检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 460-465页

作者：岳丽琴周育森张庶民杨永弘沈叙庄北京儿童医院微生物及免疫室北京100045 军事医学科学院流行病研究所北京100071 中国药品生物制品检定所血清室北京100050

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白(SCPB)的表位,分段表达其中4个功能活性区域,并分析其免疫原性。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测SCPB的表位;分别构建C5a肽酶4个目的片段的重组表达质粒,经酶切测序正确后,转化E. ... 详细信息

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白(SCPB)的表位,分段表达其中4个功能活性区域,并分析其免疫原性。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测SCPB的表位;分别构建C5a肽酶4个目的片段的重组表达质粒,经酶切测序正确后,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量;并经镍柱亲和层析纯化,纯化的重组蛋白进行蛋白质谱分析和Western blot分析后,皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清抗体水平。结果经预测,SCPB含1个既可结合MHC又具有B细胞表位特征的肽段。构建的4个重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,目的蛋白主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%～70%。纯化的重组蛋白纯度可达90%,质谱分析表明与SCPB的相似性很高;Western blot分析表明,可与兔抗全长SCPB多克隆抗体反应。重组F1、FE、Fn蛋白免疫小鼠血清抗体滴度较高,三者差异无统计学意义;F2a蛋白抗体滴度最低,与F1、FE和Fn蛋白差异有统计学意义。结论已成功构建并高效表达了SCPB的4个功能活性区域;Fn是重要的免疫优势表位功能区;本文为B族链球菌毒力机制的研究及亚单位蛋白疫苗的研制奠定了基础。

关键词： B族链球菌 C5a肽酶表位分段表达免疫原性

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汉滩病毒S基因在Vero-E6细胞中的分段表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第2期20卷 88-91页

作者：潘蕾白雪帆黄长形李光玉王九平第四军医大学唐都医院传染科西安710038

目的　体外研究汉滩病毒 (HTNV)S基因及其 5’端、3’端表达的意义 ,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。方法　设计 2套引物 ,用PCR方法从PBV2 2 0 -S2 2原核质粒中扩增出S基因全读码框 (37- 132 6bp)及S基因 5’端 (37-5 0 1bp) ,S基... 详细信息

目的　体外研究汉滩病毒 (HTNV)S基因及其 5’端、3’端表达的意义 ,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。方法　设计 2套引物 ,用PCR方法从PBV2 2 0 -S2 2原核质粒中扩增出S基因全读码框 (37- 132 6bp)及S基因 5’端 (37-5 0 1bp) ,S基因 3’端 (5 0 2 - 132 6bp)用TA克隆将其克隆入 pcDNA3 1/V5 -His -TOPO载体中 ,成功构建 pcDNA3 1-S及pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C真核表达载体 ,并通过脂质体转染至Vero -E6细胞中 ,进行了瞬时表达。结果　间接免疫荧光成功检测到 pcDNA3 1-S及pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C在Vero -E6细胞中的表达。结论　pcDNA3 1-S及 pcDNA3 1-S -N、pcDNA3 1-S -C真核表达载体有较高的转染效率 ,目的基因能在宿主细胞中表达 ,有利于研究HTNV -S基因在T细胞表位研究中的意义。

关键词：汉滩病毒 S基因 Vero-E6细胞分段表达核蛋白

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猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2024年第1期56卷 91-97页

作者：陈东奇郑殿重魏志颖王莹李佳璇崔文姜艳平王晓娜周晗王丽乔薪瑗李一经唐丽杰单智夫东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省农业科学院畜牧所黑龙江哈尔滨150030

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Nsp6基因多克隆抗体分段表达真核表达

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水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达

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中国畜牧兽医 2014年第4期41卷 32-36页

作者：刘红娜王文玉张云杨宇航郝俊伟时坤李健明杜锐吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118

利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L... 详细信息

利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L3 N3基因,构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后,将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体,并转化入表达宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明,成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3,SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44ku的目的条带,与预期相符。Western blotting进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别,具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达,为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。

关键词：水貂阿留申病毒NS1基因大肠杆菌分段表达

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单增李斯特菌内化素A分段表达及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2015年第2期 137-139,237页

作者：谢小冬姜艳平崔文乔薪瑗唐丽杰刘敏李一经东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

为了研究单增李斯特茵（Listeria monocytogenes）InlA蛋白入侵细胞时各段相关功能，试验采用PCR技术扩增得到*** 08—5923株InlA基因片段，测序后利用GenBank对InlA氨基酸序列进行分段，分为2个基因片段，即InlAl（1-1488bp）和InlA2（... 详细信息

