检索结果-内蒙古大学图书馆

人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

中国实验方剂学杂志 2021年第24期27卷 17-24页

作者：吴烨王强修成奎胡艳红马琰岩付莹坤王雪雷燕杨静中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 中国中医科学院望京医院北京100102 中国中医科学院广安门医院北京100056

目的:通过观察人参-三七-川芎提取物(GNC)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法:本研究以HUVECs作为研究对象,H_(2)O_(2)诱导内皮细胞衰老作为模型,... 详细信息

目的:通过观察人参-三七-川芎提取物(GNC)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法:本研究以HUVECs作为研究对象,H_(2)O_(2)诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白组,H_(2)O_(2)组,H_(2)O_(2)+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(Resv)及GNC提取物低(GNC-L),中(GNC-M),高(GNC-H)质量浓度组,除空白组,H_(2)O_(2)组外,其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^(-1),Resv 8μmol·L^(-1),GNC 400,300,200 mg·L^(-1)药物干预,24 h后除空白组外给予300μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)诱导HUVECs衰老,再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,流式细胞仪分析细胞周期,采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧(mtROS)水平,以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测含锰超氧化物歧化酶(MnSOD)与磷酸化(p-)p66的蛋白表达。结果:SA-β-gal染色结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少(P<0.01);细胞周期结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组G0/G1期细胞数量比例明显增多(P<0.05),G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC各组及Resv组G0/G1期细胞数量比例明显减少(P<0.05),GNC-H组,Resv组在G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05)。线粒体ROS荧光结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组强度明显减弱(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H,GNC-M组强度明显增高(P<0.05);线粒体膜电位结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组荧光强度显著下降(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H,GNC-M,GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高(P<0.01),Resv组明显增高(P<0.05);Western blot结果显示,与空白组比较,H_(2)O_(2)组MnSOD含量明显降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,GNC-H与GNC-M组表达明显增多(P<0.05);与空白组比较,H_(2)O_(2)组p-p66含量显著增高(P<0.01);与H_(2)O_(2)组比较,各用药组表达显著降低(P<0.01),表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论:中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H_(2)O_(2)诱导的血管内皮细胞的衰老,药物干预后,细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD,p-p66蛋白发生明显改善,氧化应激反应减轻,其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。

关键词：衰老血管老化内皮细胞衰老人参-三七-川芎提取物氧化应激

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人参-三七-川芎提取物对过氧化氢诱导内皮细胞衰老SIRT1自噬通路的机制研究

引用

中国中药杂志 2021年第23期46卷 6216-6223页

作者：修成奎付莹坤王强王雪胡艳红吴烨杨静雷燕中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 中国中医科学院广安门医院北京100056 中国中医科学院望京医院北京100102

观察人参-三七-川芎提取物对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮细胞衰老SIRT1-自噬通路的影响。该研究以血管内皮细胞作为研究对象,过氧化氢诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白对照组(control),模型组(model)、模型+DMSO组(DMSO),白... 详细信息

观察人参-三七-川芎提取物对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮细胞衰老SIRT1-自噬通路的影响。该研究以血管内皮细胞作为研究对象,过氧化氢诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白对照组(control),模型组(model)、模型+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(RESV)及人参-三七-川芎提取物低(GNS-L)、中(GNS-M)、高(GNS-H)剂量组,药物干预时间为24 h。应用倒置显微镜观察细胞生长状态,透射电子显微镜观察自噬小体的形成,免疫荧光染色观察细胞微管相关蛋白1轻链3β(LC3)的变化,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)双荧光体系融合蛋白示踪自噬流,单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色检测自噬囊泡,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)、泛素结合蛋白p62及LC3Ⅱ的表达。H_(2)O_(2)造模后,细胞生长速度放慢,细胞贴壁能力下降,SA-β-gal染色蓝染细胞增多,胞质内出现一定数量的双层膜结构的自噬小体及次级溶酶体,自噬流水平略增。给予药物干预后,与模型组相比,各剂量组细胞形态改善,贴壁能力尚可,细胞膜相对完整光滑,SA-β-gal染色蓝染细胞减少,胞质中出现较多自噬小体、自噬空泡及次级溶酶体,自噬溶酶体数量增多,自噬流增加,LC3及MDC染色的荧光强度明显提高,SIRT1及LC3Ⅱ蛋白表达增加,同时p62蛋白表达下调,表明用药后可以提高细胞自噬水平。中药人参-三七-川芎提取物可以延缓血管内皮细胞的衰老,且药物干预后,自噬流及相关蛋白SIRT1、LC3Ⅱ及p62变化明显,自噬水平明显提升,且EX527削弱了中药延缓血管衰老的作用,中药人参-三七-川芎提取物可能通过SIRT1自噬通路延缓血管内皮细胞的衰老。

