检索结果-内蒙古大学图书馆

中国输血杂志 2012年第6期25卷 552-556页

作者：于晶晶王红刘曦袁理刘嘉馨中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052

目的探讨过期血液中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用。方法选取全血和浓缩血小板样品为研究对象,分别采用冻融法和CaCl2法处理保存d 1、5、10的血小板,应用ELISA试剂盒测定样品中PDGF-AB、TGF-β1的含量,应用CCK-8试剂盒测定样品的... 详细信息

目的探讨过期血液中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用。方法选取全血和浓缩血小板样品为研究对象,分别采用冻融法和CaCl2法处理保存d 1、5、10的血小板,应用ELISA试剂盒测定样品中PDGF-AB、TGF-β1的含量,应用CCK-8试剂盒测定样品的促细胞增殖作用;在全血保存d 1、10、21、35、40时取样,离心收集血浆,测定其血小板生长因子含量和促细胞增殖作用。结果 CaCl2法处理的d 1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为86.56±19.66、76.15±18.55、70.65±24.13 ng/ml,TGF-β1的含量分别为86.40±19.92、79.80±16.54、92.45±17.59 ng/ml;冻融法处理的d 1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为48.24±3.73、60.91±18.39、69.35±22.29 ng/ml,TGF-β1的含量分别为107.57±46.48 149.33±24.78 154.26±38.99 ng/ml,同一处理方法 d 1、5、10血小板样品中生长因子含量无明显差别(P>0.05);同一处理方法不同时间点血小板样品对细胞增殖作用无明显差别(P>0.05);冻融法处理后样品在浓度20%时促细胞增殖率明显下降;不同时间点全血血浆促细胞增殖作用趋势线相近,在样品浓度达到20%时促细胞增殖率均明显下降。结论过期血小板中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用与新鲜血小板无显著差异,过期全血血浆中的血小板生长因子与新鲜全血相比也得到了相似的初步结果。

关键词：过期血液血小板生长因子促细胞增殖作用

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血小板生长因子制备方法、促细胞增殖作用及机制的初步研究

血小板生长因子制备方法、促细胞增殖作用及机制的初步研究

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作者：于晶晶北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

近些年报道指出血小板除具有凝血与止血功能外，还具有促组织修复和伤口愈合的作用。目前临床主要应用凝血酶-Ca为激活剂处理新鲜自体血小板制备血小板凝胶，使其在伤口处慢慢释放生长因子，但目前此项技术在国内还是一项较新的技术，... 详细信息