为了研究单增李斯特茵（Listeria monocytogenes）InlA蛋白入侵细胞时各段相关功能，试验采用PCR技术扩增得到*** 08—5923株InlA基因片段，测序后利用GenBank对InlA氨基酸序列进行分段，分为2个基因片段，即InlAl（1-1488bp）和InlA2（1315—2403bp），将其分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，并转化至宿主茵中诱导表达，表达的重组蛋白经Western—blot和间接ELISA法鉴定，用纯化的重组蛋白分别免疫家兔，并用ELISA法检测家兔多克隆抗体的特异性。结果表明：表达的2种重组蛋白分子质量分别约为79ku和64ku，以其制备的多克隆抗体均可与单增李斯特茵InlA天然蛋白发生反应；2种重组蛋白均能有效诱导抗体反应，其中InlA2（new flag）诱导产生的抗体效价较高，与单增李斯特茵InlA天然蛋白结合能力较强。

关键词：单增李斯特菌内化素A(InlA) 分段表达多克隆抗体入侵细胞功能分析

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单核细胞增生李斯特氏菌内化素A分段表达及主要功能区的确定

单核细胞增生李斯特氏菌内化素A分段表达及主要功能区的确定

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作者：谢小冬东北农业大学

学位级别：硕士

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes, LM)是一种人畜共患的兼性细胞内寄生菌,并且是20世纪末世界卫生组织WTO列为四种最重要的食源性病原微生物之一,分布广泛,易感人群较多,可引起人类和动物的脓血症、流产、脑膜炎和胃肠... 详细信息

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes, LM)是一种人畜共患的兼性细胞内寄生菌,并且是20世纪末世界卫生组织WTO列为四种最重要的食源性病原微生物之一,分布广泛,易感人群较多,可引起人类和动物的脓血症、流产、脑膜炎和胃肠炎等临床症状,同时也可以引起流产及通过胎盘引起新生儿的脓血症。其中InlA基因是LM的重要的毒力基因,InlA(内化素A)由800个氨基酸残基组成,为LM入侵人上皮细胞所必需,其受体为E-钙粘素,是最早鉴定出的与细菌侵袭相关的毒力因子,为被非吞噬细胞内化所必需,是LM所特有,不存于非致病性LM膜表面。制备针对单增李斯特菌膜表面蛋白InIA的高亲和力高特异性的抗体是建立研究LM侵入细胞时InlA各段蛋白重要性的基础。本研究通过克隆单核细胞增生李斯特氏菌特异性的膜表面蛋白InternalinA (InlA),获得LM特异性的膜表面蛋白InlA抗体,分析其氨基酸组成和蛋白结构,经免疫家兔获得多克隆抗体,从而分段制备LM特异性的抗体。为研究与分析InlA蛋白入侵细胞时各段相关蛋白发挥的作用奠定了物质基础。利用生物软件设计单核细胞增生李斯特氏菌InlA基因的引物,PCR扩增获得LM08-5923株InlA基因片段,测序后利用Genbank对InlA氨基酸序列的描述进行分段,分为2个基因片段InlA-1(1bp-1488bp)和InlA-2(1315bp-2403bp)分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将重组质粒与分子伴侣质粒pG-KJE8共同转化到BL21中,并用终浓度为lmg/mL L-β可拉伯糖和lmmol/L的IPTG进行分步诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。纯化表达产物后免疫家兔,并分别制备其多克隆抗体。间接ELISA检测多抗的效价及制备的多克隆抗体与天然InlA反应性,Western blot分析制备的抗体与表达产物和天然InlA反应性。选取4-7周龄BALB/C雌鼠25只随机分为5组(PBS组、攻毒组、免疫InlAl组、免疫InIA2组和免疫lnlA1+InlA2组),免疫组用纯化后的蛋白InlA1、InlA2及两种一起免疫小鼠,3免后14天给予灌胃LM(接种量约109CFU/mL),同时给予攻毒组和PBS组同样条件的灌胃,灌胃后60h后处死小鼠,无菌取出小鼠大肠段,无菌PBS冲后匀浆处理,再将匀浆后的液体按浓度倍比稀释,涂布与BHI (L+G)平板上通过菌落计数法计数比较定量口服LM后大肠上皮细胞内LM定植情况,分析InlA各段蛋白在侵入细胞时的作用。结果：成功借助阳性质粒与分子伴侣质粒pG-KJE8表达系统分段表达了InlA蛋白,融合表达产物分子量分别约为79ku和64ku,经GST-SefinoseTM Resin蛋白纯化试剂盒纯化后采用western blot分析,结果显示2段重组蛋白均分别能与2段重组蛋白制备多克隆抗体反应,在预期位置可见特异性条带,具有反应原性；免疫家兔获得的抗血清效价分别为InlA2(new flag)组兔血清效价最高为1:4096000, InlA1(LRRs)组兔血清效价最高为1：1024000；制备的多抗均可以与单增李斯特菌InlA天然蛋白发生反应,间接ELISA结果表明,2种重组蛋白均能够有效诱导抗体反应。动物实验结果表明免疫组攻毒后LM回收水平明显低于攻毒组,而InlA1免疫组攻毒后LM回收水平低于InlA2免疫组,说明InlA1(LRRs)段在LM侵入非吞噬细胞时发挥主要作用。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌内化素A 分段表达功能分析

