检索结果-内蒙古大学图书馆

中药药理与临床 2020年第6期36卷 53-57页

作者：金晶蒋青青刘馥春王海燕赵海梅刘端勇江西中医药大学研究生院南昌330004 江西中医药大学研究生院党办南昌330004 中医学院南昌330004 江西中医药大学研究生院科技学院南昌330004

目的:探讨左金丸对溃疡性结肠炎(UC)小鼠滤泡辅助性T细胞(Tfh)的调控作用。方法:BALB/c小鼠随机分成正常组对照、模型对照组、左金丸3 g/kg组和美沙拉嗪0.3 g/kg对照组,采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立溃疡性结肠炎小鼠模型,左金丸3 g/kg... 详细信息

目的:探讨左金丸对溃疡性结肠炎(UC)小鼠滤泡辅助性T细胞(Tfh)的调控作用。方法:BALB/c小鼠随机分成正常组对照、模型对照组、左金丸3 g/kg组和美沙拉嗪0.3 g/kg对照组,采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立溃疡性结肠炎小鼠模型,左金丸3 g/kg、美沙拉嗪300 mg/kg灌胃给药7 d后,通过体质量、结肠重量、结肠重量指数、结肠长度、结肠镜下损伤评分及结肠病理评价其疗效,采用流式细胞术检测小鼠外周血Tfh1、Tfh10、Tfh17和Tfh21数量,同时采用蛋白免疫印迹法检测各组小鼠结肠黏膜中B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(B lymphocyte induced maturation protein 1,Blimp-1)、淋巴细胞信号刺激因子相关蛋白(signal lymphocyte activation molecule(SLAM)-associated protein,SAP)及信号转导与转录激活因子5(signal transducers and activators of transcription 5,STAT5)的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠结肠组织损伤评分、结肠重量指数显著增加,结肠长度显著变短,小鼠外周血Tfh组胞亚群比例明显改变,结肠组织Blimp-1蛋白表达明显下调,SAP、STAT5蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,左金丸3 g/kg组小鼠结肠长度增加,结肠体质量、结肠重量指数和结肠镜下病理损伤评分均显著降低,小鼠外周血中Tfh1、Tfh10、Tfh21数量显著升高和Tfh17数量显著下降(P<0.05或P<0.01),同时小鼠结肠组织Blimp-1、SAP蛋白表达量显著上调及STAT5蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:左金丸可能通过调节Tfh亚群细胞平衡而达到减轻DSS诱导型结肠炎的目的。

关键词：左金丸结肠炎滤泡辅助性T细胞信号传导及转录激活因子

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重组人白细胞介素17A对结肠癌细胞生长的影响及其作用机制

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吉林大学学报（医学版） 2019年第2期45卷 258-261页

作者：杨学良王明华刘艳波孙雪梅赵晓晖杨丽娟肖梓屾北华大学附属医院普通外科吉林吉林132012 北华大学基础医学院病理生理学教研室吉林吉林132013 吉林省东丰县中医院急诊科吉林东丰136300

目的:探讨重组人白细胞介素17A (IL-17A)对结肠癌细胞生长的影响,并阐明其作用机制。方法:将结肠癌SW480细胞分为对照组和实验组,对照组细胞未经处理,实验组细胞加入50μg·L-1重组人IL-17A。采用CKK-8法检测2组SW480细胞增殖活性,... 详细信息

目的:探讨重组人白细胞介素17A (IL-17A)对结肠癌细胞生长的影响,并阐明其作用机制。方法:将结肠癌SW480细胞分为对照组和实验组,对照组细胞未经处理,实验组细胞加入50μg·L-1重组人IL-17A。采用CKK-8法检测2组SW480细胞增殖活性,采用ELISA法检测2组细胞中IL-17A水平,Western blotting法检测2组SW480细胞中信号传导及转录激活因子3 (STAT3)和磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,实验组细胞增殖活性明显升高(P<0.05)。与对照组比较,实验组SW480细胞中IL-17A水平、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:重组人IL-17A可刺激结肠癌细胞SW480细胞的生长,其作用机制可能与激活STAT3信号通路有关。

关键词：人白细胞介素17A 结肠癌细胞信号通路信号传导及转录激活因子

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Satraplatin联合放疗对鼻咽癌裸鼠STAT3及NF-κB表达的影响

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临床和实验医学杂志 2020年第9期19卷 925-928页

