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藏酋猴精液深低温冻存的研究──不同的冷冻程序、冷冻稀释保存液冻存效果的比较

动物学报 1994年第2期40卷 174-181页

作者：陈建春季维智杨上川施立明中国科学院昆明动物研究所昆明650223

以存活率（ＳＲ）、复苏运动度（ＲＭ）、ＳＰＡ为精子活力检测指标，对四种冷冻程序ＰＳＦ、Ｈ３Ｐ、ＬＰ、ＭＤＰ和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴（Ｍａｃａｃａｔｈｉｂｅｔａｎａ）精液冻存比较研究。ＰＳＦ的ＳＲ... 详细信息

以存活率（ＳＲ）、复苏运动度（ＲＭ）、ＳＰＡ为精子活力检测指标，对四种冷冻程序ＰＳＦ、Ｈ３Ｐ、ＬＰ、ＭＤＰ和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴（Ｍａｃａｃａｔｈｉｂｅｔａｎａ）精液冻存比较研究。ＰＳＦ的ＳＲ为９０．１±１．９％，ＲＭ为６３．８±２．８％，显著高于其他三种冷冻程序（Ｐ＜０．０１）。卵黄冷冻稀释保存液（ＭＤＭ）的ＳＲ（９５．４±１．３％）和ＲＭ（８８．０±１０．２％）显著高于无卵黄防冻液（ＦＣＳ－Ｇ／ＴＨ）的ＳＲ（９０．１±１．９％）和ＲＭ（６３．６±２．８％），但前者在复苏一小时后，ＲＭ（１２．５±１．６％）明显低于后者的ＲＭ（５４．７±２．２％）。用ＦＣＳ～Ｇ／ＴＨ冻存的精液经ＳＰＡ检测，其穿透率为新鲜精子的５１．９％。结果提示：１）慢速降温冷冻程序适于藏酋猴精液冻存；２）卵黄冷冻稀释保存液能较好地保存藏酋猴精液的活动度；而无卵黄防冻液则有利于延长其冷冻精子的运动寿命。这可能与两者的稀释液及所含的脂蛋白不同有关。

关键词：藏酋猴精液冷冻程序低温

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奶绵羊精液冷冻程序的探索与研究

奶绵羊精液冷冻程序的探索与研究

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作者：王俊琴内蒙古大学

学位级别：硕士

冻精的生产和应用可实现优秀家畜种质资源的长期保存和充分利用,并提高杂交改良的效率。绵羊精子对低温敏感,绵羊精液冷冻技术的进展缓慢,目前还无法支撑其产业化应用。戴瑞羊(Dairy Meade)是新西兰培育的新型专门化乳用绵羊品种。本研... 详细信息

冻精的生产和应用可实现优秀家畜种质资源的长期保存和充分利用,并提高杂交改良的效率。绵羊精子对低温敏感,绵羊精液冷冻技术的进展缓慢,目前还无法支撑其产业化应用。戴瑞羊(Dairy Meade)是新西兰培育的新型专门化乳用绵羊品种。本研究以三只戴瑞羊(N、N和N)的精液为研究材料,基于OptiXcell(IMV)商品化稀释液,在冷冻程序的-10℃100℃危险温度区间内设置了8个降温速率(30℃/min,40℃/min,50℃/min,60℃/min,70℃/min,80℃/min,90℃/min,100℃/min)以生产细管冻精,并以冻后精子的活率、运动能力、顶体完整性、质膜完整性、线粒体膜完整性、未凋亡精子比例和体外受精后胚胎的卵裂率为评价指标,筛选适合戴瑞羊的冷冻程序。实验结果如下:1)N、N和N三只戴瑞种公羊的原精质量无显著差异,30℃/min和100℃/min组的冻精解冻后活力显著低于其他组;2)60℃/min组的精子VCL、VAP和快速运动精子比例显著高于其他组;3)60℃/min和70℃/min两组的顶体完整率显著高于其他组(N和N)或与80℃/min组差异不显著但显著高于其他组(N);4)60℃/min组的质膜完整率与70℃/min和80℃/min组差异不显著但显著高于其他组(N),或与80℃/min组差异不显著但显著高于其他组(N和N);5)60℃/min和70℃/min两组的线粒体膜完整性显著好于其他组;6)60℃/min组的未凋亡精子比例显著高于其他组(N)或与70℃/min组差异不显著但显著高于其他组(N和N);7)60℃/min组的精子用于IVF实验的卵裂率与40℃/min组差异不显著,但显著高于30℃/min和80℃/min组。综合3只戴瑞种公羊8组降温速率下7个指标的结果,-10℃100℃危险温度区间内60℃/min的降温速率是最适合戴瑞羊精液冷冻的程序。本研究为戴瑞奶绵羊细管冻精的生产提供了理论依据。

