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促血管生成素2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

重庆医科大学学报 2013年第5期38卷 505-511页

作者：曾松王继见朱鹏重庆医科大学附属第二医院胃肠外科重庆400010

目的:探讨促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系;观察反义Ang2基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法:用Western blot法检测Ang2蛋白在10例胃癌组织及10例正常胃黏膜组织中的表达,用免疫... 详细信息

目的:探讨促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系;观察反义Ang2基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法:用Western blot法检测Ang2蛋白在10例胃癌组织及10例正常胃黏膜组织中的表达,用免疫组化法检测53例不同病理分期的胃癌组织中Ang2蛋白的表达;应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的pEGFP-N1-anti Ang2转染体外培养的人胃癌细胞SGC-7901,以空载体(pEGFP-N1)转染组和未转染组作对照,RT-PCR及免疫组化检测转染后Ang2基因及蛋白的表达,MTT法和流氏细胞仪(flow cytometry,FCM)检测反义Ang2基因转染对细胞生长和细胞凋亡的影响;分别用上述3组细胞注射于裸鼠皮下,对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量。结果:Ang2蛋白在正常胃黏膜组织中不表达,在不同病理分期的胃癌组织中均呈阳性表达(F=166.76,P<0.000 1);RT-PCR及免疫组化显示反义Ang2基因转染组无Ang2 mRNA及Ang2蛋白的表达,MTT法检测显示反义Ang2基因转染组细胞体外增殖能力明显低于其他两组(F=10.39,P=0.002 4),FCM检测显示其活细胞比率明显低于其他两组(χ2=3 188.980 5,P<0.000 1);转染了反义Ang2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢[第6天(F=10.18,P=0.000 5)、第18天(F=7.80,P=0.002 1)及第30天(F=79.58,P<0.000 1)],肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少[第1周(F=15.18,P<0.000 1)、第2周(F=3.50,P=0.044 4)、第3周(F=39.02,P<0.000 1)]。结论:胃癌组织中Ang2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵袭能力密切相关;反义Ang2基因转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901中Ang2 mRNA及Ang2蛋白的表达,抑制其体外生长,促进其凋亡;并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用。

关键词：新生血管形成促血管生成素2 反义真核表达载体人胃癌细胞株基因转染

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促血管生成素2调节淋巴管新生的实验研究

促血管生成素2调节淋巴管新生的实验研究

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作者：胡学庆上海交通大学

学位级别：博士

目的：基因敲除研究表明，促血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)与淋巴管的发育有关，但是淋巴管发育和新生及其调节十分复杂，Ang2在其中的作用机理并不清楚。本课题通过了解人真皮来源微淋巴管内皮细胞的特性以及Ang2在体内外的作用来... 详细信息

目的：基因敲除研究表明，促血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)与淋巴管的发育有关，但是淋巴管发育和新生及其调节十分复杂，Ang2在其中的作用机理并不清楚。本课题通过了解人真皮来源微淋巴管内皮细胞的特性以及Ang2在体内外的作用来研究Ang2与皮肤淋巴管新生的相互关系。方法：人真皮来源微淋巴管内皮细胞(HDLECs)通过酶消化结合CD34免疫磁珠阴性分选和CD31免疫磁珠阳性分选获得并进行鉴定，检测HDLECs和人皮肤组织表达Ang2的特点。HDLECs在体外进行单独培养以及与人皮肤成纤维细胞共培养，研究这两种培养条件下Ang2，血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)和其他细胞因子对HDLECs增殖和迁移的影响。将人Ang2和VEGF-C基因克隆入pCDNA3.1真核表达质粒载体并进行体外表达鉴定，制作小鼠尾部慢性阻塞性淋巴水肿模型。通过质粒注射的方法使Ang2和VEGF-C基因在淋巴水肿的鼠尾皮肤组织中过表达，观察两者对淋巴管再生的影响以及对淋巴水肿的治疗作用。结果：胶原酶消化法结合免疫磁珠分选可以分离纯化人真皮来＼源微淋巴管内皮细胞并进行体外培养。HDLECs表达Ang2但不表达VEGF-C，而人皮肤成纤维细胞表达VEGF-C但不表达Ang2，这种特点可能与淋巴管新生的调节有关。Ang2在体外对HDLECs没有直接的促增殖和迁移作用。但是，当与人皮肤成纤维细胞共培养时，Ang2能够促进HDLECs的增殖和迁移，提示Ang2间接调节淋巴管的新生。转VEGF-C基因在体内能够促进淋巴管的再生并对慢性阻塞性淋巴水肿有治疗作用。转Ang2基因在体内不能够促进淋巴管的再生，对慢性阻塞性淋巴水肿没有缓解作用，可能与Ang2体内、体外不同的作用机制有关。结论：淋巴管新生过程受VEGF-C和Ang2的双重调节。Ang2通过皮肤成纤维细胞间接调节淋巴管的新生。