作者：毕建强黄如敬胡秀茹杨文博孙云川河北省沧州中西医结合医院放化疗科河北沧州061001

目的观察并分析Satraplatin(赛特铂)联合放疗对鼻咽癌裸鼠信号传导及转录激活因子(STAT3)及核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法取健康裸鼠120只,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组60只。所有裸鼠均鼻咽癌造模成功(经过低分... 详细信息

目的观察并分析Satraplatin(赛特铂)联合放疗对鼻咽癌裸鼠信号传导及转录激活因子(STAT3)及核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法取健康裸鼠120只,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组60只。所有裸鼠均鼻咽癌造模成功(经过低分化鼻咽癌CNE-2细胞接种)。对照组裸鼠又随机分为未处理组、处理后1周组(放疗)、处理后3周组(放疗),每组20只。观察组裸鼠又随机分为未处理组、处理后1周组(放疗+Satraplatin)、处理后3周组(放疗+Satraplatin),每组20只。观察两组裸鼠处理前、处理后1周、处理后3周肿瘤凋亡率、瘤体重量、STAT3、NF-κB相对表达量。结果两组裸鼠处理前后肿瘤凋亡率差异显著(P <0. 05),两组裸鼠处理前肿瘤凋亡率比较无显著差异(P>0. 05),随着处理后时间的延长,两组裸鼠肿瘤凋亡率显著升高,但观察组裸鼠处理1周、3周肿瘤凋亡率显著高于对照组(P <0. 05)。两组裸鼠处理前后瘤体重量差异显著(P <0. 05),两组裸鼠处理前瘤体重量比较无显著差异(P>0. 05),处理后,两组裸鼠瘤体重量显著降低(P <0. 05),处理1周、3周瘤体重量显著低于对照组(P<0. 05)。两组裸鼠处理前后STAT3、NF-κB水平差异显著(P <0. 05),两组裸鼠处理前STAT3、NF-κB水平比较无显著差异(P>0. 05),处理后,两组裸鼠STAT3、NF-κB水平显著降低(P <0. 05),处理1周、3周观察组裸鼠STAT3、NF-κB水平明显低于对照组(P <0. 05)。结论 Satraplatin联合放疗能有效降低鼻咽癌裸鼠STAT3及NF-κB表达,增加鼻咽癌裸鼠肿瘤细胞凋亡,减轻瘤体重量。

关键词：裸鼠鼻咽癌 Satraplatin 放疗瘤体重量信号传导及转录激活因子核因子κB

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异基因造血干细胞移植后共刺激分子表达及巨核系植入与肺部感染关系的分析

异基因造血干细胞移植后共刺激分子表达及巨核系植入与肺部感染关...

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作者：王柔嘉中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

第一部分异基因造血干细胞移植后共刺激分子表达与移植物抗宿主病关系研究研究目的异基因造血干细胞移植（allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）作为治疗白血病的有效方法,在改善白血病患者无病生存率和总... 详细信息

