检索结果-内蒙古大学图书馆

miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤Y-79细胞生长和转移能力的影响

中国生物制品学杂志 2020年第6期33卷 640-647页

作者：刘青宁超杨捷玲岳小丁西京学院医学院陕西西安710000

目的探讨miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)Y-79细胞生长和转移能力的影响。方法临床收集人RB组织样本和癌旁组织样本各20份,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因的转录水平,并分析两者的相关性。RT-PCR检测RB细胞株Y-79和SO-RB50及正常视网膜细胞株HREC中miR-590-5p基因的转录水平。荧光素酶报告基因试验检测miR-590-5p和STAT3的相互作用关系。将Y-79细胞分为Y-79、miR-NC、miR-590-5p mimic和mi R-590-5p mimic+STAT3组,转染相应的miRNA及载体,RT-PCR检测mi R-590-5p和STAT3基因转录水平,Western blot检测STAT3、增殖蛋白Ki67、活化半胱天冬酶(cleave caspase-3,cl-caspase-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)蛋白表达水平,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常视网膜组织比较,RB组织中mi R-590-5p基因转录水平显著降低,STAT3基因转录水平显著升高(P<0.01),且miR-590-5p与STAT3基因转录水平呈负相关(r=-0.8835,P<0.001)。与正常视网膜细胞比较,SO-RB50和Y-79细胞miR-590-5p转录水平显著降低(P<0.01),从中选取miR-590-5p转录水平最低的Y-79细胞进行后续试验。与Y-79组比较,miR-590-5p mimic组mi R-590-5p表达水平显著升高,STAT3基因转录和蛋白表达水平显著降低,细胞增殖水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著降低,cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与miR-590-5p mimic组比较,miR-590-5p mimic+STAT3组STAT3蛋白表达水平显著升高,细胞增殖水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著升高,cl-caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与STAT3 WT+miR-NC组比较,STAT3 WT+miR-590-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。结论miR-590-5p可通过靶向作用于STAT3,抑制RB Y-79细胞的生长和转移能力。

关键词：视网膜母细胞瘤 Y-79细胞株 miR-590-5p 信号传导及转录激活因子3 生长转移

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脂肪酸合成酶与信号传导及转录激活因子3相互作用促进肝癌细胞的迁移和侵袭

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中华肝脏病杂志 2019年第9期27卷 681-686页

作者：黄娟邹小芹佘莎舒凤拓焕任红胡怀东杨轶轩重庆医科大学附属第二医院传染病科传染病分子生物学重点实验室病毒性肝炎研究所 400010

目的肝细胞癌(HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。转移是肝癌患者恶化的标志和死亡的主要原因。为了制定有效的治疗策略,迫切需要研究肝癌转移的分子基础。方法免疫组织化学检测脂肪酸合成酶(FASN)在肝癌中的表达。划痕试验和细胞... 详细信息

目的肝细胞癌(HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。转移是肝癌患者恶化的标志和死亡的主要原因。为了制定有效的治疗策略,迫切需要研究肝癌转移的分子基础。方法免疫组织化学检测脂肪酸合成酶(FASN)在肝癌中的表达。划痕试验和细胞侵袭试验验证FASN在肝癌迁移和侵袭中的作用。采用ITRAQ(同位素标记的相对与绝对定量)鉴定与FASN相互作用的蛋白质。免疫共沉淀(Co-IP)和细胞免疫荧光分析用于评估FASN和信号传导及转录激活因子3(STAT3)之间的相互作用。采用蛋白质印迹法检测FASN敲低后STAT3、P-STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达。采用t检验进行统计学分析。结果免疫组织化学检测结果显示FASN在肝癌组织中的表达高于癌旁组织。ITRAQ、Co-IP和免疫荧光分析发现FASN与STAT3存在相互作用。蛋白质印迹法检测结果表明FASN敲低后,P-STAT3、MMP-2和MMP-9的表达降低。结论FASN可能通过与STAT3相互作用和影响MMP-2/MMP-9的表达从而促进肝癌的转移。

