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全血电阻抗法检测血小板聚集程度在急性冠脉综合征患者PCI治疗中的临床应用

岭南心血管病杂志 2017年第5期23卷 554-557页

作者：陈曦朱媛石理李军吴同果暨南大学附属珠海医院(珠海市人民医院)心内科广东珠海519000 珠海市第二人民医院广东珠海519020 暨南大学附属广州市红十字会医院广州510220

目的探讨采用全血电阻抗法(whole blood impedance aggregometry,WBIA)法实验室诊断抗血小板药物抵抗的临床价值。方法前瞻性入选2013年11月至2015年3月暨南大学附属广州红会医院、珠海市人民医院心内科住院诊断急性冠状动脉综合征(acut... 详细信息

目的探讨采用全血电阻抗法(whole blood impedance aggregometry,WBIA)法实验室诊断抗血小板药物抵抗的临床价值。方法前瞻性入选2013年11月至2015年3月暨南大学附属广州红会医院、珠海市人民医院心内科住院诊断急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)并行经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary inter-vention,PCI)治疗的患者300例。分别于服药前及服药后7 d用WBIA法测定二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集程度,根据检测结果分为阿司匹林抵抗组和氯吡格雷抵抗组。随访1年,复查冠状动脉造影进行SYNTAX评分,观察对比各组主要不良心脑血管事件(major adverse cardiac and cerebrovascular events,MAC-CE)的发生率。评估WBIA法检测血小板聚集率的临床意义。结果阿司匹林抵抗发生率为26%,氯吡格雷抵抗发生率为28.7%。复查冠状动脉造影,无药物抵抗组SYNTAX评分明显低于阿司匹林抵抗组、氯吡格雷抵抗组,差异有统计学意义[(10.21±9.79)分vs.(18.32±18.78)分,P<0.05;(10.21±9.79)分vs.(19.57±11.32)分,P<0.05]。随访1年无药物抵抗组MACCE发生率与阿司匹林抵抗组、氯吡格雷抵抗组比较,差异有统计学意义[13.9(9.0%)vs.14(21.5%),P<0.05;13.9(9.0%)vs.16(22.2%),P<0.05]。结论 WBIA检测血小板聚集程度实验室诊断抗血小板药物抵抗有一定临床价值。

关键词：冠状动脉疾病全血电阻抗法阿司匹林氯吡格雷抗血小板药物抵抗

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维生素C后处理对缺氧复氧条件下花生四烯酸诱导的血小板活化的影响及其机制研究

维生素C后处理对缺氧复氧条件下花生四烯酸诱导的血小板活化的影...

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作者：裴东果河北医科大学

学位级别：硕士

目的:实验室及临床试验已经证实血小板活化在缺血再灌注过程中发挥重要作用,但是其机制仍不甚明确。有研究表明,缺血再灌注中发生的血小板活化与活性氧大量产生密切相关。维生素C(VC)是一种弱酸性维生素,具有强大的抗氧化作用,以往研究... 详细信息