关键词：衰老血管老化内皮细胞衰老人参-三七-川芎提取物

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

内皮细胞衰老的蛋白质更新组学及初步机制研究

内皮细胞衰老的蛋白质更新组学及初步机制研究

引用

作者：白琳郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的:　　衰老是一种起因未知、涉及广泛生理过程的复杂事件。随着年龄的增长，全身各脏器均不可避免会发生衰老，这会影响细胞和组织的结构与功能，并伴随各种年龄相关的慢性疾病的发生。内皮细胞作为血管系统的主要细胞类型，... 详细信息

背景和目的:　　衰老是一种起因未知、涉及广泛生理过程的复杂事件。随着年龄的增长，全身各脏器均不可避免会发生衰老，这会影响细胞和组织的结构与功能，并伴随各种年龄相关的慢性疾病的发生。内皮细胞作为血管系统的主要细胞类型，对衰老过程尤为敏感。内皮细胞衰老在心血管疾病和代谢疾病发病机制中起关键作用，研究内皮细胞衰老的机制对于探索血管衰老以及人体衰老具有重要意义。　　蛋白质作为生命活动的基础组成部分，在细胞的结构和功能中扮演着至关重要的角色。细胞内的蛋白质经历着持续的合成与降解循环，即蛋白质更新。在衰老过程中，蛋白质稳态失衡的原因之一是蛋白质更新速率的改变。蛋白质组学和Dynamic SILAC方法的结合能够高通量地分析细胞全蛋白质的更新和表达变化，从而扩展了蛋白质表达和更新之间的联系。了解衰老过程中蛋白质表达和更新的动态变化，为揭示衰老的分子机制和寻找衰老生物标志物提供了多维度视角。　　本研究采用连续传代的方法构建HUVEC细胞衰老模型，并结合Dynamic SILAC和TMT标记进行质谱检测，得到HUVEC衰老前后亚细胞蛋白质的表达和更新图谱。本课题系统分析了 HUVEC细胞质蛋白在衰老前后的表达以及更新变化，初步探讨了 UBE2B对内皮细胞衰老的影响。本课题通过深入探究衰老过程中细胞质蛋白多维度的变化，为理解其在内皮细胞衰老过程中的作用提供了重要线索。　　方法:　　1.构建HUVEC复制性衰老模型，利用Dynamic SILAC技术对年轻组和衰老组内皮细胞进行时间梯度动态标记培养，分别提取细胞质、细胞器膜、细胞核等亚细胞结构蛋白质组份。　　2.使用胰酶对细胞质蛋白组份进行消化，使用TMT 10plex对蛋白多肽进行标记，并进行质谱检测。　　3.使用Proteome Discoverer对质谱数据进行蛋白质鉴定定量，获得年轻组和衰老组细胞质蛋白的相对表达丰度。利用“DynaTMT_python”包分别提取细胞质蛋白的轻标和重标多肽丰度数据。　　4.根据多时间点轻标和重标蛋白质多肽的相对丰度进行蛋白质降解曲线拟合，计算获得蛋白质的半衰期。　　5.使用主成分分析、差异分析、GO、KEGG等生物信息学分析工具对细胞质蛋白的表达丰度和降解曲线计算得到的半衰期进行分析并可视化。　　6.从AmiGO2数据库下载216个与DNA损伤应答（DDR）生物学过程相关的蛋白质数据，与本研究中鉴定到的细胞质蛋白的表达和半衰期数据进行关联分析，探究DDR相关蛋白在HUVEC衰老过程中的变化。　　7.构建H2O2诱导HUVEC衰老细胞模型，通过瞬时转染siRNA和过表达质粒干预UBE2B表达，检测内皮细胞衰老相关指标。　　结果:　　1.随着连续传代，HUVEC细胞形态发生改变，细胞核变大，衰老标志物变化显著;成功构建原代HUVEC细胞连续传代的复制性衰老模型。　　2.年轻组和衰老组HUVEC共同鉴定到3252个细胞质蛋白，其中有638个细胞质蛋白在衰老组表达显著上调，519个细胞质蛋白在衰老组表达显著下调。KEGG分析结果显示，差异蛋白主要在自噬、溶酶体、细胞衰老通路中富集;GO分析结果显示，差异蛋白主要富集在RNA剪接和核糖核蛋白复合物的生物合成等生物过程。　　3.经过过滤，年轻组和衰老组共有1318个细胞质蛋白完成了高质量降解曲线拟合，并计算它们的半衰期。结果显示，年轻组和衰老组HUVEC的细胞质蛋白半衰期总体分布无显著差异。　　4.与216个DDR相关的蛋白质进行关联分析，结果显示本研究中共有47个DDR相关蛋白质被鉴定到，其中有10个DDR相关蛋白质在衰老细胞中显著上调，8个DDR相关蛋白在衰老细胞中显著下调。此外，共20个DDR相关蛋白质得到了高质量降解曲线的拟合。在这些蛋白中，有8个蛋白在衰老细胞中半衰期延长，12个蛋白在衰老细胞中半衰期缩短。　　***2B在衰老组HUVEC中表达量显著下调，半衰期缩短。干扰年轻组HUVEC UBE2B的表达，促进p53、p21和衰老相关分泌表型的表达，抑制Lamin B1的表达;SA-β-Gal染色阳性细胞比例增加。H2O2诱导HUVEC衰老模型中p16、p21衰老指标表达上调;过表达UBE2B可降低H2O2诱导HUVEC衰老模型中p16、p21的表达，敲低UBE2B则升高。　　结论:　　1.连续传代的原代HUVEC在第18代表现出显著的衰老表型，可以作为细胞衰老模型用于研究。　　2.随着衰老，原代HUVEC的细胞质蛋白表达谱发生显著变化，这些蛋白主要参与自噬、溶酶体、细胞衰老等信号通路;参与RNA剪接和核糖核蛋白复合物的生物合成等生物过程，这提示衰老过程中细胞质蛋白稳态发生重塑。　　3.随着衰老，原代HUVEC的细胞质蛋白整体半衰期分布未发生显著改变，约28％的蛋白质半衰期发生显著改变。　　4.调控DDR的

