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Ang(1-7)对AngⅡ诱导人脐静脉血管内皮细胞株细胞组织因子表达的影响

中华血液学杂志 2005年第9期26卷 557-559页

作者：张卉文志斌何晓凡贺石林中南大学湘雅医学院生理学系长沙410078

血管紧张素-(1-7)[Ang(1-7)]是近来新发现的RAS中一重要活性产物.它是在不同酶作用下由Ang Ⅰ和(或)AngⅡ生成的一个由7个氨基酸组成的多肽[1].Ang(1-7)在许多方面与AngⅡ有着相拮抗的作用,如舒张血管、降低血压和抑制细胞增殖等[2],二... 详细信息

血管紧张素-(1-7)[Ang(1-7)]是近来新发现的RAS中一重要活性产物.它是在不同酶作用下由Ang Ⅰ和(或)AngⅡ生成的一个由7个氨基酸组成的多肽[1].Ang(1-7)在许多方面与AngⅡ有着相拮抗的作用,如舒张血管、降低血压和抑制细胞增殖等[2],二者共同维持着生理的平衡。

关键词： AngⅡ 细胞组织因子内皮细胞株静脉血管人脐抑制细胞增殖血管紧张素氨基酸组成活性产物

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膜型基质金属蛋白酶-1在不同内皮细胞株中的表达差异

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第11期23卷 916-920页

作者：蒋菊香马珍妮胡晓慧董宁征吴士良阮长耿苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所苏州215006 苏州大学医学院生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院生化工程研究所苏州215123

为研究膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)在血管生物学中的作用机制,比较了3株常用的内皮细胞株:人微血管内皮细胞株HMEC-1、人脐静脉内皮细胞株ECV304和EAhy926中MT1-MMP及与其功能相关的MMP-2,TIMP-2的表达差异.实时PCR和流式细胞术检测HMEC-1、EAhy926和ECV304中MT1-MMP/MMP-2/TIMP-2的表达,明胶酶谱法分析各细胞株上清中MMP-2的酶活.实时PCR结果显示,3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,MT1-MMP在EAhy926中表达最高,TIMP-2在ECV304中表达最高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的表达.流式细胞术和酶谱的结果与PCR结果基本一致.MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中高表达可能与该细胞独特的来源、表型特点和功能有关.

关键词： MT1-MMP 内皮细胞株表达差异

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膜型基质金属蛋白酶在人恶性造血细胞株和内皮细胞株中的表达及意义

膜型基质金属蛋白酶在人恶性造血细胞株和内皮细胞株中的表达及意...

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作者：蒋菊香苏州大学

学位级别：博士

一、6种MT-MMPs和MMP-2在13株恶性造血细胞株中的表达及其相关性分析目的:检测6种MT-MMPs和MMP-2在13株恶性造血细胞株中的表达谱,并初步探讨恶性血液病中MT-MMPs和MMP-2表达的关系。方法:Alignment程序（http://***/clust... 详细信息