关键词：癌,肝细胞脂肪酸合成酶信号传导及转录激活因子3 ITRAQ 转移

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信号传导及转录激活因子3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及基因沉默对甲状腺癌细胞的影响

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中国老年学杂志 2017年第24期37卷 6017-6019页

作者：尤鸣达李岩冰张春英河北医科大学附属唐山工人医院头颈外科河北唐山063000

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞的影响。方法将FTC-133细胞分为siRNA STAT3组、阴性对照组和空白对照组,RT-PCR测定FTC-133细胞STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9... 详细信息

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞的影响。方法将FTC-133细胞分为siRNA STAT3组、阴性对照组和空白对照组,RT-PCR测定FTC-133细胞STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA的表达,Western印迹测定甲状腺癌FTC-133细胞STAT3蛋白的表达,MTT法测定甲状腺癌FTC-133细胞的生长,Transwell法检测FTC-133细胞的迁移能力。结果老年甲状腺癌组织中STAT3阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3蛋白的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3、MMP2、MMP9 mRNA的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组第1、2、3天的抑制率均明显高于阴性对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中穿膜细胞数低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论老年甲状腺癌组织中STAT3呈高表达,沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有抑制作用。

关键词：信号传导及转录激活因子3 甲状腺癌基因沉默

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微小RNA-21/信号传导及转录激活因子3信号通路调控与肿瘤的关系研究进展

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新乡医学院学报 2016年第4期33卷 332-335页

作者：刘国庆杨廷桐新乡医学院病理学教研室河南新乡453003 解放军第91医院河南焦作454003

微小RNA(miRNA)是机体内一种重要的基因调控因子,参与多种肿瘤的发生发展,信号传导及转录激活因子(STAT)是众多细胞因子的信号传导蛋白,miRNA/STAT信号通路调控二者之间的相互作用,与机体的生长发育、细胞分化、代谢以及肿瘤的发生关系... 详细信息

微小RNA(miRNA)是机体内一种重要的基因调控因子,参与多种肿瘤的发生发展,信号传导及转录激活因子(STAT)是众多细胞因子的信号传导蛋白,miRNA/STAT信号通路调控二者之间的相互作用,与机体的生长发育、细胞分化、代谢以及肿瘤的发生关系密切,本文就近年来miRNA-21/STAT3信号传导通路调节及与肿瘤发生的相互关系进行综述。

关键词：微小RNA-21 信号传导及转录激活因子3 肿瘤信号传导

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六君子汤调控STAT3/泛素蛋白酶体途径防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩的机制

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中国实验方剂学杂志 2022年第5期28卷 8-15页

作者：张艳桑亚洲彭梦薇陈玉龙刘燕张彩丽吴耀松河南中医药大学中医药科学院河南省中医方证信号传导重点实验室/河南省中医方证信号传导国际联合重点实验室郑州450046 河南省中西医结合防治脑认知疾病工程技术研究中心郑州450046 郑州市中西医结合防治脑认知疾病重点实验室郑州450046

目的:基于信号传导及转录激活因子3(STAT3)/泛素蛋白酶体途径,体内探讨六君子汤防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩的作用机制。方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组,模型组,六君子汤组,抑制剂组,六君子汤联合sttatic组(联合用药组)... 详细信息