近些年报道指出血小板除具有凝血与止血功能外，还具有促组织修复和伤口愈合的作用。目前临床主要应用凝血酶-Ca为激活剂处理新鲜自体血小板制备血小板凝胶，使其在伤口处慢慢释放生长因子，但目前此项技术在国内还是一项较新的技术，尚存在许多问题，比如血小板浓度的选取、血小板生长因子的制备方法、生长因子样品的保存、血小板来源等等。近年国内外开展了许多相关研究，主要围绕血小板生长因子制备方法和其促细胞增殖作用及对动物损伤模型的研究。本研究在前人的基础上结合目前研究现状，对血小板生长因子相关研究的问题作了系统而初步的探讨。　　目的：比较几种方法制备的血小板生长因子含量及生物学活性韵差别;考察过期血小板制得的血小板生长因子含量及活性的变化;研究冻干法是否可以有效保存血小板凝胶上清;观察含有生长因子的血小板凝胶上清是否对兔伤口愈合具有促进作用;初步探讨血小板促细胞增殖作用的机制。　　方法：S/D法、反复冻融法、CaCl2法处理血小板，测定其处理后样品中生长因子含量;比较凝胶法中CaCl2和凝血酶-Ca凝胶释放生长因子的动力学过程及所释放生长因子含量活性的差别;观察冻融法和CaCl2法处理的第1、5、10天的血小板的生长因子含量及活性的差别，并比较两种方法之间的差别;在全血保存第1、10、21、35、40天时取样，离心收集血浆，并测定其中生长因子含量及活性;冷冻干燥法保存新鲜血小板制备的血小板凝胶上清，在第0、3、6个月时用无菌PBS复溶，测定样品的生物活性的变化;将血小板与血浆分开，并用生理盐水洗涤血小板，以血小板凝胶上清为对照，观察洗涤血小板、PPP及凝胶上清促细胞增殖作用的差别。　　结果：S/D法、反复冻融法、CaC12法分别处理血小板得到的样品中PDGF-AB含量分别为(113.913±30.667)、(80.853±30.865)、(99.985±26.648)ng/ml，TGF-β1含量分别为(124.083±7.116)、(105.847±20.886)、(96.212±15.157)ng/ml;CaCl2和凝血酶-Ca法制备的凝胶均在第1h基本完全释放其中生长因子，前者在30min左右形成凝胶，后者在1-2min即可形成凝胶，两种凝胶6h时释放的生长因子PDGF-AB含量后者高于前者，TGF-β1含量两者无差别，2组不同浓度的上清细胞增殖促细胞增殖作用均高于阴性对照组(P＜0.05);过期血小板中生长因子含量及活性与新鲜的血小板无差别（P＞0.05），同一样品冻融法处理后浓度在20％左右促细胞增殖作用明显下降，而CaCl2处理后没有此现象;冷冻干燥法可在一定程度上保存在凝胶上清，在第3、6个月对达到20%浓度促细胞增殖作用均下降，而第0月时没有此下降的转折点;新鲜血小板凝胶上清对兔组织损伤可能具有一定促进作用，但效果不明显;洗涤血小板达到1%浓度时细胞有变形，达到10%浓度时细胞基本完全破碎，PPP促细胞增殖作用明显优于洗涤血小板组，但低于凝胶上清组。　　结论：新鲜和过期血小板制得的血小板生长因子富含物均具有促细胞增殖韵生物学活性，并且两者生长因子含量及生物学活性无明显差别;单纯豹冷冻干燥法不能完全有效保存血小板凝胶上清的活性。

关键词：血小板生长因子血小板凝胶制备方法作用机制促细胞增殖作用

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成纤维细胞烟雾暴露后产生的基质蛋白具有促细胞增殖作用

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中华医学杂志 2011年第36期91卷 2587-2587页

作者：马洪明陈秋冬暨南大学附属第一医院呼吸内科广州510630

慢性阻塞性肺疾病（COPD）以肺气肿及呼吸道壁增厚为特征，其主要致病因素是长期暴露于颗粒物。香烟烟雾是最常见的颗粒物，其细胞毒性和促炎活动相结合致肺泡破坏引起肺气肿。目前尚不清楚香烟烟雾本身是否可引起呼吸道壁增厚。

关键词：香烟烟雾促细胞增殖作用成纤维细胞基质蛋白暴露后慢性阻塞性肺疾病长期暴露致病因素

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杜仲对成骨样细胞增殖的作用

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中药药理与临床 2000年第4期16卷 24-26页

作者：王大为高晓燕李发美姜志明沈阳药科大学基础部沈阳110015 沈阳军区总医院

杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR1 0 6成骨样细胞体外共同培养 ,用MTT法检测细胞增殖 ,结果水提液在 0 4mg/ml培养 48小时具有最强的促进细胞增殖作用 ,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定促进作用 ,但无显著性差... 详细信息

杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR1 0 6成骨样细胞体外共同培养 ,用MTT法检测细胞增殖 ,结果水提液在 0 4mg/ml培养 48小时具有最强的促进细胞增殖作用 ,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定促进作用 ,但无显著性差异 ,而乙酸乙酯和正丁醇萃取后的剩余水层仍保留与原水提液相似的促进细胞增殖作用。表明杜仲中极性大部位可能含有直接作用于成骨细胞的活性成分。

关键词：杜仲促细胞增殖作用成骨样细胞 UMR106 MTT法细胞增殖

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醛糖还原酶(AR)基因对大鼠肾系膜细胞的转染及AR抑制剂对其增殖的影响

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复旦学报（医学版） 2005年第4期32卷 383-387页

作者：车祺蒋涛林伊凤李慧张农复旦大学上海医学院病理学系上海200032

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染及AR抑制剂(ARI)对体外培养大鼠肾系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法应用Westernblot检测转基因MsC及PDGF作用MsC后AR的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比大鼠正常MsC和... 详细信息