一、6种MT-MMPs和MMP-2在13株恶性造血细胞株中的表达及其相关性分析目的:检测6种MT-MMPs和MMP-2在13株恶性造血细胞株中的表达谱,并初步探讨恶性血液病中MT-MMPs和MMP-2表达的关系。方法:Alignment程序（http://***/clustalw）比较6种MT-MMPs蛋白序列的同源性,半定量RT-PCR检测13株不同谱系恶性造血细胞株中MT-MMPs和MMP-2的mRNA表达差异,明胶酶谱法分析各细胞株上清中MMP-2的酶活,流式细胞术检测MT1-MMP蛋白的表达。用SPSS 13.0 for Windows分析了各基因的表达与细胞来源的相关性和各基因相互间表达的相关性。结果:属于同一亚类的MT1-,MT2-,MT3-,MT5-MMP氨基酸一致性较高,为53%-65%,其中MT3-、MT5-MMP氨基酸一致性最高为65%,而属于另一亚类的MT4-,MT6-MMP氨基酸一致性较高,为46%。6种MT-MMPs和MMP-2在13株细胞中呈现不同的表达谱,其中MT2-、MT4-、MT1-MMP和MMP-2表达较广泛,而MT3-、MT5-、MT6-MMP在检测的细胞株中较少表达,统计分析显示MT-MMPs和MMP-2的表达与细胞的来源无明显的相关性（P＞0.1）,而MT1-MMP和MMP-2（R=0.64,P=0.02）,MT3-MMP和MT5-MMP（R=0.57,P=0.04）的表达有相关性;同时还发现MT1-MMP和MMP-2在来源于急性肿瘤的细胞株中表达明显高于来源于慢性肿瘤的细胞株（P＜0.01）,相反地,MT4-MMP则在来源于慢性肿瘤的细胞株中的表达较高（P＜0.01）,而MT2-MMP在两组细胞株中的表达无明显差异。结论:MT-MMPs在恶性造血细胞中的表达差异,提示它们在不同类型的血液系统肿瘤发展中发挥各自独特的作用。另外,MT1-MMP和MMP-2,MT3-MMP和MT5-MMP之间表达的相关性提示它们在功能上密切相关。二、MT1-MMP瞬时转染HL-60细胞及对其生物学行为的影响目的:构建的MT1-MMP真核表达载体,瞬时转染HL60,初步探讨该基因对HL60细胞增殖、凋亡、侵袭能力和细胞周期等功能的影响。方法:RT-PCR从EAhy926中扩增MT1-MMP全长cDNA,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-MT1-MMP表达载体;载体经酶切、PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至HL60瞬时表达,RT-PCR,real-time PCR和流式细胞术鉴定转染效果。利用建立的HL60/MT1-MMP细胞为模型,HL60/pcDNA3.1为对照,用MTT法检测细胞的增殖,real-time PCR检测MMP-2、Bcl-2和Bax的表达,Transwell板检测细胞侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期。结果:成功构建了MT1-MMP表达载体,real-time PCR和流式细胞术鉴定MT1-MMP能在HL60中获得高效表达。MTT法结果提示转染后HL60/MT1-MMP细胞的增殖能力显著高于对照组（P＜0.01）,real-time PCR提示转染后48h转染组和对照组相比MMP-2、Bcl-2和Bax的表达无明显变化,Transwell板检测结果显示转染后48h HL60/MT1-MMP的侵袭能力（15.42±2.38%）显著高于对照组（5.16±0.78%）（P＜0.01）,细胞周期分析发现转染后24h,HL60/MT1-MMP G2期和S期比例（67.5±3.57%）高于对照组（57.9±2.52%）（P＜0.05）,而转染后48h和72h则两组细胞细胞周期无明显差别。结论:过度表达MT1-MMP的白血病细胞株体外增殖和侵袭能力增强,而其侵袭能力的增强与MMP-2无直接关系,MT1-MMP可能不直接参与调节Bcl-2/Bax介导的细胞凋亡。三、siRNA靶向干扰多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中MT2-MMP的表达及对其功能影响的初步研究目的:通过RNA干扰降低RPMI8226中MT2-MMP的表达,探讨MT2-MMP对RPMI8226细胞增殖,凋亡,细胞周期和表达血管内皮生长因子及其受体基因的影响。方法:Real-time PCR筛选3对siRNA（siRNA A,siRNA B,siRNA C）24h,48h和72h的干扰效率,流式细胞术鉴定MT2-MMP蛋白水平的干扰。以有效干扰的siRNA通过脂质体转染RPMI8226,建立MT2-MMP瞬时沉默细胞模型,以无关siRNA转染RPMI8226组作为对

关键词： MT-MMPs 恶性造血细胞株内皮细胞株真核表达 RNA干扰表达差异

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膜型基质金属蛋白酶在人血管内皮细胞株中的表达

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苏州大学学报（医学版） 2007年第2期27卷 172-175,202页

作者：蒋菊香胡晓慧马珍妮董宁征白霞阮长耿江苏省血液研究所苏州大学附属第一医院

目的探讨膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases,MT-MMPs）在内皮细胞中的作用。方法用Clustal W软件（http：//***/clustalw）比较6种MT-MMPs的蛋白序列同源性,并描绘出进化树,用半定量逆转录-聚合酶链式反... 详细信息

