检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2025年第36期29卷 7762-7768页

作者：孙峥赵华山西医科大学第二医院口腔科山西省太原市030000

背景:促红细胞生成素/促红细胞生成素受体信号通路除了参与骨髓造血,也参与调节非造血组织,如脑、心脏、骨骼肌、脂肪组织等的代谢反应。同时,激活此信号通路能加速牙周膜干细胞的生物矿化过程,减轻细胞氧化应激损伤,但促进牙周膜干细... 详细信息

背景:促红细胞生成素/促红细胞生成素受体信号通路除了参与骨髓造血,也参与调节非造血组织,如脑、心脏、骨骼肌、脂肪组织等的代谢反应。同时,激活此信号通路能加速牙周膜干细胞的生物矿化过程,减轻细胞氧化应激损伤,但促进牙周膜干细胞成骨分化的机制尚不清楚。目的:探究促红细胞生成素/促红细胞生成素受体信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响及作用机制。方法:采用酶消化法分离、培养牙周疾病患者及健康人群的牙周膜干细胞,采用qRT-PCR和免疫印迹法检测两种牙周膜干细胞中促红细胞生成素受体的mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA沉默促红细胞生成素受体,或使用促红细胞生成素诱导促红细胞生成素受体表达激活,然后采用qRT-PCR、免疫印迹法检测促红细胞生成素受体、成骨标志基因Runt相关转录因子2、骨钙素、骨桥素、骨唾液蛋白的表达水平,采用碱性磷酸酶染色、茜素红染色检测牙周膜干细胞成骨分化能力,采用免疫印迹法检测信号转导及转录激活因子5的磷酸化水平。结果与结论:(1)qRT-PCR和免疫印迹法结果显示,疾病组牙周膜干细胞中促红细胞生成素受体的mRNA和蛋白水平显著低于健康组牙周膜干细胞;(2)碱性磷酸酶染色以及茜素红染色显示,敲低促红细胞生成素受体能抑制牙周膜干细胞的成骨分化能力;qRT-PCR结果显示,与对照组相比,敲低促红细胞生成素受体组Runt相关转录因子2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P <0.05);(3)qRT-PCR结果显示,促红细胞生成素处理后,牙周膜干细胞中促红细胞生成素受体表达恢复,沉默促红细胞生成素受体后再给予促红细胞生成素处理,逆转了促红细胞生成素受体的表达水平;促红细胞生成素处理后提高了疾病组牙周膜干细胞的成骨分化能力以及成骨标志基因Runt相关转录因子2的表达水平(P <0.05),沉默信号转导及转录激活因子5表达后,抑制了促红细胞生成素的这种作用;(4)免疫印迹结果显示,随着促红细胞生成素处理时间的延长,疾病组牙周膜干细胞中信号转导及转录激活因子5磷酸化水平增加(P <0.05)。上述结果表明,促红细胞生成素通过诱导信号转导及转录激活因子5的磷酸化,恢复病理性牙周膜干细胞的成骨分化能力。

关键词：牙周膜干细胞促红细胞生成素促红细胞生成素受体信号转导及转录激活因子5 成骨分化牙周炎工程化干细胞

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生长激素慢性刺激对肝脏JAK2-STAT5信号通路的影响

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世界华人消化杂志 2016年第13期24卷 2032-2037页

作者：赵巧飞徐扬志邹婧何济满南方医科大学南方医院消化内科广东省广州市510515

目的:研究生长激素(growth hormone,GH)慢性刺激对肝脏Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)-信号转导及转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号通路的影响.方法:动物实验使用健康BALB/c♂小鼠,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共2 wk;检测肝脏P-STAT5、信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)-3 mRNA及生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)水平.细胞实验使用大鼠肝癌细胞H4-II-E,分为GH慢性刺激组与对照组,每日分别予GH或PBS刺激共4 d;检测细胞P-STAT5水平及P-STAT5与DNA的结合水平.结果:动物试验中,小鼠接受GH慢性刺激后,肝脏P-STAT5水平降低,SOCS-3 mRNA水平升高(P<0.05),而GHR水平无变化.细胞实验中,GH慢性刺激同样导致P-STAT5水平下降(P<0.05),同时P-STAT5与DNA的结合水平亦降低(P<0.05).结论:GH慢性刺激可抑制肝脏JAK2-STAT5信号通路,其机制可能是SOCS-3基因的表达增加,从而抑制了STAT5的磷酸化.