目的:基于信号传导及转录激活因子3(STAT3)/泛素蛋白酶体途径,体内探讨六君子汤防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩的作用机制。方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组,模型组,六君子汤组,抑制剂组,六君子汤联合sttatic组(联合用药组),每组8只。除空白组外,其余各组采用小鼠肺癌细胞(Lewis细胞)右前腋下皮下接种的方法建立肺癌恶病质肌肉萎缩小鼠移植瘤模型,在造模第8天,六君子汤组给予六君子汤灌胃(9.56 g·kg^(-1)·d^(-1))和抑制剂组腹腔注射抑制剂[25 mg·kg^(-1)·(2d)^(-1)]治疗。药物干预3周后取材,称量小鼠体质量、腓肠肌质量;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠腓肠肌肌纤维病理变化及横截面积的改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠腓肠肌中磷酸化-STAT3(p-STAT3),STAT3,肌肉萎缩盒F基因(MAFbx),肌肉环状指基因1(MuRF1)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠腓肠肌中STAT3,MAFbx,MuRF1 mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量及腓肠肌质量明显减轻,腓肠肌肌纤维横截面积明显减小,腓肠肌中p-STAT3,STAT3,MAFbx,MuRF1蛋白表达及STAT3,MuRF1,MAFbx mRNA的表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,六君子汤组小鼠体质量、腓肠肌质量、肌纤维横截面积明显增加(P<0.05),腓肠肌p-STAT3,STAT3,MuRF1,MAFbx蛋白表达及STAT3,MAFbx mRNA的表达均下降(P<0.05);与模型组比较,抑制剂组小鼠体质量及腓肠肌肌纤维横截面积增加(P<0.05),抑制剂组腓肠肌p-STAT3,STAT3,MuRF1,MAFbx蛋白表达及STAT3,MAFbx mRNA表达均下降(P<0.05);与模型组比较,联合用药组小鼠体质量及腓肠肌质量增加(P<0.05);腓肠肌p-STAT3,STAT3,MuRF1蛋白表达及STAT3,MAFbx mRNA表达均下降(P<0.05);与六君子汤组比较,抑制剂组、联合用药组腓肠肌中p-STAT3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:六君子汤可以防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩,其机制可能与调控STAT3信号介导的泛素蛋白酶体途径相关蛋白和基因的表达有关。

关键词：肺癌恶病质肌肉萎缩六君子汤信号传导及转录激活因子3 泛素蛋白酶体

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circ_005379结合ANXA2激活STAT3通路促进乳腺癌进展的机制研究

circ_005379结合ANXA2激活STAT3通路促进乳腺癌进展的机制研究

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作者：杨斌山东大学

学位级别：硕士

研究目的:　　乳腺癌是女性最常见的癌症之一，是女性癌症死亡的第二大原因，探究乳腺癌发生进展的分子机制至关重要。circRNA作为一种是新兴的单链RNA，由于其能抵抗RNA酶的降解而比较稳定，有望成为新的生物标记物。circRNA的作用机... 详细信息