目的:实验室及临床试验已经证实血小板活化在缺血再灌注过程中发挥重要作用,但是其机制仍不甚明确。有研究表明,缺血再灌注中发生的血小板活化与活性氧大量产生密切相关。维生素C(VC)是一种弱酸性维生素,具有强大的抗氧化作用,以往研究发现,维生素C能够清除活性氧、减少血小板活化、减轻再灌注损伤,但其对离体缺氧复氧血小板的作用尚不清楚。本实验旨在观察维生素C后处理对离体缺氧复氧血小板的作用并阐明其具体作用机制。方法:研究对象为新鲜机采健康人血小板原浆共67人份,血小板浓度为(960～1280)×109/L,由河北省血液中心提供。其纳入标准及排除标准均严格按照国家献血法的标准。用生理盐水将血小板原浆稀释为200×109/L以备用,于血小板采集后4小时内完成实验。首先进行血小板缺氧-复氧实验以选取最佳实验处理时间,对血小板进行不同缺氧或复氧时间处理并用全血电阻抗法检测血小板聚集,诱导剂为花生四烯酸(AA0.5mmol/L),建立离体缺氧复氧血小板模型。选取三种不同抗氧化剂(维生素C、褪黑素、普罗布考)进行缺氧后处理,并分别制备成缺氧复氧组(A/R组)、药物后处理组(C1-3组),考虑到维生素C的弱酸性同时设立盐酸后处理组(HCl组,p H值与VC组相同,均为3.24)。用全血电阻抗法检测血小板聚集率及斜率以观察不同抗氧化剂对血小板聚集率的影响。测定维生素C后处理组中血小板凋亡相关指标,用倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS),流式细胞术检测线粒体膜电位(△ψm),Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C(cyto-C)、Caspase-9的表达。数据采用SPSS22.0进行统计分析。计量资料服从正态分布时用均数±标准差((?)±s)表示,不服从正态分布时采用中位数(四分位数间距)表示,即M(QR)。正态分布时采用单因素方差分析,不服从正态分布时组间比较采用多个相关样本的秩和检验。P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1不同缺氧或复氧时间对健康人血小板聚集率的影响1.1不同缺氧时间对于血小板聚集率的影响与未缺氧组相比,各缺氧组血小板聚集率及聚集斜率均有所升高,且缺氧20min组活化率最大。两两比较,发现缺氧20min组与5min组差异有统计学意义(P<0.05),而5min、10min、30min组间差异无统计学意义(P>0.05);1.2不同复氧时间对于血小板聚集率的影响与未复氧组血小板相比,各复氧组血小板聚集率及聚集斜率均有所升高,且5min组活化率最大,但各组间差异无统计学意义(P>0.05);2三种抗氧化剂后处理对A/R时血小板聚集率的影响2.1维生素C对A/R时血小板聚集率的影响与缺氧复氧组相比,1000μM维生素C处理组血小板聚集率下降,差异有统计学意义(P<0.05),而10μM组、100μM组、HCl组与A/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。1000μM维生素C较10μM、100μM来说,血小板聚集抑制率最大且差异有统计学意义(P<0.05);2.2褪黑素对A/R时血小板聚集率的影响与缺氧复氧组相比,100μM褪黑素处理组血小板聚集率下降,差异有统计学意义(P<0.05),而0.01μM组、1μM组与A/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。1000μM褪黑素较0.01μM、1μM来说,血小板聚集抑制率最大且差异有统计学意义(P<0.05),而0.01μM组、1μM组不仅未表现出抑制作用反而呈现活化血小板作用;2.3普罗布考对A/R时血小板聚集率的影响与缺氧复氧组相比,100μM普罗布考处理组血小板聚集率下降,差异有统计学意义(P<0.05),而1μM组、10μM组与A/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。100μM普罗布考较1μM、10μM来说,血小板聚集抑制率最大且差异有统计学意义(P<0.05);3维生素C对血小板凋亡相关指标变化影响3.1活性氧(ROS)与Control组(指血小板置于空气中,未进行缺氧复氧)相比,A/R组、VC组、HCl组中ROS产生明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与A/R组相比,VC组ROS减少,差异有统计学意义(P<0.05),而HCl组无类似变化,提示维生素C具有强大的清除活性氧的作用,且该作用与VC本身的弱酸性无关;3.2线粒体膜电位(△ψm)与Control组相比,A/R组、VC组、HCl组中低△ψm血小板百分比明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);VC组与A/R组相比,低△ψm血小板百分比相对减少,差异有统计学意义(P<0.05),而HCl组与A/R组相比,差异无统计学意义(P>0.05),提示维生素C减轻线粒体损伤与其抗氧化作用相关,而与其酸性无关;3.3凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cyto-C、Caspase-9的表达

关键词：维生素C 活性氧血小板凋亡血小板聚集全血电阻抗法体外孵育

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阿托伐他汀的抗血小板聚集作用依赖于血小板浓度

阿托伐他汀的抗血小板聚集作用依赖于血小板浓度

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作者：赵蕾河北医科大学

学位级别：硕士

目的：冠心病是严重危害人类健康的常见病，随着人们生活水平的不断提高，冠心病的发病率和死亡率逐年升高，并且呈现年轻化的趋势，而血小板活化在冠心病的发生、发展中起着关键作用。目前，环氧合酶抑制剂阿司匹林、二磷酸腺苷（ADP... 详细信息

