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SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立

中国动物传染病学报 2017年第1期25卷 7-11页

作者：谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。

关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR 熔解曲线鉴别

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一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备及应用

一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备及应用

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作者：刘光清缪秋红朱杰唐井玉殷冬冬李传峰陈宗艳 200241 上海市闵行区紫月路518号

本发明提供了一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备及应用，所述制备方法包括以下步骤：A、扩增RHDV2的VP60基因；B、将步骤A得到的VP60基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体中，得质粒；C、将步骤B得到的质粒转化感受态细... 详细信息

标准号: CN108359645A

本发明提供了一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备及应用，所述制备方法包括以下步骤：A、扩增RHDV2的VP60基因；B、将步骤A得到的VP60基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体中，得质粒；C、将步骤B得到的质粒转化感受态细胞，得重组质粒；D、将步骤C得到的重组质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞，即得所述表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒。本发明成功构建了表达兔病毒性出血症Ⅱ型衣壳蛋白的杆状病毒，并使其在昆虫细胞上成功表达，最终通过蛋白电泳，免疫印迹、电镜观察进行了病毒表达产物的鉴定。该杆状病毒在未来可以用来进行新型兔病毒性出血症亚单位疫苗的研究，以此用来预防兔病毒性出血症Ⅱ型。

关键词：杆状病毒兔病毒性出血症衣壳蛋白兔病毒性出血症病毒重组质粒制备昆虫杆状病毒表达病毒表达产物转染昆虫细胞感受态细胞亚单位疫苗脂质体介导蛋白电泳电镜观察昆虫细胞免疫印迹质粒转化构建扩增质粒克隆成功预防应用研究

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一种变异的兔病毒性出血症病毒及其在制备灭活疫苗中的应用

一种变异的兔病毒性出血症病毒及其在制备灭活疫苗中的应用

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作者：刘光清殷冬冬缪秋红朱杰 200241 上海市闵行区紫月路518号

本发明提供了一种变异的兔病毒性出血症病毒及其在制备灭活疫苗中的应用，该毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为兔病毒性出血症病毒变异株SH17株，保藏编号为：CCTCC NO:V201806。该毒株与目前国内分离的兔病毒性出血症病... 详细信息

标准号: CN108588034A

本发明提供了一种变异的兔病毒性出血症病毒及其在制备灭活疫苗中的应用，该毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为兔病毒性出血症病毒变异株SH17株，保藏编号为：CCTCC NO:V201806。该毒株与目前国内分离的兔病毒性出血症病毒序列比对差异较大，其中主要抗原基因的同源性仅80％。且该毒株感染兔偏幼龄化，当前的兔病毒性出血症疫苗对该毒株没有有效的保护作用。因此本发明首次提出了用兔病毒性出血症病毒变异株SH17株制备油乳灭活疫苗，该疫苗具有良好的免疫效果，对被免疫兔只的副作用小，且制备出的疫苗抗原性好，安全性高，对外界环境无任何不良影响，容易通过安全评价。

关键词：兔病毒性出血症病毒保藏毒株变异株制备兔病毒性出血症疫苗中国典型培养物制备灭活疫苗安全评价抗原基因免疫效果灭活疫苗序列比对疫苗抗原感染兔免疫兔同源性油乳疫苗应用

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兔病毒性出血症病毒分子生物学研究进展

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中国养兔 2016年第1期 32-36页

作者：于新友李天芝莫玲王玉茂山东绿都生物科技有限公司滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600

本文介绍了兔病毒性出血症病毒基因组特点及编码蛋白,论述了兔病毒性出血症病毒分子生物学诊断方法,包括RT-PCR方法、多重PCR、套式RT-PCR方法、荧光定量RT-PCR方法和环介导等温扩增方法,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了阐述。

关键词：兔病毒性出血症病毒基因组编码蛋白分子生物学诊断基因工程疫苗

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兔病毒性出血症病毒体外增殖技术获突破

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新农村 2017年第8期 56-56页

最近，中国农业科学院上海兽医研究所创新团队成功解决了兔病毒性出血症病毒（RHDV）的体外增殖的技术难题，在杯状病毒研究领域取得了突破性进展。兔病毒性出血症病毒引发的兔出血症为急性、败血性传染病，

关键词：兔病毒性出血症病毒增殖技术体外增殖中国农业科学院败血性传染病杯状病毒兔出血症研究所

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兔病毒性出血症病毒分离和鉴定

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中国畜禽种业 2016年第10期12卷 130-131页

作者：张颖王金良山东省滨州市畜牧兽医研究院 256600

从疑似感染兔病毒性出血症病毒的病兔体内分离到1株病毒,病兔表现体温升高、呼吸困难、全身实质脏器出血等典型病变。取病兔肝脏做血凝和血凝抑制试验,分离毒株可以凝集1.0%人"O"型红细胞,可以被兔病毒性出血症病毒阳性血清中... 详细信息

从疑似感染兔病毒性出血症病毒的病兔体内分离到1株病毒,病兔表现体温升高、呼吸困难、全身实质脏器出血等典型病变。取病兔肝脏做血凝和血凝抑制试验,分离毒株可以凝集1.0%人"O"型红细胞,可以被兔病毒性出血症病毒阳性血清中和,对家兔的LD50为10-6.75/ml,是一株对家兔具有高致病力的强毒株,对分离毒株进行RT-PCR检测为阳性,说明该病兔感染了兔病毒性出血症病毒,本病毒的成功分离和鉴定为发病兔场找到了致病原,为兔瘟疾病的诊断和防制提供了参考。

关键词：兔病毒性出血症病毒分离鉴定

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一种组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途

一种组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及...