关键词：内皮细胞衰老蛋白质更新蛋白表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

吴茱萸碱调控内皮细胞微粒对AngⅡ诱导的内皮细胞衰老的保护作用

引用

中国药理学通报 2024年第11期40卷 2199-2200页

作者：王恺王嫣彭芳陈天琪周慧史琴贵州中医药大学基础医学院贵州贵阳550025

吴茱萸碱(evodiamine,Evo)是传统中药吴茱萸的主要活性成分之一,对血管内皮细胞具有保护作用[1],可减轻细胞炎性损伤。内皮细胞微粒(endothelial microparticles,EMP)是反映内皮细胞功能障碍的新兴标志物,近年来研究表明EMP能诱导年轻... 详细信息

吴茱萸碱(evodiamine,Evo)是传统中药吴茱萸的主要活性成分之一,对血管内皮细胞具有保护作用[1],可减轻细胞炎性损伤。内皮细胞微粒(endothelial microparticles,EMP)是反映内皮细胞功能障碍的新兴标志物,近年来研究表明EMP能诱导年轻内皮细胞衰老,参与细胞衰老过程[2]。但吴茱萸是否通过EMP改善内皮细胞衰老,目前尚未见报道。

关键词：内皮细胞衰老内皮细胞微粒吴茱萸碱 SIRT1/p53通路 AngⅡ ROS

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Aspirin抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制研究

Aspirin抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制研究

引用

作者：伊桐凝中国医科大学

学位级别：博士

前言糖尿病人群患心血管并发症导致死亡的机率是正常人的2-4倍。因此探究糖尿病血管并发症的相关机制以及寻找有效的防治措施已经成为研究人员关注的焦点。糖尿病大血管病变的病理基础主要是动脉粥样硬化性改变。最近研究发现,内皮细... 详细信息

