检索结果-内蒙古大学图书馆

信号转导与转录因子3在宫颈癌组织中的表达及外周血表皮生长因子受体测定的意义

实用妇产科杂志 2010年第12期26卷 920-923页

作者：农文政马刚杜萍甘精华黄丽珍广西壮族自治区民族医院广西南宁530001 广西壮族自治区人民医院广西南宁530021

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)及其上游基因表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈癌中的表达及两者在宫颈癌发生发展中的作用和关系。方法:采用蛋白印记法(Western Blot)检测15例正常宫颈组织(健康对照组)、40例宫颈癌组织(宫颈癌组)中S... 详细信息

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)及其上游基因表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈癌中的表达及两者在宫颈癌发生发展中的作用和关系。方法:采用蛋白印记法(Western Blot)检测15例正常宫颈组织(健康对照组)、40例宫颈癌组织(宫颈癌组)中STAT3的表达及其磷酸化STAT3(p-STAT3)情况。双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测宫颈癌组患者治疗前后和健康对照组血清EGFR的含量。结果:①宫颈癌组织中STAT3表达水平和磷酸化水平明显高于健康对照组正常宫颈(P<0.05);②早期宫颈癌患者术前、术后血清中EGFR含量与健康对照组比较,差异无统计学意义(P=0.835;P=0.586;P=0.277);③中晚期宫颈癌患者术前、术后血清EGFR含量显著高于健康对照组(P=0.011;P=0.022;P=0.039)。治疗后EGFR含量稍有下降,治疗后14天与治疗前1天、治疗后7天比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:STAT3高表达和激活能促进宫颈癌的发生、发展,晚期宫颈癌血清中EGFR测定可能成为宫颈癌的疗效评价及远期预后的指标。

关键词：信号转导与转录因子3 表皮生长因子受体蛋白印记法宫颈癌双抗体夹心酶联免疫吸附法

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信号转导与转录因子3和表皮生长因子受体在宫颈不同病变组织中的表达及其临床意义

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现代生物医学进展 2019年第22期19卷 4264-4268页

作者：冯苗苗李道成沈宏伟李思瑾蔡逸苗广州中医药大学第一附属医院妇科广东广州510405 中山大学附属第一医院妇科广东广州510080

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)与表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈不同病变组织中的表达变化及其临床意义。方法:采用Western blot与免疫组化的方法检测100例上皮内瘤样病变(CIN)组织、60例宫颈癌组织及40例正常宫颈组织中STAT3与E... 详细信息

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)与表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈不同病变组织中的表达变化及其临床意义。方法:采用Western blot与免疫组化的方法检测100例上皮内瘤样病变(CIN)组织、60例宫颈癌组织及40例正常宫颈组织中STAT3与EGFR的表达;分析STAT3与EGFR的表达与宫颈癌组织病理特征的关系;对宫颈癌组织中STAT3与EGFR的表达的相关性进行分析。结果:宫颈癌组织以及CIN组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率显著高于正常宫颈组织(P<0.05),且宫颈癌组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率高于CIN组织,差异有统计学意义(P<0.05);STAT3与EGFR在宫颈癌组织中的染色强度较正常宫颈组织以及CIN组织显著增强;STAT3与EGFR的异常表达与宫颈癌患者的组织学分级、临床分期以及是否发生淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄以及病理分型无关(P>0.05);宫颈癌组织中STAT3和EGFR表达呈正相关(P<0.05)。结论:STAT3与EGFR表达与CIN、宫颈癌的进展紧密相关,且与宫颈癌部分病理特征相关,二者有可能作为宫颈癌诊断及预后的参考指标。

关键词：信号转导与转录因子3 表皮生长因子受体宫颈癌宫颈上皮内瘤变

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组氨酸磷酸酶蛋白14对肺癌细胞皮下移植瘤生长及信号转导与转录因子3磷酸化水平的影响

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中国老年学杂志 2019年第6期39卷 1340-1343页