目的探讨膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases,MT-MMPs）在内皮细胞中的作用。方法用Clustal W软件（http：//***/clustalw）比较6种MT-MMPs的蛋白序列同源性,并描绘出进化树,用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术检测HMEC-1、ECV304和EAhy926 3株内皮细胞株中MT-MMPs的mRNA表达差异。结果蛋白质序列同源比较结果提示,MT-MMPs各成员间氨基酸一致性为31%-65%,RT-PCR检测结果发现6种MT-MMPs在3株不同细胞中呈现不同的表达谱。结论 MT-MMPs在不同血管内皮细胞株中的表达差异,可能与各内皮细胞不同的来源、表型特点和各自具有不同的功能有关。

关键词：膜型基质金属蛋白酶内皮细胞株进化树表达

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实时定量PCR分析MT1-MMP/TIMP-2/MMP-2在不同来源人血管内皮细胞株中的表达

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中国血液流变学杂志 2007年第1期17卷 7-10页

作者：蒋菊香马珍妮胡晓慧董宁征阮长耿江苏省血液研究所苏州大学附属第一医院

为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量PCR分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT... 详细信息

为深入研究MT1-MMP在血管生物学中的功能,该研究比较了MT1-MMP及与其功能相关MMP-2、TIMP-2在人微血管内皮细胞株HMEC-1和人大血管内皮细胞株EAhy926、ECV304中的mRNA表达差异。实时定量PCR分析显示3株细胞均表达MT1-MMP与TIMP-2,其中MT1-MMP在EAhy926中表达最高,TIMP-2在3株细胞中呈现相似的表达量,在ECV304中相对表达较高,而仅在EAhy926中检测到MMP-2的高表达。MT1-MMP和MMP-2在典型的大血管内皮细胞株EAhy926中的高表达可能与该类内皮细胞独特的来源、表型特点和功能有关。

关键词： MT1-MMP 内皮细胞株实时定量PCR

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登革病毒感染原代人单核细胞、上皮细胞与内皮细胞株后IL-8分泌增加

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国外医学（微生物学分册） 2002年第5期25卷 45-46页

作者：魏惠永

登革出血热(DHF)为登革病毒(DV)感染后出现的严重临床症状,其特征为血浆渗出和血液循环衰竭。由于观察到临床表现较重的患者血浆中有IL-8水平升高,作者研究了DV体外感染对炎症性细胞因子分泌表达的影响。对照组加入不含登革病毒2型(DV2... 详细信息

登革出血热(DHF)为登革病毒(DV)感染后出现的严重临床症状,其特征为血浆渗出和血液循环衰竭。由于观察到临床表现较重的患者血浆中有IL-8水平升高,作者研究了DV体外感染对炎症性细胞因子分泌表达的影响。对照组加入不含登革病毒2型(DV2)的昆虫细胞C6/36培养上清液后,ELISA测定其基线细胞因子水平。

关键词：登革病毒感染原代人单核细胞上皮细胞内皮细胞株 IL-8分泌

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过表达WNT2基因的内皮细胞株及其构建方法和应用

过表达WNT2基因的内皮细胞株及其构建方法和应用

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作者：王韫芳柳娟陈虹宇 102218 北京市昌平区立汤路168号

本发明提出了过表达WNT2基因的内皮细胞株及其构建方法和应用，所述构建细胞株的方法包括：将内皮细胞的WNT2基因进行过表达。本发明的细胞株过表达WNT2基因，能够促进内皮细胞的增殖、增加内皮细胞血管化、促进肝祖细胞药物代谢相关基... 详细信息

标准号: CN114891831A

本发明提出了过表达WNT2基因的内皮细胞株及其构建方法和应用，所述构建细胞株的方法包括：将内皮细胞的WNT2基因进行过表达。本发明的细胞株过表达WNT2基因，能够促进内皮细胞的增殖、增加内皮细胞血管化、促进肝祖细胞药物代谢相关基因的表达，有助于构建血管发育、药物性肝损伤等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、药物性肝损伤等疾病的机制研究以及靶向药物的研发和肝毒性的检测等，具有广阔的应用前景。

