检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 228-230页

作者：沈玉娟曹建平卢潍媛李小红刘海鹏徐馀信周晓农汤林华刘述先中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因... 详细信息

目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。

关键词：微小隐孢子虫卵囊脱氧核精核酸分离和提纯螯合树脂法聚合酶链反应

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体外延长胰岛培养时间的实验

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中国临床康复 2005年第47期9卷 56-57页

作者：曹博郭筠秋周强金连弘刘慧雯哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨市第五医院黑龙江省哈尔滨市150040

目的分离纯化大鼠胰岛,探索胰岛体外长期培养的新方法,为胰岛移植治疗糖尿病提供数量多、质量好的胰岛。方法实验于2002-12/2004-03在哈尔滨医科大学组织工程与发育生物学研究室完成。①取16～22d龄,体质量80g的雄性W istar大鼠睾丸支... 详细信息

目的分离纯化大鼠胰岛,探索胰岛体外长期培养的新方法,为胰岛移植治疗糖尿病提供数量多、质量好的胰岛。方法实验于2002-12/2004-03在哈尔滨医科大学组织工程与发育生物学研究室完成。①取16～22d龄,体质量80g的雄性W istar大鼠睾丸支持细胞。②采用改良的胰管内顺行灌注胶原酶消化体质量200～250g的W istar大鼠胰腺,Ficoll不连续浓度梯度纯化,手挑法检出全部胰岛,用双硫腙鉴定胰岛。③分为胰岛单独培养组和胰岛与支持细胞联合培养组,应用倒置显微镜和荧光显微镜观察单独培养组和联合培养组的胰岛形态和存活率,在培养的第3,7,14,28天用放射免疫法测定胰岛素分泌量,并通过胰岛素释放实验计算刺激指数。结果①胰岛的回收率回收率为53.6%,纯度为100%。②两组胰岛存活率的比较联合培养组的胰岛存活率显著高于单独培养组[培养14d84%,3%;培养28d82%,0(P<0.01)]。③两组累积胰岛素分泌量及刺激指数比较联合培养组胰岛素分泌量显著高于单独培养组[培养7d(105.0±11.6),(48.0±5.3)m IU/L(P<0.01)],刺激指数也显著高于单独培养组(培养7d6.1±0.7,1.1±0.2)(P<0.01)。结论通过胆总管顺行注入胶原酶进行消化,Ficoll不连续密度梯度离心法进行胰岛纯化,体视镜下手挑胰岛,胰岛的回收率和纯度较高。睾丸支持细胞与胰岛联合培养可以促进胰岛生长,显著延长存活时间,是一种较好的体外长期培养胰岛的方法。

关键词：胰岛睾丸分离和提纯

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厚壳贻贝多糖的提取和免疫学活性研究

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 896-899页

作者：姚滢魏江洲王俊张建鹏刘军华冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:深入研究海洋生物多糖的药用价值,对厚壳贻贝多糖进行提取分离和免疫学活性的研究。方法:通过热碱法提取厚壳贻贝多糖粗品,用双蒸水配成三种浓度的厚壳贻贝多糖溶液,然后对其进行正常小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、NK... 详细信息

目的:深入研究海洋生物多糖的药用价值,对厚壳贻贝多糖进行提取分离和免疫学活性的研究。方法:通过热碱法提取厚壳贻贝多糖粗品,用双蒸水配成三种浓度的厚壳贻贝多糖溶液,然后对其进行正常小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、NK细胞活性测定、抗体生成细胞的检测、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞等实验,并用MTT法对荷瘤小鼠进行了脾淋巴细胞增殖活力测定。结果:成功获得厚壳贻贝多糖粗品,呈白色粉末状;各项免疫学活性测定结果表明厚壳贻贝多糖粗品溶液能有效地增加正常小鼠的脾淋巴细胞转化率,增强小鼠迟发型变态反应、NK细胞活性、抗体形成细胞活性、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率(P<0.01),且随多糖溶液浓度增高而增强(各浓度组间相比P<0.01);厚壳贻贝粗品溶液还能非常显著地提高荷瘤小鼠的脾脏细胞的增殖能力(P<0.01)。结论:厚壳贻贝多糖能从细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能及NK细胞活性方面促进正常小鼠的免疫活性作用,并具有明显的抗肿瘤作用。