作者：马建欣马永新熊胜春承德市中心医院心胸外科河北承德067000 承德市第三医院肿瘤科

目的探讨组氨酸磷酸酶蛋白(PHP)14对肺癌细胞皮下移植瘤生长及信号转导与转录因子(STAT)3磷酸化水平的影响。方法在肺癌细胞A549中转染PHP14小干扰核糖核酸(siRNA)1质粒和PHP14 siRNA2质粒,以实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和West... 详细信息

目的探讨组氨酸磷酸酶蛋白(PHP)14对肺癌细胞皮下移植瘤生长及信号转导与转录因子(STAT)3磷酸化水平的影响。方法在肺癌细胞A549中转染PHP14小干扰核糖核酸(siRNA)1质粒和PHP14 siRNA2质粒,以实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹法测定转染后细胞中PHP14表达。以噻唑蓝(MTT)法测定转染后24 h、48 h、72 h的细胞OD值。将沉默PHP14后的肺癌细胞种植到裸鼠皮下,7 d、14 d、21 d、28 d测定肿瘤体积,28 d检测肿瘤重量,Western印迹法检测肿瘤组织中STAT3、磷酸化(p)-STAT3、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-p38MAPK蛋白水平。结果 PHP14的siRNA1和siRNA2均能够抑制肺癌细胞中PHP14的表达和转录,并且siRNA1的干扰效率更好(P<0.05)。沉默PHP14后的肺癌细胞在24 h、48 h、72 h的OD值均显著低于正常细胞(P<0.05)。沉默PHP14后的肺癌细胞接种到裸鼠皮下后7 d、14 d、21 d、28 d的移植瘤体积均显著低于正常细胞,肿瘤重量显著低于正常细胞(P<0.05)。沉默PHP14可以显著减少肺癌细胞皮下移植瘤中STAT3磷酸化水平,显著提高p38MAPK磷酸化水平。结论沉默PHP14可以抑制肺癌细胞体外增殖能力,抑制细胞皮下移植瘤的生长,减少移植瘤中STAT3的磷酸化,促进移植瘤中p38MAPK的磷酸化。

关键词：组氨酸磷酸酶蛋白14 肺癌细胞皮下移植瘤信号转导与转录因子3

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乳脂球-表皮生长因子8对脑缺血后小胶质细胞极化的调控作用机制研究

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中华物理医学与康复杂志 2021年第7期43卷 588-594页

作者：方莹莹张靖慧南方医科大学基础医学院广州510515 广东省康复医学会广州510000 中山大学附属第三医院康复医学科广州510630

目的探寻乳脂球-表皮生长因子8(MFG-E8)在脑缺血后小胶质细胞极化的调控作用和作用机制。方法选取C57BL/6小鼠40只,采用随机数字表法将其为假手术组、缺血组、重组小鼠乳脂球-表皮生长因子8(rmMFG-E8)组和rmMFG-E8+科利维林(Colivelin T... 详细信息