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作者：徐义刚王丽姜艳平唐丽杰李一经郭超群 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号

本发明公开一种组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途。所述的重组乳酸菌疫苗株含有EGFP标记的组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的乳酸菌表达质粒。本发明利用乳酸菌为疫苗抗原传递载体，以... 详细信息

标准号: CN107446872A

本发明公开一种组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途。所述的重组乳酸菌疫苗株含有EGFP标记的组成型表达兔病毒性出血症病毒VP60蛋白的乳酸菌表达质粒。本发明利用乳酸菌为疫苗抗原传递载体，以兔病毒性出血症病毒VP60蛋白为免疫原制备重组乳酸菌口服疫苗诱导动物机体产生免疫应答，能够有效地刺激机体产生局部黏膜免疫应答，又能刺激机体的体液免疫应答，以达到预防兔病毒性出血症病毒的感染的目的。此外，本发明以增强型绿色荧光蛋白EGFP作为筛选标记，构建非抗生素抗性筛选标记的基因工程乳酸菌，符合绿色、环保的发展理念。

关键词：兔病毒性出血症病毒乳酸菌重组乳酸菌组成型表达免疫应答筛选标记疫苗株制备增强型绿色荧光蛋白EGFP 非抗生素抗性体液免疫应答表达质粒传递载体基因工程局部黏膜口服疫苗疫苗抗原诱导动物免疫原有效地刺激构建感染预防环保

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兔病毒性出血症病毒 VP60蛋白基因研究进展

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动物医学进展 2015年第2期 94-97页

作者：李桂黎任冉阳胡凌杨泽晓四川农业大学动物检疫实验室四川雅安625014

兔病毒性出血症病毒（RHDV）是引起兔病毒性出血症（RHD）的病原，严重威胁着世界养兔业的健康发展。在RHDV的感染和免疫研究方面，RHDV 的衣壳蛋白VP60作为具有重要免疫原性的主要结构蛋白备受关注，论文对V P60蛋白基因的结构特征、... 详细信息

兔病毒性出血症病毒（RHDV）是引起兔病毒性出血症（RHD）的病原，严重威胁着世界养兔业的健康发展。在RHDV的感染和免疫研究方面，RHDV 的衣壳蛋白VP60作为具有重要免疫原性的主要结构蛋白备受关注，论文对V P60蛋白基因的结构特征、核苷酸变异情况及在诊断方法建立和疫苗预防研究等方面进行了综述，为RHDV防控相关研究提供有用的参考资料。

关键词：兔病毒性出血症病毒 VP60蛋白

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一株兔病毒性出血症病毒的分离鉴定及灭活疫苗的制备

一株兔病毒性出血症病毒的分离鉴定及灭活疫苗的制备

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第三届河北省畜牧兽医科技发展大会

作者：陈萍王士军河北省廊坊市香河县畜牧兽医局

为开发针对兔病毒性出血症流行毒株的新型疫苗,本研究从临床组织病料中分离鉴定出一株兔病毒性出血症病毒,将该分离毒株的病毒液灭活后,以黄芪多糖为佐剂研制出兔病毒性出血症黄芪多糖佐剂灭活疫苗,该疫苗具有良好的安全性,免疫后14天,... 详细信息

为开发针对兔病毒性出血症流行毒株的新型疫苗,本研究从临床组织病料中分离鉴定出一株兔病毒性出血症病毒,将该分离毒株的病毒液灭活后,以黄芪多糖为佐剂研制出兔病毒性出血症黄芪多糖佐剂灭活疫苗,该疫苗具有良好的安全性,免疫后14天,兔病毒性出血症血凝抑制抗体效价达2～8,攻毒保护率达到100%。表明该疫苗具有良好的免疫原性。本研究为研制针对兔病毒性出血症流行毒株的优质新型疫苗提供了科学依据和实践参考。

关键词：兔病毒性出血症病毒分离鉴定灭活疫苗制备

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一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT-LAMP检测方法

一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT-LAMP检测方法

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作者：杨泽晓徐秋梅王印汪开毓姚学萍曾辉耿毅 625014 四川省雅安市雨城区新康路46号

本发明公开了一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT‑LAMP检测方法，根据RT‑PCR法扩增测序的基因序列，运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V4software针对目的序列的6个不同位点，设计了4条特异性引物和1条环引物，通过反应... 详细信息

标准号: CN104046701B

本发明公开了一种不用于诊断目的的兔病毒性出血症病毒RT‑LAMP检测方法，根据RT‑PCR法扩增测序的基因序列，运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V4software针对目的序列的6个不同位点，设计了4条特异性引物和1条环引物，通过反应条件优化、敏感性试验和特异性试验，初步建立了RHDV的RT‑LAMP检测法，并进行临床检样初步应用。试验结果显示：该法可以扩增出183bp以上的一个梯状条带产物，可以检测到25copies的目的基因，对兔大肠杆菌、兔巴氏杆菌和实验室构建的欧洲野兔综合症病毒蛋白VP60基因重组质粒pGM‑T‑EBHSV的扩增均为阴性，有着比RT‑PCR法更高的敏感性，在临床检测中该法阳性检出率与RT‑PCR法检测结果相符合。

关键词：扩增兔病毒性出血症病毒反应条件优化大肠杆菌敏感性试验特异性试验特异性引物兔巴氏杆菌综合症病毒基因序列检测结果临床检测目的基因设计软件重组质粒环引物检出率野兔阴性测序构建检样梯状条带位点蛋白诊断检测应用

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