关键词：厚壳贻贝多糖分离和提纯免疫活性

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米糠蛋白酶解产物中血管紧张素转化酶抑制剂的研究

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华中科技大学学报（医学版） 2005年第6期34卷 699-702,706页

作者：毕昊刘志国屈伸王亚林吴琼华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 武汉工业学院生物与化学工程系武汉430023

目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质,先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后,采用凝胶层析法分离酶解组分,检测各组分ACE抑制性,对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP-... 详细信息

目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质,先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后,采用凝胶层析法分离酶解组分,检测各组分ACE抑制性,对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP-Sephadex C-25作进一步的分离检测。结果获得的ACE抑制肽分子量为307.1,其等电点在5～6之间。它在消化液中具有稳定性。其IC50为0.061mg/ml。结论从米糠蛋白酶解产物中获取了ACE抑制剂。

关键词：米糠蛋白胃蛋白酶胰蛋白酶血管紧张素转化酶抑制剂分离和提纯

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正交设计法确定黄芪中黄酮类成分的超声提取条件

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第二军医大学学报 2005年第10期26卷 1168-1170页

作者：纪松岗李翔娄子洋王彬柴逸峰解放军401医院药剂科青岛266071 第二军医大学药学院药物分析学教研室上海200433 第二军医大学药学院分析测试中心上海200433 东方肝胆外科医院药剂科上海200438

目的:确定黄芪药材中黄酮类成分超声提取的最佳前处理条件。方法:以毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量为指标,采用正交设计法对超声时间(10、20、30min)、溶剂中甲醇含量(50%、75%、100%)以及提取次数(1、2、3次)等影响因素进行考察,确定最... 详细信息

目的:确定黄芪药材中黄酮类成分超声提取的最佳前处理条件。方法:以毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量为指标,采用正交设计法对超声时间(10、20、30min)、溶剂中甲醇含量(50%、75%、100%)以及提取次数(1、2、3次)等影响因素进行考察,确定最优提取条件,并同浸泡提取和索氏提取作比较。结果:提取黄芪药材中黄酮类成分的最佳前处理方案为甲醇超声处理2次,每次20min。超声提取的效率优于浸泡提取和索氏提取。结论:同其他方法比较,超声提取作为黄芪中黄酮类成分的提取方法,具有效率高、时间短和操作简便的优点。

关键词：正交设计法黄芪黄酮类分离和提纯

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重组人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因工程菌的优化表达及其单克隆抗体制备

重组人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因工程菌的优化表达及其单克隆...

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作者：邹爱民第四军医大学

学位级别：硕士

目的:利用基因工程技术,分别构建含HBV/RNAse H1及H2基因的原核表达载体pGSTag,并转化到大肠杆菌,诱导表达出目的蛋白后,用原核表达产物作为抗原,制备单克隆抗体,并对抗单克隆抗体血清型进行初步分析鉴定,为临床应用奠定基础。方法... 详细信息

目的:利用基因工程技术,分别构建含HBV/RNAse H1及H2基因的原核表达载体pGSTag,并转化到大肠杆菌,诱导表达出目的蛋白后,用原核表达产物作为抗原,制备单克隆抗体,并对抗单克隆抗体血清型进行初步分析鉴定,为临床应用奠定基础。方法:本研究采用摇瓶发酵,将重组质粒pGSTag/HBV/RNAseH1及H2分别转化BL21(DE3)codon plus(?)-RP、HB101、BL21(DE3)PlysS、G1727、DH5α、BL21大肠杆菌。同时用不同的培养基(LB、SOB、SOC、TB、2YT、M9)、不同的初始菌浓度(即OD为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2)、不同的诱导时间(2.0h,4.0h,6.0h)、初始pH(6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,8.5)以及不同的IPTG诱导浓度(0.1,0.3,0.6,1.0,2.0,3.0mmol/L),分别表达重组蛋白,并将重组菌与空白菌作生长曲线对比,收集菌体,初步纯化,菌液(0.5ml)经离心洗涤后,进行SDS-PAGE分析,并用FR-200紫外可见分析装置、复日smart view 2001生物电泳图象分析系统分析pGSTag/HBV-RNAseH1及H2蛋白表达量,同时进行Westerblot印迹分析。并以