目的探寻乳脂球-表皮生长因子8(MFG-E8)在脑缺血后小胶质细胞极化的调控作用和作用机制。方法选取C57BL/6小鼠40只,采用随机数字表法将其为假手术组、缺血组、重组小鼠乳脂球-表皮生长因子8(rmMFG-E8)组和rmMFG-E8+科利维林(Colivelin TFA)组,每组10只小鼠。缺血组、重组小鼠乳脂球-表皮生长因子8(rmMFG-E8)组和rmMFG-E8+科利维林(Colivelin TFA)组制作大脑中动脉梗阻再灌注模型(tMCAO),其中rmMFG-E8组和rmMFG-E8+Colivelin TFA组小鼠在造模成功后立即进行脑梗侧侧脑室立体定位注射,分别给予总量2μl,浓度0.4μg/μl的rmMFG-E8和总量2μl,浓度0.4μg/μl的rmMFG-E8+总量2μl,浓度5 pmol/μl的Colivelin TFA干预。造模成功1、3、5、7 d后采用行为学实验检测神经功能恢复情况,造模成功7 d后采用组织染色观察脑梗死灶体积比例,通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测小胶质细胞M1极化标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2极化标记物精氨酸酶1(Arg1)和小鼠类几丁质酶3样分子(Ym1)、MFG-E8的基因表达水平,通过免疫印迹实验检测MFG-E8、磷酸化信号转导与转录因子3(p-STAT3)和细胞因子信号传导抑制因子-3(SOCS3)蛋白表达水平。结果行为学检测发现,缺血组、rmMFG-E8组和rmMFG-E8+Colivelin TFA组在造模成功1、3、5、7 d后的转棒时间和mNSS评分与假手术组同时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模成功7 d后,与假手术组比较,缺血组MFG-E8基因和蛋白表达均显著降低(P<0.05),M1极化标记物iNOS基因的表达显著增高(P<0.05),M2极化标记物Arg1和Ym1基因的表达显著下降(P<0.05),p-STAT3/STAT3蛋白的表达显著上调(P<0.05),SOCS3/GAPDH蛋白的表达显著下调(P<0.05)。造模成功7 d后,与缺血组比较,rmMFG-E8组的梗死灶体积显著缩小(P<0.05)。造模成功7 d后,rmMFG-E8+Colivelin TFA组iNOS基因的表达较rmMFG-E8组明显增加(P<0.05),Arg1和Ym1基因的表达明显降低(P<0.05),p-STAT3/STAT3的表达显著上调(P<0.05),SOCS3/GAPDH的表达显著下降(P<0.05)。结论MFG-E8可通过STAT3信号通路促进脑缺血后小胶质细胞向M2型极化,促进脑缺血小鼠神经功能的恢复。

关键词：大脑中动脉梗阻再灌注模型小胶质细胞极化乳脂球-表皮生长因子8 信号转导与转录因子3

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miR-34a/STAT3/VAMP8调控血小板免疫活化的机制研究

miR-34a/STAT3/VAMP8调控血小板免疫活化的机制研究

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作者：郭方君南昌大学

学位级别：硕士

目的:探讨miR-34a/STAT3/VAMP8调控血小板免疫活化的机制方法:（1）培养人成巨核细胞白血病细胞Meg-01,用1mmol/L双氧水（H2O2）刺激其2小时,模拟血小板氧化应激状态。实验分为2组,control组、H2O2组。q-RT-PCR检测各组细胞中miR-34a的... 详细信息