关键词：戴瑞羊冷冻程序细管冻精体外受精

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鸡精液冷冻稀释液筛选和冷冻程序的研究

鸡精液冷冻稀释液筛选和冷冻程序的研究

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作者：王世银甘肃农业大学

学位级别：硕士

本论文从冷冻稀释液的筛选、优化和冷冻程序几个方面对鸡精液冷冻技术进行了研究。对于稀释液的筛选,本文先设计了8个冷冻稀释液基础液,分别进行大量的冷冻试验,最终筛选出一个冷冻效果较好的稀释液基础液,然后再对该基础液从渗透压,抗... 详细信息

本论文从冷冻稀释液的筛选、优化和冷冻程序几个方面对鸡精液冷冻技术进行了研究。对于稀释液的筛选,本文先设计了8个冷冻稀释液基础液,分别进行大量的冷冻试验,最终筛选出一个冷冻效果较好的稀释液基础液,然后再对该基础液从渗透压,抗冻剂种类及添加浓度,卵黄、咖啡因和维生素E等物质的添加等方面进行了较为系统的优化,得到了一个冷冻效果较好的稀释液。然后又对影响精液冷冻效果的另一个因素——冷冻工艺从降温速度,平衡时间和冷冻剂型等方面进行了研究,确定了一个较为合理的冷冻程序。具体的试验结果如下: 1.渗透压为422mOsm,pH为6.48的1号稀释液基础液冷冻效果最好,精子冻后活力达到0.72,精子复苏率达90.0%,存活时间达60min,极显著地高于其它液体。 2.渗透压为420mOsm时精子的冻后活力、复苏率和存活时间分别为0.70、87.5%和75min,均极显著地高于渗透压为330mOsm、360mOsm、390mOsm、400mOsm、440mOsm时的冻后活力和复苏率(p<0.01)。 3.鸡精液冷冻时的最佳抗冻剂为浓度为6%的甘油,其次为浓度为6%的DMSO,最后为浓度为10%的DMA和浓度为4%的乙二醇。联合抗冻剂冷冻效果与单一抗冻剂差异不显著。 4.添加10%的卵黄、5mmol/L的咖啡因和15mg/mL的维生素E可显著地提高精子的冻后活力和复苏率。 5.在鸡精液冷冻时,降温速度控制在0.55℃/min,在4℃下平衡120min冷冻效果较好。 6.冷冻剂型以颗粒冻精为好。 7.鸡冷冻精液的解冻以干解冻效果较好,一次解冻的精液颗粒数应尽可能少。 8.高温解冻的解冻效果优于温水解冻(30℃～40℃)和低温冰水解冻(0℃～5℃),本试验中采用70℃高温解冻效果较好。 9.采用离心去除甘油时,离心速度应控制在800rpm为宜。

关键词：鸡精液冷冻稀释液抗冻剂冷冻程序

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不同冷冻程序和冷冻保护剂对延边奶山羊耳部成纤维细胞冷冻效果的影响

不同冷冻程序和冷冻保护剂对延边奶山羊耳部成纤维细胞冷冻效果的...