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染及AR抑制剂(ARI)对体外培养大鼠肾系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法应用Westernblot检测转基因MsC及PDGF作用MsC后AR的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比大鼠正常MsC和转基因MsC的生长情况,并观察ARI———Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子(PDGF)和小牛血清(NBS)促细胞增殖作用的影响。结果①Westernblot鉴定转基因MsCAR表达较正常MsC明显增高;②转染组较正常组生长速度快;③PDGF作用MsC后可上调AR的表达;④PDGF和10%NBS均可显著刺激两组细胞的增殖,ARI可部分抑制PDGF对正常组和转染组的促增殖作用,对10%NBS,ARI可部分抑制其对转染组的促增殖作用,而对正常组无显著影响,抑制作用呈剂量依赖性。结论AR可能参与了MsC在病理状况下的过度增殖过程。

关键词：醛糖还原酶(AR) 大鼠肾系膜细胞抑制剂 Westernblot 血小板源性生长因子促细胞增殖作用促增殖作用 PDGF blot检测 MsC 流式细胞术剂量依赖性转基因 ARI 正常组体外培养基因转染 MTT法细胞周期小牛血清生长速度

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较大容量冻干血小板的实验研究

较大容量冻干血小板的实验研究

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作者：魏淑贞广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究通过改变血小板膜保护剂、血小板激活抑制剂和蛋白质类保护剂三类成分组成,采用正交设计法筛选出优化血小板保护液;用优化的血小板保护液进行较大容量(100mL)血小板冻干工艺探索,确定本研究的制备工艺;用确定制备工艺制备的... 详细信息

目的:本研究通过改变血小板膜保护剂、血小板激活抑制剂和蛋白质类保护剂三类成分组成,采用正交设计法筛选出优化血小板保护液;用优化的血小板保护液进行较大容量(100mL)血小板冻干工艺探索,确定本研究的制备工艺;用确定制备工艺制备的冻干血小板进行细胞增殖实验,间接证明这种方法制备的产品促进创伤愈合的有效性;用皮肤急性毒性试验和重复给药毒性实验检测其对SD大鼠的毒性作用来评价产品的初步安全性。综合四部分的实验研究,以期获得初步安全、有效的较大容量的血小板冻干产品。方法:1.冻干保护液的优化:采用3因素3水平的正交设计法,对血小板膜保护剂、血小板激活抑制剂、蛋白质类保护剂的三类成分组成的保护液进行优选。以血小板最大聚集率为优选指标,同时结合血小板回收率、血小板活化标志PAC-1和CD62P的阳性表达率三项指标综合分析,通过比较其差异,筛选出本实验的最优冻干血小板保护液。以优化保护液对血小板处理后进行冻干,并以此为实验组,与新鲜血小板和原保护液处理后冻干血小板进行比较验证,检测血小板最大聚集率、血小板回收率、血小板活化标志PAC-1、CD62P的阳性表达率和电镜下超微结构的差异,来验证最优冻干保护液的可行性。2.较大容量血小板冻干工艺的探索:结合血小板特点选择血小板冻干专用袋的原材料,通过冻干实验对血小板冻干专用袋进行初设计和二次改进样袋制备,并研制了一款血小板冻干专用袋,并对血小板冻干专用袋的密封性和无菌性进行检测。在小容量冻干血小板的基础上,探索较大容量血小板冻干的温度、时间和真空度等参数。采用卡尔·费修法和减压干燥法检测较大容量冻干血小板的含水量。通过血小板最大聚集率、PAC-1、CD62P等指标比较其与新鲜血小板的差异,验证冻干效果。3.较大容量冻干血小板的促细胞增殖作用:将冻干血小板用等体积的PPP(Platelet poor plasma)复水化后,用葡萄糖酸钙-凝血酶激活剂与冻干血小板复水化液按1:10的比例激活,离心分离上清液。选择人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)基础培养3-5d进行细胞传代,再加入5%、10%、20%三种不同浓度的上清液培养24h、48h、72h,用CCK8法检测培养细胞密度。以新鲜血小板和5%FBS(Fetal bovine serum)的1640培养基作对照。用酶标仪对培养细胞的OD值进行检测,对实验结果进行统计分析。4.安全性评价:(1)皮肤急性刺激实验。选择SD大鼠作为实验对象,用FDP(Freeze-dried platelets)复水化悬液作为实验组,生理盐水(Normal saline,NS)做空白对照组,在大鼠背部两侧皮肤进行脱毛处理后,实验组在左侧反复涂抹复水化液,右侧反复涂抹生理盐水,分别观察、记录1、24、48和72h四个时间点的创面的水肿、过敏性红斑等发生情况,并进行评分、比较。(2)重复给药毒性实验。选择SD大鼠作为实验对象,用FDP复水化悬液作为实验组,不做任何处理的大鼠作为空白对照组。于第0天和第14天分别腹腔注射FDP复水化液0.5mL/只和2.0mL/只。观察注射后有无用爪搔鼻、喷嚏、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克及死亡等反应,并于第7、14、21和28天采血进行血常规和谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Glutamic pyruvic aminotransferase,AST)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)、肌酐(Creatinine,Cr)和尿酸(Uric acid,UA)五项生化指标检查,结实验数据进行统计学分析。结果:1.冻干保护液的优化结果:(1)正交设计实验结果:血小板最大聚集率组间最高(74.33±4.01)%,血小板活化标志PAC-1和CD62P低于9组平均水平,血小板回收率高于9组平均水平。以主要体现血小板功能的血小板最大聚集率为优先指标,结合其余三项检测指标进行综合分析,在原保护液的基础上,筛选出添加了2%DMSO(Dimethyl sulfoxide)、第二信使调节剂、2mmol/L维生素B6,75%的PPP保护液组为最优组合。(2)验证实验结果:优化保护液组血小板最大聚集率(76.12±6.02)%,与原保护液组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与新鲜血小板组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。最优保护液组血小板激活标志PAC-1和CD62P阳性表达率分别为(3.23±0.49)%和(36.83±8.21)%,二者与原保护液组、新鲜血小板组相比,差异无统计学意义(P>0.05);最优保护液组冻干血小板复水化后血小板回收率为(85.90±2.24)%,与原保护液组相比,差异无统计