目的：冠心病是严重危害人类健康的常见病，随着人们生活水平的不断提高，冠心病的发病率和死亡率逐年升高，并且呈现年轻化的趋势，而血小板活化在冠心病的发生、发展中起着关键作用。目前，环氧合酶抑制剂阿司匹林、二磷酸腺苷（ADP）受体拮抗剂氯吡格雷、GPⅡ b/Ⅲ a受体拮抗剂替罗非班等抗血小板药物在冠心病治疗中疗效确切。近年来，他汀类药物作为强有效的胆固醇合成抑制剂，通过强化降脂可显著降低冠心病患者心肌梗死、卒中和心源性死亡等心血管不良事件的发生率，因此越来越受到临床医师的广泛关注。许多研究表明，他汀类药物不仅能显著降低血浆胆固醇水平，并且具有抑制泡沫细胞生成、稳定粥样斑块、抗炎、改善血管内皮功能以及抗血小板和抗栓作用即他汀的多效性。其中，他汀类药物的抗血小板作用对冠心病尤其是急性冠脉综合征（ACS）患者具有重要意义，但尚未得到确切证实。还有一些研究表明，他汀类药物不仅能显著降低高胆固醇血症患者心血管不良事件的发生率，并且能够降低血脂正常群体的心血管疾病的发病率[6-8],这说明他汀类药物的心血管保护作用与其降低胆固醇的作用可能无直接关系，而是通过其多效性实现的。但是上述研究结果大多来自体内试验，存在混杂因素不易控制等缺陷，因此他汀类药物是否具有直接的抗血小板作用以及机制尚未得到确切证实。本课题选取阿托伐他汀钙，将126人份健康人血小板原浆稀释为生理边界值浓度（100×109/L和300×109/L）和高浓度（600×109/L）的血小板原浆，与不同浓度的阿托伐他汀钙体外孵育，通过检测血小板聚集率与聚集斜率，观察阿托伐他汀钙对不同浓度的血小板原浆的血小板聚集率是否有直接的抑制作用，为伴或不伴有高胆固醇血症的冠心病患者应用他汀类药物提供客观依据。方法：研究对象为新鲜机采健康人血小板原浆共126人份，血小板浓度为（960～1280）×109/L，由河北省血液中心提供。其纳入标准及排除标准均严格按照国家献血法的标准。用生理盐水将血小板原浆稀释为100×109/L组（39人份）、300×109/L组（42人份）和600×109/L组（45人份），取不同浓度的血小板分别制备成空白对照组（CN组）、实验对照组(CD组)以及阿托伐他汀钙终浓度分别为10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L的实验组（C1-3组），于血小板采集后2小时内用全血电阻抗法检测血小板聚集率及斜率。诱导剂为二磷酸腺苷（ADP）（10μmol/L）、花生四烯酸（AA）(0.5mmol/L）、胶原（2μg/mL）及肾上腺素（EP）(1mg/mL)。数据采用SPSS16.0进行统计分析。计量资料服从正态分布时用均数±标准差（x±s）表示，不服从正态分布时采用中位数（四分位数间距)表示,即M(QR)。正态分布时采用单因素方差分析，不服从正态分布时组间比较采用多个相关样本的秩和检验。P＜0.05认为有统计学差异。结果： 1不同浓度的阿托伐他汀钙对浓度为100×109/L的健康人血小板原浆血小板聚集率的影响 1.1阿托伐他汀对ADP（10μmol/L）诱导血小板聚集的影响：CN、CD、C1-3组的血小板聚集率分别为3.50（1）ohms、3.00（1）ohms、3.00（1）ohms、3.00（2）ohms及3.14±1.06ohms；各组间差异没有统计学意义（P=0.674）。聚集斜率分别为2.00（1）ohms/min、2.00（2）ohms/min、2.00（1）ohms/min、2.00（1）ohms/min及2.00（1）ohms/min；各组间差异无统计学意义（P=0.572）。 1.2阿托伐他汀对AA（0.5mmol/L）诱导的血小板聚集的影响：CN、CD、C1-3组的血小板聚集率分别为3.56±1.15ohms、3.50（1）ohms、3.00（1）ohms、3.00（2）ohms及3.00（2）ohms；各组间差异没有统计学意义（P=0.200）。聚集斜率分别为1.50（1）ohms/min、1.50（1）ohms/min、1.00（1）ohms/min、1.00（1）ohms/min及1.00（1）ohms/min；各组间差异无统计学意义（P=0.993）。 1.3阿托伐他汀对胶原（2μg/mL）诱导的血小板聚集的影响：CN、CD、C1-3组的血小板聚集率分别为9.00（2）ohms、8.50±1.78ohms、8.00（3）ohms、8.00（2）ohms及8.00（3）ohms；各组间差异没有统计学意义（P=0.362）。聚集斜率分别为2.00（1）ohms/min、2.00（1）ohms/min、2.00（1）ohms/min、2.00（0）ohms/min及2.00（0）ohms/min；