关键词：肝脏生长激素信号转导及转录激活因子5 信号转导抑制因子-3

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靶向STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

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临床检验杂志 2011年第3期29卷 199-201页

作者：张丽杰赵振军鹿刚单保恩河北医科大学第三医院检验科石家庄050091 河北以岭医院检验科石家庄050091 河北医科大学第四医院科研中心石家庄050011

目的构建靶向信号转导及转录激活因子5(STAT5)的RNAi重组质粒并进行鉴定。方法设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7... 详细信息

目的构建靶向信号转导及转录激活因子5(STAT5)的RNAi重组质粒并进行鉴定。方法设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STAT5基因表达。结果酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STAT5的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STAT5表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05)。其中以Pgenesil-1-STAT5A1抑制效应最强。结论成功构建靶向STAT5的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰载体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础。

关键词：信号转导及转录激活因子5 RNA干扰 SMMC7721细胞株

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血管紧张素Ⅱ诱导其前体基因表达及促进血管平滑肌细胞增殖的作用机制研究

血管紧张素Ⅱ诱导其前体基因表达及促进血管平滑肌细胞增殖的作用...

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作者：李爱英河北医科大学

学位级别：博士

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)异常增殖是动脉粥样硬化斑块形成、高血压和血管成形术后再狭窄等血管增殖性疾病共同的细胞病理学基础。虽然多种细胞因子和血管活性物质能促进VSMC的增殖,但血管紧张素II(angiotens... 详细信息