关键词：基因工程菌人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因优化表达抗体单克隆分离和提纯 HBV-RNAseH区重组蛋白小鼠

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DNA自动测序中的常见影响因素及测序反应体系的优化

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吉林大学学报（医学版） 2004年第6期30卷 978-980页

作者：许艳卫红飞胡小平包木胜王爱丽程岩王丽颖吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021 吉林大学

目的 :分析和研究 DNA测序过程中影响因素及其测序反应体系的优化。方法 :对 DNA测序体系中模板、引物、测序产物的纯化及 3种测序反应体系对测序结果的影响进行比较。结果 :采用 5 μL (含 1μLTRR)、 5 μL (含 2 μL TRR)和 10 μL (... 详细信息

目的 :分析和研究 DNA测序过程中影响因素及其测序反应体系的优化。方法 :对 DNA测序体系中模板、引物、测序产物的纯化及 3种测序反应体系对测序结果的影响进行比较。结果 :采用 5 μL (含 1μLTRR)、 5 μL (含 2 μL TRR)和 10 μL (含 4 μL TRR)测序反应体系对同一质粒 DNA进行测序 ,其可判读序列都能达到 72 0 bp以上。结论 :DNA自动测序的质量与模板的纯度、浓度、所用引物、测序反应体系及测序反应产物的纯化有直接的关系。采用 5 μL (含 1μL TRR)测序反应体系在保证测序质量的同时可降低 DNA测序成本。

关键词：序列分析 DNA DNA 分离和提纯电泳毛细管成本及成本分析

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小鼠ERA蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化

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第四军医大学学报 2004年第8期25卷 684-687页

作者：杜孟刚陈苏民吴元明董珂陈南春郑玉第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033

目的 :对小鼠ERA蛋白 (mERA)进行表达、纯化 ,为真核生物ERA功能研究奠定基础 .方法 :构建MBP mER A融合表达载体 .在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白 ,经直链淀粉亲和层析纯化 ,WesternBlotting鉴定所表达纯化的蛋白 .结果 :表达... 详细信息

目的 :对小鼠ERA蛋白 (mERA)进行表达、纯化 ,为真核生物ERA功能研究奠定基础 .方法 :构建MBP mER A融合表达载体 .在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白 ,经直链淀粉亲和层析纯化 ,WesternBlotting鉴定所表达纯化的蛋白 .结果 :表达的MBP mERA融合蛋白占菌体总蛋白的 1 8% ;纯化后的融合蛋白纯度为 70 % ;WesternBlotting证实了mERA蛋白的表达 .结论 :利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中高表达了mera基因 ,并对融合蛋白进行了初步纯化 .

关键词：小鼠 era基因基因表达蛋白质类分离和提纯

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吲哚-3-原醇和阿魏酸钠抗氧化性肝损伤作用及其机制研究

吲哚-3-原醇和阿魏酸钠抗氧化性肝损伤作用及其机制研究

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作者：张春武汉大学

学位级别：硕士

在多种原因引起的肝脏急慢性损伤和疾病中，组织细胞内的氧张力升高和脂质过氧化物堆积是共同的发病机制和病理生理通路之一。针对疾病的发病机制进行有效、有靶位的抗氧化研究是治疗多种肝脏疾病的主要手段。十字花科类蔬菜提取物吲哚... 详细信息