关键词：血小板冻干较大容量冻干工艺促细胞增殖作用安全性

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尾加压素II介导卵圆细胞增殖的机制探讨

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1833-1833页

作者：禹晓童王鹏雁王红霞王学江首都医科大学基础医学院病理生理学教研室北京100069 北京协和医院病理科北京100032

目的：探讨尾加压素II（ UII）对肝脏干细胞即卵圆细胞内活性氧（ ROS）的影响及其参与UII促细胞增殖的机制探讨。方法：通过流式细胞术，应用DCFH－DA探针检测UII孵育卵圆细胞WB－F344后，胞内ROS水平变化。通过Western blot方法检测胞... 详细信息

目的：探讨尾加压素II（ UII）对肝脏干细胞即卵圆细胞内活性氧（ ROS）的影响及其参与UII促细胞增殖的机制探讨。方法：通过流式细胞术，应用DCFH－DA探针检测UII孵育卵圆细胞WB－F344后，胞内ROS水平变化。通过Western blot方法检测胞内NADPH氧化酶亚基、细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白依赖性激酶2及信号通路蛋白ERK表达水平。采用流式细胞术方式分析UII对于细胞周期的影响。应用BrdU掺入法检测细胞增殖情况。结果：UII刺激卵圆细胞可引起胞内ROS水平增加，同时NADPH氧化酶亚基表达上调。给予NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理后，明显改善UII介导的ERK磷酸化水平升高。此外，UII孵育组细胞周期比例S期明显高于G1期，而apocynin预处理组S期比例较UII刺激组有所降低，且细胞增殖检测结果显示apocynin预处理可使UII介导的促细胞增殖效应受到明显抑制。结论：UII可通过上调细胞内NADPH氧化酶介导ROS增加，继而促进ERK激活以及加速细胞从G1期进入S期，参与UII促细胞增殖作用。

关键词：尾加压素促细胞增殖作用细胞周期氧化酶抑制剂卵圆细胞流式细胞术细胞内活性氧预处理周期蛋白探针检测蛋白依赖性激酶肝脏干细胞增殖效应应用亚基通路蛋白机制探讨孵育方式分析方法

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