前言糖尿病人群患心血管并发症导致死亡的机率是正常人的2-4倍。因此探究糖尿病血管并发症的相关机制以及寻找有效的防治措施已经成为研究人员关注的焦点。糖尿病大血管病变的病理基础主要是动脉粥样硬化性改变。最近研究发现,内皮细胞衰老和动脉粥样硬化关系密切。正常生理状态下,内皮细胞的更新率很低,若不是因为受到损伤,其完全更新大约需要三年左右的时间。内皮细胞分裂能力有限,因损伤造成的不断分裂将导致内皮细胞端粒缩短,并进入生长停滞期,即衰老期,如血管分叉处的内皮细胞因受到血流切应力的作用易受损而发生反复分裂,该部位不但端粒较短,而且恰好是动脉粥样硬化的好发部位。Minamino研究显示,动脉粥样硬化斑块处内皮细胞与非斑块处的内皮细胞相比,呈现出衰老细胞的特征,如β-半乳糖苷酶(β-gal)染色阳性和端粒缩短等。同时,血管内皮细胞在衰老过程中,分泌的各种生物活性因子也在发生变化,如内皮依赖性血管舒张因子合成下降、炎性因子合成增加、粘附因子表达增多等。这些变化都将造成内皮功能障碍,最终导致动脉粥样硬化的发生。糖尿病患者与没有糖尿病人相比大血管疾病发病早,而且病变更加弥漫和严重,因此,高糖有可能因加速内皮细胞衰老而导致了糖尿病大血管病变。解释细胞衰老的机制之一就是端粒学说。端粒是真核细胞染色体末端的DNA序列,细胞每分裂一次,其端粒DNA序列就丧失5-25bp,当端粒缩短到一定长度,便不能维持染色体的稳定,使细胞失去了分裂增殖能力而衰老、死亡,这种缩短就是细胞衰老的标志。端粒酶是一种核糖核蛋白逆转录酶,可以在缩短的端粒末端加上新的重复序列,保持端粒长度以延缓细胞衰老进程。当端粒酶缺乏或失活时,端粒DNA因不能得到及时的补充和修复而缩短。细胞内很多因素可以调节端粒的长度和端粒酶的活性,非对称性二甲基精氨酸(asymmetricdimethylarginine,ADMA)就是其中之一。ADMA不但是NOS的内源性抑制剂,也是心血管疾病独立危险因素之一。研究发现ADMA因上调细胞内活性氧(reactive oxygen system,ROS)的水平,抑制NO的合成而具有诱导内皮细胞衰老的作用。此外,代谢ADMA的二甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethylargininedimethylaminohydrolase,DDAH)是一种对氧化应激敏感的酶类。来自Lin的研究发现,糖尿病患者体内氧化应激程度加重的同时,伴随有DDAH活性的下降和ADMA水平的升高。因此,降低细胞内氧化应激的水平或升高NO的水平都能有效地延缓内皮细胞的衰老和动脉粥样硬化的发生。 ROS在衰老的过程中起着重要的作用,ROS可通过抑制Src家族激酶的活性而缩短端粒的长度,推进衰老的进程。大量体内和体外的实验表明,高糖能引起机体和细胞内氧化应激水平的加重。这有可能是糖尿病人过早衰老的原因之一。在内皮细胞中,NO能与过量的ROS反应而减轻细胞内氧化应激的程度,但研究显示,衰老的细胞中NO水平明显下降。NO是一种重要的具有多种功能的信号分子,可调节血管管腔大小、抑制血小板聚集、抗凋亡、抑制平滑肌细胞增殖和白细胞黏附,因而在抗动脉粥样硬化过程中发挥着重要的作用。NO是在eNOS的作用下由L-精氨酸合成而来。研究证明,内皮细胞衰老过程中eNOS的表达和活性都明显下降,尽管其中的机制还不十分明确,但可以肯定的是,这是导致NO水平下降的直接原因。 Aspirin是具有百年历史的非甾体类解热镇痛药,现在已经被广泛地应用于心血管疾病,尤其是缺血性心脏病的防治中。最近研究发现,aspirin除具有抗栓、抗炎的作用外,还具有抗氧化和升高NO的作用,因此aspirin有可能具有抗内皮细胞衰老的潜质。根据目前的研究状况,本项研究主要解决以下几个问题:(1)aspirin是否具有抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用;(2)这种抗衰老作用是否与aspirin升高细胞内NO,降低氧化应激的水平有关? 材料与方法 1、根据细胞形态学变化、β-gal染色阳性细胞数、PCR-ELISA法检测的细胞内端粒酶活性以及流式细胞仪检测的细胞周期分布特点评估内皮细胞衰老的程度。 2、采用经典的Griess法检测细胞上清液中总一氧化氮(NO/NO)水平。 3、根据细胞内DAF-FM DA荧光强度,荧光酶标仪检测细胞内总NOS活性。 4、采用Western blot方法检测细胞eNOS总蛋白表达和磷酸化eNOS(Ser-1177)蛋白表达。 5、采用RT-PCR方法检测细胞内eNOS mRNA表达。 6、根据细胞内DCFH-DA的荧光强度,流式细胞仪检测细胞内ROS的水平。 7、应用液质联用仪检测细胞内DDAH活性和ADMA水平。结果 1、高糖环境下(11-33 mM葡萄糖)内皮细胞呈现出衰老的特征并随糖浓度的升高而加重。衰老的细胞

关键词：阿司匹林内皮细胞衰老端粒酶一氧化氮一氧化氮合酶活性氧非对称性二甲基精氨酸二甲基精氨酸二甲胺水解酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

血管老化相关内皮细胞衰老的机制研究与益气活血中药的干预作用

血管老化相关内皮细胞衰老的机制研究与益气活血中药的干预作用

引用

作者：王铭中国中医科学院

学位级别：博士

血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素,随着我国老龄化社会的到来,对其进行深入的研究显得十分必要。血管内皮细胞不仅是血液与血管平滑肌之间的一层半通透性屏障,亦是一个活跃的内分泌器官,是全身和局部血流动力学功能及细胞增... 详细信息

