛋白Ch Hxt4和Ch Hxt6参与调控希金斯刺盘孢的次生菌丝形成。对Ch Hxt6蛋白第169位苏氨酸（Thr169）和第221位脯氨酸（Pro221）分别进行单点和双点突变。与野生型相比,单点突变菌株Ch Hxt6（T169S）m和双点突变菌株Ch Hxt6（T169S+P221L）m对拟南芥的致病力有所下降,而单点突变菌株Ch Hxt6（P221L）m的致病力无明显变化。显微观察发现:与野生型相比,Ch Hxt6（T169S）m和Ch Hxt6（T169S+P221L）m菌株的次生菌丝形成率分别下降了44%和52%,而Ch Hxt6（P221L）m菌株的次生菌丝形成率无明显变化,说明Ch Hxt6的Thr169位点对于Ch Hxt6的致病功能十分重要。将Ch Hxt1-Ch Hxt6基因分别转入缺失所有己糖转运蛋白hxt的酿酒酵母突变体中表达,发现表达了Ch Hxt6的酵母菌株可以在以葡萄糖、半乳糖、果糖和甘露糖为唯一碳源的培养基上生长,而分别表达了Ch Hxt1-Ch Hxt5的酵母菌株在其中一种或多种己糖的培养基上生长存在缺陷,说明Ch Hxt6能够广泛参与多种单糖的转运和利用;而表达单点突变基因Ch Hxt6（T169S）、Ch Hxt6（P221L）和双点突变基因Ch Hxt6（T169S+P221L）的酵母菌株在以葡萄糖或半乳糖为唯一碳源的培养基上的生长情况比表达Ch Hxt6完整基因的酵母菌株稍微减弱,且表达Ch Hxt6（T169S+P221L）的酵母菌株在甘露糖上的生长显著减弱,说明Ch Hxt6中Thr169和Pro221位点与Ch Hxt6的糖转运功能密切相关。（2）对希金斯刺盘孢进行环状RNA（circ RNAs）的高通量测序,从菌丝、分生孢子和附着胞样品中共鉴定到26,876条circ RNAs。环状RNA中超过70%的长度位于200～500 nt之间,鉴定到的circ RNAs在12条染色体上均匀分布。在菌丝中特异表达的circ RNAs占总数的69.1%,在孢子和附着胞中特异表达的circ RNAs分别占总数的23.9%和1.9%,在三类样品中均表达的circ RNAs占总数的1.1%,表明希金斯刺盘孢circ RNA的表达具有组织特异性。对差异表达circ RNAs的母基因进行GO和KEGG富集分析,发现基因的功能和调控途径主要与生长发育和代谢等进程相关。从活体寄生真菌玉米黑粉菌和死体寄生真菌灰霉病菌的RNA-seq数据中分别预测到3,405和2,980条来源于编码区的circ RNAs,而它们与希金斯刺盘孢circ RNAs之间共鉴定出875条circ RNAs的母基因是同源基因,其中有113个基因产生相似的circ RNAs,表明植物病原真菌中circ RNAs具有一定的保守性。对产生circ RNAs的非编码区序列Ch NCR1-Ch NCR10分别进行敲除,发现Ch NCR1-Ch NCR10敲除突变体的致病力与野生型相比无明显差别。敲除突变体ΔCh NCR1、ΔCh NCR3和ΔCh NCR7的菌丝生长速率相比野生型降低。将ΔCh NCR1、ΔCh NCR3和ΔCh NCR7菌株接种在含有山梨醇、刚果红和荧光增白剂的PDA上培养

关键词：希金斯刺盘孢己糖转运蛋白点突变侵染结构致病力环状RNA

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仙客来叶斑病侵染特性观察

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湖北农业科学 2013年第14期52卷 3302-3305页

作者：袁强史丽娟高琪蒋先锋李真冯艳忠李凤兰东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 黑龙江省农业科学院哈尔滨150086

为仙客来(Cyclamen premium Mill)叶斑病的起源、发生、传播和防治研究提供形态解剖学依据,利用石蜡切片和扫描电镜观察患叶斑病的仙客来叶片,研究病原菌在叶片中的分布和侵染特点。结果表明,叶斑病病原菌先通过菌丝从叶片气孔侵入,进... 详细信息