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蛋白质内含子体内定向进化和切割、分段表达及体外剪接

蛋白质内含子体内定向进化和切割、分段表达及体外剪接

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作者：周倩东华大学

学位级别：硕士

蛋白质内含子是位于蛋白质前体内的插入序列,其两侧的氨基酸序列称为蛋白质外显子。在蛋白质前体翻译后成熟过程中,蛋白质内含子通过四个连续的亲核置换反应精确地从前体蛋白质中自我切除,同时催化两侧蛋白质外显子以肽键相连产生成熟蛋... 详细信息

蛋白质内含子是位于蛋白质前体内的插入序列,其两侧的氨基酸序列称为蛋白质外显子。在蛋白质前体翻译后成熟过程中,蛋白质内含子通过四个连续的亲核置换反应精确地从前体蛋白质中自我切除,同时催化两侧蛋白质外显子以肽键相连产生成熟蛋白,这一过程称为蛋白质剪接。蛋白质内含子自主催化的反应为蛋白质合成和加工提供了新的途径,因而在蛋白质工程及其它领域具有广泛的应用前景。但是,在目前的研究中,仍然存在着大量未解决的问题,如异源生物体内剪接效率低、蛋白质内含子纯化系统效率低以及不能实现蛋白质剪接人为控制等。针对以上问题,本研究对蛋白质内含子进行了如下改造: 将卡那霉素抗性和蛋白质剪接活性相结合,成功的在异源生物体内构建了依赖卡那霉素抗性的蛋白质内含子筛选系统。选择TerThyX和Ssp DnaX两个微小蛋白质内含子对该筛选系统的可行性进行检验,结果显示:含有卡那霉素的平板上的菌落生长情况与western blot检测结果一致,证明本筛选系统完全可行。进一步结合定向进化的策略,利用易错PCR,构建菌落数超过10～6的突变库,在抗性平板上获得了4个高剪接活性的突变蛋白质内含子。Westernblot显示:改造后的Ssp DnaX微小蛋白质内含子在***细胞内剪接活性高于90%,真正解决了异源生物体内剪接活性低的问题。利用已获得的高剪接活性的S1和S11型断裂蛋白质内含子Rma DnaB和Ssp GyrB,成功定点突变了N端或C端与剪接直接有关的保守位点的氨基酸,在***体内将其改造为只有一端可发生断裂,不能进行完整的剪接作用的N端和C端切割元件。检测改造后的断裂蛋白质内含子一端切割的效率,筛选具高效切割活性的蛋白质内含子,以用于深入研究蛋白质剪接机制,以及进一步构建高效的蛋白纯化系统。将断裂蛋白内含子的N端和C端一小段多肽共同表达形成一个融合蛋白(NC蛋白),同时在另一系统中表达intein中间片段(IM蛋白),成功构建了Rma DnaB和Ssp GyrB的NC融合蛋白和IM蛋白。分别纯化NC和IM蛋白后,在16℃,25℃,37℃条件下进行体外剪接反应,从而达到辅助断裂蛋白质内含子两端二聚化的目的。通过检测反应结果,解开IN和IC特异性结合之谜。通过本论文的研究,在蛋白质内含子高级结构未知的情况下,筛选获得高剪接活性的蛋白质内含子,完成了对蛋白质内含子功能的进化。并实现了断裂蛋白质内含子的空间隔离,这对多个蛋白质片段的体外连接具有重要的指导作用,并为研究蛋白质内含子剪接过程的可控性奠定理论基础。随着对蛋白质内含子的剪接机制研究的深入,蛋白质内含子的功能将进一步得到开发,从而为蛋白质工程研究开辟新的途径。

