检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医文摘 2006年第5期22卷 31-31页

作者：焦凤超焦新安潘志明

将运送H5亚型禽流感病毒DNA疫苗重组减毒鼠伤寒沙门氏菌以1.0×10^(10)CFU剂量口服接种1日龄SPF雏鸡,结果表明,重组菌对雏鸡具有良好的安全性。将重组菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)以2×10~9CFU的剂量两次口服免疫1... 详细信息

将运送H5亚型禽流感病毒DNA疫苗重组减毒鼠伤寒沙门氏菌以1.0×10^(10)CFU剂量口服接种1日龄SPF雏鸡,结果表明,重组菌对雏鸡具有良好的安全性。将重组菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)以2×10~9CFU的剂量两次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,同时,将重组菌分别与pVAX1-IFN-7或pVAX1-IL_2(200,ug/只)联合免疫,通过测定小肠粘膜抗体效价,结果显示。

关键词：禽流感病毒流感病毒群亚型 H5 减毒鼠伤寒沙门氏菌重组菌疫苗菌苗 DNA

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减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤基因治疗载体的低毒性和靶向性研究

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世界感染杂志 2009年第2期9卷 118-118页

作者：周易明刘常星邬剑华王依婷陈宗祐复旦大学附属华山医院外科上海200040 华东师范大学新药创制先进技术研究院上海200062

目的研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性。方法将野生型沙门氏菌（对照组）和VNP20009（研究组）分别通过尾静脉注射感染正常小鼠，观察其生存期差别；将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP... 详细信息

目的研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性。方法将野生型沙门氏菌（对照组）和VNP20009（研究组）分别通过尾静脉注射感染正常小鼠，观察其生存期差别；将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）标记VNP20009，红色荧光蛋白（red fluorescent protein，RFP）和GFP分别标记小鼠前胃癌细胞（mouse forestomach carcinoma cell，MFC）的胞质和胞核，尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠，以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况。结果接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4d全部死亡、而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10d依然全部存活；VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂；在体实验中，感染后第6天，正常组织中的细菌明显减少，到第18天时几乎消失，但在肿瘤组织中依然持续增殖。细菌在肿瘤／正常组织（肝脏）中的比例在感染后第4天约为224：1，第6天为1020：1。结论基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性，具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌离体肿瘤细胞基因治疗载体靶向性研究低毒性 protein carcinoma 尾静脉注射

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用体内激活的启动子调控HCV核心抗原表达可增强重组鼠伤寒沙门氏菌的免疫原性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 266-270页

作者：赵平柯屾王宏卫钱锋戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学病原生物学教研室第二军医大学微生物学教研室北京100853 解放军总医院基础医学研究所

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答 ,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子 ,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒 ,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中。体外培养时 ,Mg2 +能够剂量依... 详细信息

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答 ,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子 ,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒 ,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中。体外培养时 ,Mg2 +能够剂量依赖性抑制该重组菌表达HCV核心抗原。将该重组菌和组成性表达的重组菌分别口服接种BALB/c小鼠 ,观察质粒的稳定性和小鼠的免疫应答。结果表明 ,体内激活的pagC基因启动子能明显提高质粒在重组鼠伤寒沙门氏菌中的稳定性和增强重组菌诱导的体液和细胞免疫应答 ,这为发展高效免疫、成本低廉的口服丙肝疫苗提供了一个新思路

关键词：体内激活的启动子减毒鼠伤寒沙门氏菌丙型肝炎病毒免疫应答

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生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究

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中国药学杂志 2011年第6期46卷 410-414页

作者：王晓利李银聚廖成水程相朝张春杰吴庭才河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌... 详细信息

目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4μ***-1,活性相当于50.2μ***-1标准品t-PA。结论研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 apo—t—PA基因卵黄

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稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性

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病毒学报 2008年第1期24卷 41-46页

作者：潘志明黄金林程宁宁崔一晨游猛唐丽华张晓明焦新安刘秀梵扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙... 详细信息