为仙客来(Cyclamen premium Mill)叶斑病的起源、发生、传播和防治研究提供形态解剖学依据,利用石蜡切片和扫描电镜观察患叶斑病的仙客来叶片,研究病原菌在叶片中的分布和侵染特点。结果表明,叶斑病病原菌先通过菌丝从叶片气孔侵入,进入海绵组织中产生孢子,再向其他部位蔓延。叶斑病病原菌在侵染过程中产生了垫、塞和钉状的特殊侵染结构。

关键词：仙客来叶斑病侵染特点侵染结构

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灰葡萄孢菌隔膜蛋白septin的生物学功能解析

灰葡萄孢菌隔膜蛋白septin的生物学功能解析

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作者：冯会强吉林大学

学位级别：硕士

灰葡萄孢菌是一种全球重要的植物病原真菌,属于典型的死体营养型,寄主范围十分广泛,能够侵染多达1400种植物。该菌不仅能在植物生长期侵染,也能在果蔬储藏期侵染发病,危害广泛,损失严重。目前灰葡萄孢菌作为一种模式植物病原备受关注,... 详细信息

灰葡萄孢菌是一种全球重要的植物病原真菌,属于典型的死体营养型,寄主范围十分广泛,能够侵染多达1400种植物。该菌不仅能在植物生长期侵染,也能在果蔬储藏期侵染发病,危害广泛,损失严重。目前灰葡萄孢菌作为一种模式植物病原备受关注,但关于其寄主侵染过程的分子机理仍不清楚。在过往的研究中发现,灰葡萄孢菌需要形成特定的侵染结构:附着胞或侵染垫,才能正常侵入寄主,进一步分泌多种致病因子杀死寄主从而获取营养。此外,隔膜蛋白septin作为真核生物中一类高度保守的蛋白家族,参与细胞骨架,细胞周期,细胞分泌等多项生命过程并发挥重要功能。在真菌中septin蛋白家族具有四个核心成员:Sep3、Sep4、Sep5、Sep6,其中Sep4是最小的蛋白。本研究重点解析新型细胞骨架隔膜蛋白septin如何在灰葡萄孢菌生长发育发挥功能,并参与寄主侵染过程,主要研究结果如下:(1)通过生物信息学分析,检索到灰葡萄孢菌中四个核心septins组分:BcSep3、BcSep4、BcSep5、BcSep6;(2)利用农杆菌介导转化,同源重组基因替换的方法,筛选获得灰葡萄孢菌四个核心septin基因敲除突变体ΔBcsep3,ΔBcsep4,ΔBcsep5,ΔBcsep6菌株。通过致病性分析,结果表明核心septins组分是灰葡萄孢菌致病所必需的;(3)通过野生型与突变体表型差异分析,发现BcSep4是灰葡萄孢菌侵染结构发育所必需的;另外,BcSep4还在灰葡萄孢菌无性繁殖、芽管发育、柔性生长、逆境响应、胞内物质运输等过程中发挥重要功能;(4)通过GFP融合亚细胞定位,证明BcSep4可能通过参与脂膜微曲面形成,调控灰葡萄孢菌生长发育和侵染结构形成过程;(5)利用二亚苯基碘(diphenylene iodonium,DPI)和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)处理,发现灰葡萄孢菌BcSep4在侵染结构形成过程中受活性氧ROS信号传导调控,并与cAMP信号传导有关;(6)通过对四个核心septin基因缺失突变体菌株ΔBcsep3、ΔBcsep4、ΔBcsep5、ΔBcsep6生物表型分析,发现四个核心septin组分都是灰葡萄孢菌侵染结构形成所必需的;(7)对四个核心septin组分分别进行亚细胞定位,结果表明BcSep3、BcSep4、BcSep5、BcSep6在胞内能够以不同的自我组装分配模式,影响细胞极性,共同调控灰葡萄孢菌生长发育和侵染结构形成。本研究首次解析灰葡萄孢菌septin的生物学功能,让我们对灰葡萄孢菌的生长发育和分子致病机理有了更深入的认识。由于植物中没有septin存在,因此未来可能作为潜在的防治靶标应用于农业防治中。