目的:探讨miR-34a/STAT3/VAMP8调控血小板免疫活化的机制方法:（1）培养人成巨核细胞白血病细胞Meg-01,用1mmol/L双氧水（H2O2）刺激其2小时,模拟血小板氧化应激状态。实验分为2组,control组、H2O2组。q-RT-PCR检测各组细胞中miR-34a的表达水平;Western Blot（WB）检测各组细胞中CD62P、CD40L、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平;（2）培养Meg-01细胞,向细胞内分别转染miR-34a的模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）48小时后,H2O2刺激2小时。实验分为4组,control组、H2O2组、miR-34a mimic+H2O2组、miR-34a inhibitor+H2O2组。透射电镜观察细胞内致密颗粒的变化。（3）培养Meg-01细胞,向细胞内分别转染miR-34a mimic、miR-34a inhibitor及其各自阴性对照,实验分为5组,control组、miR-34a mimic组、mimic control组、miR-34a inhibitor组、inhibitor control组。q-RT-PCR检测各组细胞中miR-34a、miR-96的表达水平;WB检测各组细胞中P-STAT3、STAT3、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平。（4）利用靶基因预测网址Target Scan预测STAT3基因与miR-34a是否有结合位点,并用双荧光素酶报告基因验证STAT3是否是miR-34a的靶基因。（5）培养Meg-01细胞,向细胞内分别转染STAT3过表达质粒（CA-STAT3）、干扰片段（si-STAT3）及其各自阴性对照,实验分为5组,control组、CA-STAT3组、CA-control组、si-STAT3组、si-control组。q-RT-PCR检测各组细胞中STAT3mRNA、miR-96的表达水平;WB检测各组细胞中P-STAT3、STAT3、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平。（6）培养Meg-01细胞,向细胞内分别转染miR-96 mimic、miR-96 inhibitor及其各自阴性对照,实验分为5组,control组、miR-96 mimic组、mimic control组、miR-96 inhibitor组、inhibitor control组。q-RT-PCR检测各组细胞中miR-96的表达水平;WB检测各组细胞中CD62P、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平。（7）培养Meg-01细胞,向细胞内分别转染CA-VAMP8及si-VAMP8及其各自阴性对照,实验分为5组,control组、CA-VAMP8组、CA-control组、si-VAMP8组、si-control组。WB检测各组细胞中CD62P、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平。结果:（1）H2O2刺激Meg-01细胞2小时后,与control组比较,H2O2能显著升高细胞内miR-34a、CD62P、CD40L、PAC-1、VAMP8蛋白表达水平（P<0.05）。（2）向细胞转染miR-34a mimic、miR-34a inhibitor及其各自阴性对照后,H2O2刺激2小时,透射电镜结果显示,H2O2组、H2O2+miR-34a mimic组中的致密颗粒数均比control、H2O2+miR-34a inhibitor组多,H2O2+miR-34a mimic组中的致密颗粒数多于H2O2组,control组、H2O2+miR-34a inhibitor组间致密颗粒数无明显变化。（3）向细胞转染miR-34a mimic、miR-34a inhibitor及其各自的阴性对照后,q-RT-PCR检测结果显示,miR-34a mimic组的miR-34a的表达高于control组和mimic control组（P<0.05）、miR-96的表达低于control组和mimic control组（P<0.05）;miR-34a inhibitor组的miR-34a的表达低于control组和inhibitor control组（P<0.05）、miR-96的表达高于control组和inhibitor control组（P<0.05）;control组、mimic control组、inhibitor control组间无显著差异（P>0.05）。WB结果显示,miR-34a mimic组P-STAT3蛋白的表达明显低于control组和mimic control组（P<0.05）,而STAT3蛋白的表达无显著差异（P>0.05）;miR-34a mimic组PAC-1、VAMP8蛋白的表达明显高于control组和mimic contro

关键词：微小RNA34a 信号转导与转录因子3 囊泡相关膜蛋白8 血小板活化

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叶酸缺乏通过线粒体STAT3介导缺血再灌后神经细胞损伤的机制研究

叶酸缺乏通过线粒体STAT3介导缺血再灌后神经细胞损伤的机制研究

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作者：董志萍天津医科大学

学位级别：硕士

目的通过线栓法制备SD大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)缺血再灌注模型,观察叶酸缺乏(folic acid deficiency,FD)对脑缺血再灌注后大脑线粒体损伤的影响,通过叶酸缺乏和JAK2/STAT3抑制剂AG490联合干预,探讨... 详细信息