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)异常增殖是动脉粥样硬化斑块形成、高血压和血管成形术后再狭窄等血管增殖性疾病共同的细胞病理学基础。虽然多种细胞因子和血管活性物质能促进VSMC的增殖,但血管紧张素II(angiotensinII, AngII)在VSMC增殖及高血压、动脉粥样硬化、血管再狭窄等血管重塑性疾病的发生发展过程中处于关键地位。已经证明,在心血管系统中,VSMC不仅是AngII的一个重要来源,而且也是AngII调节血管功能的重要靶细胞。因此,研究AngII调节其前体基因表达及促进VSMC增殖的作用机制,对阐明血管增殖性疾病的分子机制具有重要意义。为了阐明AngII调节血管紧张素原基因表达及促进VSMC增殖的分子机制,本研究观察AngII对转录激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)表达活化及其对血管紧张素原基因表达的影响;探讨AP-1与信号转导及转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5, STAT5)在调节血管紧张素原基因表达中的相互关系;确定AngII诱导VSMC增殖的信号转导途径及roscovitine抗VSMC增殖的作用靶点。 1 AngII调节其前体基因在VSMC中表达的分子机制 AP-1是一种激活细胞增殖相关基因表达的转录因子,在AngII诱导其前体基因表达过程中,伴有AP-1(Fos-Jun二聚体)与血管紧张素原基因启动子结合活性的增强。为进一步探讨AngII促进AP-1与其顺式元件结合的分子机制。本部分实验用放线菌酮(cycloheximide, CHX)作为c-Jun的阻断剂,观察AngII对AP-1与血管紧张素原基因启动子相互作用及对血管紧张素原基因表达的影响。实验结果如下: 1.1不同剂量CHX对VSMC活力的影响为了观察CHX对VSMC是否具有的毒性,用不同剂量的CHX处理VSMC后,进行MTT分析。结果显示,在15～45μmol/L浓度范围内,VSMC活力无明显变化。提示在该浓度范围内,CHX对VSMC不产生毒性作用。 1.2 AngII促进c-Jun蛋白表达与磷酸化 Western blot结果显示,AngII作用于VSMC 0.5 h后,细胞核内的c-Jun水平即显著升高并在此水平上保持至3 h。而且,免疫细胞化学染色证实,AngII诱导表达的c-Jun主要分布在细胞核内。用抗丝氨酸磷酸化抗体对核提取物进行免疫沉淀后检测磷酸化型c-Jun水平时发现,伴随着c-Jun表达增高,磷酸化型c-Jun水平也平行升高。用CHX预处理VSMC 0.5 h后,再用AngII刺激,c-Jun表达虽然不受影响,但其磷酸化水平明显降低。结果提示,AngII对其前体基因的正反馈调节是通过促进AP-1表达及诱导c-Jun磷酸化活化而实现的,CHX是一种AP-1磷酸化的抑制剂。 1.3 CHX抑制AngII诱导的血管紧张素原基因表达用RT-PCR检测CHX抑制c-Jun磷酸化对血管紧张素原基因表达的影响。结果显示,用AngII处理VSMC 3 h,可显著提高血管紧张素原基因的表达活性。用CHX预处理VSMC可抑制AngII诱导的血管紧张素原基因表达。由此可见,CHX对c-Jun磷酸化的抑制可下调血管紧张素原基因的表达活性,提示AP-1的磷酸化活化是该基因表达所必需的。 1.4 AngII促进AP-1与血管紧张素原基因启动子结合为寻找AngII诱导c-Jun磷酸化与其促进血管紧张素原基因表达之间的关系,用EMSA检测AngII对AP-1与其顺式元件结合活性的影响。结果显示,AngII处理VSMC 0.5 h后,核蛋白与探针的结合活性显著升高,至3 h达高峰。分别加入抗c-Jun和抗STAT5b抗体进行超迁移分析,均可出现抗体-抗原-探针形成的超迁移条带。在CHX预处理的细胞,其核蛋白与探针的结合活性明显下降。为了查明CHX抑制AP-1结合活性的机制,对同样条件下收集的核蛋白进行Western blot分析。结果表明,CHX对AP-1结合活性的抑制效应与AP-1蛋白水平无关,而是CHX抑制AP-1磷酸化的直接结果。上述结果提示,AngII诱导AP-1磷酸化是AngII对血管紧张素原基因正反馈调节的机制之一。 2 Roscovitine抑制血管平滑肌细胞增殖与c-Jun表达之间的关系 Roscovitine作为一种细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs)的特异性抑制剂,

关键词：血管平滑肌细胞信号转导及转录激活因子5 转录激活蛋白-1 血管紧张素II 血管紧张素原基因表达细胞增殖放线菌酮 Roscovitine ERK1/2

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血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控机制

血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控机制

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作者：聂磊河北医科大学

学位级别：博士

血管活性肽是一类调节血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)舒缩功能、维持血管张力的小分子肽类物质,多数以自分泌、旁分泌方式发挥作用,按其血管效应的不同分为缩血管肽和舒血管肽。前者包括血管紧张素I(Iangiotensin II... 详细信息