关键词：内皮细胞构建药物性肝损伤细胞株血管疾病应用内皮细胞株靶向药物基因缺陷机制研究细胞药物相关基因肝毒性血管化肝祖研发增殖代谢血管发育疾病检测

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双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

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中国病理生理杂志 2005年第8期21卷 1652-1653页

作者：李绚阎蓉华罗照田吴琦贺荣华王伯瑶四川大学华西医学中心基础医学与法医医学院病理生理教研室、感染免疫研究室、钩体病防治研究室四川成都610041 The UT MD Anderson cancer Center Box 354HoustonTX77030 MDACC

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用.方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量... 详细信息

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

关键词：人脐静脉血管内皮细胞双黄连注射液 NF-κB活性活性抑制作用信号通道靶分子定量分析法 ELISA法内皮细胞株

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血管抑制素的分离纯化及性质研究

血管抑制素的分离纯化及性质研究

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作者：房佰俊郑州大学

学位级别：硕士

该试验拟以小鼠肺动脉内皮细胞株及原代培养的人脐静脉内皮细株作为检测细胞,从人血浆组份III中用亲和层析及分子筛技术分离纯化plasminogen,经过对plasminogen进行有限酶解和亲和层析得到Kring1-Kring3和Kring1-Kring4部分,即angiostat... 详细信息

该试验拟以小鼠肺动脉内皮细胞株及原代培养的人脐静脉内皮细株作为检测细胞,从人血浆组份III中用亲和层析及分子筛技术分离纯化plasminogen,经过对plasminogen进行有限酶解和亲和层析得到Kring1-Kring3和Kring1-Kring4部分,即angiostatin,并在细胞水平、组织动物水平对其生物学特性进行研究.结论:1、以1H11、HUVEC为检测细胞,采用MTT法,是一种检测血管形成抑制剂的较好的体外实验方法:2、从人血浆组份III中分离纯化到的plasminogen,分子量约为94KD;而有限酶解plasminogen所得的HAG的分子量约为37KD、34KD、52KD;3、纯化的HAG体外能抑制内皮细胞的增殖,且对内皮细胞的细胞毒作用呈剂量和时间依赖性,而HAG对多数肿瘤细胞株和正常组织细胞的增殖则无影响;4、ECGF对HAG体外抑制内皮细胞的增殖有明显的拮抗作用;5、透射电镜及琼脂糖凝胶电泳提示HAG对1H11内皮细胞体外增殖的特异性抑制作用的机制之一是诱导1H11内皮细胞凋亡;6、HAG对人血管内皮细胞的敏感性高于对小鼠血管内皮细胞的敏感性;7、HAG能抑制小鼠LEWIS肺癌的生长,而无明显的常规化疗药物的免疫抑制等毒副作用;8、angiostatin可能存在种属差异.该实验原代培养了HUVEC,建立了检测血管抑制剂的体外实验方法,纯化人血浆组份III中的抗血管生成组分并对其生物学特性进行了研究,提示血浆来源的血管生成抑制剂治疗肿瘤具有良好的临床应用前景.

关键词：血管抑制素血浆组份III 内皮细胞株

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绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转染骨髓间充质干细胞、乳鼠心肌细胞、Eahy926细胞表达特征的共聚焦分析

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新乡医学院学报 2011年第2期28卷 147-151页

作者：张颖辛毅汪劲松许秀芳罗毅黄益民首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学室北京100029 北京放射医学研究所北京100850

目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病... 详细信息

目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病毒载体,将GFP、RFP以同时或先后方式共转染hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞,激光共聚焦显微镜观察2种报告基因在不同细胞中的共表达特点。结果 3种细胞均能被GFP、RFP共转染,其中hMSC和乳鼠Myo均有竞争加随机转染方式,Eahy926只有随机转染方式;3种细胞转染GFP、RFP的效率有所不同,共表达2种报告基因的细胞表现为以核为中心的表达区域重叠。结论 hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞均可共转染2种报告基因,但整合方式有所不同,这将对利用多个报告基因同时示踪细胞多种生命特征提供有力帮助。

关键词：慢病毒载体人骨髓间充质干细胞心肌细胞内皮细胞株绿色荧光蛋白红色荧光蛋白

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