第一部分异基因造血干细胞移植后共刺激分子表达与移植物抗宿主病关系研究研究目的异基因造血干细胞移植（allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）作为治疗白血病的有效方法,在改善白血病患者无病生存率和总生存率方面远远优于常规化疗,甚至是治愈某些白血病的唯一方法,但移植相伴而来的是各种并发症的出现。在异基因造血干细胞移植病人中,大约20%发生急性移植物抗宿主病（Graft Versus Host Disease,GVHD）。GVHD是移植相关死亡（transplant related mortality,TRM）的主要原因之一。造血干细胞移植后供体T细胞抗原受体（T cell receptor,TCR）与受体靶组织抗原提呈细胞（antigen presenting cell,APC）表面抗原肽-主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）结合后产生第一信号。同时,T细胞与APC上多个共刺激分子结合,产生第二信号,活化供体T细胞,产生GVHD。共刺激分子CD28超家族,包括CD28、可诱导共刺激分子（inducible costimulator,ICOS）、程序性死亡受体-1（programmed cell death protein 1,PD-1）和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4）,其与共刺激分子配体CD80/86、ICOSL、PD-L1结合,产生第二信号,诱导T细胞活化。本研究通过建立aGVHD小鼠模型,观察移植后各时间点共刺激分子、共刺激分子配体以及部分细胞因子的动态变化,分析共刺激分子与aGVHD发生发展的动态变化,探究aGVHD发生时骨髓免疫微环境重建规律。研究方法建立小鼠半相合造血干细胞移植后GVHD模型。每周取小鼠外周血,用流式细胞术进行共刺激分子（ICOS、CD28、CTLA-4、PD-1）和CD4+T细胞、CD8+T细胞检测。取小鼠脾细胞进行淋巴细胞亚群（Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞）检测。采用免疫组化的方法进行共刺激分子配体（ICOSL、PD-L1、CD80）检测。研究结果1、aGVHD组小鼠接受移植后10天左右逐渐出现弓背、脱毛、腹泻等典型aGVHD表现。实验组aGVHD出现的中位时间为14天（11-18天）,中位生存时间22天（13-30天）;对照组在30天内均存活,aGVHD组全部发病。2、移植后对照组和aGVHD组外周血中CD8+T细胞比例均在前三周迅速升高,之后GVHD组继续保持迅速升高趋势,但BM组自+21天开始缓慢下降。两组外周血中CD8+T细胞比例在移植后各节点差异无统计学意义。移植后两组外周血中CD4+/CD8+T细胞比值均在移植后均保持持续下降趋势,GVHD组下降速度较快,两组在移植后各节点无显著差异。3、移植后GVHD组外周血中CD4+CTLA-4在移植后呈迅速下降趋势,并在移植后+28天时降至最低水平,显著低于对照组（P=0.003）;GVHD组在移植后+14天至+28天CD4+CTLA-4低于对照组且至观察结束无回升趋势（P=0.053）。移植后GVHD组外周血中CD8+CTLA-4在移植后呈快速下降趋势,并在移植后+28天时显著低于对照组水平（P=0.011）;GVHD组在移植后+14天至+28天CD8+CTLA-4显著低于对照组（P=0.006）。移植后GVHD组外周血中CD4+ICOS表达在移植后先稍有下降后呈缓慢上升,并在移植后+28天时显著高于对照组水平（P=0.013）;移植后GVHD组外周血中CD8+ICOS在移植后+7-14天保持稳定,之后迅速上升,在移植后+21天时达到高峰并显著高于对照组水平（P=0.001）。移植后GVHD组外周血中CD4+PD-1在移植后+7天时高于对照组（P=0.058）。移植后GVHD组外周血中CD8+PD-1在移植后+7天至+21天时显著高于对照组水平（P=0.001）。4、对照组肠组织肠腺上皮CD80无明显阳性表达,aGVHD组肠组织阳性表达率为40%。对照组及aGVHD组肝脏组织肝细胞均无明显CD80阳性表达。对照组小鼠脾脏呈阴性表达。aGVHD组脾脏组织阳性率60%。对照组肠组织ICOSL无明显阳性表达,aGVHD组肠组织部分阳性表达,阳性表达率为80%（高于CD80）。对照组及aGVHD组肝脏组织中肝细胞均无明显ICOSL阳性表达。BM组脾脏组织淋巴细胞未被活化,aGVHD组脾脏组织大部分淋巴细胞呈棕黄色阳性表达,阳性率90%。5、相对于BM对照组,aGVHD组IL-17、IFN-γ表达水平较高,但IL

关键词：移植物抗宿主病共刺激分子信号传导及转录激活因子细胞毒T淋巴细胞相关抗原4 异基因造血干细胞移植肺部感染巨核系植入巨核系造血

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基于JAK-STAT1信号通路探讨植物乳杆菌上清抗TGEV感染的机制

基于JAK-STAT1信号通路探讨植物乳杆菌上清抗TGEV感染的机制

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作者：王凯西南大学

学位级别：硕士

猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的急性、高度接触性肠道传染病。其对两周龄以内的仔猪有极高... 详细信息

猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的急性、高度接触性肠道传染病。其对两周龄以内的仔猪有极高的致死率,给养猪业带来极大的危害。现有的TGEV疫苗并不能产生理想的防治效果,因此以新方法防治猪传染性胃肠炎显得尤为重要。益生菌普遍存在于动物肠道中,有助于促进肠道蠕动、维持肠道稳态。目前研究表明多种益生菌可发挥抗病毒作用。本课题组前期成功分离并鉴定出一株植物乳杆菌,将其命名为LP-1,试验发现经该菌株上清（LP-1 supernatant,LP-1S）处理后,ST细胞能对TGEV感染产生明显的抑制作用。但LP-1S作用于猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）是否能抑制TGEV在该细胞内增殖,其具体机制目前尚无文献报道。本试验通过探究LP-1S作用于IPEC-J2细胞是否能对TGEV在该细胞内复制产生抑制效果,并进一步检测LP-1S处理后的IPEC-J2细胞感染TGEV不同时间点细胞诱导IFN-β水平,胞内STAT1磷酸化、p-STAT1核易位情况及部分ISGs转录及蛋白表达产生的影响,初步阐明LP-1S通过影响IPEC-J2细胞内JAK-STAT1信号通路发挥抗TGEV的作用机制。主要研究内容如下:1、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内TGEV的复制情况（1）MTT法检测发现1/4倍稀释LP-1S为作用IPEC-J2细胞的最大无毒剂量;利用Western-blot检测发现LP-1S在IPEC-J2细胞中抗TGEV效果具有浓度依赖性,最佳浓度剂量为1/4倍稀释。（2）1/4倍稀释的LP-1S作用于IPEC-J2细胞后感染TGEV GFP Miller（MOI=0.1）株,在不同时间点通过倒置荧光显微镜观察TGEV GFP Miller株的荧光强度,发现LP-1S预处理组荧光数目明显少于未处理组;TCID50检测结果显示24h、48h LP-1S处理组较同时间点TGEV攻毒组均有极显著差异（P<0.01）。利用绝对荧光定量PCR、Western-blot分别检测IPEC-J2细胞中TGEV Miller N基因的病毒拷贝数和N蛋白的表达量,发现12h LP-1S预处理组较TGEV攻毒组N基因拷贝数有显著差异（0.0148h）STAT1磷酸化水平较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）。通过激光共聚焦显微镜发现,在12h LP-1S处理组感染TGEV后p-STAT1核易位水平较TGEV感染组有显著差异（0.01转录水平及ZAP、PKR蛋白表达情况按上述将IPEC-J2分为三组,利用相对荧光定量PCR检测不同时间点胞内部分ISGs基因的转录水平。结果发现这些基因在TGEV感染后24h-48h,LP-1S预处理组ISGs转录水平较TGEV攻毒组均有极显著差异（0.01转录水平在24h均达到最高值,PKR、ZAP、OASL、ISG15的基因转录水平与时间呈正相关,在48h达到峰值。Western-blot结果显示24h LP-1S处理后感染TGEV组胞内PKR蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）;ZAP蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有显著差异（0.01转录趋势一致;此外,两组p-PKR/PKR比值在不同时间点（24h、48h）均无显著差异（0.05

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 LP-1S 干扰素-β 信号传导及转录激活因子干扰素刺激基因

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叔丁基双氧水诱导HEI-OC1细胞株凋亡与STATs mRNA表达的相关性分析

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听力学及言语疾病杂志 2018年第2期26卷 162-166页

作者：曾梓豪罗璇姚裕恒王军义广东药科大学公共卫生学院广州510310

目的通过分析氧化应激损伤的凋亡HEI-OC1细胞各信号转导及转录激活子(signal transducers and activators of transcription,STATs)的表达,探讨酪氨酸激酶-信号转导及转录激活子(janus kinase-signal transducers and activators of transcription,JAK-STATs)信号通路在毛细胞凋亡中的生物学作用。方法采用不同浓度(0、20、40、60 μM)叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)染毒构建HEI-OC1细胞株凋亡模型(0μM浓度为对照组),Annexin V-FITC/PI法检测20、40、60 μM浓度t-BHP染毒组细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测STATs mRNA表达水平。结果对照组及20、40、60 μM t-BHP染毒组的细胞凋亡率分别为3.9%、7.4%、32.0%、91.2%;与对照组相比,各浓度T-BHP染毒组STAT1mRNA、STAT3mRNA、STAT5mRNA、STAT6 mRNA的表达水平均显著性下降(分别为F=5 534.302,P<0.01;F=146.038,P<0.01;F=685.929,P<0.01;F=516.11,P<0.01),各浓度t-BHP染毒组间差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比各浓度t-BHP染毒组STAT2mRNA的表达水平均有显著变化(F=1 259.148,P<0.01),20 μM染毒组STAT2 mRNA的表达水平明显下降(P<0.01),但40、60 μM染毒组均明显升高(P<0.01);STAT4 mRNA在HEI-OC1细胞株中未见表达。结论 JAK-STAT2信号通路具有促进毛细胞氧化应急损伤凋亡的生物学作用,JAK-STAT1/STAT3/STAT5/STAT6信号通路有抑制毛细胞氧化应急损伤凋亡的生物学作用。

关键词：氧化应激 HEI-OC1细胞株凋亡 JAK-STAT信号通路信号传导及转录激活因子

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复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞JAK/STAT信号通路的影响研究

复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞JAK/STAT信号通路的影响研...