血管老化是促进心血管疾病发生的重要危险因素,随着我国老龄化社会的到来,对其进行深入的研究显得十分必要。血管内皮细胞不仅是血液与血管平滑肌之间的一层半通透性屏障,亦是一个活跃的内分泌器官,是全身和局部血流动力学功能及细胞增生调节的重要决定因素。研究已经表明,内皮细胞衰老是血管整体老化的重要病理改变之一；因此,内皮细胞一直是血管老化研究的重点领域。本课题组前期的相关研究取得了如下成果：Ang Ⅱ的诱导从mRNA和蛋白水平上调ATl和NADPH氧化酶p22phox的表达,介导细胞内活性氧水平的增高,可能是血管内皮细胞衰老的主要机制之一；氧化应激在血管老化的发生、发展中有着重要的作用。同时,益气活血中药人参、三七、川芎组方能够有效降低Ang Ⅱ信号通路的强度,减轻氧化应激损伤,具有显著的延缓血管内皮细胞衰老的作用；并且中药低剂量干预(20mg/L)的疗效更加突出。增殖停滞被认为是细胞衰老的重要特征。人体衰老时组织器官的结构和功能退化均与其细胞数量的减少关系密切,而细胞增殖则是维持细胞数量的关键环节。衰老细胞的增殖障碍既受细胞外信号的调控,又必须通过细胞内信号级联反应的介导,而促使细胞周期的停滞。研究表明,细胞周期素依赖性激酶抑制因子(CDI)的表达能够明显抑制细胞的增殖,是衰老细胞处理各种信息并作出相应应答的主要方式之一,这种控制生长发育的基因在细胞生命晚期发挥作用可能是促使其衰老的主要原因。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是核受体超家族成员之一,其主要在脂肪组织、内皮细胞以及免疫细胞中表达,参与脂肪细胞分化、血管内皮保护、及机体免疫调节等多项生命活动,是胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类药物作用的靶分子,是近年来心血管药理研究的热点之一。现已表明,PPARγ可以直接作用于血管壁,阻断血管硬化的进程。同时,PPARγ亦能够减轻血管内皮细胞的氧化应激损伤,促进其NO的合成与分泌,从而对内皮细胞发挥重要的代偿保护作用,并成为延缓血管老化和内皮细胞衰老的重要作用靶点。研究指出老化血管的结构重塑和功能退化直接改变了各种心血管疾病的发生阈值、进展速度和严重程度,是导致心血管死亡率增高的主要原因之一。老化相关的血管硬化不同于局灶性的动脉粥样硬化,它不与临床上的梗塞、出血和动脉瘤等疾病直接相关,而表现为血管全程的管壁增厚、弹性降低和内腔扩大,与相关脏器的功能不全和衰竭关系更加密切。目前,评价血管老化程度最有临床价值的无创性检测方法是测定脉搏波传播速度(PWV)。血管老化促使血管壁增厚,僵硬度增加,顺应性降低,从而导致其PWV水平升高。国外研究指出,急性心肌梗死患者的PWV水平与其心血管死亡率密切相关,并且独立于先前的心血管疾病史、年龄和糖尿病等。因此,在前期工作的基础上,本研究旨在进一步从内皮细胞衰老的角度研究血管老化的发生机制和益气活血中药干预的作用途径；并以STEMI为疾病平台,探讨血管老化的临床意义和中医舌象特征。首先,继续以Ang Ⅱ诱导的衰老血管内皮细胞模型为研究对象,采用低剂量益气活血中药干预,以从细胞增殖调控的角度,探讨其衰老的内在机制和中药的干预作用；其次,以PPARγ为靶点,探讨其对衰老内皮细胞的代偿保护作用及其变化,并揭示益气活血中药干预的可能机制。再次,以PWV为检测指标,对血管老化与ST段抬高急性心肌梗死(STEMI)患者近期预后的相关性进行分层分析,并从舌诊的角度分析血管老化的中医特征。以期为血管老化的研究及中医药防治提供新理论、新视角和新靶点,也为将来从血管老化角度评估心血管疾病的预后提供新的思路。本论文主要由基础研究、临床研究和文献综述所组成。基础研究分为以下四个部分：第一部分：Ang Ⅱ诱导血管内皮细胞衰老的特征改变目的：探讨Ang Ⅱ诱导血管内皮细胞衰老的细胞学特征改变。方法：从健康产妇分娩健康婴儿的脐带中分离、培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),作形态学和vWF荧光抗体染色鉴定,采用ECM完全培养基传代培养细胞至生长良好的第4代,同步化后进行实验,分为对照组和Ang Ⅱ组(10-6mol/L)。选取Ang Ⅱ诱导后的24h和48h点进行动态观察,运用荧光显微镜观察细胞形态的变化,采用β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞的衰老,通过检测细胞培养上清中NO、eNOS的含量判断内皮细胞的功能状态；利用CCK-8和流式细胞周期检测评价细胞的增殖能力。结果：与对照组相比,Ang Ⅱ组随诱导时间的延长,其细胞数量减少,胞浆区域增大,细胞浆/细胞核比例增加,胞浆中可见较多颗粒或空泡；β-半乳糖苷酶阳性染色的细胞数量明显增加(p<0.01)；上清中NO和eNOS的含量明显下降(p<0.01)；CCK-8法检测的活细胞数量明显减少(p<0.01)；细胞大量停滞于

关键词：血管老化益气活血中药内皮细胞衰老 ST段抬高急性心肌梗死脉搏波传播速度紫暗舌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

p53的SUMO化介导内皮细胞衰老与凋亡逃逸促进动脉粥样硬化的发生

p53的SUMO化介导内皮细胞衰老与凋亡逃逸促进动脉粥样硬化的发生

引用

作者：陈艳佳南方医科大学

学位级别：博士

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是动脉壁纤维脂肪病变的形成,其进展缓慢,在出现明显的临床症状前“潜伏期”长,是一种血管炎症性疾病。AS进一步发展,可演变为一列心血管疾病,如心肌梗死、脑卒中、外周动脉疾病等,在世界范围内引起极... 详细信息