目的通过线栓法制备SD大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)缺血再灌注模型,观察叶酸缺乏(folic acid deficiency,FD)对脑缺血再灌注后大脑线粒体损伤的影响,通过叶酸缺乏和JAK2/STAT3抑制剂AG490联合干预,探讨线粒体内信号转导及转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在叶酸缺乏引起的脑缺血再灌注损伤中的作用。体外培养N2a细胞,建立氧糖剥夺/复氧(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)模型,检测叶酸缺乏对N2a细胞活力的影响,不同通路的抑制剂分别与叶酸缺乏联合干预,探讨叶酸缺乏对N2a细胞线粒体内STAT3不同活化位点的具体调控机制,为脑梗塞疾病的预防及治疗提供新的思路及实验依据。方法1.125只体重为160-180 g的雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为5组,分别为假手术组(SHAM)、大脑中动脉缺血再灌注模型组(MCAO)、模型+叶酸缺乏组(MCAO+FD)、模型+叶酸缺乏+AG490组(MCAO+FD+AG490)及模型+AG490组(MCAO+AG490),每组25只。SHAM、MCAO组、MCAO+AG490组大鼠用正常对照饲料饲养,MCAO+FD和MCAO+FD+AG490组大鼠用叶酸缺乏饲料饲养,MCAO模型前,叶酸缺乏预干预25 d。MCAO+FD+AG490和MCAO+AG490组在手术前1 h以4 m L/kg·d剂量进行腹腔注射浓度为0.75 mg/m L的AG490溶液。造模后24 h通过TTC染色法测定大鼠脑梗死体积;FJB染色法检测大鼠脑组织皮质区神经细胞损伤情况;透射电镜观察大脑线粒体损伤情况;免疫荧光双标法检测脑组织线粒体内p Y-STAT3和p S-STAT3表达情况;蛋白免疫印迹检测脑组织中线粒体中p Y-STAT3、p S-STAT3、JAK2、p-JAK2蛋白表达。2.体外培养N2a细胞,建立细胞OGD/R模型,分别用AG490、LY294002、U0126抑制剂与叶酸缺乏联合干预,CCK-8检测细胞活力,Western blot检测线粒体中p Y-STAT3、p S-STAT3、p-ERK1/2、p-AKT、p-JNK、JNK的表达情况。结果1.与MCAO组比较,叶酸缺乏干预组:TTC染色法结果显示脑梗死体积增大;FJB染色法结果显示神经细胞损伤明显加重;透射电镜观察及线粒体损伤评分结果显示,线粒体严重损伤;免疫荧光检测结果显示,大脑海马皮质线粒体标记物COX IV与p Y-STAT3、COX IV与p S-STAT3双阳性细胞数均进一步增加;Western blot检测结果显示,脑组织线粒体中p Y-STAT3、p S-STAT3、p-JAK2蛋白表达均升高,以上各个指标两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与MCAO+FD组比较,MCAO+FD+AG490组:神经细胞损伤减轻;脑组织线粒体损伤减轻;免疫荧光检测结果显示,大脑皮质区线粒体COX IV与p Y-STAT3双阳性细胞数较少;Western blot检测结果显示,脑组织中线粒体中p Y-STAT3、p-JAK2表达降低,以上各个指标的两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。p S-STAT3蛋白表达量无明显改变(P>0.05)。2.体外培养N2a细胞,建立细胞OGD/R模型,Western blot检测结果显示,细胞复氧30 min时,N2a细胞线粒体中p Y-STAT3蛋白表达量达到高峰;细胞复氧45 min时,p S-STAT3蛋白表达量达到高峰。分别用AG490、LY294002、U0126与叶酸缺乏联合干预细胞,Western blot检测结果显示,与对照组比,OGD/R组细胞线粒体中的p Y-STAT3、p S-STAT3、p-ERK1/2、p-AKT表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05),而p-JNK蛋白无明显变化(P>0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+FD组细胞线粒体中的p Y-STAT3、p S-STAT3、p-ERK1/2、p-AKT表达量进一步增加,差异具有统计学意义(P<0.05),p-JNK蛋白无明显变化(P>0.05)。与OGD/R+FD相比,OGD/R+FD+AG490组p Y-STAT3蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05),p S-STAT3蛋白表达量无明显变化(P>0.05);OGD/R+FD+LY294002组、OGD/R+FD+U0126组p S-STAT3蛋白表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05),

关键词：叶酸缺乏信号转导与转录因子3 脑缺血再灌注线粒体抑制剂

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PTPRD通过下调STAT3调控人肝细胞癌中PD-L1表达的机制研究