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作者：唐莹上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最为常见的慢性并发症之一，课题组前期研究发现由鱼腥草和牛蒡子两味中药构成的小复方具有改善糖尿病肾损伤的作用。本文采用水蒸气蒸馏法、水煎法和乙醇回流法分别获得复方鱼腥草不同提取物，并... 详细信息

目的:　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最为常见的慢性并发症之一，课题组前期研究发现由鱼腥草和牛蒡子两味中药构成的小复方具有改善糖尿病肾损伤的作用。本文采用水蒸气蒸馏法、水煎法和乙醇回流法分别获得复方鱼腥草不同提取物，并以其提取物作用于高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞。通过研究复方鱼腥草不同提取物对小鼠肾小球系膜细胞高糖条件下增殖的抑制作用和其对JAK2-、STAT3、SOCS-1和SOCS-3基因表达的影响，从而探讨复方鱼腥草提取物以SOCS对JAK/STAT信号通路进行负反馈调节作用，为复方鱼腥草防治糖尿病肾损害的机制研究提供体外实验依据。　　方法:　　1、将鱼腥草和牛蒡子粉混匀，以水蒸气蒸馏法提取复方鱼腥草挥发油组分;取回流液浓缩后真空干燥得到复方鱼腥草水提组分;药渣加75％乙醇水溶液回流2h后过滤浓缩后，真空干燥处理得到复方鱼腥草醇提组分。最后以挥发油组分、水提组分和醇提组分所得质量比配制得到复方鱼腥草总提取物。　　2、对高糖条件培养下的小鼠肾小球系膜细胞分别加入1、2、4、8、16、32、64、128μg/mL复方鱼腥草挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物，并以加等体积DMSO设为溶剂对照组和加10μmol/L AG490为阳性对照组。待药物作用24h，采用MTT法测定复方鱼腥草不同提取物对小鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用，并计算各种提取物的半数抑制浓度。　　3、以复方鱼腥草不同提取物各自IC50浓度，对高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞分别作用4、8、12、24、48h，收集细胞提取总RNA，以RT-PCR法检测复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞中JAK2、STAT3、SOCS-1和SOCS-3mRNA相对表达量的影响。　　结果:　　1、MTT实验结果显示:复方鱼腥草不同提取物均对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞的增殖具有抑制作用;其抑制效果具有浓度依赖性;以GraphPad Prism5计算所得:复方鱼腥草挥发油提取物IC50浓度为124.9μg/mL;复方鱼腥草水提物IC50浓度为37.83μg/mL;复方鱼腥草醇提物IC50浓度为44.59μg/mL;复方鱼腥草总提取物IC50浓度为27.73μg/mL。　　2、RT-PCR实验结果显示:复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下的小鼠肾小球系膜细胞JAK2、STAT3、SOCS-1和SOCS-3mRNA的表达都有影响，不同组分的起效时间和持续效果有差异性;与溶剂对照组相比，复方鱼腥草提取物可以使SOCS-1和SOCS-3mRNA的表达显著上升，与此同时JAK2和STAT3mRNA的表达降低。　　结论:　　复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制效果，从而对糖尿病肾损害有改善作用，其效果是通过增加SOCS-1、SOCS-3的基因表达和抑制JAK2、STAT3的基因表达而实现的。因此，复方鱼腥草提取物可能通过SOCS负反馈调节JAK/STAT信号通路相关基因表达，从而起到减轻糖尿病肾损害的作用。

关键词：复方鱼腥草糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖抑制作用两面神激酶信号传导及转录激活因子基因表达

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类风湿关节炎湿热痹阻型患者信号分子STAT1、STAT3的表达及三黄一龙汤联合MTX的影响

类风湿关节炎湿热痹阻型患者信号分子STAT1、STAT3的表达及三黄一...