关键词：灰葡萄孢菌隔膜蛋白septin 侵染结构致病性亚细胞定位活性氧ROS

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外源氨气对赤星病菌侵染烟草叶片的细胞学和生理学的影响

外源氨气对赤星病菌侵染烟草叶片的细胞学和生理学的影响

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作者：丁燕芳河南农业大学

学位级别：硕士

本论文主要以赤星病菌为研究对象，模拟烟叶成熟期氨挥发的情况，探讨叶表吸附氨对赤星病菌侵染结构体外组织学和叶片超微结构的影响以及接种叶片的相关生理变化，以期揭示烟叶衰老成熟期氨释放与诱导烟草赤星病初始发生的氨挥发因素的... 详细信息

本论文主要以赤星病菌为研究对象，模拟烟叶成熟期氨挥发的情况，探讨叶表吸附氨对赤星病菌侵染结构体外组织学和叶片超微结构的影响以及接种叶片的相关生理变化，以期揭示烟叶衰老成熟期氨释放与诱导烟草赤星病初始发生的氨挥发因素的相互关系。主要结果如下： 1适宜氨浓度处理接种叶片的确定 20μl/L的氨气浓度为氨处理赤星病菌侵染叶片的最适浓度。通过烟叶氨气挥发量的测定发现，氨气挥发量随叶片的衰老大幅上升，叶龄70天挥发量最大，达到14.44μl/（m2*h）。由此对离体叶片分别采用15μl/L、20μl/L、25μl/L浓度的氨气处理烟草叶片得出，20ul/l的氨气处理叶片后与正常叶片的丙二醛、叶绿素含量差异不显著，与氨处理接种孢子的叶片丙二醛、叶绿素含量和无氨处理接种孢子叶片的叶绿素含量差异显著。 2外源氨气处理对烟草赤星病菌侵染结构体外的组织学和超微结构影响（1）外源氨气处理对烟草赤星病菌侵染结构及侵入方式的影响一定浓度的氨气能够促进赤星病菌孢子的萌发。氨处理在接种6小时后孢子大量萌发并开始伸出了1条芽管，在12小时叶片表面大量孢子均产生2-3条芽管，24h几乎所有的孢子都已萌发产生数条芽管，且开始有附着包出现，伴随有菌丝的产生。对照在接种12小时后孢子开始萌发并产1条芽管，在24h孢子大量萌发，有1-2条芽管产生，但无附着孢和菌丝产生。氨处理在48小时孢子上有菌丝产生，并定向延伸，对照则只有单个芽管的伸长。（2）外源氨气处理烟草赤星病菌侵染叶片后超微结构变化一定浓度的氨气能够提高赤星病菌的致病能力，加剧侵染步伐。2天时与对照相比处理叶绿体出现漂移现象，叶绿体膨大，叶片细胞间出现明显空隙，间隔，叶绿体漂移中央；处理在4天时细胞壁周围附着大量的菌丝，并有少量菌丝进入细胞间隙，附着与细胞器周围；对照在接种4天时细胞壁中间出现空隙，间断，叶绿体飘移细胞壁；在6天时处理细胞壁间隙，细胞壁里面均有大量菌丝侵入，细胞核表面也附着大量的菌丝，且细胞器变形，对照在接种6天时细胞壁间隙，细胞壁上附着有大量菌丝，但菌丝尚未穿透细胞壁。 3外源氨气处理赤星病菌侵染烟草叶片的生理变化一定浓度的氨气可能在病原菌的初始侵染中加速叶片的衰老，降低品种抗病的防御机制，促进病原菌的侵染进程。氨处理烟草叶片中叶绿素含量在第二天急剧下降且降幅大于对照。丙二醛的含量，处理在前期含量高于对照后期含量低于对照，后期变化与对照趋势相同。脯氨酸含量在后期低于对照。外源氨气在病原菌初期侵染过程中可能起到加速叶绿素降解，促使烟草叶片膜脂过氧化程度加重，抗逆性减弱。氨处理接种叶片减缓可溶性糖含量的增加，随着处理时间的延长，氨浓度含量降低，可溶性糖含量增加而游离氨基酸含量降低；总酚类黄酮的含量变化趋势一直，在前期处理两者含量都是急剧下降。说明了氨气与寄主叶片的互作，在一定程度上为病原菌的侵染提供了一个相对有利的环境，从而有利于病原菌对寄主叶片的侵染。 4外源氨气处理赤星病菌侵染烟草叶片的相关防御酶、活性氧代谢变化研究了氨处理赤星病菌接种后叶片的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧阴离子自由基（O2-）、过氧化氢（H2O2）活性变化规律。结果表明，对照和处理的保护酶活性在前期都有明显的增加，但是随着氨处理时间的延长，处理的防御酶活性在后期一直低于对照的酶活性。氨处理后期的接种叶片防御酶活性明显降低，减少了对活性氧的清楚，致使超氧阴离子自由基、过氧化氢发生积累，使细胞膜遭受伤害，从而加速细胞的衰老和解体，加剧了病原菌对寄主叶片的侵染步伐。 5外源氨气处理赤星病菌侵染烟草叶片的病程相关蛋白变化几丁质酶的活性处理和对照的变化规律基本一致，在整个时间段内，处理的几丁质酶含量均低于对照，可能原因是氨环境对存在于真菌细胞壁中的几丁质酶有一定的影响；β-1,3-葡聚糖酶活性在整个时间段内，处理和对照的变化规律也基本一致，但处理的β-1,3-葡聚糖酶的变化幅度明显低于对照。