关键词：促血管生成素2 淋巴管新生基因调节

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促血管生成素2和Endoglin与胎儿生长受限的相关性

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江苏医药 2012年第4期38卷 416-419,F0002页

作者：管秀娟程国梅陶贝贝崔世红杨健丽郑州大学第三附属医院妇产科河南省450052

目的探讨促血管生成素2(Ang-2)和Endoglin(Eng)在孕妇血清中的水平和在胎盘组织中的表达与胎儿生长受限(FGR)发病的关系。方法选取剖宫产分娩的FGR孕妇30例作为FGR组,同期剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组。采用ELISA测定孕妇血... 详细信息

目的探讨促血管生成素2(Ang-2)和Endoglin(Eng)在孕妇血清中的水平和在胎盘组织中的表达与胎儿生长受限(FGR)发病的关系。方法选取剖宫产分娩的FGR孕妇30例作为FGR组,同期剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组。采用ELISA测定孕妇血清中Ang-2、可溶性Endoglin(sEng)的水平;采用SP检测胎盘组织中Ang-2、Eng的表达。结果 (1)FGR组血清Ang-2为(8.86±0.43)ng/ml,显著低于对照组的(19.31±0.25)ng/ml(P<0.01);FGR组sEng为(4.63±0.09)ng/ml,显著高于对照组的(2.77±0.09)ng/ml(P<0.01)。FGR组胎盘组织Ang-2的表达为118.17±1.59,显著低于对照组的151.64±1.64(P<0.01);FGR组胎盘组织Eng的表达为106.04±1.12,显著高于对照组的92.64±1.26(P<0.01)。(2)FGR组胎盘组织中Ang-2的表达与孕妇血清Ang-2水平呈正相关(r=0.93,P<0.01);FGR组胎盘组织中Eng的表达与孕妇血清中sEng水平呈正相关(r=0.88,P<0.01);FGR组胎盘组织中Ang-2的表达与Eng的表达无相关性;FGR组孕妇血清Ang-2水平与sEng水平无相关性。结论血清Ang-2水平和胎盘组织中表达显著降低,血清sEng和胎盘组织Eng表达水平显著升高可能参与了FGR的发病过程。

关键词：促血管生成素2 Endoglin 胎儿生长受限

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局部注射促血管生成素2调控自噬促进体内组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复的研究

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中国修复重建外科杂志 2018年第9期32卷 1150-1156页

作者：殷建王斌朱超孙超刘新晖南京医科大学附属江宁医院骨科南京211100

目的探讨兔桡骨骨缺损处局部注射促血管生成素2(angiopoietin 2,Ang-2),通过调控自噬促进组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复的机制。方法取48只新西兰大白兔,构建单侧1.5 cm长桡骨缺损模型,于骨缺损处植入羟基磷灰石/胶原支架后,随... 详细信息

目的探讨兔桡骨骨缺损处局部注射促血管生成素2(angiopoietin 2,Ang-2),通过调控自噬促进组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复的机制。方法取48只新西兰大白兔,构建单侧1.5 cm长桡骨缺损模型,于骨缺损处植入羟基磷灰石/胶原支架后,随机分为两组,对照组(A组)和Ang-2组(B组)分别于术后2周内每日于骨缺损处注射1 m L生理盐水和1 m L溶于生理盐水的400 ng/m L Ang-2。采用Western blot检测骨痂区自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 lightchain 3,LC3)和Beclin-1,血管生成相关蛋白VEGF及自噬降解底物蛋白SQSTMl/p62的表达。术后4、8、12周行X线片检查,采用LaneSandhu X线评分法对骨缺损修复情况进行评分;术后12周处死动物取标本行大体观察,采用HE染色观察骨缺损区血管生成情况。结果 Western blot检测示,B组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及VEGF相对表达量高于A组,SQSTMl/p62相对表达量低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。影像学及标本大体观察示A组仅有少量骨痂生成,但骨缺损未修复;B组新生骨痂较多,骨缺损处完全修复。术后4、8、12周B组Lane-Sandhu评分均显著高于A组(P<0.05)。HE染色示B组哈佛管排列整齐,新生血管显著多于A组,差异有统计学意义(t=–11.879,P=0.000)。结论局部注射适宜浓度Ang-2可能通过增强自噬促进兔体内组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复。

关键词：促血管生成素2 自噬血管生成组织工程人工骨骨缺损兔

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反义促血管生成素2基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的抑制作用

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重庆医科大学学报 2013年第5期38卷 497-501页