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中国人民解放军中医与中药学专业委员会2017年学术年会

作者：刘德芳呼永河郭明阳晏姣罗勇杨敏李莞周龙甫杨梅李华解放军成都军区总医院中西医结合风湿科成都610083 解放军成都军区总医院中心实验室成都610083 解放军成都军区总医院肿瘤科成都610083

目的：通过检测类风湿关节炎(RA)湿热痹阻型患者血清和滑膜中STAT1、STAT3、TNF-α、IL-6的表达水平,探讨信号分子STAT1、STAT3在RA发病中的作用,以及三黄一龙汤联合甲氨蝶呤(MTX)的作用机制. 方法：选择2014年1月-2016年12月解放军... 详细信息

目的：通过检测类风湿关节炎(RA)湿热痹阻型患者血清和滑膜中STAT1、STAT3、TNF-α、IL-6的表达水平,探讨信号分子STAT1、STAT3在RA发病中的作用,以及三黄一龙汤联合甲氨蝶呤(MTX)的作用机制. 方法：选择2014年1月-2016年12月解放军西宁联保中心成都总医院中西医结合风湿科住院的RA湿热痹阻证患者118例作为研究对象,30例有膝关节滑膜液者,纳入RA滑液组,30健康体检者归于健康对照组.治疗时,将符合标准的90例患者按随机对照法分为联合组和MTX组,联合组采用三黄一龙汤联合MTX治疗,对照组用MTX治疗.ELISA法检测STAT1、STAT3、TNF-α、IL-6的表达水平,常规检测血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、DAS28,以及28个关节的压痛、肿胀计数. 结果：RA湿热痹阻患者外周血和滑膜液中STAT1和STAT3都有表达,但较健康对照组明显降低(P＜0.01);外周血和关节滑膜液IL-6和TNF-α都有较高表达,明显高于健康对照组(P＜0.05).经过三黄一龙汤联合MTX治疗后,STAT1、STAT3、IL-6和TNF-α的表达明显降低(P＜0.05),关节压痛计数、肿胀计数及ESR、CRP和DAS28亦都明显降低(P＜0.05或P＜0.01). 结论：RA湿热痹阻患者信号因子STAT1、STAT3的异常表达可能参与了RA的发生发展;三黄一龙汤联合MTX可能通过调节STAT1、STAT3表达,抑制炎性细胞因子IL-6、TNF-α等的分泌,从而控制疾病的进展.

关键词：类风湿关节炎三黄一龙汤甲氨蝶呤信号传导及转录激活因子肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6 临床疗效

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抑制糖原合成酶激酶3β诱导巨噬细胞表型转化及其对组织损伤的保护作用

抑制糖原合成酶激酶3β诱导巨噬细胞表型转化及其对组织损伤的保...

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作者：蒋春明南京大学

学位级别：博士

研究目的：了解抑制GSK3β对体外诱导分化M1型Mψψ表型的影响及机制并探讨GSK3β抑制剂(TDZD-8)对叶酸肾损伤模型小鼠肾脏Mψψ表型的影响和肾脏损伤的保护作用。研究方法：体外培养骨髓细胞,在脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和Y-... 详细信息