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是动脉壁纤维脂肪病变的形成,其进展缓慢,在出现明显的临床症状前“潜伏期”长,是一种血管炎症性疾病。AS进一步发展,可演变为一列心血管疾病,如心肌梗死、脑卒中、外周动脉疾病等,在世界范围内引起极高的患病率和死亡率。AS常常与血管衰老并存,细胞衰老又是血管衰老的原因之一。有研究证明衰老的内皮细胞出现在动脉粥样硬化的病变部位。内皮细胞衰老引起的内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化发生、发展的病理生理基础。晚期氧化蛋白产物,(advanced oxidative protein products,AOPPs)被认为是一种氧化应激的产物。研究证明,AOPPs会随年龄的增长而逐渐积累,并发现其在动脉粥样硬化患者血清中增高。我们的实验结果证实AOPPs可引起内皮细胞早衰,因此本课题将以AOPPs刺激的内皮细胞作为本研究的衰老细胞模型,探讨内皮细胞衰老发生的内在分子机制。该模型目前未见报道,具备可行性和创新性。衰老的细胞究竟是走向凋亡还是凋亡逃逸,是什么机制决定了衰老细胞的命运?这一命题在学术界引起了争论。目前有关凋亡逃逸的研究大多集中在肿瘤研究领域,但关于内皮细胞的凋亡逃逸目前研究极为少见。由于内皮细胞在体内的更替率低,一旦损伤则增殖修复困难,我们推测,衰老的内皮细胞很可能不是直接凋亡而是逃避凋亡,以衰老的状态长期存活并在体内积累,从而引起血管衰老及功能障碍。因此,明确衰老的内皮细胞会否发生凋亡逃逸并阐明其机制,对AS等衰老相关疾病的防治具有重要意义。以往对细胞衰老的研究,多与端粒酶和Sirt介导的乙酰化水平变化有关。而我们的前期研究发现,p53的SUMO化修饰在衰老的内皮细胞中增高,提示p53的SUMO化可能介导内皮细胞衰老。研究表明,细胞内p53水平的高低及p53的翻译后修饰对衰老细胞的命运起着重要的决定性作用。而p53的SUMO化作为一种较为新颖的翻译后修饰,目前在内皮细胞衰老的研究中较少见。本课题拟从p53的SUMO化入手,探讨其介导内皮细胞衰老与凋亡逃逸的分子机制。目的:本研究以AOPPs诱导的内皮细胞应激性早衰为模型,探讨p53的SUMO化介导内皮细胞衰老与凋亡逃逸的机制。方法:以人脐静脉内皮细胞为研究对象,用AOPPs诱导的内皮细胞作为应激性衰老的细胞模型,用跨内皮细胞电阻(TER)和FITC荧光漏出实验检测单层内皮细胞通透性;用CCK-8法检测内皮细胞的增殖能力;用Transwell迁移实验检测内皮细胞的迁移能力;使用Matrigel成管实验评价内皮细胞的成管功能;用免疫荧光及免疫印迹检测细胞自噬水平;用β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞比例;用流式细胞术检测凋亡细胞百分比;再分别用RAGE抑制剂、自噬激动剂、自噬抑制剂、转染RAGE siRNA以及p53位点失活型腺病毒,探讨p53的SUMO化在AOPPs诱导的内皮细胞衰老与凋亡逃逸中的作用。用高脂饮食配合药物腹腔注射的方法构建动脉粥样硬化小鼠模型,建模成功后取小鼠主动脉,用油红O染色计算斑块面积,用免疫组化、免疫印迹和免疫沉淀检测血管衰老及自噬相关蛋白的表达及分布。结果:第一部分:AOPP-BSA介导HUVECs屏障功能障碍与血管新生能力减退1.以不同浓度AOPP-BSA刺激HUVECs不同时间,随着AOPP-BSA刺激浓度和刺激时间的增加,HUVECs的跨内皮细胞电阻值逐渐下降,FITC-dextran的漏出量则逐渐增多。2.随着AOPP-BSA刺激浓度的增加和刺激时间的延长,HUVECs的增殖能力逐渐下降,当刺激浓度达200 μg/mL、刺激时间达24 h时出现统计学差异。3.随着AOPP-BSA刺激浓度的增加和刺激时间的延长,HUVECs的迁移细胞数逐渐下降,当刺激浓度达200 μg/mL、刺激时间达12 h时可出现统计学差异。4.当AOPP-BSA刺激浓度达50 μg/mL时,HUVECs的成管能力被明显抑制并出现统计学差异,且在任一时间点观察,HUVECs均未能形成肉眼可见的完整的管状结构。第二部分:AOPP-BSA通过RAGE介导HUVECs衰老与凋亡逃逸1.以 200 μg/mL AOPP-BSA 处理 HUVECs 12h,与对照组相比,AOPP-BSA刺激可诱导衰老细胞比例增多及衰老相关蛋白表达增加。2.以55℃水浴处理HUVECs 10min诱导细胞凋亡作为阳性对照,Annexin V-FITC/PI双染法结果显示AOPP-BSA刺激并未造成内皮细胞明显凋亡,提示AOPP-BSA引起内皮细胞衰老的同时可能介导凋亡逃逸。3.预转染RAGE siRNA敲低RAGE的表达,AOPP-BSA诱导的衰老内皮细胞比例显著下降。第三部分:AOPP-BSA通过抑制自噬介导HUVECs衰老1.以不同浓度AOPP-BSA刺激HUV