关键词：蛋白质内含子定向进化切割分段表达体外剪接

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基于分段表达的全球高精度对流层延迟精化模型构建

基于分段表达的全球高精度对流层延迟精化模型构建

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作者：朱葛桂林理工大学

学位级别：硕士

对流层延迟是影响高精度全球卫星导航定位(Global Navigation Satellite System,GNSS)的一个重要因素,也是大气科学研究的基础数据。使用高精度的对流层延迟模型可以提高精密单点定位(PPP)的收敛时间、精度和稳定性。此外,高精度的对流... 详细信息

对流层延迟是影响高精度全球卫星导航定位(Global Navigation Satellite System,GNSS)的一个重要因素,也是大气科学研究的基础数据。使用高精度的对流层延迟模型可以提高精密单点定位(PPP)的收敛时间、精度和稳定性。此外,高精度的对流层静力学延迟(ZHD)是利用GNSS技术获取水汽信息的关键参数,可用于从GNSS数据中分离出高精度的对流层湿延迟(ZWD),从而反演水汽变化。然而当前已有对流层延迟模型存在以下问题需要深入研究和解决:仅采用单一函数对大气高度范围内变化进行拟合,难以较好地反映不同高程区间的变化情况;模型未顾及精细的日周期变化;仅使用单一格网数据建模等。本文联合欧洲中期数值预报中心(ECMWF)提供的最新ERA5大气再分析资料,开展了基于分段表达的全球高精度对流层延迟精化模型构建研究。主要研究内容和贡献如下:1.由于对流层延迟在垂直方向上与高度变化密切相关,在不同大气高度范围变化不同,因此,需研究基于分段表达的ZTD(zenith tropospheric delay)和ZHD(zenith hydrostatic delay)垂直剖面函数。而ZTD和ZHD分段垂直剖面函数的高度区间精细探测是构建高精度分段表达的ZTD、ZHD垂直剖面函数的关键。利用ERA5大气再分析资料积分的ZTD、ZHD分层垂直剖面信息,充分探测ZTD、ZHD的分段最优高程区间。与不分段指数函数在垂直方向拟合相比,基于分段表达的指数函数具有更好的拟合性能。2.分析了ZTD和ZHD的时空特性,构建了基于分段表达的全球ZTD垂直剖面模型(GZTD-P模型)和全球ZHD垂直剖面模型(GZHD-P)。联合2017和2018年545个探空站分层ZTD数据和2017年MERRA-2大气再分析资料对GZTD-P模型和GZHDP模型进行精度验证,并与性能优异的GPT3模型进行精度比较。结果表明:(1)以探空站分层ZTD数据为参考值,GZTD-P模型的bias和RMS均表现出较小值,分别为0.98cm和2.80cm,相比于GPT3模型,GZTD-P模型的偏差较少了0.42 cm(30%),RMS误差减少了0.97 cm(26%),在全球表现出了最优的精度和稳定性;(2)以MERRA-2积分的分层ZTD为参考值进行外符合检验,GZTD-P模型具有最小的RMS值,为1.77cm,相比于GPT3模型,GZTD-P模型在MERRA-2资料ZTD垂直插值的精度提升了1.8 cm(50%)。(3)以探空站分层ZHD数据为参考值,GZHD-P模型的bias和RMS均表现出较小值,分别为1.36cm和2.84cm,相比于GPT3模型,GZHD-P模型的偏差较少了0.15 cm(10%),RMS误差减少了0.84 cm(23%),在全球表现出了最优的精度和稳定性;(4)以MERRA-2积分的分层ZHD为参考值,GZHD-P模型具有最小的RMS值,为1.20cm,相比于GPT3模型,GZHD-P模型在MERRA-2资料ZHD垂直插值的精度提升了2.26 cm(65%)。3.在分析ZTD和ZHD精细的日周期变化以及纬度因素的基础上,建立了全球分段ZTD经验格网模型(GGZTD-P模型)和全球分段ZHD经验格网模型(GGZHD-P模型)。联合2017年和2018年545个探空站分层ZTD和ZHD信息,对模型进行精度验证。结果表明:(1)以探空站分层ZTD数据为参考值,GGZTD-P模型的RMS为3.23cm,相比于GPT3模型精度提高了3.61cm(53%);(2)以探空分层ZHD数据为参考值,GGZHD-P模型的RMS为3.01cm,相比于GPT3模型精度提高了3.45cm(53%);因此建立的模型在全球范围内具有较高的精度,可为全球实时高精度GNSS水汽监测和实时定位提供参考。4.滑动窗口算法的优势之一是用户可以根据需要改变其滑动窗口大小来获取不同分辨率的模型参数,分别建立了不同窗口大小的垂直剖面模型,以及组合型经验格网模型,以减少提供给用户的格网数据量,丰富模型的适用性、以及加快对流层延迟计算的过程。不同窗口大小的模型仍然体现出相对较好的性能,通过提供不同分辨率的模型参数,供用户根据自身需求选择合适的模型。