作者：陈雷朱鹏重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400010

目的:观察以pEGFP-N1为载体的促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中Ang2蛋白的表达,研究其对人胃癌细胞体外生长的抑制作用。方法:应用重组质粒转染反义Ang2的pEGFP-N1载体(pEGFP-N1-anti Ang2)、pEGFP... 详细信息

目的:观察以pEGFP-N1为载体的促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中Ang2蛋白的表达,研究其对人胃癌细胞体外生长的抑制作用。方法:应用重组质粒转染反义Ang2的pEGFP-N1载体(pEGFP-N1-anti Ang2)、pEGFP-N1空载体质粒以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT-PCR技术与免疫组化法检测Ang2基因及其蛋白的表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:RT-PCR与免疫组化均示pEGFP-N1-anti Ang2转染组无Ang2 mRNA及其Ang2蛋白的表达,MTT检测表明pEGFP-N1-anti Ang2转染组活细胞数较其它两组均低,差异有统计学意义(F=10.39,P=0.002 4),流式细胞仪检测则显示其凋亡率较其它两组明显增高,差异有统计学意义(χ2=3 188.98,P<0.000 1)。结论:pEGFP-N1-anti Ang2成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭Ang2 mRNA表达,使已转染pEGFP-N1-anti Ang2的人胃癌细胞Ang2蛋白的表达减少,并抑制人胃癌细胞的恶性表型。

关键词：人类反义真核表达载体促血管生成素2 基因转染凋亡

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慢性阻塞性肺疾病患者脂代谢和血清促血管生成素2水平与病情严重程度的关系

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中国全科医学 2015年第34期18卷 4210-4215页

作者：李春芝刘洪英刘军肖河北省人民医院河北省石家庄市050051

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者脂代谢和血清促血管生成素2(ANG2)水平与病情严重程度的关系。方法采用随机数字表法选取2012年11月—2014年1月河北省人民医院收治的COPD患者185例作为COPD组,另选取同期本院体检健康者30例作为对照... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者脂代谢和血清促血管生成素2(ANG2)水平与病情严重程度的关系。方法采用随机数字表法选取2012年11月—2014年1月河北省人民医院收治的COPD患者185例作为COPD组,另选取同期本院体检健康者30例作为对照组。COPD组患者给予沙美特罗替卡松联合噻托溴铵粉吸入剂吸入治疗。分别于对照组入选次日和观察组治疗前(T0)和治疗1周(T1)、2周(T2)、1个月(T3)和3个月(T4)采集空腹静脉血5 ml,检测血清ANG2水平和血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,并评估BODE指数(B为体质指数,O为气流阻塞程度,D为呼吸困难,E为运动能力)。比较不同BODE指数分级COPD患者治疗前后的血脂水平和血清ANG2水平并分析COPD患者脂代谢紊乱、血清ANG2水平与其BODE指数的关系。结果 COPD组和对照组HDL-C、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);COPD组和对照组TC、TG、ANG2水平和BODE指数比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中与COPD组T0比较,COPD组T2、T3、T4TC、TG水平均升高,ANG2水平和BODE指数均降低,差异有统计学意义(P<0.05);对照组TC、TG水平均高于COPD组T0、T1、T2、T3、T4时,ANG2水平和BODE指数均低于COPD组T0、T1、T2、T3、T4时,差异有统计学意义(P<0.05)。T0和T4时,COPD组BODE指数分级分布比较,差异有统计学意义(U=9.25,P<0.01)。T0、T4时,不同BODE指数分级患者HDL-C、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同BODE指数分级患者TC、TG、ANG2水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其分级越高,TC、TG水平越低,ANG2水平越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,COPD患者TC、TG水平与BODE指数呈负相关(r=-0.941、-0.940,P<0.05),血清ANG2水平与BODE指数呈正相关(r=0.921,P<0.05)。COPD患者治疗期间不良反应症状均较轻微且均可在不加干预的情况下于3 d内消失。结论COPD患者存在脂代谢紊乱和血清ANG2水平升高,且其血脂水平和血清ANG2水平均与其病情严重程度相关,这可能与ANG2与Tie受体结合引发内皮细胞凋亡和血管退化及COPD患者营养不良导致血脂水平降低有关,COPD患者脂代谢和血清ANG2可作为其病情严重程度评价的参考指标。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性脂代谢促血管生成素2 病情严重程度

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血管内皮生长因子和促血管生成素2对甲状腺乳头状癌及颈部淋巴结转移的诊断价值

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实用医学杂志 2021年第11期37卷 1441-1444页