关键词：动脉粥样硬化 p53 SUMO化内皮细胞衰老凋亡逃逸自噬

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

阿司匹林抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用

引用

中国动脉硬化杂志 2014年第1期22卷 27-31页

作者：伊桐凝张锦于世家辽宁中医药大学附属医院内分泌科辽宁省沈阳市110031 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁省沈阳市110001

目的探讨阿司匹林是否具有抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别于正常糖浓度培养液(5.5 mmol/L)、高糖培养液和高糖(33 mmol/L)+阿司匹林(0.01、0.1、1及3 mmol/L)培养液中培养48 h,观察细胞形态... 详细信息

目的探讨阿司匹林是否具有抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别于正常糖浓度培养液(5.5 mmol/L)、高糖培养液和高糖(33 mmol/L)+阿司匹林(0.01、0.1、1及3 mmol/L)培养液中培养48 h,观察细胞形态、采用β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,PCR-ELISA检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧水平。结果高糖培养液作用HUVEC 48 h后,细胞呈现衰老状态,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数明显增加,端粒酶活性明显减低,细胞周期停滞于G0/G1期,S期显著减少,细胞内活性氧水平显著增加。0.01、0.1和1 mmol/L阿司匹林作用后细胞形态改善,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少,端粒酶活性增强,S期细胞显著增加,细胞内活性氧水平降低(P<0.05)。而3 mmol/L阿司匹林作用后与高糖组相比差异无显著性。结论高糖环境下阿司匹林(0.01、0.1和1 mmol/L)具有抗内皮细胞衰老的作用,其作用机制可能与氧化应激有关。

关键词：阿司匹林内皮细胞衰老端粒酶细胞周期活性氧

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

阿司匹林抗高糖诱导内皮细胞衰老过程中对一氧化氮-一氧化氮合酶系统的影响

引用

中国糖尿病杂志 2014年第9期22卷 841-845页

作者：伊桐凝张锦于世家辽宁中医药大学附属医院内分泌科沈阳110031 中国医科大学附属第一医院内分泌科

目的探讨阿司匹林是否通过影响一氧化氮（NO）-一氧化氮合酶（NOS）系统发挥抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用. 方法人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分别于正常糖浓度培养液（5.5 mmol/L）、高糖培养液（33 mmol/L）、含阿司匹林（0.01... 详细信息

目的探讨阿司匹林是否通过影响一氧化氮（NO）-一氧化氮合酶（NOS）系统发挥抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用. 方法人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分别于正常糖浓度培养液（5.5 mmol/L）、高糖培养液（33 mmol/L）、含阿司匹林（0.01～1mmol/L）培养液及含L-NAME（300 μmol/L）培养液中培养48 h.采用β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平.Griess法检测细胞总NO水平,荧光酶标仪检测细胞内NOS活性.Westernblot分析eNOS蛋白及eNOS人丝氨酸（Ser-1177）蛋白表达. 结果高糖作用内皮细胞48 h后与正常糖浓度相比,SA-β-gal阳性细胞数明显增多.阿司匹林剂量依赖性地减少SA-β-gal阳性细胞数,降低ROS的水平,升高NO的水平、总NOS活性和eNOS Ser-1177蛋白表达（P＜0.05）.L-NAME（NOS的抑制剂）能完全抑制高糖环境下阿司匹林的上述作用（P＜0.05）.各组间eNOS总蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论高糖环境下阿司匹林通过提高细胞NOS活性而升高NO水平,降低氧化应激反应而发挥抗衰老作用.

关键词：阿司匹林高糖内皮细胞衰老活性氧簇一氧化氮

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于PPARγ/NF-κB通路探讨益气活血方及益气活血养阴方对Ang Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞衰老的影响

基于PPARγ/NF-κB通路探讨益气活血方及益气活血养阴方对Ang Ⅱ...