关键词：阿托伐他汀钙抗血小板血小板聚集率全血电阻抗法体外孵育

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丹参多酚酸盐不能拮抗健康人及冠心病患者血小板的聚集

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中华中医药学刊 2013年第9期31卷 2075-2078页

作者：谷培崔炜刘凡谢瑞芹谷国强杨晓红鲁静朝郑红梅张冀东河北医科大学第二医院心血管病研究所心血管内科河北石家庄050000

目的:观察丹参多酚酸盐是否具有抗血小板聚集作用。方法:将26例健康人全血、8例冠心病患者全血及26例健康人血小板原浆分别与不同浓度的丹参多酚酸盐体外孵育,用全血电阻抗法检测ADP、AA及EP诱导的血小板聚集率与聚集斜率,比较不同组间... 详细信息

目的:观察丹参多酚酸盐是否具有抗血小板聚集作用。方法:将26例健康人全血、8例冠心病患者全血及26例健康人血小板原浆分别与不同浓度的丹参多酚酸盐体外孵育,用全血电阻抗法检测ADP、AA及EP诱导的血小板聚集率与聚集斜率,比较不同组间的差异。结果:在健康人全血组及冠心病患者全血组中,ADP、AA及EP诱导的血小板聚集率及聚集斜率在不同组间没有显著差异(P>0.05);只有在健康人血小板原浆组中,EP诱导的血小板聚集率不同组间比较P值为0.004(P<0.05)。结论:健康人及冠心病人全血中,低、中、高浓度的丹参多酚酸盐均不能拮抗ADP、AA及EP诱导的血小板聚集率,亦不能降低血小板聚集斜率。

关键词：丹参多酚酸盐血小板聚集率诱导剂全血电阻抗法体外孵育

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丹参多酚酸盐对健康人及冠心病患者血小板聚集的影响

丹参多酚酸盐对健康人及冠心病患者血小板聚集的影响

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作者：谷培河北医科大学

学位级别：硕士

目的：随着社会发展和人们生活水平的不断提高，冠心病的发病率与死亡率逐年升高，并呈现年轻化的趋势，严重威胁着人们的生命健康。而血小板活化后粘附、聚集在冠心病的发生、发展中起着关键作用。因此抗血小板已成为治疗冠心病的关键... 详细信息