作者：刘美莲苏法铭李晓玲彭晓霞陈晓铭广东医科大学附属医院肿瘤中心广东湛江524023 广东医科大学附属医院内分泌科广东湛江524023 广东医科大学附属医院病理科广东湛江524023

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织标本中血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素2(Ang⁃2)对PTC诊断及其并发颈部淋巴结转移的临床价值。方法选取经病理确诊的PTC患者86例(未合并颈部淋巴结转移的PTC患者病例41例和已并发颈部淋巴结转移的... 详细信息

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织标本中血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素2(Ang⁃2)对PTC诊断及其并发颈部淋巴结转移的临床价值。方法选取经病理确诊的PTC患者86例(未合并颈部淋巴结转移的PTC患者病例41例和已并发颈部淋巴结转移的PTC患者病例45例)。采用免疫组织化学染色法Max Vision TM法检测PCT组织及癌旁正常甲状腺组织的VEGF和Ang⁃2的表达水平并记录上述相关临床资料。结果(1)VEGF的表达水平在PTC组织中明显高于癌旁组织(P<0.05);在未并发颈部淋巴结转移和已并发颈部淋巴结转移的PTC组织中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05);(2)Ang⁃2在PTC组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05);在未并发颈部淋巴结转移和已并发颈部淋巴结转移的PTC组织中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF和Ang⁃2对于辅助PTC的诊断有一定的临床意义,VEGF和Ang⁃2对预测PTC是否伴有颈部淋巴结转移可能无诊断价值。

关键词：甲状腺乳头状癌血管内皮生长因子促血管生成素2 淋巴结转移

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促血管生成素2及其受体Tie2基因RNA干扰表达载体的构建与鉴定

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医学综述 2009年第22期15卷 3498-3501页

作者：王彪单秀英林菊丽庄福连鲁开化福建医科大学附属第一医院整形外科福州350005 第四军医大学西京医院整形外科中心西安710043

目的构建促血管生成素2(Ang-2)及其受体Tie2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法以Ang-2、Tie2的mRNA已知序列为靶点,化学合成能编码针对Ang-2、Tie2基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸各2对,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6-siRNA... 详细信息

目的构建促血管生成素2(Ang-2)及其受体Tie2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法以Ang-2、Tie2的mRNA已知序列为靶点,化学合成能编码针对Ang-2、Tie2基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸各2对,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6-siRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ启动子的下游,构建重组质粒pSliencer-1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA。结果将与目的片段相符的双链shRNA和线性化的pSilencer1.0-U6-siRNA质粒连接后,经限制性内切酶HindⅢ酶切电泳及测序分析证实,2条重组质粒载体构建正确,无任何碱基突变。结论成功构建pSilencer1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,为进一步研究其对血管生成的作用打下基础。

关键词： RNA干扰促血管生成素2 受体Tie2 重组质粒载体

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胶质瘤促血管生成素2基因表达的意义及与血管生成的关系

胶质瘤促血管生成素2基因表达的意义及与血管生成的关系

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作者：罗望池福建医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨胶质瘤促血管生成素2(angiopoietin2,简称Ang2)表达与血管生成的关系。方法:采用RT-PCR和SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因及蛋白表达;CD34 单克隆抗体组织化学染色显示微血管,用微血管计数(MVC)测定肿瘤血... 详细信息

目的: 探讨胶质瘤促血管生成素2(angiopoietin2,简称Ang2)表达与血管生成的关系。方法: 采用RT-PCR和SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因及蛋白表达;CD34 单克隆抗体组织化学染色显示微血管,用微血管计数(MVC)测定肿瘤血管生成。结果: 50 例脑胶质瘤和8 例正常脑组织均可表达Ang2mRNA片段。Ang2mRNA表达与脑胶质瘤的血管生成呈显著正相关(r=0. 821,P<0 01);高恶度胶质瘤Ang2mRNA及蛋白表达、MVC 分别显著高于低恶度胶质瘤(P<0 01);低恶度胶质瘤Ang2mRNA及蛋白表达、MVC 均显著高于正常脑组织(P<0 05)。免疫组化染色显示, Ang2 蛋白主要分布在高恶度胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞,低恶度胶质瘤呈低水平表达,正常脑组织不表达。结论:

关键词：胶质瘤促血管生成素2 基因表达血管生成

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促血管生成素2在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理的关系

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中华实验外科杂志 2004年第4期21卷 440-440页

作者：朱鹏陈道达华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022

促血管生成素-2(Ang-2)是新近发现的一种与肿瘤有关的蛋白分子[1],我们采用Western Blot及免疫组化技术检测胃癌组织Ang-2蛋白的表达水平,探讨Ang-2在胃癌的发生、发展及肿瘤血管生成中的调节作用。

关键词：促血管生成素2 胃癌表达病理

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