研究目的:　　乳腺癌是女性最常见的癌症之一，是女性癌症死亡的第二大原因，探究乳腺癌发生进展的分子机制至关重要。circRNA作为一种是新兴的单链RNA，由于其能抵抗RNA酶的降解而比较稳定，有望成为新的生物标记物。circRNA的作用机制复杂，包括作为内源竞争性RNA（ceRNA）起到miRNA“海绵”作用、调控基因转录、与蛋白相互作用、参与蛋白质翻译等。本研究在临床样本检测乳腺癌中circ_0005379的表达，明确其诊断价值;通过体内外实验明确其在乳腺癌中的功能，通过circRNA与结合蛋白互作方式阐明其促进乳腺癌发展的分子机制。　　研究方法:　　1.在3对配对的人乳腺癌和癌旁组织中进行全转录组测序筛选差异表达的circRNA,后续在11对配对的乳腺癌及癌旁组织中使用实时定量PCR验证候选circRNA的差异表达，进行ROC曲线分析，探究其诊断价值。并分析126例乳腺癌患者中circ_0005379表达量与乳腺癌患者临床病理参数的关系。　　2.构建circ_0005379慢病毒过表达、shRNA干扰载体，进行细胞功能研究，检测circ_0005379在体外对乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移浸润的影响。进行裸鼠动物实验，探究circ_0005379在体内对肿瘤生长及远处转移的作用。　　3.使用荧光原位杂交技术确定circ_0005379的细胞内定位，RNA下拉实验、蛋白质谱寻找circ_0005379的潜在结合蛋白，使用RNA结合蛋白免疫沉淀、western blot等实验证明circ_0005379与RNA结合蛋白直接结合及circ_0005379调控RNA结合蛋白的分子机制。　　研究结果:　　1.通过全转录组测序在3对配对的乳腺癌和癌旁组织中筛选了异常表达的circRNA,在11对配对的乳腺癌及癌旁组织中行实时定量PCR证实circ_0005379在乳腺癌中表达上调。circ_0005379对乳腺癌及癌旁具有较好的区分能力，其在肿瘤直径大（P=0.0016）、有淋巴结转移（P=0.0256）、HER2 阳性（P=0.0447）、ki-67 高表达（P=0.0450）、HER2阳性分型（P=0.0416）、分期较晚（P＜0.0001）的乳腺癌组织中表达更高。　　2.体外细胞学实验证实circ_0005379过表达可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移浸润，抑制细胞凋亡，而下调circ_0005379可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移浸润，促进细胞凋亡。裸鼠体内成瘤实验发现circ_0005379可以促进乳腺癌生长、转移。　　3.荧光原位杂交发现circ_0005379在细胞质及细胞核中均有分布。RNA pull-dowm、蛋白质谱、RNA结合蛋白免疫沉淀、western blot发现并验证circ_0005379可直接结合ANXA2蛋白并上调 ANXA2,促进STAT3、p-STAT3的表达。Western blot发现circ_0005379可部分逆转泛素化相关分子UBAP2和TRIM65介导的ANXA2下调。　　研究结论:　　circ_0005379在乳腺癌组织较癌旁组织表达升高，在乳腺癌组织中其高表达与乳腺癌肿瘤直径大、腋窝淋巴结转移阳性、分期晚、HER2表达阳性、ki-67表达高相关。circ_0005379促进体外乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，在体内加速肿瘤生长和转移。circ_0005379结合并上调ANXA2,可能是通过阻断UBAP2和TRIM65介导的ANXA2泛素化，从而上调STAT3,促进乳腺癌的进展。