关键词：烟草赤星病外源氨侵染结构超微结构防御酶病程相关蛋白

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基于转录组分析苹果梨表皮蜡质调控Alternaria alternata侵染的分子机制

基于转录组分析苹果梨表皮蜡质调控Alternaria alternata侵染的分...

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作者：胡培芳甘肃农业大学

学位级别：硕士

本研究以苹果梨采后主要致病菌Alternaria alternata为研究对象,通过ABI STEP ONE PLUS测序方法研究了蜡质处理后***侵染结构形成过程的转录组,通过生物信息学方法比较了果蜡和蜂蜡处理后***差异表达基因的GO功能、COG分类和KEGG代谢途... 详细信息

本研究以苹果梨采后主要致病菌Alternaria alternata为研究对象,通过ABI STEP ONE PLUS测序方法研究了蜡质处理后***侵染结构形成过程的转录组,通过生物信息学方法比较了果蜡和蜂蜡处理后***差异表达基因的GO功能、COG分类和KEGG代谢途径网络,并对主要的差异表达基因进行了qPCR验证;同时通过用各位点的抑制剂处理***,研究了钙信号途径在梨果蜡质诱导***侵染结构形成中的调控作用。结果如下:1.通过高通量测序及生物信息学分析,发现在***孢子萌发阶段（6h）,果蜡处理较对照和蜂蜡组分别有56（33个上调、23个下调）和62（35个上调、27个下调）差异表达基因;在***附着胞形成阶段（12h）,果蜡处理较对照和蜂蜡组有127（64上调、63个下调）和260个（140个上调、120个下调）差异表达基因;与果蜡处理后***的孢子萌发阶段（6h）相比,果蜡处理的***附着胞形成阶段（12h）有626（486个上、140个下调）基因差异表达。总体上在***侵染结构形成过程中,***果响应果蜡表面时的差异基因数目显著低于蜂蜡。***数据库功能注释和富集分析显示果蜡和蜂蜡处理的***差异表达基因主要富集于细胞组分、分子功能和生物学过程三大类,其中注释到生物学过程中的差异基因最多,主要体现在生物过程中的代谢过程,且果蜡组在GO分析的各功能类别中差异基因均低于蜂蜡组和对照组;COG分类数据库分析表明差异表达基因主要富集在***的初级代谢、次级代谢、细胞分裂及胞内信号传导等过程。在发育的不同阶段各处理差异表达基因富集的生物过程不同,其中果蜡处理组的细胞分裂及胞内信号传导弱于蜂蜡处理;KEGG代谢途径分析发现在***孢子萌发及附着孢形成阶段,果蜡组的脂肪酸代谢和过氧化物酶途径中差异基因占比均显著高于蜂蜡组。3.对筛选的与脂肪酸代谢、过氧化物酶体及钙离子信号通路相关的的8个关键差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果显示除磷脂酶C基因外,果蜡处理***后长链脂肪酸辅酶A连接酶、酰基辅酶A氧化酶、酰基辅酶A脱氢酶,3-酮脂酰辅酶A硫解酶、过氧化物酶体基因PEX2、钙调素基因均上调表达,与转录组测序结果中差异表达的基因上调表达变化趋势基本一致,表明本研究中测序结果比较可靠。4.通过用Ca2+信号转导途径不同位点阻断（抑制）剂处理***的分生孢子,结果表明钙离子螯合剂（EGTA）、磷脂酶C抑制剂（新霉素）、胞内钙离子通道阻滞剂（TMB-8）、钙调蛋白拮抗剂（W-7）、钙调磷酸激酶抑制剂（环孢菌素A）能显著抑制对照及果蜡刺激的***孢子萌发和附着胞形成,且抑制作用存在浓度效应。同时发现各抑制剂处理对果蜡诱导***附着胞形成过程的抑制作用大于孢子萌发,表明钙离子信号途径对果蜡诱导***附着胞的形成具有重要的调控作用。综上,通过转录组学方法较为全面地解析了果蜡诱导***侵染结构形成的主要分子机制,发现了一些与其诱导相关的代谢途径及信号通路,为进一步具体阐明***感知和响应果实表皮蜡质信号进而致病的分子机制提供重要的理论依据。