采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-F)。体内、体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-F在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-F。将重组菌SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)分别以1×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫4日龄SPF鸡,免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和小肠黏膜抗体效价水平与空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。免疫保护试验结果显示,SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异(P<0.05),且SL7207(pmcDNA3.1-F)免疫组的保护率较SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组提高了20.0%,说明稳定携带新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

关键词：新城疫 DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力

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稳定携带H5亚型禽流感病毒候选DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性

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微生物学报 2007年第4期47卷 662-666页

作者：唐丽华潘志明程宁宁焦新安张晓明黄金林扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

采用PCR技术从重组质粒pVAX1-HA扩增出禽流感病毒JSGO(H5N1)株的血凝素(HA)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-HA。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207*,构建成功携带DNA疫苗的... 详细信息

采用PCR技术从重组质粒pVAX1-HA扩增出禽流感病毒JSGO(H5N1)株的血凝素(HA)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-HA。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207*,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207*(pmcDNA3.1-HA)。经体内体外试验证实,重组质粒pmcDNA3.1-HA在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-HA。将重组菌SL7207*(pmcDNA3.1-HA)和SL7207*(pcDNA3.1-HA)分别以2×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对禽流感病毒HA蛋白的黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫试验鸡,免疫鸡的小肠样品中可测到针对禽流感病毒HA蛋白的黏膜抗体,且SL7207*(pmcDNA3.1-HA)免疫组的抗体效价高于SL7207*(pcDNA3.1-HA)免疫组。免疫保护试验结果显示,SL7207*(pmcDNA3.1-HA)和SL7207*(pcDNA3.1-HA)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异(P<0.05),且SL7207*(pmcDNA3.1-HA)免疫组的保护率较SL7207*(pcDNA3.1-HA)免疫组提高了22.6%,说明稳定携带H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

关键词：禽流感 DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力

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减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究(英文)

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2006年第3期32卷 237-244页

作者：迪卡陈雪燕帅江冰陈宁方维焕浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310029

本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于... 详细信息

本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol?L-1,增加浓度至0.75 mmol?L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol?L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 ***细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌大肠杆菌重组质粒增强型绿色荧光蛋白

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表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒沙门氏菌株的构建

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 187-190页

作者：宁元元毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋... 详细信息

目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况。并观察重组菌体外培养的稳定性。结果利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经Tricine-SDS-PAGE电泳出现了1条Mr约21000的蛋白条带,Westen-blot检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌平衡致死系统 EHEC O157:H7

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口服减毒沙门氏菌传递shRNA表达载体在抗肿瘤治疗中的应用及前脑特异转录因子Fezf2对斑马鱼多种神经元协调发育的调控

口服减毒沙门氏菌传递shRNA表达载体在抗肿瘤治疗中的应用及前脑...

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作者：杨楠复旦大学

学位级别：博士

第一部分口服减毒沙门氏菌传递shRNA表达载体在抗肿瘤治疗中的应用RNA干扰是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的机制,双链RNA (dsRNA)经剪切后通过碱基互补配对被定位到同源mRNA转录本,导致靶标基因表... 详细信息