关键词：乳腺癌临床病理环状RNA_005379 ANXA2蛋白信号传导及转录激活因子3 分子机制

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IL-22/STAT3信号通路在慢性间歇低氧致胰岛素抵抗中的作用

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1678-1682页

作者：刘宏飞孙婷婷田稼荟陈新洁任丽珏杜婧韩芳魏翠英内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内分泌科包头014010 北京大学人民医院睡眠医学中心北京100044

目的对照观察大鼠在慢性间歇低氧-复氧条件下,白细胞介素-22(IL-22)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)的关系,探讨IL-22/STAT3通路在慢性间歇低氧所致胰岛素抵抗中的作用。方法将24只SD大鼠随机分为... 详细信息

目的对照观察大鼠在慢性间歇低氧-复氧条件下,白细胞介素-22(IL-22)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)的关系,探讨IL-22/STAT3通路在慢性间歇低氧所致胰岛素抵抗中的作用。方法将24只SD大鼠随机分为对照组(NC组)和间歇低氧组(CIH组),每组各12只。NC组置于常氧环境12周,CIH组先予间歇低氧8周,随后恢复常氧饲养至第12周。两组均于基线、第8周、第12周测定FBG、FINS、IL-22、p-STAT3/STAT3水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较组间差异。结果①两组基线时各观察指标之间差异无统计学意义(P>0.05);8周时,与NC组比较,CIH组FBG、FINS、HOMA-IR水平增高、IL-22水平降低(均P<0.05),p-STAT3/STAT3有降低趋势,但差异无统计学意义;复氧4周时,两组FBG、FINS、HOMA-IR、IL-22水平比较差异无统计学意义(均P>0.05),CIH组p-STAT3/STAT3值较NC组增高(P<0.05)。②Spearman秩相关分析显示,HOMA-IR与IL-22、p-STAT3/STAT3均呈负相关(均P<0.05)。结论慢性间歇低氧能够抑制IL-22/STAT3信号通路的表达;IL-22/STAT3信号通路可能介导了慢性间歇低氧所致的胰岛素抵抗。

关键词：间歇低氧胰岛素抵抗白细胞介素-22 信号传导及转录激活因子3

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柳穿鱼黄素抗食管鳞癌作用与机制研究

柳穿鱼黄素抗食管鳞癌作用与机制研究

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作者：陈栩楠郑州大学

学位级别：硕士

目的：　　柳穿鱼黄素(pectolinarigenin,PEC)是从菊科植物飞机草中提取的黄酮类生物小分子，具有广谱抗肿瘤活性。本研究旨在探讨PEC对食管鳞癌的药理学作用及可能的分子机制。　　方法：　　一、PEC对食管鳞癌细胞的药理学作用　　1. ... 详细信息