关键词：梨果皮蜡质 A.alternata 转录组钙信号途径侵染结构

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灰葡萄孢菌菌株CanBC-3致病力衰退及其机制研究

灰葡萄孢菌菌株CanBC-3致病力衰退及其机制研究

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作者：周宇华中农业大学

学位级别：硕士

灰葡萄孢菌菌株CanBC-3刚分离时为一强毒菌株,在实验室培养一段时间之后,表型发生明显改变,包括致病力衰退、生长缓慢和菌落形态异常等现象。这些变化可能是灰葡萄孢菌致病因子发生变化引起的,对这些因子的研究,有助于深入理解灰葡萄孢... 详细信息

灰葡萄孢菌菌株CanBC-3刚分离时为一强毒菌株,在实验室培养一段时间之后,表型发生明显改变,包括致病力衰退、生长缓慢和菌落形态异常等现象。这些变化可能是灰葡萄孢菌致病因子发生变化引起的,对这些因子的研究,有助于深入理解灰葡萄孢菌的致病机制。本研究主要以弱致病性菌株CanBC-3为材料进行了以下研究: 首先,对源于菌株CanBC-3的两类灰葡萄孢菌衍生后代进行了致病性测定、培养特性观察和生物量测定。结果表明:以CanBC-3V为代表的衍生菌株为强致病性菌株,菌丝生长较快,菌落扩展均匀,生物量高。而以CanBC-3HV为代表的另一类菌株为弱致病性菌株,菌丝生长慢,菌落扩展不均匀,生物量低。其次,分析了灰葡萄孢菌菌株CanBC-3HV的垂直传染规律和水平传染规律。结果表明:菌株CanBC-3HV可以通过菌核、分生孢子和原生质体再生将它的弱毒特性传染给后代,但是传染频率较低,这种传染称为垂直传染。菌株CanBC-3HV也可以把它的弱毒特性传给其它强毒灰葡萄孢菌菌株,这种传染属于水平传染。结果表明:CanBC-3HV的水平传染具有菌株特异性,即只能传染给CanBC-3来源的强毒菌株,而不能传染给非CanBC-3来源的强毒菌株。再次,比较了灰葡萄孢菌菌株CanBC-3HV(弱致病型)和CanBC-3V(强致病型)在产生酸、毒素、蛋白酶、淀粉酶和果胶酶,以及在形成侵染垫结构等方面的差异。结果表明:致病力弱的菌株CanBC-3HV在产生酸、毒素、蛋白酶和淀粉酶等方面并未受到明显抑制,果胶酶产量稍微受到抑制。但是,菌株CanBC-3HV侵染结构形成率较低,36h仅为3%,低于强毒菌株CanBC-3V,36h可以达到98%。因此初步估计菌株CanBC-3HV是由于菌丝生长受阻而引起的侵袭力衰退。最后,分析了灰葡萄孢菌菌株CanBC-3HV致病力衰退的原因。结果表明:灰葡萄孢菌菌株CanBC-3HV的致病力衰退与dsRNA、内生细菌和转座子无关。此外,本研究观察到一种现象:在灰葡萄孢菌菌株CanBC-3HV菌丝细胞内出现了细胞结构。