PTPRD通过下调STAT3调控人肝细胞癌中PD-L1表达的机制研究

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作者：蒙秋华广西医科大学

学位级别：硕士

研究目的1、明确抑癌因子PTPRD基因和免疫点PD-L1在肝癌组织上的相关性。2、观察抑癌因子PTPRD基因在HepG2肝癌细胞上对免疫点PD-L1表达的调控机制。为寻找肝癌免疫治疗的新靶点提供思路。3、观察抑癌因子PTPRD在裸鼠肝癌模型中的抑癌... 详细信息

研究目的1、明确抑癌因子PTPRD基因和免疫点PD-L1在肝癌组织上的相关性。2、观察抑癌因子PTPRD基因在HepG2肝癌细胞上对免疫点PD-L1表达的调控机制。为寻找肝癌免疫治疗的新靶点提供思路。3、观察抑癌因子PTPRD在裸鼠肝癌模型中的抑癌活性。研究方法1、采用免疫组化法分析肝癌组织及其癌旁组织PTPRD和PD-L的阳性表达,用spearman分析PTPRD和PD-L1阳性表达的相关性。2、用RT-PCR和Western blot法检测肝癌组织和癌旁组织上PTPRD和PD-L1的mRNA和蛋白表达水平,分析二者基因和蛋白表达的相关性。3、用PTPRD过表达的腺病毒和PTPRD沉默的慢病毒分别构建PTPRD过表达和沉默的HepG2肝癌细胞系,用RT-PCR和Western blot法检测PTPRD过表达或沉默时PD-L1的基因和蛋白表达变化,同时检测STAT3和p-STAT3的蛋白表达变化。体外检测PTPRD基因改变时对HepG2肝癌细胞增殖和克隆能力的影响。4、用PTPRD沉默的慢病毒构建稳定PTPRD沉默的HepG2肝癌细胞系,观察PTPRD沉默对裸鼠肝癌模型成瘤率的影响。研究结果1、免疫组化结果显示,肝癌组织PTPRD阳性率低于癌旁组织,PD-L1阳性率高于癌旁组织,相关分析显示PTPRD和PD-L1在肝癌组织上的表达呈负相关性。2、RT-PCR和Western blot法检测提示,PTPRD基因和蛋白表达在肝癌组织上显著低于癌旁组织,PD-L1基因和蛋白表达在肝癌组织上显著高于癌旁组织(P<0.05)。与免疫组化结果一致。3、与对照组相比,PTPRD过表达时,PD-L1基因和蛋白表达水平显著下降,STAT3和p-STAT3的蛋白表达水平也显著下降;PTPRD沉默时,PD-L1基因和蛋白表达水平显著升高,STAT3和p-STAT3的蛋白表达水平也显著升高(P<0.05)。与对照组相比,PTPRD过表达可抑制肝癌细胞的增殖和克隆,反之,PTPRD沉默可显著促进肝癌细胞的增殖和克隆。4、与对照组相比,PTPRD沉默可显著促进肝癌裸鼠模型肿瘤细胞的生长。研究结论1、PTPRD和PD-L1在肝癌细胞上的表达成负相关性。2、PTPRD可能通过STAT3通路调控肿瘤免疫相关因子PD-L1的表达从而抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能。

关键词：程序性死亡受体配体1 蛋白酪氨酸磷酸酶D 信号转导与转录因子3 肝细胞癌

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同型半胱氨酸对脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞活化和线粒体损伤的作用及p-STAT3调节机制

同型半胱氨酸对脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞活化和线粒体损伤的作...