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作者：于昊嬴延边大学

学位级别：硕士

动物体细胞核移植技术是哺乳动物胚胎工程的主要组成部分，是实现动物克隆的有效方法[1][2]。在畜牧产业和转基因动物的生产中有着极其广阔的应用前景。然而动物体细胞的体外培养是动物克隆中非常重要的一环，但是由于哺乳动物体细胞从... 详细信息

动物体细胞核移植技术是哺乳动物胚胎工程的主要组成部分，是实现动物克隆的有效方法[1][2]。在畜牧产业和转基因动物的生产中有着极其广阔的应用前景。然而动物体细胞的体外培养是动物克隆中非常重要的一环，但是由于哺乳动物体细胞从动物体分离后，在体外的生存期正常不会超过一年,而且还可能因为频繁传代导致遗传物质的变异,因此在常规体外培养条件下的细胞很难无限期保持原质量。如果采取适当的方法，将体外培养的细胞在超低温条件下保存,即可使细胞的生命力固定在某一阶段而不衰老死亡,对动物克隆研究具有非常重要的价值。\n 本实验以延边奶山羊耳部成纤维细胞为研究对象，采用组织块加酶消化培养法进行原代培养，细胞成功扩增培养到5-6代后，用于冷冻保存实验。实验的目的是通过确定延边奶山羊耳部成纤维细胞的最佳冷冻保存程序以及冷冻保护剂，来建立一套适合延边奶山羊的冷冻体系，从而对这一优良地方奶山羊品种进行必要的保存，为以后应用体细胞核移植方法重新扩繁该品系提供重要材料。实验设计和结果如下：\n 1、选择4种不同的冷冻保护程序（①4℃放30分钟、-20℃2小时、液氮口10分钟后投入液氮②4℃放30分钟、液氮口2小时后投入液氮③液氮口放20分钟后投入液氮④直接投入液氮），结果表明方法2和方法3差异不显著，方法2解冻后细胞复苏效果最好，细胞活率及培养24小时后细胞贴壁率均优于其他方法。\n 2、选取5%、7.5%、10%和12.5%四个浓度的DMSO（二甲基亚砜）对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存，结果显示7.5%组冷冻复苏后细胞存活率达到67.3%，培养24小时后贴壁率可达到65.9%，结果均高于其他各组。\n 3、选取5%、10%、15%和20%四个浓度的GC（甘油）对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存，结果显示15%组冷冻复苏后细胞存活率达到63.8%，培养24小时后贴壁率可达到63.3%，结果均高于其他各组。\n 4、选取5%、10%、15%和20%四个浓度的EG（乙二醇），对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存。结果表明，15%组冷冻复苏后细胞存活率达到\n 5、61.8%，培养24小时后贴壁率可达到60.7%，结果均高于其他各组。\n 6、从生长曲线可以看出，冷冻后延边奶山羊耳部成纤维细胞，传代后滞留期短，约1～2天，到达对数生长期，持续六天左右，第7天达到高峰，之后是生长抑制期出现死亡，细胞数量开始减少，进入平台期，冻存后细胞的生长规律与未进行冷冻细胞的基本一致。

关键词：冷冻程序冷冻保护剂奶山羊成纤维细胞冷冻效果细胞核移植动物克隆

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两种冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻效果的比较

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中国比较医学杂志 2009年第10期19卷 47-50页

作者：杨博刘丽均高娟贾青郁丽丽施恩靳亚平西北农林科技大学动物医学院杨陵712100 斯莱克实验动物有限责任公司上海201615

目的比较不同冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻保护的影响,以期提高兔精子冷冻保存的效果和效率。方法用三步降温法(程序Ⅰ)和两步降温法(程序Ⅱ)两种冷冻程序与终浓度分别为2%,3%,4%,5%的甘油和乙酰胺两种冷冻保护剂配合进行精液冷冻... 详细信息

目的比较不同冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻保护的影响,以期提高兔精子冷冻保存的效果和效率。方法用三步降温法(程序Ⅰ)和两步降温法(程序Ⅱ)两种冷冻程序与终浓度分别为2%,3%,4%,5%的甘油和乙酰胺两种冷冻保护剂配合进行精液冷冻保存,统计精子复苏率。结果使用程序Ⅱ添加3%乙酰胺的冷冻保护剂实验组的精子复苏率较高,同其它组比较差异有显著性意义(P<0.05);程序Ⅱ比程序Ⅰ节省约70%的时间,同种浓度冷冻保护剂的不同冷冻程序组之间精子复苏率差异无显著性意义(P>0.05)。结论程序Ⅱ与3%乙酰胺配合可以取得良好的冷冻保存效果;用程序Ⅱ进行兔精液冷冻保存可以大幅缩短操作时间。