目的：　　柳穿鱼黄素(pectolinarigenin,PEC)是从菊科植物飞机草中提取的黄酮类生物小分子，具有广谱抗肿瘤活性。本研究旨在探讨PEC对食管鳞癌的药理学作用及可能的分子机制。　　方法：　　一、PEC对食管鳞癌细胞的药理学作用　　1. MTT实验检测PEC对食管鳞癌细胞ECa109和EC9706活力的影响，并计算IC50值。　　2. 克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验检测PEC对食管鳞癌细胞ECa109和EC9706增殖与迁移的影响。　　3. Western blot实验检测PEC对ECa109和EC9706细胞中迁移相关蛋白表达的影响。　　二、PEC对食管鳞癌作用的分子机制　　1. 用PEC处理ECa109细胞，提取细胞总RNA并进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),对差异表达基因进行分析，以探明受PEC调节的可能基因及信号通路。　　2. 用PEC处理ECa109和EC9706细胞，Western blot测定处理前后细胞中催乳素信号通路的下游蛋白JAK2、p-JAK2、AKT、p-AKT、PI3K、STAT3、p-STAT3、PRLR、GSK3-β、p-GSK3-β 的表达情况。　　3. 分子对接实验与细胞热转移实验测定PEC与催乳素通路关键蛋白催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)相互作用。　　4. 用催乳素处理ECa109和EC9706细胞以激活PRLR通路，克隆形成实验，划痕实验，和Transwell实验检测PRLR激活后PEC对食管鳞癌ECa109和EC9706细胞增殖及迁移能力的变化，并用Western blot检测细胞中上述催乳素信号通路的下游蛋白的表达变化。　　5.催乳素与PEC单用或联用处理ECa109和EC9706细胞，分别提取上述细胞中核蛋白与细胞浆蛋白，Western blot实验测定细胞浆与细胞核中STAT3蛋白的表达含量变化，以此判断STAT3蛋白是否入核发挥作用。　　结果：　　一、PEC具有抗食管鳞癌细胞作用　　1. PEC能显著抑制ECa109与EC9706细胞活力，且呈现剂量依赖性和时间依赖性。　　2. PEC能显著抑制ECa109细胞与EC9706细胞的克隆形成和细胞迁移，且抑制效果呈现剂量依赖性与时间依赖性。　　3. PEC可以促进ECa109细胞与EC9706细胞中E-Cadherin蛋白的表达，抑制Vimentin蛋白的表达且结果呈现时间依赖性。　　二、PEC通过直接与PRLR结合抑制其下游通路蛋白发挥抗食管鳞癌活性　　1. RNA-seq结果显示，PEC处理后细胞中共有600个基因表达水平发生变化,其中上调基因365个，下调基因235个。综合分析各基因归属的信号通路,发现PRL信号通路及其下游PI3K/AKT和JAK2/STAT3信号通路均有显著变化，提示PEC可能通过影响PRL通路发挥抗食管鳞癌作用。　　2. PEC 处理后，细胞中 PRLR、p-AKT、p-STAT3、PI3K、p-JAK2 表达降低，而p-GSK3-β蛋白表达升高，提示PEC能够抑制PRLR及AKT和STAT3信号。　　3. 分子对接分析结果显示，PRLR蛋白的20种同分异构体均可以与PEC形成π-π堆叠键，且其中的18种可以与PEC形成氢键;经PEC处理后PRLR蛋白在50～62℃梯度温度中稳定性显著提升。以上结果提示PEC与PRLR存在直接相互作用。　　4. 激活催乳素通路后，PEC对食管鳞癌ECa109细胞与EC9706细胞的增殖与迁移的抑制作用均减弱。激活催乳素通路后，PEC对食管鳞癌ECa109细胞与EC9706细胞p-AKT、p-STAT3、p-JAK2、PI3K蛋白的抑制作用及p-GSK3-β蛋白的促进作用均减弱。　　5. 核蛋白中PEC单用组STAT3含量上升，催乳素单用组STAT3含量下降，催乳素与PEC联用后，相对于PEC单独应用组STAT3含量下降，而胞浆蛋白中STAT3蛋白含量的变化趋势则完全相反。上述结果进一步证明PEC通过抑制催乳素通路发挥抗食管鳞癌作用。　　结论：　　1. PEC具有抗食管鳞癌作用。　　2. PEC抗食管鳞癌作用与其直接作用于PRLR蛋白从而抑制催乳素下游通路JAK2/STAT3 与 PI3K/AKT 激活有关。