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作者：陈爽天津医科大学

学位级别：硕士

目的通过线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)的脑缺血再灌注模型,观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对脑缺血再灌注后大脑海马DG区和皮质区小胶质细胞活化及线粒体损伤的影响,通过JAK2/STAT3抑制剂... 详细信息

目的通过线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)的脑缺血再灌注模型,观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对脑缺血再灌注后大脑海马DG区和皮质区小胶质细胞活化及线粒体损伤的影响,通过JAK2/STAT3抑制剂AG490和Hcy联合干预,探讨Hcy通过信号转导及转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对脑缺血再灌注损伤的作用及机制,为预防高Hcy血症相关的缺血性脑病提供新的思路及实验依据。方法120只体重在180-200 g范围的雄性SD大鼠,随机分组法分为假手术组(SHAM)、大脑中动脉缺血再灌注组(MCAO)、模型+同型半胱氨酸组(MCAO+Hcy)、模型+同型半胱氨酸+AG490组(MCAO+Hcy+AG490)及模型+AG490组(MCAO+AG490),每组24只;SHAM和MCAO组按照4 m L/kg·d剂量尾静脉注射生理盐水,MCAO+Hcy和MCAO+Hcy+AG490组按4 mL/kg·d剂量尾静脉注射浓度为0.8 mg/m L的Hcy溶液,干预21 d后进行MCAO手术,MCAO+Hcy+AG490和MCAO+AG490组在手术前1 h以4 mL/kg·d剂量进行腹腔注射浓度为0.75 mg/mL的AG490溶液;造模后24 h通过氯化三甲苯甲基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死体积;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法检测大脑细胞形态改变;透射电镜观察大脑线粒体损伤情况;线粒体呼吸链复合酶活性试剂盒检测线粒体呼吸链复合酶活性;免疫荧光法检测脑组织Iba-1、OX-42、IL-6、TNF-α、8-OHdG和p-STAT3表达情况;Western blot检测脑组织中p-STAT3、Iba-1、OX-42、IL-6、TNF-α蛋白表达及胞浆中Cyt c蛋白表达和线粒体中p-STAT3及Cyt c蛋白表达。体外培养N2a细胞,H2DCFDA探针法检测不同干预后ROS水平,Western blot检测线粒体中p-STAT3表达情况。结果与MCAO组比较,Hcy干预模型组:TTC染色结果显示,脑梗死体积增大;HE染色结果显示,神经细胞损伤加重;透射电镜观察及线粒体损伤评分结果显示,线粒体损伤加重;线粒体呼吸链复合酶活性检测结果显示,呼吸链复合酶I、II、III活性均有不同程度下降;免疫荧光检测结果显示,大脑海马DG区和皮质区小胶质细胞特异性标记物Iba-1和OX-42阳性细胞数增加、炎症因子标记物IL-6和TNF-α阳性细胞数增加、氧化应激标记物8-OHdG阳性细胞数增加、OX-42(Iba-1)与p-STAT3双阳性细胞数增加及线粒体标记物COX IX与p-STAT3双阳性细胞数增加;Western blot检测结果显示,脑组织中Iba-1、OX-42、IL-6、TNF-α及p-STAT3蛋白表达均升高,线粒体中Cyt c蛋白表达降低和p-STAT3蛋白表达升高,以上各个指标两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与MCAO+Hcy组比较,MCAO+Hcy+AG490组大脑梗死体积减小;神经细胞损伤减轻;脑组织线粒体损伤减轻;免疫荧光检测结果显示,大脑海马DG区和皮质区Iba-1、OX-42、IL-6、TNF-α及8-OHdG阳性细胞数均减少,OX-42(Iba-1)与p-STAT3双阳性细胞数及COX IV与p-STAT3双阳性细胞数均较少;Western blot检测结果显示,脑组织中Iba-1、OX-42、IL-6、TNF-α及p-STAT3蛋白表达均降低,胞浆中Cyt c蛋白表达降低,线粒体中Cyt c蛋白表达升高和p-STAT3蛋白表降低,以上各个指标的两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。H2DCFDA探针检测N2a细胞ROS水平,与对照组比较,Hcy也能够促进N2a细胞内ROS的生成,且ROS水平在干预5 min后开始升高;Western blot检测结果显示,Hcy也能够激活N2a细胞线粒体中的STAT3,p-STAT3表达在干预30 min后开始升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Hcy组比较,Hcy+AG490和Hcy+GEE组ROS水平显著下降,线粒体中p-STAT3表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立大鼠脑缺血再灌注模型,发现Hcy能加剧脑缺血再灌注后脑组织和线粒体损伤、促进小胶质细胞活化和炎症因子表达、提高氧化应激水平以及增加小胶质细胞和线粒体中p-STAT3的表达,在给予AG490后,Hcy引起的上述效应在一定程度上均被抑制,故Hcy可能通过提高小