研究目的：了解抑制GSK3β对体外诱导分化M1型Mψψ表型的影响及机制并探讨GSK3β抑制剂(TDZD-8)对叶酸肾损伤模型小鼠肾脏Mψψ表型的影响和肾脏损伤的保护作用。研究方法：体外培养骨髓细胞,在脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和Y-干扰素(intertferon-gamma, IFNy)作用下转化为M1型Mψψ。分别使用不同浓度糖原合成酶激酶3β (glycogen synthase kinase 3β, GSK3β)抑制剂TDZD-8(0,1,2.5,5μM)和氯化锂(Lithium Choloride, LiCl)、SiRNA干扰技术抑制GSK3β,通过免疫荧光、蛋白印迹以及流式细胞等方法检测Mψψ表面标志物如M1标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和白介素-1β (interleukin-1 beta,IL-1p)和M2标志物精氨酸酶I (arginase I, Arg I)和甘露糖受体(mannose receptor, MR)表达的变化情况,以及该过程中细胞信号传导及转录激活因子(signal transducers and activators of transcription, STAT)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR-γ)活性的变化。并通过使用相应STAT、PPARγ的激活剂／抑制剂探讨GSK3β抑制剂诱导Mψψ表型变化的潜在机制。在急性肾损伤叶酸动物模型中应用GSK3β抑制剂TDZD-8,采用前处理(TDZD-pre,叶酸注射前30分钟单次给药)和后处理(TDZD-post,在叶酸注射后第5天单次给药),观察各组小鼠肾功能指标变化情况,并在第7天观察肾脏损伤以及组织内Mψψ的表型,以及在第28天时肾脏组织纤维化的程度。研究结果：体外研究发现,骨髓细胞培养诱导分化的Ml型Mψψ在不同浓度TDZD-8作用48小时后,细胞表达iNOS和IL-1β显著下降,而ArgI和MR受体表达显著上升,这种作用在TDZD-80-5μM浓度区间呈剂量依赖。免疫荧光检测显示在TDZD-8作用下,M1型Mψψ表达iNOS显著下降,流式细胞仪检测表明TDZD-8使M1型Mψψ表达MR显著上升。使用SiRNA干扰技术发敲低GSK3β表达后M1型Mφ表达ArgⅠ和MR显著上升。M1型Mφ在5μM TDZD-8干预下,细胞pSTAT1, pSTAT6的表达在120分钟内无显著变化,pSTAT3的表达呈时间依赖下降。使用STAT3特异性抑制剂(stattic)对M1型Mφ进行干预,M1型Mφ表达M2标志物(ArgⅠ和MR)无显著上调。M1型Mφ在TDZD-8干预下,细胞抑制性磷酸化PPARy (pPPARy)表达显著下调。使用PPARy抑制剂(GW6229)和TDZD-8对M1型Mφ共处理后,TDZD-8诱导的M2标志物(ArgⅠ和MR)表达的上调能被显著抑制。体内对叶酸肾损伤模型的研究发现,在损伤早期,小鼠肾脏小管间质呈现典型的急性肾损伤的特点,血清肌酐(serum creatinine, Scr)显著上升。急性期过后,尽管Scr逐渐下降,但肾脏组织逐渐出现慢性化病变,在28天后肾脏组织有明显的胶原Ⅰ和纤维连接蛋白沉积。在损伤前预防性给予(前处理)或在损伤后第5天给予(后处理)TDZD-8均可显著减轻第7天时肾脏的损伤,并减轻第28天时肾脏的纤维化。前处理后肾脏组织中细胞凋亡(TUNEL)显著减少,细胞增生、修复(Ki-67, PAX 2)等指标表达显著上升,组织中M2型Mφ比例无显著上调(TDZD-pre:FA:26.8±12.4 vs 17.4±5.7, P>0.05)。后处理中,组织也表现为细胞凋亡(TUNEL)的减少,细胞增生、修复(Ki-67, PAX 2)等指标表达的上调,但程度显著弱于前处理组(P<0.05)。后处理中组织中M2型Mφ比例显著高于前处理组(TDZD-pre:TDZD-post:26.8±12.4 vs 85.7±9.3, P<0.01)。研究结论：抑制GSK3β可诱导M1型Mφ向M2转化。后处理中使用GSK3β抑制剂TDZD-8具有诱导叶酸肾脏损伤模型肾脏组中Mφ向M2转化的作用,并减轻肾脏的纤维化,这一作用至少部分依赖于PPAR-γ通路实现。以上结果提示,GSK3β可作为潜在急性肾损伤的干预靶点改善肾脏的远期预后。

关键词：巨噬细胞糖原合成酶激酶3β 信号传导及转录激活因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ 急性肾损伤纤维化

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调控JAK-STAT信号通路的化学小分子发现及其作用机制研究

调控JAK-STAT信号通路的化学小分子发现及其作用机制研究

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作者：何玉娇中国科学院大学

学位级别：博士

JAK/STAT信号通路介导了包括干扰素在内的约38种细胞因子的生理功能，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。通过其表面受体和下游的一系列信号因子，该通路提供了巧妙和直接的机制实现细胞外因子对基因表达... 详细信息

