检索结果-内蒙古大学图书馆

植物病理学报 2003年第4期33卷 307-312页

作者：蒋军喜陈正贤李桂新周雪平浙江大学生物技术研究所杭州310029 江西农业大学农学院南昌330045 浙江大学生物技术研究所杭州310029

利用甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)单克隆抗体细胞株2B5腹水和SCMV、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)和约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus,JGMV)的特异性引物对我国浙江、江苏、上海、山东、河南、河北、北京、山西、陕西、甘肃、四川、云南12省市15个地点的176株玉米矮花叶病病样分别进行了间接ELISA和免疫捕获反转录pcr(IC-RT-pcr)检测,结果表明这些病样均含有SCMV,而无MDMV、SrMV或JGMV存在,表明上述12省市的玉米矮花叶病病原为SCMV.进一步对甘肃(GS)、四川(SC)、云南(YN)3个SCMV分离物的近全长CP基因进行了序列测定,并测定了浙江分离物(ZJ)和甘肃分离物(GS)在13个玉米品种上的致病性.

关键词：玉米矮花叶病甘蔗花叶病毒检测免疫捕获反转录pcr 致病性

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高粱红条病病原的分子鉴定

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浙江大学学报(农业与生命科学版) 2002年第3期28卷 255-259页

作者：蒋军喜周雪平石银鹿浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029 山西农业科学院植物保护研究所山西太原030031

从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物,命名为GL-SX.根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白(CP)基因C-端和复制酶(NIb)基因C-端的保守序列设计引物,对GL-SX进行免疫捕获反转录pcr (IC-RT-pcr) 扩增,获得一条长约1.1 kb的扩... 详细信息

从山西高粱红条病病叶中得到一种病毒分离物,命名为GL-SX.根据甘蔗花叶病毒亚组(SCMV subgroup)外壳蛋白(CP)基因C-端和复制酶(NIb)基因C-端的保守序列设计引物,对GL-SX进行免疫捕获反转录pcr (IC-RT-pcr) 扩增,获得一条长约1.1 kb的扩增片段,扩增片段克隆后测定序列,该序列含1087个核苷酸(nt),编码362氨基酸(aa),取其中的近全长CP氨基酸序列(296 aa)与甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV)、玉米矮花叶病毒 (Maize dwarf mosaic virus, MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus, SrMV)和约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus, JGMV) 等4种病毒的对应序列进行同源性比较,结果与SCMV的同源性最高(95.3%),而与SrMV、MDMV和JGMV等3种病毒的同源性相对较低,依次为69.3%、69.1%和55.4%.根据Potyvirus属病毒种类划分的标准,将GL-SX鉴定为SCMV.将GL-SX的近全长CP氨基酸序列与SCMV种内各分离物的对应序列进行同源性比较及构建关系树,结果显示GL-SX与SCMV-MDB具有较远缘的种内亲缘关系,而与德国的一个SCMV玉米分离物(SCVM-Hoe)及中国的两个玉米分离物(SCMV-ZJ和SCMV-BJ)具有很高的同源性.

关键词：高粱红条病鉴定免疫捕获反转录pcr 甘蔗花叶病毒

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杭州地区甘蔗花叶病病原鉴定

引用

农业生物技术学报 2002年第4期10卷 377-380页

作者：蒋军喜周雪平洪健江西农业大学农学院南昌 330045 杭州 310029 杭州 310029 浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所杭州 310029

从杭州田间表现典型花叶症的甘蔗病叶中得到病毒分离物SC-ZJ,按照SCMV亚组中甘蔗花叶病毒(Sugarcanemosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic Virus,MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)、约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus,JGMV)等4种病毒基因组序列设计特异性引物,对SC-ZJ进行IC-RT-pcr扩增,结果用SrMV特异性引物扩增到1条长约1.1 kb的片段,而用其它3种病毒特异性引物扩增不出任何片段。扩增片段经克隆后测定序列,序列包含1135核苷酸(nt),编码378个氨基酸(aa),取其中的近全长外壳蛋白(CP)氨基酸序列(312 aa),与SrMV、MDMV、SCMV、JGMV等4种病毒对应的序列进行同源性比较,结果核苷酸序列同源性依次为95.3％、75.2％、61.2％和53.6％,氨基酸序列同源性依次为97.1％、78.1％、72.9％和56.2％。根据IC-RT-pcr扩增鉴定及序列同源性比较结果,将SC-ZJ鉴定为SrMV。并根据CP氨基酸序列的同源性进一步分析了4种病毒的亲缘关系。

关键词：甘蔗花叶病高粱花叶病毒免疫捕获反转录pcr 鉴定

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SRBSDV和RBSDV检测技术的建立

SRBSDV和RBSDV检测技术的建立

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作者：姚景海福建农林大学

学位级别：硕士

南方水稻黑条矮缩病是威胁我国水稻生产的重要病毒病害之一,由南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)引起。该病毒属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)。主要由迁飞性的白背飞虱(Soga... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病是威胁我国水稻生产的重要病毒病害之一,由南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)引起。该病毒属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)。主要由迁飞性的白背飞虱(Sogatella furcifera)以持久增殖型方式传播,不经卵传播,白背飞虱一旦获毒则终身带毒；灰飞虱(Laodelphax striatellus)也可以带毒,但不能传毒。水稻一旦发生该病即没有有效药物或方法进行治疗,而且发病植株将作为侵染源被介体白背飞虱向周围健康水稻传播病毒,将加重田间的病害发生。因此需及时检测田间水稻和介体昆虫的带毒情况,尽早拔除发病植株,灭杀田间介体昆虫,从而阻断病害的扩散。目前检测病毒的方法较多,常用RT-pcr法检测SRBSDV,但该方法存在操作复杂、耗时、成本高等缺陷,不适用于大批量样品的检测。为了建立快速、简便、特异性的病毒检测技术,本研究优化了免疫捕获反转录扩增(Immunocapture reverse transcription, IC-RT-pcr)和逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediared isothermal amplification, RT-LAMP)体系,用于检测水稻和介体昆虫中的SRBSDV。通过对免疫捕获抗体的筛选,明确SRBSDV P9-1蛋白的多克隆抗体可用于免疫捕获反转录扩增检测技术,用于捕获水稻或介体昆虫中的病毒,从而捕获病毒RNA,用于RT-pcr检测病毒。通过对环介导等温扩增技术Mg2+浓度、dNTP浓度、反应温度以及钙黄绿素用量的优化,建立了适合检测SRBSDV的RT-LAMP检测方法,并将RT-LAMP方法应用于检测2013年不同地区采集到的水稻病样和介体昆虫的带毒率。此外,本研究通过原核表达蛋白制备了RBSDV编码蛋白P9-1的多克隆抗体,Western blot实验表明所制备的抗体可特异性检测RBSDV侵染水稻中的P9-1蛋白,并可通过IC-RT-pcr方法检测RBSDV侵染的褐飞虱。通过对检测方法的比较,本研究所建立的RT-LAMP较IC-RT-pcr方法灵敏。由于IC-RT-pcr不需要提取RNA,避免了提取单头昆虫RNA的困难,因此比较适用于单头飞虱带毒检测；而RT-LAMP方法可同步进行反转录和pcr,与常规RT-pcr方法比较缩短了检测时间,因此适用于水稻样品的快速检测。本研究对RT-LAMP和IC-RT-pcr检测方法的优化丰富了水稻病毒的检测技术,有利于田间水稻病毒病害的监测和诊断。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒免疫捕获反转录pcr 反转录环介导等温扩增抗体制备

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