关键词：柳穿鱼黄素食管鳞癌两面神激酶2 信号传导及转录激活因子3 磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白激酶B 抗肿瘤活性

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黄精+苍术通过APE1/STAT3轴抑制非小细胞肺癌进展的机制研究

黄精+苍术通过APE1/STAT3轴抑制非小细胞肺癌进展的机制研究

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作者：秦晨歌南通大学

学位级别：硕士

目的：肺癌是一种高发病率、高致死率的恶性肿瘤，常常因发现就是晚期肿瘤，患者因难以治疗而导致患者死亡。虽然临床上已经有了多种治疗方法，如手术、放疗和化疗等，但是它们仍然存在着许多限制和副作用，如手术和放疗会破坏正常组织... 详细信息

目的：肺癌是一种高发病率、高致死率的恶性肿瘤，常常因发现就是晚期肿瘤，患者因难以治疗而导致患者死亡。虽然临床上已经有了多种治疗方法，如手术、放疗和化疗等，但是它们仍然存在着许多限制和副作用，如手术和放疗会破坏正常组织和器官，导致患者的身体功能受到损害，而化疗则可能会引发严重的副作用，如恶心、呕吐、脱发等。中药具有独特的药理作用和较好的安全性，对肺癌的治疗具有一定的潜力。因此，越来越多的研究者开始探索中药治疗肺癌的可能性。黄精和苍术是常见的中草药，已被证实具有一定的抗肿瘤作用。黄精主要含有多种生物活性成分，如黄精苷、黄精甙、黄精苷酸等，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等作用;而苍术主要含有β-元素、β-香叶烯、β-坎肖烯等化合物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。然而，黄精和苍术联合治疗肺癌的具体机制尚未得到充分阐明。为此，本研究旨在深入探究黄精和苍术联合干预在抑制肺癌中的作用机制，并评估其安全性。　　方法：通过中药药理学网络筛选黄精和苍术主要生物分子网络与通路。CCK8实验检测黄精和苍术对人肺腺癌肿瘤细胞系 H1299和PC9细胞及鼠源性肺癌细胞 LLC细胞和正常支气管上皮细胞 Beas2B细胞活性的影响，用于确定后续实验给药浓度。动物实验中，利用LLC细胞构建皮下荷瘤小鼠动物模型;利用基因缺陷小鼠构建原发性肺癌小鼠动物模型。通过 HE和免疫组化染色，观察黄精和苍术对荷瘤小鼠以及原发性肺癌小鼠的治疗效果;通过转录组学分析黄精和苍术干预原发性肺癌小鼠与对照组小鼠之间存在差异表达的基因。APE1具有调节基因表达和信号转导通路的功能利用qPCR、免疫组化和Western blot分别检测原发性肺癌小鼠肺组织中 APE1的 mRNA和蛋白的表达。EdU 染色检测不同浓度黄精和苍术以及 APE1 抑制剂E3330 干预 H1299 和 PC9细胞后对其细胞增殖的影响。通过流式细胞术检测不同浓度黄精和苍术以及 APE1 抑制剂 E3330 干预 H1299和PC9细胞后对其细胞周期的影响。Western blot检测不同浓度黄精和苍术以及 APE1抑制剂 E3330干预 H1299和 PC9细胞后，对其细胞内 APE1、STAT3、CDK4、P21和P27蛋白表达的影响。通过 HE染色观察检测不同浓度黄精和苍术干预对原发性肺癌小鼠肝脏和肾脏的病理变化，并利用试剂盒检测小鼠血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血清肌酐，评估黄精和苍术的用药安全性。　　结果：通过中药药理学网络筛选出黄精和苍术主要作用的靶点基因的生物学通路与肿瘤的发生发展密切相关。CCK8实验表明黄精和苍术对肺癌细胞系 H1299、PC9和 LLC 细胞有明显的抑制作用，而在同浓度下对正常肺上皮细胞无抑制作用，并且根据实验结果选取黄精+苍术浓度为 5mg/ml 和 8mg/ml 用于干预 H1299 细胞， 2mg/ml和 4mg/ml用于干预 PC9细胞。HE和免疫组化染色确认荷瘤小鼠和原发性肺癌小鼠动物模型构建成功，并且免疫组化结果表明黄精和苍术可以很好的抑制荷瘤小鼠瘤体的生长，通过 HE染色并对肿瘤面积占比进行定量发现黄精和苍术对原发性肺癌小鼠有明显的抑制原发性肺癌的发展。通过转录组学发现，黄精+苍术可以抑制原发性肺癌小鼠肺组织中 APE1的表达，并且 qPCR、免疫组化以及 Western blot验证了黄精+苍术可以抑制原发性肺癌小鼠肺组织中 APE1 mRNA和蛋白表达。EdU染色表明黄精+苍术可以抑制肺癌细胞 H1299和PC9的细胞增殖。流式细胞术结果显示黄精+苍术可以诱导 H1299和PC9细胞 G1/G0细胞周期阻滞，并且通过 Western Blot验证了黄精+苍术干预后H1299和PC9细胞中APE1、p-STAT3和CDK4蛋白表达下调， P21和P27蛋白表达上调。肾脏和肝脏的 HE染色以及对小鼠血清进行检测的谷草转氨酶、谷丙转氨酶和血清肌酐表明黄精+苍术作用于小鼠后，对小鼠肝功、肾功无副作用。　　结论：黄精和苍术联合干预可通过下调 APE1/STAT3 通路来抑制肺癌细胞的增殖,并且阻滞肺癌细胞的细胞周期 G0/G1期。此外，我们的实验结果还表明，黄精和苍术联合干预是安全的，并没有对小鼠的肝肾功能产生副作用。这些发现为深入探究 APE1/STAT3信号通路在肺癌细胞增殖中的作用机制提供了新思路，并为开发相关的治疗策略提供了重要依据。因此，黄精和苍术联合应用有望成为一种潜在的肺癌治疗策略。