关键词：兔精子冷冻冷冻程序冷冻保护剂

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不同冷冻程序对萨能奶山羊精液质量的影响

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中国奶牛 2022年第9期 42-46页

作者：王广李德娴张永涛邹家浩李雪清袁宇欣余梦琦陈璐李广西北农林科技大学动物科技学院奶羊产业技术创新实验室杨凌712100

为了探究萨能奶山羊细管冻精最适冷冻程序,本试验设置5个不同的冷冻程序[在5~-10℃温区内,各组降温速率相同(6℃/min),在-10~-140℃危险温区内设置5个不同梯度的降温速率(25℃/min,35℃/min,40℃/min,55℃/min,65℃/min)]用于程序化冷... 详细信息

为了探究萨能奶山羊细管冻精最适冷冻程序,本试验设置5个不同的冷冻程序[在5~-10℃温区内,各组降温速率相同(6℃/min),在-10~-140℃危险温区内设置5个不同梯度的降温速率(25℃/min,35℃/min,40℃/min,55℃/min,65℃/min)]用于程序化冷冻中。试验利用全自动细管精液程控冷冻仪编制冷冻程序,通过casa系统测定精液在不同冷冻程序下精子活力变化,同时利用特异性荧光探针(异硫氰酸镧-花生凝集素,FITC-PNA)检测解冻后精子顶体完整率,用低渗精子肿胀法(HOST)检测解冻后精子质膜完整率。结果表明,冷冻程序C组(5~-10℃,降温速率6℃/min;-10~-140℃,降温速率40℃/min)解冻后精子活力、质膜完整率和顶体完整率最高,分别达到60.75%、38.10%和71.01%,均显著高于其他组(P<0.05)。在危险温区内,降温速率为40℃/min可以较好地保证冷冻萨能奶山羊精子的活力和质膜功能,同时利用程序化冷冻程序C组可显著提高精子的受精能力,C组的降温速率可以提高冷冻萨能奶山羊解冻后精液质量。

关键词：萨能奶山羊降温速率冷冻程序精子活力

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一种干细胞冷冻程序降温盒

一种干细胞冷冻程序降温盒

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作者：项雅莉殷瑛曾强罗玉东杜海彪彭芳霁 430075 湖北省武汉市高新大道666号光谷生物城B6栋

本实用新型涉及一种干细胞冷冻程序降温盒，包括盒体和设在盒体顶部的盒盖，盒体底部安装有第一固定环，第一固定环两侧对称设置有两个弧形滑槽。本实用新型的有益效果是：当需要携带多个降温盒时，可将其中一个降温盒的第二固定环套入... 详细信息

标准号: CN215189025U

本实用新型涉及一种干细胞冷冻程序降温盒，包括盒体和设在盒体顶部的盒盖，盒体底部安装有第一固定环，第一固定环两侧对称设置有两个弧形滑槽。本实用新型的有益效果是：当需要携带多个降温盒时，可将其中一个降温盒的第二固定环套入到另一个降温盒的第一固定环内，并使第一固定块沿着通槽进入弧形滑槽内，然后转动第二固定环使第一固定块在弧形滑槽内滑动，最后将第一固定块固定在第二固定槽内，依次可将多个降温盒连接，方便携带多个降温盒，当需要将降温盒叠放在冷冻室内时，可将其中一个降温盒的第一固定块固定在另一个降温盒的第一固定槽内，依次可将多个降温盒叠放在一起，防止倾倒。

关键词：降温盒固定环固定块弧形滑槽本实用新型固定槽盒体对称设置固定环套盒体顶部冷冻程序携带干细胞滑动盒盖通槽冷冻转动倾倒室内

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一种干细胞冷冻程序降温盒

一种干细胞冷冻程序降温盒

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作者：谭汝福 611730 四川省成都市高新区新航路1号附10号

本实用新型公开了一种干细胞冷冻程序降温盒，包括降温盒，降温盒的内部开设有内腔，降温盒的表面开设有插槽，插槽的一端与内腔相连通设置，该内腔的底部等间距开设有样本槽，内腔的中部垂直焊接设有固定杆；定位槽与降温盒内部所设置... 详细信息