第一部分口服减毒沙门氏菌传递shRNA表达载体在抗肿瘤治疗中的应用 RNA干扰是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的机制,双链RNA (dsRNA)经剪切后通过碱基互补配对被定位到同源mRNA转录本,导致靶标基因表达被抑制,即所谓的转录后基因沉默。从RNA干扰机制被阐明至今,RNA干扰技术已成为一种普遍采用的基因组研究的实验工具,并被认为是一种极有潜力的疾病治疗手段。然而,尽管siRNA具备做为小分子药物的潜力,将siRNA引入临床却受到了siRNA的稳定性和传递时的靶向性问题的困扰。而表达shRNA的载体虽然能够在体外培养的细胞和动物体内介导长时间的RNA干扰,但表达载体的有效传递依然存在问题。随着肿瘤治疗学和细菌学研究的发展,减毒沙门氏菌载体系统作为治疗恶性肿瘤的呈递工具逐渐为人们所认识。通过口服或静脉注射,沙门氏菌能够有效地聚集到多种肿瘤中并抑制肿瘤生长,甚至可以追踪转移的肿瘤；此外,沙门氏菌还能将携带的外源DNA传递到肿瘤细胞中,发挥载体作用。考虑到沙门氏菌特有的靶向肿瘤和传递外源功能性DNA的能力,我们首次尝试了使用减毒沙门氏菌做为传递shRNA表达质粒的载体,在肿瘤细胞中介导基于DNA载体的RNA干扰策略。研究选取了在90%以上恶性黑色素瘤中表达,并通过抑制细胞凋亡导致肿瘤细胞高转移能力的基因bcl2为靶标基因,以减毒沙门氏菌为运输载体,经口服将携带表达特异shRNA的质粒载体导入荷瘤小鼠体内。实验结果显示,减毒沙门氏菌能聚集在肿瘤中,并将shRNA表达质粒传递到肿瘤细胞,引起荷瘤小鼠肿瘤细胞中bcl2基因的表达水平显著降低,瘤体生长受到抑制(p<0.01),小鼠寿命显著延长(p<0.05)。使用减毒沙门氏菌运输shRNA表达载体,在肿瘤细胞中诱发RNA干扰,特异性地沉默肿瘤发生过程中的关键基因,这一方法有效解决了shRNA表达质粒的肿瘤靶向性问题,同时利用减毒沙门氏菌的抗肿瘤效应,将两种强有力的肿瘤治疗手段结合起来,为提高癌症治疗方法的实用性和有效性进行了有益的探索。第二部分前脑特异转录因子Fezf2对斑马鱼多种神经元协调发育的调控脊椎动物中枢神经系统是生命体最为复杂的结构之一,神经系统的结构和机能单位是神经细胞(又称为神经元)。神经元的形态结构千差万别、数量定位也各不相同,并能合成分泌不同的神经递质、建立不同的连接模式。在发育过程中,不同的神经元是由共同的前体细胞产生的,我们对于调控前体细胞分化成不同类型神经元的机制所知极少。本课题选取了斑马鱼间脑神经发育为研究对象,探究了调控神经分化的机制,发现在进化中保守的前脑特异锌指结构转录因子Fezf2(又称为Fezl)能够调控间脑结节后和下丘脑区域(PT/H区域)多种神经元协调产生。Fezf2功能丧失不仅影响PT/H区域多巴胺能神经元、5-羟色胺能神经元和催产素能神经元的发育,也会导致该区域GABA神经元和其它一些Islet1阳性中间神经元的缺失；在早期神经元发育受损的同时,少突神经胶质细胞前体细胞标志之一Olig2的表达却增加了。进一步的分析发现,受Fezf2影响的PT/H区域多巴胺能神经元、5-羟色胺能神经元和GABA神经元在发育的相同阶段产生。与不同神经前体细胞分化和不同神经元命运相关的proneural基因neurogenin1和ascl1a以及在多巴胺能神经元中表达的otpb和在分化中的GABA神经元中表达的dlx2都是Fezf2作用的下游因子,表明Fezf2通过在发育早期建立表达不同proneural基因的神经前体细胞群体来协调不同类型神经元的发育,同时也能调控在特异神经元中表达的决定因子,在发育的不同阶段调控了神经细胞的命运。Fezf2激活前体细胞中proneural基因的表达能够活化相邻细胞中的Notch信号通路,而活化了的Notch信号通路则抑制fezf2的表达。由此可见,前脑特异的转录因子Fezf2能够调控多种神经元的协调发育并受到Notch信号通路的负反馈调控。事实上,存在于特定区域前体细胞中的调控因子(如前脑中的Fezf2)与Notch信号通路间的相互调控可能是在器官发育过程中协调不同类型细胞有序产生的普遍机制。

