检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2012年第3期22卷 12-16页

作者：包新奇黄绍华刘巧荣孙明杨璐申屠芬琴康立平陈西钊江苏省疾病预防控制中心南京210036 徐州市高校兽医站徐州221006 北京世纪元亨动物防疫技术有限公司北京100085 中国动物疫病预防控制中心北京100125

目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy... 详细信息

目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。

关键词： PRV gB 分段表达 ELISA

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乙型脑炎病毒E蛋白的分段表达与免疫性分析

乙型脑炎病毒E蛋白的分段表达与免疫性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室华南农业大学兽医学院

流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)可导致中枢神经系统损伤,且人畜共患,是世界范围内急性病毒型脑炎流行的最主要形式之一。猪患流行性乙型脑炎的主要表现为怀孕母猪流产、产死胎或弱仔,公猪则患睾丸炎,仔猪呈神经症状,常使养... 详细信息

流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)可导致中枢神经系统损伤,且人畜共患,是世界范围内急性病毒型脑炎流行的最主要形式之一。猪患流行性乙型脑炎的主要表现为怀孕母猪流产、产死胎或弱仔,公猪则患睾丸炎,仔猪呈神经症状,常使养猪业遭受巨大损失。目前尚无简便快速的诊断方法和特效的治疗药物。E蛋白是主要的毒粒抗原,参与病毒复制的许多重要过程,包括受体结合、膜融合、毒粒包装等。E蛋白上有特异性抗体的中和表位,可诱导免疫动物产生中和抗体。E蛋白在体外进行高效表达不仅有利于该蛋白结构与功能的深入研究,而且有利于开发新型疫苗(亚单位疫苗)和诊断试剂的开发。为了对JEV E蛋白的免疫特性进行分析,本试验依据E蛋白的空间结构特点把全长E基因分成3段,成功地在***中高效融合表达EF1、EF2、EF3蛋白,通过Western blot和ELISA鉴定确定EF1、EF2融合蛋白与JEV阳性血清反应。且GST-EF2反应信号最强,而对照GST和GST-EF3没有反应。由于EF1片段长为873bp,所以将其进一步细分(EF1-1、EF1-2、EF1-3、EF1-4),每段间约有20bp的重叠,进行融合表达及检测,结果发现4段均与JEV阳性血清有强的反应性。通过本实验证明了EF1、EF2片段1～402aa是E蛋白中的免疫优势决定区,包括了12个Cys的保守区及域I、域П和域Ⅱ3个主要抗原域。通过Western blot和ELISA鉴定证明了表达的蛋白具有较好的抗原性。本研究结果对进一步进行鉴定E蛋白的抗原表位和基于这些抗原表位序列的应用研究具有重要意义。

关键词：乙型脑炎病毒 ELISA Western 抗原表位阳性血清分段表达免疫性

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人卵透明带蛋白-3在***中的分段表达、纯化及其鉴定

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第九次全国生殖生物学学术研讨会

作者：徐万祥何远何亚萍王丽婷孙志达季朝能钱吉王曙谢毅上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室

哺乳动物包括人的卵子外都围有一层半透明带(zona pellucida, ZP),它们通常由按电泳迁移率大小命名的ZP1、ZP2和ZP3或按所克隆基因大小命名的ZPA、ZPB和ZPC三种糖蛋白组成。长期以来,ZP蛋白一直是人们研制免疫避孕疫苗和研究精卵受精机... 详细信息

哺乳动物包括人的卵子外都围有一层半透明带(zona pellucida, ZP),它们通常由按电泳迁移率大小命名的ZP1、ZP2和ZP3或按所克隆基因大小命名的ZPA、ZPB和ZPC三种糖蛋白组成。长期以来,ZP蛋白一直是人们研制免疫避孕疫苗和研究精卵受精机制的重要实验材料。人卵巢很难获得,从卵子外的透明带中分离纯化单一组份蛋白更是不易。因此,为开展相关研究,通过基因工程直接获取人ZP(huZP)各组份蛋白也许是唯一可行的途径。虽然已有若干利用真核和原核生物系统表达人精子受体huZP3蛋白的报道,但效果均不甚理想且都是融合蛋白形式的表达。

关键词：合成肤卵透明带蛋白 E.coli 分段表达

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1390bp)和SapA-C(1403bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱

关键词：胎儿弯杆菌免疫原性分析分段表达

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大肠杆菌O157:H7 tir基因的分段表达与纯化

大肠杆菌O157:H7 tir基因的分段表达与纯化

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第八届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：任燕阎玉碧丁红雷西南大学动物科技学院动物传染病学实验室

引言肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的具有公共卫生学意义的病原菌。其发挥致病作用的一个重要途径是通过一个Ⅲ型分泌系统将多个效应蛋白转运至宿主细胞,破坏宿主细胞的信号转导,导致宿主细胞的损伤。Tir蛋白在O157:H7导致宿主的... 详细信息

引言肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的具有公共卫生学意义的病原菌。其发挥致病作用的一个重要途径是通过一个Ⅲ型分泌系统将多个效应蛋白转运至宿主细胞,破坏宿主细胞的信号转导,导致宿主细胞的损伤。Tir蛋白在O157:H7导致宿主的病理损伤中发挥许多重要作用。如通过与Intimin作用使O157:H7黏附于宿主细胞,与肌动蛋白相互作用造成细胞骨架的损伤等。但这些作用是Tir蛋白的那些区段发挥作用还不清楚。本研究克隆表达了Tir蛋白的多个区段,为研究Tir蛋白不同区段的作用提供了研究材料。材料与方法