JAK/STAT信号通路介导了包括干扰素在内的约38种细胞因子的生理功能，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。通过其表面受体和下游的一系列信号因子，该通路提供了巧妙和直接的机制实现细胞外因子对基因表达的调控。因此，JAK/STAT信号通路作为一个研究范式，对于了解细胞是如何感知外界环境信号，揭示这些信号如何调控细胞生长和分化等细胞命运决定的机制具有重要的意义。虽然JAK/STAT信号通路过去被发现参与诸多信号通路的互相调控，在细胞命运决定中发挥重要功能，但是JAK/STAT信号通路与这些信号通路的相互交流机制还不清楚。因此，我们通过建立细胞筛选模型得到了一系列能够直接或间接调节JAK/STAT信号传导或功能的化学小分子调节剂，从不同角度研究了JAK/STAT信号通路与这些信号通路的相互交流，从而为揭示新的JAK/STAT通路组织特异性调控机制，发现新的候选药物和药物靶点奠定了基础。　　1.大黄素通过抑制26S蛋白酶体增强Ⅰ型干扰素介导的JAK/STAT信号传导干扰素临床治疗的一个重要限制因素在于干扰素会诱导干扰素受体的降解，从而造成耐药性和疗效降低。因此探讨调控干扰素受体稳定性策略是改善干扰素临床疗效的有效方式，但是目前缺乏增强受体稳定性有效的手段。26S蛋白酶体过去被发现能够负调控Ⅰ型干扰素(IFNα/β)的信号传导，因此用化学小分子调节剂来抑制26S蛋白酶体的活性可能是提高Ⅰ型干扰素的疗效和减少其副作用的一种新策略。我们通过构建HEK293 A-cODC-luciferase稳定转染细胞系的26S蛋白酶体抑制剂细胞筛选模型发现，天然蒽醌类化合物大黄素是一个26S蛋白酶体的强效抑制剂。大黄素优先抑制了26S蛋白酶体的半胱天冬酶样活性和糜蛋白酶样活性并且在细胞中提高了内源蛋白的泛素化水平。分子对接试验计算机模型表明，大黄素所展示出来的方向和构象有利于与26S蛋白酶体的β1，β2，β5亚基的活性口袋发生亲核攻击。大黄素也能够增加STAT1磷酸化，降低STAT3的磷酸化，且增加了通过IFNα刺激的内源基因表达。进一步研究发现，大黄素抑制了IFNα刺激的Ⅰ型干扰素受体1(IFNAR1)的泛素化和降解。同时，大黄素在HeLa宫颈癌细胞中增强了IFNα的抗增殖效果以及在注射了Huh-7肝癌细胞的小鼠体内能够降低肿瘤的生长。该研究首次揭示了26S蛋白酶体是大黄素的新靶点，提示蒽醌类天然产物是一类新的26S蛋白酶体抑制剂，抑制26S蛋白酶体活性作为提高IFNα/β疗效的一种新的手段值得进一步研究。　　2.苯基噁唑类化合物通过抑制TRBP介导的microRNA生物合成发挥抗肿瘤作用　　MicroRNAs是JAK/STAT信号通路参与细胞命运调控的主要途径之一，但是其机制还不清楚。其中miR-21调控了诸多抑癌基因的表达，也是抑制干扰素抗肿瘤作用的主要因素之一。我们通过筛选、构效关系和作用机制研究，首次发现了苯基噁唑类小分子3b，能够抑制细胞内成熟miRNA的表达，而不影响pri-miRNA和pre-miRNA的合成;化合物3b可以抑制成熟miR-21的表达，其抑制miR-21表达的活性也是目前最高的（IC50值～1.38μM），同时增加miR-21靶基因PTEN和PDCD4的蛋白表达;化合物3b不直接抑制Dicer的活性，可以通过TRBP诱导Ago2与Dicer的解离，抑制RISC复合体对pre-miRNA的剪切作用;化合物3b可以显著抑制乳腺癌和肝癌细胞的迁移和侵袭。该研究首次发现了第一个TRBP的化学小分子抑制剂3b，为进一步开发以TRBP为新靶点的抗肿瘤药物奠定了基础，也有助于促进对miRNA生物合成与细胞信号传导与之间交流通讯的认识。　　3.葫芦素类似物抑制STAT3的构效关系研究　　STAT3蛋白的过度激活参与了诸多肿瘤的发生，也是抑制干扰素抗肿瘤作用的重要因子。葫芦素过去已经被发现是STAT3的抑制剂，然而由于葫芦素对细胞骨架的脱靶效应所导致的高毒性从而影响了葫芦素在治疗疾病方面的应用。前期从Trichosanthes cucumerina中分离得到了5种葫芦素类化合物，包括葫芦素B(1)，异葫芦素B(2)，葫芦素E(3),2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷葫芦素G(4)以及2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷葫芦素H(5)。接着对葫芦素B结构进行改造合成了11个葫芦素类似物。我们对葫芦素及其类似物对STAT3表达的影响进行评估，结果发现除了已经有文献报道的天然产物葫芦素外，化合物6，8，14对STAT3也有明显的抑制作用。进一步研究发现，化合物14与天然产物葫芦素类似，对STAT3及STAT3的磷酸化均表现出抑制作用且呈现出一定的浓度、时间依赖关系。化合物14同时也能够影响细胞的形态，破坏细胞骨架。因此，没有细胞毒性

关键词：细胞发育两面神激酶信号传导及转录激活因子信号通路化学小分子调控机制

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