关键词：同型半胱氨酸信号转导与转录因子3 脑缺血再灌注小胶质细胞线粒体

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黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞凋亡和IL-6/STAT3表达的影响

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贵州医科大学学报 2021年第6期46卷 627-631,638页

作者：张健彭煜晖李毅梁欣明付文莉张婷柏华禹文峰吴昌学张启芳贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学第三附属医院医学中心实验室贵州都匀558000

目的研究黄连素(BBR)对人耐紫杉醇(PTX)去势性前列腺癌细胞凋亡和白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录因子3(STAT3)表达的影响。方法选取对数生长期人耐PTX前列腺癌细胞株DU145 R,用DMSO、10及20μmol/L BBR处理72 h,采用流式细胞术检测D... 详细信息

目的研究黄连素(BBR)对人耐紫杉醇(PTX)去势性前列腺癌细胞凋亡和白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录因子3(STAT3)表达的影响。方法选取对数生长期人耐PTX前列腺癌细胞株DU145 R,用DMSO、10及20μmol/L BBR处理72 h,采用流式细胞术检测DU145 R细胞凋亡;取0、10及20μmol/L BBR处理24 h的DU145 R细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)与蛋白印迹(Western blot)分别检测DU145 R细胞中IL-6、STAT3 mRNA及蛋白表达。结果与DMSO组相比,10和20μmol/L BBR组DU145 R细胞凋亡数量增加(P<0.05);与0μmol/L组比较,10和20μmol/L BBR组DU145 R细胞中IL-6与STAT3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论BBR可能通过下调IL-6/STAT3表达诱导DU145 R细胞的凋亡。

关键词：白细胞介素6 前列腺肿瘤前列腺癌细胞紫杉醇耐药黄连素信号转导与转录因子3

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STAT3小干扰RNA的构建及对缺氧复氧人肾小管上皮细胞凋亡的影响

引用

现代生物医学进展 2014年第15期14卷 2858-2862,2900页

作者：斯妍娜韩流程浩吕云落蔡朦朦谢欣怡鲍红光南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)麻醉科江苏南京210006

目的:构建信号转导与转录因子3(STAT3)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对缺氧复氧后人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法:设计3对人STAT3 siRNA靶序列,用DNA重组技术克隆至质粒pRNAT-U6.1/neo中,构建重组质粒pRNAT-U6.1-STAT3 siR... 详细信息

目的:构建信号转导与转录因子3(STAT3)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对缺氧复氧后人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法:设计3对人STAT3 siRNA靶序列,用DNA重组技术克隆至质粒pRNAT-U6.1/neo中,构建重组质粒pRNAT-U6.1-STAT3 siRNA,检测并筛选出最佳抑制效率的siRNA质粒载体。重组质粒转染至缺氧复氧后HKC细胞,Western blotting和Real Time-PCR测定STAT3蛋白和mRNA表达量,流式细胞仪测定细胞凋亡,间接荧光法测定Bcl-2和Bax表达的变化。结果:靶向STAT3基因表达的质粒载体构建成功,并筛选出抑制效率最佳的重组质粒。缺氧复氧后HKC细胞STAT3表达、凋亡率和Bax/Bcl-2比值增加;缺氧复氧后HKC细胞转染重组质粒后STAT3表达、凋亡率和Bax/Bcl-2比值明显降低。结论:成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3的重组质粒载体。该载体可有效抑制缺氧复氧后HKC细胞中STAT3信号转导通路的活化,并进一步通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡。

关键词：信号转导与转录因子3 小干扰RNA 缺氧复氧肾小管上皮细胞

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