关键词：分段表达垂直剖面模型经验模型 ZTD ZHD

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1型鸭肝炎病毒VP1基因的序列分析及分段表达

1型鸭肝炎病毒VP1基因的序列分析及分段表达

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作者：包飞飞内蒙古农业大学

学位级别：硕士

为了解我国1型鸭肝炎病毒的基因变异情况,本试验对6株分离自山东地区的鸭肝炎病毒株SD4、SD10、SD15、SD37、SD38、SD40病毒液接种鸭胚尿囊腔,收集尿囊液,鉴定冻存备用。对其VP1基因进行序列测定,用MEGA5软件与GenBank中已公布的14株鸭... 详细信息

为了解我国1型鸭肝炎病毒的基因变异情况,本试验对6株分离自山东地区的鸭肝炎病毒株SD4、SD10、SD15、SD37、SD38、SD40病毒液接种鸭胚尿囊腔,收集尿囊液,鉴定冻存备用。对其VP1基因进行序列测定,用MEGA5软件与GenBank中已公布的14株鸭肝炎病毒VP1序列进行比较分析,比较核苷酸的同源性并绘制进化树。结果表明,SD4株VP1基因与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源在84.7%～91.0%之间,SD10株VP1基因与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源在86.5%～92.2%之间,SD15株VP1基因与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源在84.9%～94.0%之间,SD37株VP1基因与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源在84.8%～90.3%之间,SD38株VP1基因与10株DHAV-1的同源性在92.2%-98.0%之间,SD40与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源性在85.9%～91.8%之间。6株试验毒株与2型和3型鸭肝炎病毒VP1基因的同源性在62.5%～71.6%之间,同源性较低。SD38 VP1基因与10株1型鸭肝炎病毒VP1基因的同源性较高。同时,本试验对SD38病毒株VP1基因进行分段表达。成功获得了高抗原性的可溶性蛋白pCold-TF-1Q、pCold-TF-1Z、pCold-TF-1H,并对获得的分段表达蛋白进行了纯化。本试验为建立检测Ⅰ型鸭病毒性肝炎抗体的ELISA检测方法奠定了基础。

关键词： 1型鸭肝炎病毒 VP1基因序列分析分段表达

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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒Gn和Gc蛋白的分段表达

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江苏预防医学 2013年第1期24卷 4-6页

作者：张文帅迟莹张黎温恬曾晓燕焦永军江苏省疾病预防控制中心南京210009

目的分段表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)Gn和Gc蛋白。方法采用PCR方法克隆了SFTSV Gn和Gc基因上三段相互重叠的基因片段Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3,将PCR产物分别连接到原核表达载体pET28a(+)上,经酶切、PCR、测序鉴定... 详细信息

目的分段表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)Gn和Gc蛋白。方法采用PCR方法克隆了SFTSV Gn和Gc基因上三段相互重叠的基因片段Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3,将PCR产物分别连接到原核表达载体pET28a(+)上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pET28a-Gn(Gn1)、pET28a-Gn(Gn2)、pET28a-Gn(Gn3)、pET28a-Gc(Gc1)、pET28a-Gc(Gc2)、pET28a-Gc(Gc3),将其分别转化感受态菌BL21,IPTG诱导表达,通过Western blot鉴定Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3蛋白的表达。结果成功构建重组质粒pET28a-Gn(Gn1)、pET28a-Gn(Gn2)、pET28a-Gn(Gn3)、pET28a-Gc(Gc1)、pET28a-Gc(Gc2)、pET28a-Gc(Gc3),Western blot可见Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2和Gc3编码蛋白的成功表达。结论 Gn和Gc蛋白的分段表达成功,为进一步深入研究SFTSV的Gn和Gc蛋白结构与功能及精确定位其抗原表位奠定了基础。

关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 Gn和Gc蛋白分段表达

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