标准号: CN207784126U

本实用新型公开了一种干细胞冷冻程序降温盒，包括降温盒，降温盒的内部开设有内腔，降温盒的表面开设有插槽，插槽的一端与内腔相连通设置，该内腔的底部等间距开设有样本槽，内腔的中部垂直焊接设有固定杆；定位槽与降温盒内部所设置的样本槽的孔径相同，样本试管可直接贯穿定位槽并卡设在样本槽的内部，达到双层固定的效果；当样本试管数量较多时，可旋转插板，使得定位槽的数量相对变多，且固定效果明显，相较于传统技术，节省了空间；在插板的端部设有滑块，滑块滑动卡设在降温盒内部开设有的滑槽中，使得插板能稳定旋转，同时起到固定插板的作用。

关键词：降温盒定位槽样本槽插板内腔样本试管插槽滑块本实用新型内腔相连通表面开设垂直焊接固定插板固定效果冷冻程序双层固定干细胞固定杆滑动卡可旋转滑槽贯穿

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一种全自动多步程序冷冻仪

一种全自动多步程序冷冻仪

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作者：燕海峰张佰忠张翠永易康乐朱立军王坤李剑波黄军生 410131 湖南省长沙市芙蓉区长榔路8号湖南省畜牧兽医研究所

本发明公布了一种全自动多步程序冷冻仪，属于生物技术领域，它包括箱体，箱盖，动力装置，箱体内部为空腔无盖结构，底部设置有顶出斜块；箱盖上设置有主杆导孔和支架，安装有动力装置和温控装置。本发明的目的是，解决现有设备细胞冷... 详细信息

标准号: CN104488851A

本发明公布了一种全自动多步程序冷冻仪，属于生物技术领域，它包括箱体，箱盖，动力装置，箱体内部为空腔无盖结构，底部设置有顶出斜块；箱盖上设置有主杆导孔和支架，安装有动力装置和温控装置。本发明的目的是，解决现有设备细胞冷冻保存过程中，冷冻室的所有样品只能执行同一套冷冻程序，要么依赖进口，要么需要人工操作，主观性强、精度低、劳动力成本高，设备容器结构复杂，不利于取样和清洁仪器，试验完成取出样品才能进行下次试验等问题，提供一种冷冻速率达到甚至高于-70℃/min，冷冻室中同批样品有多套冷冻速率，精度高，全自动，自主研发生产、成本较低，容器结构简单，利于取出样品、清洁仪器，可多次试验后统一取出样品的细胞冷冻装置。

关键词：冷冻室动力装置冷冻速率清洁仪器细胞冷冻箱盖试验生物技术领域劳动力成本程序冷冻冷冻程序人工操作容器结构设备容器温控装置箱体内部自主研发杆导孔主观性顶出空腔取样无盖支架底部依赖进口

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一种全自动多步程序冷冻仪

一种全自动多步程序冷冻仪

引用

作者：燕海峰张佰忠张翠永易康乐朱立军王坤李剑波黄军生 410131 湖南省长沙市芙蓉区长榔路8号湖南省畜牧兽医研究所

标准号: CN104488851B

本发明公布了一种全自动多步程序冷冻仪，属于生物技术领域，它包括箱体，箱盖，动力装置，箱体内部为空腔无盖结构，底部设置有顶出斜块；箱盖上设置有主杆导孔和支架，安装有动力装置和温控装置。本发明的目的是，解决现有设备细胞冷冻保存过程中，冷冻室的所有样品只能执行同一套冷冻程序，要么依赖进口，要么需要人工操作，主观性强、精度低、劳动力成本高，设备容器结构复杂，不利于取样和清洁仪器，试验完成取出样品才能进行下次试验等问题，提供一种冷冻速率达到甚至高于?70℃/min，冷冻室中同批样品有多套冷冻速率，精度高，全自动，自主研发生产、成本较低，容器结构简单，利于取出样品、清洁仪器，可多次试验后统一取出样品的细胞冷冻装置。

关键词：冷冻室取出动力装置清洁仪器箱盖冷冻生物技术领域细胞冷冻保存细胞冷冻装置程序冷冻仪劳动力成本多次试验冷冻程序人工操作容器结构设备容器温控装置现有设备箱体内部研发生产杆导孔主观性试验顶出空腔取样无盖斜块支架进口统一

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