关键词：分段表达大肠杆菌 O157:H7 tir 宿主细胞

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汉滩病毒核蛋白的分段表达及抗原表位分析

汉滩病毒核蛋白的分段表达及抗原表位分析

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中国科协首届学术年会

作者：薛小平徐志凯马文煜尹文张芳琳闫岩吴兴安白文涛第四军医大学微生物学教研室

目的:研究和确定汉滩病毒的抗原特性,将有助于汉滩病毒感染与免疫机制的阐明以及亚单位疫苗的研制,并丰富人类对有囊膜病毒的中和性抗原位点的分布及基因定位方面的知识。

关键词：抗原表位汉滩病毒分段表达

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的分段表达及免疫学性质分析

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的分段表达及免疫学性质分析

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重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会

作者：赵卓陈立罗萍余抒吴超邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物教研室

研究背景:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是一种定植于胃内的微需氧菌,与慢性胃炎、消化性溃疡、和胃癌等多种疾病相关,世界卫生组织已将其列为一类致癌因子。尿素酶(Urease)是HP中含量最丰富的蛋白,对HP在胃内的寄生和致病都起重... 详细信息

研究背景:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是一种定植于胃内的微需氧菌,与慢性胃炎、消化性溃疡、和胃癌等多种疾病相关,世界卫生组织已将其列为一类致癌因子。尿素酶(Urease)是HP中含量最丰富的蛋白,对HP在胃内的寄生和致病都起重要作用,主要由A、B亚单位组成。

关键词：尿素酶免疫学性质幽门螺杆菌分段表达

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乙肝病毒P基因在大肠杆菌中的分段表达及纯化

乙肝病毒P基因在大肠杆菌中的分段表达及纯化

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第九届西北五省（区）检验医学学术会议

作者：岳乔红胡兴斌苏哲尹文雷迎峰韦三华郝哓柯第四军医大学西京医院检验科第四军医大学微生物学教研室解放军68101部队卫生所第四军医大学微生物学教研室第四军医大学微生物学教研室第四军医大学微生物学教研室第四军医大学西京医院检验科

1 引言我国是乙肝的高流行地区,占全球表面抗原阳性总携带率的50％,拥有超过1．2亿的病毒携带者,大约1000万人发病,年发病率为158／10万, 约80％患者为慢性乙型肝炎,而慢性乙型肝炎原发性肝癌相对危险度增加300倍以上。目前HBV

关键词：大肠杆菌分段表达 HBV 亲和层析柱

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水貂阿留申病毒NS1基因的分段原核表达及免疫原性研究

水貂阿留申病毒NS1基因的分段原核表达及免疫原性研究

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作者：刘红娜吉林农业大学

学位级别：硕士

水貂阿留申病(Aleutian disease, AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus, ADV)引起的一种慢性、进行性、病毒性传染病。幼貂感染AD时，会出现急性间质性肺炎；成年貂感染AD时，会造成公貂繁殖能力下降，母貂流产、产死胎或产... 详细信息

水貂阿留申病(Aleutian disease, AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus, ADV)引起的一种慢性、进行性、病毒性传染病。幼貂感染AD时，会出现急性间质性肺炎；成年貂感染AD时，会造成公貂繁殖能力下降，母貂流产、产死胎或产木乃伊胎。目前尚未研制出有效的疫苗或药物防控AD的传播，只能通过定期检测、淘汰病貂来净化貂群。AD的流行给世界各地水貂养殖场带来巨大的经济损失。因此，研发有效的疫苗对防治该病具有重要意义。 ADV基因组主要由非结构蛋白NS1及结构蛋白VP2构成，其中NS1蛋白对病毒在病貂体内复制及转录后调控起到一定作用，结构蛋白VP2是ADV主要衣壳蛋白。本实验以非结构蛋白NS1为研究对象。根据GenBank登录NS1序列可知，NS1基因含有一段80bp长的内含子序列，使得NS1蛋白在原核表达系统中不能连续表达，本研究以重叠延伸PCR（SOE-PCR）法，设计重叠互补引物将NS1基因拼接成去掉内含子的全长基因，并对其进行生物信息学分析；利用DNAStar Protean模块预测其亲水性、表面可及性、柔韧性、蛋白二级结构、抗原性等，再利用网络资源预测其是否含有信号肽、跨膜区等；根据预测结果将NS1基因分成五段，分别克隆至pMD18-T或pGEM-T载体；将NS1全长基因及5段分段基因分别与表达载体pGEX-4T-1连接，成功构建了全长及分段的重组表达质粒；利用IPTG进行诱导表达，SDS-PAGE结果验证六段基因表达的目的蛋白均与预期相符；Western Blotting结果证明每段蛋白均具有反应原性。将六段蛋白分别进行纯化免疫小鼠，同时设立PBS对照组及GST标签蛋白对照组，通过间接ELISA法、流式细胞检测法、淋巴细胞增殖实验（CCK-8）及细胞因子检测（IL-4及IFN-γ）等检测小鼠体内体液免疫应答水平及细胞免疫应答水平。结果表明各组均有一定的免疫原性，其中NS1-2组及NS1-3组免疫原性较强。本实验对后续进行水貂本体动物免疫效果的研究具有参考价值，为研制基因工程亚单位疫苗奠定基础。

关键词：水貂阿留申病毒 NS1基因分段表达蛋白纯化免疫原性研究

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2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析

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南方农业学报 2015年第7期46卷 1310-1314页

作者：胡巧云袁小宁熊毅何奇松黄胜斌孙翔翔吴军颜健华冯淑萍李军郭建刚广西动物疫病预防控制中心南宁530001 广西大学生命科学技术学院南宁530005

【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离... 详细信息

【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。

关键词： 2型猪链球菌 SspA基因分段表达免疫原性

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