关键词：灰葡萄孢菌弱毒株CanBC-3HV 果胶酶侵染结构致病力

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基于苹果梨果皮含量水平的酚类物质对Alternaria alternata侵染及胞外降解酶的调控

基于苹果梨果皮含量水平的酚类物质对Alternaria alternata侵染及...

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作者：刘筱甘肃农业大学

学位级别：硕士

本研究以苹果梨主要致病菌互隔交链孢(Alternaria alternata)为研究对象,通过体内体外实验,系统研究基于果皮含量水平的不同酚类物质(绿原酸、咖啡酸、儿茶素)对***生长(孢子萌发、芽管伸长、菌丝生长)、侵染结构(附着胞、侵染菌丝)形... 详细信息

本研究以苹果梨主要致病菌互隔交链孢(Alternaria alternata)为研究对象,通过体内体外实验,系统研究基于果皮含量水平的不同酚类物质(绿原酸、咖啡酸、儿茶素)对***生长(孢子萌发、芽管伸长、菌丝生长)、侵染结构(附着胞、侵染菌丝)形成以及胞外降解酶类(角质酶、PG、PMG、PGTE、PMTE、Cx、β-葡萄糖苷酶)活性的影响。结果如下:1.基于果皮含量水平的外源绿原酸(1000～4000μg/g)、咖啡酸(100～400μg/g)、儿茶素(500～2000μg/g)处理均能不同程度的抑制***孢子萌发、芽管的伸长以及菌丝的生长,其抑制作用存在浓度效应,其中4000μg/g绿原酸、400μg/g咖啡酸以及2000μg/g儿茶素抑制效果最明显,且儿茶素的抑制效果相对优于绿原酸和咖啡酸;体内实验表明三种酚类物质均能不同程度的延缓损伤接种***在苹果梨上的病斑的扩展。2.基于果皮含量水平的三种外源酚类物质处理均能显著的延缓或抑制***在梨果表皮侵染过程及侵染结构的形成,随着酚类物质浓度的增大,抑制效果越显著,其中4000μg/g绿原酸、400μg/g咖啡酸以及2000μg/g儿茶素处理的***在梨果表皮未见附着胞及侵染菌丝的形成,且外源咖啡酸的抑制效果相比其它两种酚类物质则更明显一些;体外洋葱表皮侵染试验进一步证实三种酚类物质能显著抑制***附着胞和侵染菌丝的形成,并且侵染结构的形成率明显低于体内试验。3.基于果皮含量水平的三种外源酚类物质对***在体内和体外条件下分泌的胞外降解酶的活性均具有不同程度的影响,其作用效果因体内体外条件、酶和酚类物质种类而不同。离体条件下三种酚类物质处理均促进了***分泌的角质酶的活性,而在体内条件下角质酶活性却被抑制;无论在体外还是活体条件下三种酚类物质均能显著的抑制***分泌的PG酶的活性,其中4000μg/g绿原酸、400μg/g咖啡酸以及2000μg/g儿茶素处理后体外条件下培养第4 d时PG酶的活性比同期对照分别降低了72.3%、98.1%和68.4%,同时基于果皮含量水平的三种外源酚类物质不论是在体外还是体内条件下也显著抑制了***分泌的PMG、PGTE、PMTE、Cx以及β-葡萄糖苷酶等其它胞外降解酶的活性。综上基于苹果梨果皮含量水平的绿原酸、咖啡酸、儿茶素等酚类物质可通过抑制或调控***侵染结构的分化和主要致病因子胞外降解酶的活性而影响病原物侵染。