关键词： RNA干扰减毒鼠伤寒沙门氏菌 shRNA 肿瘤靶向性肿瘤治疗前脑特异锌指蛋白 fezf2 too few 斑马鱼神经分化多巴胺能神经元 5-羟色胺能神经元 GABA神经元 proneural基因 Notch信号通路

来源：评论

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减毒沙门菌介导的基于甲病毒复制子载体的自杀基因系统的抗肿瘤效应研究

减毒沙门菌介导的基于甲病毒复制子载体的自杀基因系统的抗肿瘤效...

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作者：陈智浩华中科技大学

学位级别：博士

自杀基因治疗系统如HSV-TK/GCV和CD/5-Fc系统是肿瘤基因治疗的手段之一,新发现的一种自杀基因系统-大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(ePNP)/2-氟-2-脱氧腺苷(F-dAdo)系统已被证实对肿瘤具有强大的杀伤效应。但是,仍然存在一些问题有待解决：1.... 详细信息

自杀基因治疗系统如HSV-TK/GCV和CD/5-Fc系统是肿瘤基因治疗的手段之一,新发现的一种自杀基因系统-大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(ePNP)/2-氟-2-脱氧腺苷(F-dAdo)系统已被证实对肿瘤具有强大的杀伤效应。但是,仍然存在一些问题有待解决：1.如何大量表达自杀基因,从而最大限度地提高前药的转化和利用效率。2.是否能够激发机体免疫系统产生明显的抗肿瘤效应。3.如何增加肿瘤治疗的靶向性。有研究显示,在表达载体中引入甲病毒复制子序列,能将外源抗原的表达效率提高数倍。减毒鼠伤寒沙门氏菌已经被确认能够选择性的在肿瘤组织里集聚,且能够顺利的将携带的真核表达质粒运输到肿瘤细胞中进行表达。结核杆菌热休克蛋白65能够通过其多肽结合阈与抗原结合形成抗原-肽复合物,进而被抗原呈递细胞以MHC-1分子的途径呈递,激活针对肿瘤的特异性的CTL细胞。本论文的第一部分,我们以质粒pSFVl为基础,首先构建了人巨细胞病毒(CMV)通用启动子调控下的DNA表达载体PSC-ePNP-mHsp65,然后将该载体导入到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,设计出自杀基因治疗系统SL/PSC-ePNP-mHsp65。通过体外感染肿瘤细胞,发现该系统能够高效率的表达外源基因,加入前药F-dAdo后利用细胞毒性实验和高效液相色谱法证实该系统在体外能够产生强大的杀伤肿瘤细胞的效应。体内实验结果则显示口服该重组细菌疫苗后,SL7207能优先在肿瘤组织中集聚,配合前药F-Ado能够对肿瘤细胞产生强大的杀伤作用,同时还能够引起强烈的细胞毒性T细胞反应,显著抑制肿瘤生长,甚至部分实现了对肿瘤的清除。为了进一步提高上面重组细菌疫苗的靶向性,我们在论文的第二部分中,构建了人端粒酶启动子(hTERT)调控下的DNA表达载体pShT-ePNP,利用SL7207能够在肿瘤组织中积聚的特性,双重靶向性地将构建好的质粒运输到肿瘤细胞中表达,体外实验证实该系统能在转录水平和蛋白水平高效率表达ePNP基因,加入前药F-Ado后引起细胞的广泛坏死,且呈良好的剂量和时间依赖性。动物实验也证实该自杀系统能够抑制肿瘤的生长和延长荷瘤鼠的生存期,具有良好的抗肿瘤效应和较好的安全性。

关键词：大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶 2-氟-2-脱氧腺苷西门利克森林病毒减毒鼠伤寒沙门氏菌热休克蛋白65 自杀基因

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