在多种原因引起的肝脏急慢性损伤和疾病中，组织细胞内的氧张力升高和脂质过氧化物堆积是共同的发病机制和病理生理通路之一。针对疾病的发病机制进行有效、有靶位的抗氧化研究是治疗多种肝脏疾病的主要手段。十字花科类蔬菜提取物吲哚-3-原醇（I3C）能增强多种组织细胞内抗氧化酶活力；阿魏酸钠（SF）是当归的水溶性单体提取成分，含有酚羟基，具有抗氧化活性。本研究利用精密肝切片技术制作急性肝损切片模型，并以细胞培养技术为手段，分离、提纯肝星状细胞（HSC），建立原代HSC体外自氧化激活模型，探讨I3C和SF在切片和细胞水平对氧化性肝损伤的作用及其机制，为研究筛选有效的肝保护药物，同时也为进一步开展探讨HSC激活机制及其有效干预环节的研究奠定实验基础。目的：建立体外损伤性肝切片模型，研究I3C和SF对其的保护作用及机制。建立大鼠肝脏原代HSC分离及体外激活方法，研究I3C和SF对激活HSC细胞增殖影响。方法：利用精密肝切片技术制作大鼠乙醇损伤肝切片模型，观察不同剂量I3C和SF对培养液中肝损伤标志酶及肝细胞浆苯胺羟化酶（ANH）、乙醇脱氢酶（ADH）活性的影响，并进行组织学检查。采用肝脏离体链霉蛋白酶、Ⅳ型胶原酶分别灌注消化、Nycodenze一步法密度梯度离心分离HSC。台盼蓝染色排斥法鉴定计数细胞得率和活率，相差显微镜、荧光激发观察鉴别细胞形态。建立HSC体外自氧化激活模型，利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法测定HSC增殖。结果：50 mmol·L-1乙醇作用肝切片4 h时，培养液谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性明显升高，同时肝细胞浆ANH活性升高，ADH活性降低；加入I3C 100～400μmol·L-1及SF 463～1388 nmol·L-1后，培养液中各酶活性显著降低的同时，肝细胞ANH和ADH活性恢复正常。肝切片病理学检查也证实了I3C的保护作用。HSC得率为0.5～1.2×10～7／肝，活率平均为94％，24小时细胞爬片、Desmin免疫组化染色显示纯度为95％。研究进一步发现，HSC在培养的第4天开始自行激活，第7天明显活化；I3C对活化的HSC增殖有明显的量效抑制关系，100～800μmol·L-1I3C均能有效抑制HSC增殖；较大剂量SF 231～463 nmol·L-1对活化HSC 增殖亦有明显抑制作用。结论:I3C、SF能有效拮抗乙醇所致的氧化性肝损伤，其机制与改变乙醇的代谢途径有关。原代HSC分离和培养方法成功，HSC自氧化激活模型制作良好，I3C和SF能有效抑制HSC的活化增殖。

关键词：吲哚-3-原醇阿魏酸钠精密肝切片技术苯胺轻化酶乙醇脱氢酶肝星状细胞分离和提纯自氧化激活模型细胞增殖

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深圳蛇口地区葡萄球菌188株鉴定及耐药分析

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中国误诊学杂志 2004年第6期4卷 889-890页

作者：孙延生曾训李绪黎黄小兰广东省深圳蛇口人民医院检验科 518067

对我院2003-01～2003-12从临床分离的葡萄球菌188株进行鉴定以及常用体外抗生素最低抑菌浓度MIC分析如下.1材料和方法1.1菌株 2003-01～2003-12我院细菌室各种临床感染标本188例,按常规方法[1]分离(血液18株,尿液30株,前列腺液、精液以... 详细信息

对我院2003-01～2003-12从临床分离的葡萄球菌188株进行鉴定以及常用体外抗生素最低抑菌浓度MIC分析如下. 1材料和方法 1.1菌株 2003-01～2003-12我院细菌室各种临床感染标本188例,按常规方法[1]分离(血液18株,尿液30株,前列腺液、精液以及尿道分泌物94株,痰及咽拭子36株,脓液及其它10株),再根据细菌鉴定仪(美国德灵公司生产的MicroSCAN auto SCAN4)鉴定为188例葡萄球菌.

关键词：葡萄球菌金黄色分离和提纯葡萄球菌金黄色药物作用甲氧西林抗药性

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