关键词： A.alternata 绿原酸咖啡酸儿茶素侵染结构胞外降解酶

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发育及贮藏期苹果梨果皮蜡质对Alternaria alternata侵染的影响

发育及贮藏期苹果梨果皮蜡质对Alternaria alternata侵染的影响

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作者：唐瑛甘肃农业大学

学位级别：硕士

本文以苹果梨作为研究试材,采用冷冻扫描电镜和光学显微镜观察分析发育及贮藏期果实表皮蜡质的结构变化及其病原物侵染过程;并通过体内(in vivo)和体外(in vitro)洋葱膜以及载玻片涂膜技术分析蜡质化学组分对***侵染结构形成、角质酶活... 详细信息

本文以苹果梨作为研究试材,采用冷冻扫描电镜和光学显微镜观察分析发育及贮藏期果实表皮蜡质的结构变化及其病原物侵染过程;并通过体内(in vivo)和体外(in vitro)洋葱膜以及载玻片涂膜技术分析蜡质化学组分对***侵染结构形成、角质酶活性的影响,同时分析梨果实表皮及体外涂膜表面的疏水性(接触角)与***侵染结构形成之间的关系。结果表明:1.经冷冻扫描电镜观察在苹果梨果实发育过程中,花后30d果实表皮的蜡膜已经形成,但膜不完整,花后60d,蜡膜层进一步增厚,局部区域形成微裂纹,在果实发育后期,蜡膜厚度显著增加,皮孔被覆盖,果皮表面形成大量薄片状结晶体。在贮藏期间蜡膜厚度没有明显的变化,在贮藏前期果实表皮蜡质表面覆有片状结晶体,随着贮藏时期的延长,逐步转变为光滑的块状结晶体。***在苹果梨表皮上的侵染过程为孢子萌发形成芽管,芽管伸长、顶端膨大形成附着胞,部分附着胞进一步分化形成侵染菌丝,进而通过皮孔或表皮侵入。体内实验表明,与脱蜡表皮相比,完整果皮能有效的促进***附着胞和侵染菌丝的形成,不同发育期果实表皮对***侵染过程及侵染结构的促进作用有差异,其中***在花后60d果实表皮上2h孢子萌发,9h形成大量附着胞,且形成率高达55%,显著高于其它发育期;体外实验进一步证实了不同发育期果皮蜡质提取物对***侵染过程以及结构形成均具有促进作用,但由于蜡质提取物在不同膜上重结晶结构的差异,促进作用有所不同,如花后120d蜡质提取物能显著促进侵染菌丝形成,但其形成率在洋葱膜、Formvar膜、硅烷化载玻片上分别为22.3%、11%和4%。不同发育期果实表皮及体外不同膜的疏水性均存在差异,体外蜡质涂膜表面的疏水性高于果实表皮的疏水性,经相关性分析,疏水性与附着胞以及侵染菌丝形成之间是正相关,相同接触角果蜡对***侵染结构形成的促进作用远高于蜂蜡。体内和体外实验进一步表明发育期果皮蜡质对***角质酶的基因表达和酶活性也具有诱导作用。同时通过无损接种和化学组分分析表明,***对苹果梨蜡质也具有一定的降解作用。3.贮藏期完整果皮与脱蜡表皮相比,对***孢子萌发具有一定的抑制作用,却促进了侵染结构的形成以及芽管长度增加,不同贮藏期果皮蜡质对***侵染结构的形成具有差异。除了因不同介质导致的差异,体外实验进一步证实了贮藏期果皮蜡质均有效促进了***附着胞和侵染菌丝的形成,随着贮藏时间延长,果皮蜡质对侵染结构形成促进作用越明显。贮藏期果实表面疏水性均高于发育期,相关性分析同样证实表面疏水性与***附着胞、侵染菌丝形成呈正相关。贮藏期蜡质提取物对***角质酶活性具有一定的诱导作用,但对角质酶基因表达影响不大。综上所述,苹果梨发育贮藏过程表皮蜡质化学组分、疏水性以及表皮结构变化对***侵入过程以及侵染结构的形成均具有一定调控作用。

关键词：苹果梨蜡质 Alternaria alternata 侵染结构角质酶

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