目的：随着社会发展和人们生活水平的不断提高，冠心病的发病率与死亡率逐年升高，并呈现年轻化的趋势，严重威胁着人们的生命健康。而血小板活化后粘附、聚集在冠心病的发生、发展中起着关键作用。因此抗血小板已成为治疗冠心病的关键环节。临床常用检测血小板聚集率的方法来观察药物疗效。目前，环氧合酶抑制剂阿司匹林、二磷酸腺苷（ADP）受体拮抗剂氯吡格雷、GPⅡbⅢa受体拮抗剂替罗非班等药物已在抗血小板治疗中取得了很好的效果，但我国的中药如丹参、银杏、川芎、红花等，也越来越受到人们的广泛关注。随着科研仪器及技术的不断发展，人们发现了众多中药提取物，在冠心病的治疗中起着重要作用。目前受到最多关注的是较纯化的水溶性丹参提取物-丹参多酚酸盐。一些实验表明丹参多酚酸盐具有抗氧化、抑制低密度脂蛋白的氧化修饰作用、抑制胞间连接、抑制金属蛋白酶的表达、抗炎等作用，对抗动脉粥样硬化，保护心脑血管。还有一些研究表明丹参多酚酸盐可以降低P选择素，改善血小板一氧化氮合酶（eNOS）的活性，降低冠心病患者ADP及肾上腺素（EP）诱导的血小板聚集率。但目前这些研究均为体内试验，存在混杂因素不易控制等缺陷，丹参多酚酸盐的抗血小板聚集作用及其机制并未得到确切证实。本课题通过将26例健康人全血、8例冠心病患者全血及26例健康人血小板原浆分别与不同浓度的丹参多酚酸盐体外孵育，通过检测血小板聚集率与聚集斜率，观察丹参多酚酸盐是否有抗血小板作用，为临床丹参多酚酸盐的使用提供客观依据。材料：实验对象分三部分。①健康人全血组。共26例，其中男性9例，女性17例，年龄15～64岁（36.08±14.19）岁。入选标准：肝肾功能正常、血常规正常、女性处于非月经期的健康人。②冠心病患者全血组。共8例患者，其中男性5例，女性3例，年龄51～78岁（62.13±8.27）岁。入选标准：为急性冠脉综合征（ACS）患者，包括ST段抬高型心肌梗死患者、非ST段抬高型心肌梗死患者及不稳定型心绞痛患者。两组的排除标准：各种血液病，出血性疾病，或有出血倾向；近1周使用过阿司匹林、氯吡格雷、肝素等抗血小板、抗凝药物。③健康人血小板原浆组。共26份新鲜机采健康人血小板原浆，血小板浓度约为1280×109/L。其纳入标准及排除标准均严格按照国家献血法的标准。方法：对健康人及冠心病人全血组受试对象于肘静脉或股静脉采集血标本，采血后各自制备成空白对照组、丹参多酚酸盐终浓度分别为1mg/L、10mg/L、100mg/L的实验组(C0-3组)，于1小时内用全血电阻抗法检测血小板聚集率及斜率。健康人血小板原浆组在血小板采集后1小时内用同上方法测血小板聚集率及斜率。诱导剂为二磷酸腺苷（ADP）(10μmol/L)、花生四烯酸（AA）(0.5μmol/L)及EP（1mg/mL）。数据采用SPSS13.0进行统计分析。计量资料服从正态分布时用均数±标准差（x±s）表示，不服从正态分布时采用中位数（四分位数间距）表示,即M（QR）。正态分布时采用单因素方差分析，不服从正态分布时组间比较采用多个相关样本的秩和检验。P<0.05认为有统计学差异。结果： 1不同浓度的丹参多酚酸盐对健康人全血血小板聚集的影响 1.1ADP（10μmol/L）诱导血小板聚集：C0-C3组的血小板聚集率分别为7.00（5.00）ohms，7.04±3.17ohms，7.00±3.73ohms，7.12±4.71ohms。差异无统计学意义（P=0.923）。聚集斜率分别为4.00（3.00）ohms/min，4.00（4.00）ohms/min，4.00（5.00）ohms/min，4.00（5.00）ohms/min。差异无统计学意义（P=0.252）。 1.2AA（0.5μmol/L）诱导的血小板聚集：C0-C3组的血小板聚集率分别为10.65±3.53ohms，11.19±4.20ohms，12.00（4.00）ohms，12.08±3.70ohms。差异无统计学意义（P=0.096）。聚集斜率分别为6.50（5.00）ohms/min，6.81±2.93ohms/min，7.42±3.25ohms/min，7.77±3.87ohms/min。差异无统计学意义（P=0.296）。 1.3EP（1mg/ml）诱导的血小板聚集：C0-C3组的血小板聚集率分别为6.26±4.45ohms，5.00（8.00）ohms，5.42±3.20ohms，8.95±5.10ohms。差异无统计学意义（P=0.157）。聚集斜率分别为2.00（1.00）ohms/min，2.00（1.00）ohms/min，2.00（1.00）ohms/min，3.00（2.00）ohms/min。差异无统计学意义（P=0.405）。

关键词：丹参多酚酸盐血小板聚集率诱导剂全血电阻抗法体外孵育

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