血管活性肽是一类调节血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)舒缩功能、维持血管张力的小分子肽类物质,多数以自分泌、旁分泌方式发挥作用,按其血管效应的不同分为缩血管肽和舒血管肽。前者包括血管紧张素I(Iangiotensin II,Ang II)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)等,后者包括肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)和心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)等。生理条件下,血管舒-缩活性肽的分泌和生物活性处于动态平衡,以保证血管张力的稳态。不同种类的活性肽之间存在着复杂的正反馈或负反馈调节,由此构成一个精细、严密的血管张力调控网络。由于大多数缩血管活性肽具有强烈的促进VSMC 肥大、增殖、迁移的活性,其功能的亢进常常是多种血管重塑性疾病的主要诱因。而舒血管活性肽则具有相反的作用。因此,研究血管活性肽之间形成的复杂网络,阐明该网络对血管功能的调节机制,将有利于深层次了解血管活性肽系统的生理功能和在心血管疾病发生发展中的病理生理学意义。本研究课题以Ang II 为诱发因素,观察其对VSMC 释放ET-1、Ang II、ANF 和ADM 的影响及相互关系,研究了转录激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)和Janus 蛋白酪氨酸激酶-信号转导及转录激活因子途径( janus protein tyrosine kinase-signal transducers and activators of transcription pathway,JAK-STAT pathway)对血管活性肽基因转录激活的作用以及AP-1 和信号转导及转录激活因子5(signal transducers and activators of transcription 5,STAT5)在调节基因转录过程中的相互关系,以期揭示Ang II 对4 种血管活性肽相对水平调节的分子机制。 1 血管舒-缩肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控研究基因序列分析证实,在Ang II、ET-1、ANF 和ADM 基因的启动子区中均含有AP-1的结合位点,而且,这4种血管活性肽的表达也有赖于AP-1的活化。本部分实验探讨了AP-1 的DNA 结合活性与4 种血管活性肽表达及其动态平衡之间的关系以及VSMC 在该网络平衡中的地位,并揭示Ang II 对4 种血管活性肽相对水平调节的分子机制。实验结果如下:

关键词：血管平滑肌细胞血管活性肽信号转导及转录激活因子5 血管紧张素II 转录激活蛋白-1

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TNF-α对Tc9细胞分化和抗肿瘤作用的研究

TNF-α对Tc9细胞分化和抗肿瘤作用的研究

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作者：杨思雨吉林大学

学位级别：博士

恶性肿瘤是目前威胁人类生命健康的主要疾病之一,其治疗方法主要有手术治疗、化学治疗、放射线治疗,近年来肿瘤的免疫治疗作为肿瘤生物治疗的技术之一,因其副作用小等优点成为科研人员的研究热点。肿瘤的免疫治疗是靶向机体自身免疫系... 详细信息