关键词：非小细胞肺癌黄精苍术抗肿瘤作用脱嘧啶核酸内切酶1 信号传导及转录激活因子3

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SPP1通过JAK2/STAT3通路促进食管癌细胞的放射抵抗

SPP1通过JAK2/STAT3通路促进食管癌细胞的放射抵抗

引用

作者：王梅洁山东大学

学位级别：博士

研究背景食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是临床常见的消化道恶性肿瘤,是当前全球第七大常见的癌症类型,位居全球癌症死因的第6位,在中国因恶性肿瘤所致死亡的原因中位列第四,是临床实践和科学研究中非常重要的肿瘤类型。放射治疗是E... 详细信息

研究背景食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是临床常见的消化道恶性肿瘤,是当前全球第七大常见的癌症类型,位居全球癌症死因的第6位,在中国因恶性肿瘤所致死亡的原因中位列第四,是临床实践和科学研究中非常重要的肿瘤类型。放射治疗是ESCA非手术治疗的主要手段,能有效杀死肿瘤细胞,缓解临床症状,避免围手术期的肿瘤进展和患者死亡,延长患者的生存时间。然而,在根治性、围手术期或姑息性放射治疗中,患者的5年生存率仅有8.3%～14.6%,这主要是由于ESCA组织出现了放射治疗抵抗现象,这是临床实践中影响ESCA治疗效果的主要障碍之一。因此,探索ESCA发生放射抵抗的具体分子机制,研究ESCA放射抵抗相关的分子靶点和下游信号通路,以开发新的治疗靶点和联合治疗方法,对于提高ESCA的局部控制率和患者生存率具有重大意义。分泌型磷蛋白1(Secreted phosphoprotein 1,SPP1)又称骨桥蛋白,是分泌型酸性蛋白家族的成员。SPP1广泛表达于多种细胞,如心脏成纤维细胞、骨细胞、巨噬细胞、平滑肌和内皮细胞等,参与调控生物矿化、骨骼重塑、分子趋化、细胞活化和细胞凋亡等多种生物学过程。目前有文献报道,已通过生物信息学分析的方法发现血液中的SPP1水平与ESCA的诊断和预后具有一定相关性,然而,肿瘤微环境中的SPP1水平与ESCA的相关性更加直接,因此,SPP1的诊断和预后价值仍需通过ESCA临床组织样本进行深入的实验验证。此外,有文献报道SPP1在乳腺癌、结肠癌和前列腺癌等多种癌症类型中高表达并可增强肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,然而,SPP1在ESCA中的研究甚少且缺乏系统全面的实验验证,尤其是SPP1在ESCA放射治疗抵抗过程中的作用尚无研究。因此,研究SPP1在ESCA发生发展和放射抵抗过程中的具体功能和作用具有重要意义和创新性。JAK(janus kinase)家族属于非受体酪氨酸激酶家族,目前有4个成员:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK的N端结构域能与受体相结合,C端为激酶结构域。每种JAK家族的成员可与特异的细胞因子受体结合,进而激活下游信号通路。JAK的底物是信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT),STAT家族目前有7个成员:STAT1至STAT7。STAT被JAK磷酸化后会发生二聚化,然后进入细胞核内调节相关基因的表达,进而影响细胞功能。JAK-STAT信号通路与细胞增殖、分化、存活等基础细胞生物学行为密切相关,并且在多种肿瘤的发生、进展、转移和治疗抵抗的发生中发挥着重要作用。有研究报道,在乳腺癌中JAK-STAT是SPP1的下游信号通路,参与了 SPP1介导的乳腺癌细胞的肿瘤恶性生物学行为,故我们猜测SPP1能够通过JAK-STAT通路介导ESCA细胞的放射抵抗现象。然而,JAK-STAT通路与SPP1在ESCA中的关系尚不明确,并且JAK-STAT通路在ESCA放射抵抗中过程的作用尚无相关研究。研究目的1.研究SPP1与食管癌预后的相关性。2.研究SPP1在食管癌细胞恶性生物学行为中的作用,探究SPP1靶向疗法联合放疗对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。3.研究放疗对食管癌细胞SPP1表达水平的影响。4.研究SPP1与食管癌细胞放射抵抗现象之间的关系,并探索其下游信号通路及分子机制。材料方法1.数据库检索:利用TCGA数据库获取ESCA中SPP1蛋白的表达情况、SPP1表达水平与ESCA临床特征的关系、SPP1表达水平与ESCA生存曲线的关系。2.生物信息学分析:GEO数据库获取SPP1的mRNA表达情况并绘制火山图,通过R软件对SPP1与JAK-STAT信号通路进行基因富集分析并绘制图表。3.细胞系构建:使用SPP1-敲低和SPP1-过表达慢病毒转染Eca-109和Kyse-150细胞系,用嘌呤霉素筛选出稳转细胞系,并构建相应对照细胞系。4.细胞增殖检测:(1)EdU检测:将细胞以1×105个/孔的密度种于24孔板中,37℃孵育24 h,使用EdU试剂盒进行检测,采集细胞荧光图像并分析。(2)CCK-8检测:将细胞以3×103/孔的密度种于96孔板中,37℃孵育,并分别于24、48、72、96、120小时等时间点加入CCK-8试剂,测定450 nm处的OD值,绘制细胞生长曲线。(3)克隆形成:将细胞以1000个/孔的密度种于6孔板中,37℃孵育约10天。细胞克隆形成后用甲醇固定,结晶紫染色,拍照并统计克隆数量。5.细胞迁移检测:(1)细胞创伤愈合实验:细胞种于六孔板,当细胞密度达70%时用200 μ1枪头划一条直线,于无血清培养基中孵育,分别于0、48、72小时采集图像。(2)Transwel

关键词：食管癌放射抵抗 DNA损伤修复分泌型磷蛋白1 Janus激酶2 信号传导及转录激活因子3

来源：评论

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