引用

作者：吴烨中国中医科学院

学位级别：硕士

多数心血管疾病的发生发展过程中都伴随有血管老化的现象,延缓血管老化是防治心血管疾病的重要策略之一。血管内皮细胞衰老是血管老化的始发环节,在血管老化的发生发展中有重要作用。因此,从内皮细胞衰老的分子机制入手,研究血管老化的... 详细信息

多数心血管疾病的发生发展过程中都伴随有血管老化的现象,延缓血管老化是防治心血管疾病的重要策略之一。血管内皮细胞衰老是血管老化的始发环节,在血管老化的发生发展中有重要作用。因此,从内皮细胞衰老的分子机制入手,研究血管老化的变化一直是心血管疾病与衰老关系的研究热点,对防治心血管疾病具有重要意义。高血压病是常见的心血管病之一,其发生发展的过程中伴有血管老化、血管重构的不断出现,故高血压病可作为血管老化的疾病模型用于衰老研究。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone System,RAAS)的激活与高血压的发生密切相关,其主要成分血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)能诱导血管内皮细胞衰老,增加炎性因子表达,引起血管损伤。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisomeproliferator-activated receptor gamma,PPAR γ)通过调节核因子κB(Nuclearfactorkappa-B,NF-κB)表达抑制细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶和黏附分子等分泌,改善血管的炎症反应,并可能影响高血压病过程中血管老化的发生。因此,从PPAR γ/NF-κB炎症通路入手,研究血管老化过程中AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老的变化,并使用中药干预治疗,对防治高血压疾病具有重要意义。课题组前期研究证实,益气活血方可通过激活PPARγ通路延缓Ang Ⅱ诱导的内皮细胞衰老并延缓自然衰老大鼠的血管老化,益气活血养阴方可延缓D-gal诱导的小鼠血管老化。本研究通过构建AngⅡ诱导HUVECs衰老模型,以PPAR γ/NF-κB炎性通路为切入点,探索益气活血方和益气活血养阴方对AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老的干预作用,从细胞水平阐明益气活血方和益气活血养阴方延缓血管老化的作用机制。研究一益气活血方及益气活血养阴方对Ang Ⅱ诱导的HUVECs衰老的干预研究目的:构建Ang Ⅱ诱导HUVECs衰老模型,观察益气活血方和益气活血养阴方对血管内皮细胞衰老的影响。方法:通过用不同浓度AngⅡ干预HUVECs48h,实验分为空白组、模型组、10-4 mol/L、10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L,确定Ang Ⅱ最佳诱导衰老浓度。利用细胞衰老-β-半乳糖苷酶(Senescence-associated-β-Galactosidase,SA-β-gal)荧光染色法比较荧光值高低,细胞周期分析法观察各期细胞比例,Western blot法检测p16蛋白表达情况。确定最佳诱导衰老浓度后,分别用不同浓度的益气活血方和益气活血养阴方提前12h干预细胞,再与AngⅡ同时处理细胞48h,每12h换药,通过SA-β-gal荧光染色法比较荧光值变化,确定益气活血方和益气活血养阴方最适宜的延缓衰老的浓度。采用10-6 mol/LAngⅡ诱导细胞衰老,100mg/L作为益气活血方和益气活血养阴方的干预浓度,分为空白组、模型组、RSC组、仅RSC组(不加造模药)、RSCS组、仅RSCS组(不加造模药)、替米沙坦组、DMSO组8个组。采用SA-β-gal化学染色法和荧光染色法检测细胞衰老程度,细胞周期分析确定各期细胞比例,免疫荧光、Western blot法检测p16、p53蛋白表达情况。结果:(1)与空白组对比,10-6 mol/L AngⅡ组光镜下出现衰老形态变化,SA-β-gal染色荧光值升高(p<0.001),细胞周期停滞于G0/G1比例升高,处于S期细胞比例下降,p16蛋白比例上升(p<0.01);筛选中药最佳干预浓度时,100mg/L益气活血方组和益气活血养阴方组均能降低SA-β-gal染色荧光值(p<0.05,p<0.01);(2)正式实验中,与空白组相比,模型组细胞SA-β-gal蓝染率、荧光值均升高,细胞处于G0/G1期比例升高,处于S期比例下降(p<0.001),p16蛋白荧光表达升高(p<0.05),p53蛋白荧光表达升高(p<0.01),p16蛋白含量表达升高(p<0.001),p53蛋白含量表达升高(p<0.01);与模型组相比,RSC组SA-β-gal蓝染率及荧光强度下降,细胞周期中G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升(p<0.001),RSC组p16、p53荧光值下降(p<0.01),p16、p53蛋白含量降低(p<0.001);RSCS组SA-β-gal蓝染率及荧光值下降,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升,p53荧光值下降,p16蛋白含量降低(p<0.001),p53蛋白含量下降(p<0.01)。结论:10-6 mol/L的Ang Ⅱ刺激48 h可加速HUVECs衰老进程,100 mg/L的益气活血方和益气活血养阴方能够延缓HU

关键词：益气活血方益气活血养阴方内皮细胞衰老炎症 PPAR γ/NF-κB信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：