恶性肿瘤是目前威胁人类生命健康的主要疾病之一,其治疗方法主要有手术治疗、化学治疗、放射线治疗,近年来肿瘤的免疫治疗作为肿瘤生物治疗的技术之一,因其副作用小等优点成为科研人员的研究热点。肿瘤的免疫治疗是靶向机体自身免疫系统的一种治疗方法,通过提高自身免疫系统的抗肿瘤能力达到肿瘤治疗的目的。细胞过继免疫治疗是肿瘤免疫治疗的方法之一,是将致敏淋巴细胞输给细胞免疫功能低下者（如肿瘤患者）,使其获得抗肿瘤免疫力。细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）是传统的肿瘤杀伤效应T细胞,可以直接杀伤肿瘤细胞,也是目前应用于肿瘤过继免疫治疗的主要效应T细胞。细胞毒性T细胞9（Tc9细胞）是近年来新发现的细胞毒T细胞亚群,相比于目前应用于临床的Tc1细胞而言,具有体内存活时间长,能够发挥长效抗肿瘤作用的优点;此外,有研究表明,虽然Tc9细胞在体外对肿瘤的直接杀伤作用较弱,但Tc9细胞可以在体内分化为Tc1样细胞,使其抗肿瘤作用增强。因此Tc9细胞有望成为更有效的细胞过继免疫治疗的效应T细胞。肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）是TNF家族成员之一,是一种具有多种生物学功能的细胞因子,不但可以诱导细胞炎性因子的产生,还参与了细胞的增殖、存活以及凋亡等生物学反应。前期研究发现TNF-α可以影响辅助性T细胞（Th细胞）的生成和增殖。由于相同亚型的Th细胞和Tc细胞的极化环境具有相似性,且Tc9细胞在过继免疫治疗中具有巨大潜力。因此,本研究将深入探讨TNF-α对Tc9细胞的影响,以期更有效的诱导和扩增肿瘤特异性Tc9细胞并提高其相关分子（如IL-9）的表达水平,从而更好的发挥其肿瘤免疫疗效。研究主要分为以下三部分:第一部分TNF-α对Tc9细胞的体外诱导作用目的:探究TNF-α对Tc9细胞体外分化,存活以及增殖能力的影响,明确TNF-α对Tc9细胞的诱导作用。方法:（1）分选后的CD8+T细胞在Tc0、Tc9的极化条件下,加入或不加入TNF-α,体外培养2天后,qPCR及流式检测IL-9的mRNA及蛋白质表达情况;（2）将分选后的CD8+T细胞在与（1）相同的培养环境下,体外培养2天后,qPCR检测Tc细胞相关的细胞因子、效应分子以及分化分子的表达情况;（3）将分选后的CD8+T细胞在与（1）相同的的培养环境下,体外培养2天后,流式检测T细胞凋亡以及Ki67分子表达情况。结果:（1）在体外诱导Tc9细胞的过程中加入TNF-α,提高了IL-9的mRNA及蛋白质表达水平;（2）加入TNF-α后,其他Tc细胞相关的细胞因子及效应分子没有明显改变;与对照组相比,TNF-α诱导的Tc9细胞的CD44分子表达增加;（3）与常规诱导的Tc9细胞相比,TNF-α诱导的Tc9细胞的Ki67的表达量增加且Annexin V阳性Tc9细胞数降低。结论:TNF-α可以在体外环境下促进Tc9细胞的分化,提高Tc9细胞的存活能力以及增殖能力,即TNF-α对Tc9细胞具有明显的诱导作用。第二部分TNF-α对Tc9细胞的体内抗肿瘤效应的影响目的:探究TNF-α对Tc9细胞的体内抗肿瘤效应的影响。方法:（1）体外培养OT-I小鼠来源的Tc9细胞和TNF-α诱导的Tc9细胞,过继免疫治疗B16-OVA荷瘤C57BL/6小鼠,对比肿瘤的生长情况;（2）体外培养OT-I小鼠来源的Tc9细胞和TNF-α诱导的Tc9细胞,用于过继免疫治疗B16-OVA肿瘤肺转移小鼠,检测肿瘤组织中IL-9的mRNA表达情况,对比T细胞的肿瘤部位浸润情况;（3）通过体内杀伤实验,对比常规Tc9细胞和TNF-α诱导的Tc9细胞的体内特异性杀伤能力。结果:（1）相比于常规诱导的Tc9细胞,TNF-α诱导的Tc9细胞能够更有效地减缓肿瘤生长;（2）相比于常规Tc9细胞治疗组,TNF-α诱导的Tc9细胞治疗组检测到更高水平的IL-9的表达,即肿瘤部位浸润了更多的TNFα-Tc9细胞;（3）与Tc9细胞组相比,TNF-α诱导的Tc9细胞组能够更有效地特异性杀伤靶细胞。结论:TNF-α可以提高Tc9细胞的肿瘤部位浸润能力和特异性杀伤能力,增强Tc9细胞的抗肿瘤效应。第三部分TNF-α诱导Tc9细胞的作用机制研究目的:探究TNF-α诱导Tc9细胞的作用机制。方法:（1）初始CD8+T细胞在Tc9的极化条件下,加入或不加入TNF-α以及TNF受体封闭抗体,体外培养2天后,qPCR及流式检测IL-9的mRNA及蛋白质表达情况;（2）将分选后的CD8+T细胞在与（1）相同的培养环境下,体外培养2天后,流式检测T细胞存活以及增殖情况;（3）初始CD8+T细胞在Tc9的极化条件下,加入或不加入TNF-α,检测STAT5、NF-κB通路相关蛋白;初始CD8+T细胞在Tc9的极化条件下,加入或不加入TNF-α以及S

关键词：肿瘤坏死因子α 细胞毒性T细胞9 肿瘤坏死因子受体2型信号转导及转录激活因子5 肿瘤免疫治疗

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