检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床康复 2005年第26期9卷 92-93,i0004页

作者：段发亮马廉亭于耀宇解放军广州军区武汉总医院神经外科湖北省武汉市430070

目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进。方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江医院神经外科实验室完成。①选用SD大鼠20只,取孕13～14d的S... 详细信息

目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进。方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江医院神经外科实验室完成。①选用SD大鼠20只,取孕13～14d的SD大鼠胚胎纹状体,吸管吹打(不超过10次)后,用组织剪剪成1mm3块状,以1.25mL/L的胰酶,在37℃下消化20min,以S-Dulbecco改良的Eagle培养基-F12中止消化,采用1000r/min离心10min,显微镜下细胞记数,以1×104/cm2接种到改良的有血清和多聚赖氨酸铺被的12孔培养板上,培养液为Dulbecco改良的Eagle培养基-F12加上B27,加入血清和20μg/L表皮生长因子。7d后用吸管吸取漂浮的细胞球,机械吹打成单细胞悬液,按每培养孔1×104/cm2细胞行传代再培养,此后5～7d再传代,方法同前。②利用神经干细胞与星形胶质细胞、神经细胞以及成纤维细胞贴壁之间的差异,使细胞分为贴壁和漂浮的两层细胞,分离去掉贴壁的神经细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞以及部分的神经干细胞,得到漂浮的细胞球。③机械吹打后制成单细胞悬液,再传代培养,细胞重新增殖成细胞球,应用免疫细胞化学技术特异性抗原巢蛋白检测最初的细胞球、吹打后的单细胞和重新增殖的细胞球巢蛋白抗原的表达和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。巢蛋白为神经干细胞特异性标记物,其阳性表达表明神经干细胞的存在。结果:①原代培养的纹状体细胞第2天可见贴壁生长的神经细胞、星形胶质细胞和增殖的细胞球(约10～16个细胞大小),漂浮的细胞开始出芽并增殖;第3天贴壁的细胞球继续增殖(约50个细胞大小),漂浮的细胞则增殖成4～8个大小的细胞球;第4～7天贴壁的细胞球开始分化,漂浮的细胞则继续增殖成约30个细胞大小的细胞球,巢蛋白染色阳性。②漂浮的细胞,吹打后行传代培养,加入表皮生长因子、血清和多聚赖氨酸,细胞仍漂浮生长,1周后增殖成约70～80个细胞大小的细胞球,吸管吹打继续再培养,细胞仍漂浮增殖成细胞球,巢蛋白抗原表现阳性。③免疫细胞化学染色显示原代培养中贴壁的细胞球、吹打后的单细胞、漂浮的细胞球巢蛋白染色阳性,吹打后的细胞若不加入表皮生长因子,则细胞染色显示胶质纤维酸性蛋白和神经丝蛋白阳性。分离纯化后的细胞具有自我更新能力和多分化潜能,有很强的增殖能力。结论:利用有血清和多聚赖氨酸加入的方法分离培养的原代细胞球巢蛋白表达阳性,具有纯化度高,存活时间长的特点。

关键词：神经系统/细胞学细胞分化培养基细胞,培养的分离培养方法神经干细胞纹状体区免疫细胞化学染色第一军医大学珠江医院表皮生长因子

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非O157产志贺毒素大肠杆菌分离培养方法研究进展

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中华预防医学杂志 2013年第8期47卷 764-766页

作者：白向宁孟琼赵爱兰熊衍文中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

产志贺毒素大肠杆菌（Shigatoxin—producingescherichia coli，STEC）是一类危害人类健康的重要致病菌，可引起出血性肠炎（hemorrhagiccolitis，HC）、溶血性尿毒综合征（hemolyticuremicsyndrome，HUS）等严重疾病。1983年Riley等报道了第一起由O157：H7STEC引起的食物中毒，之后不同国家相继报道了O157：H7STEC所致的暴发和散发感染。2001年，国际上即已提出了食品和动物饲料中0157STEC菌株分离的标准方法（ISO16654：2001），

关键词：产志贺毒素大肠杆菌 O157 分离培养方法溶血性尿毒综合征出血性肠炎人类健康食物中毒标准方法

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牛成纤维细胞体外分离培养方法比较及细胞特征鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2022年第1期 17-21,26,134页

作者：高美红白佳桦肖霖力杨凌许晓玲刘彦北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097 河北工程大学河北邯郸056000

为了获得牛成纤维细胞最佳体外分离培养方法并建立成纤维细胞特征鉴定方法,试验采集牛耳皮肤组织块,利用眼科剪修剪成大小为0.5~2 mm^(3)的组织块,分别采用组织块贴壁法、胶原酶Ⅱ+组织块黏附法、双酶消化法(胰蛋白酶+胶原酶Ⅱ)+组织块... 详细信息

为了获得牛成纤维细胞最佳体外分离培养方法并建立成纤维细胞特征鉴定方法,试验采集牛耳皮肤组织块,利用眼科剪修剪成大小为0.5~2 mm^(3)的组织块,分别采用组织块贴壁法、胶原酶Ⅱ+组织块黏附法、双酶消化法(胰蛋白酶+胶原酶Ⅱ)+组织块黏附法进行原代牛耳成纤维细胞的分离培养,观察各方法培养的细胞生长情况,利用成纤维细胞特异性标志蛋白(波形蛋白)免疫荧光方法对分离获得细胞的纯度进行鉴定,采用CCK-8试剂盒对传代细胞增殖情况进行检测,绘制增殖曲线。结果表明:组织块贴壁法在培养至第7天,开始有成纤维细胞缓慢游出,并向组织块周围迁移;培养至第17天,细胞大约汇合至培养皿的80%。胶原酶Ⅱ+组织块黏附法培养至第3天时,在镜下可观察到呈絮状团块、圆形的细胞;培养至第5天时,细胞迅速生长,并且呈梭形、胞质伸展、胞核清晰、单层融合;培养至第11天时,絮状团块和培养皿边缘的细胞出现放射样和旋涡样生长晕,汇合至培养皿的70%~80%。双酶消化法+组织块黏附法培养至第3天时,在镜下观察到细胞大多呈梭形;培养至第5天时,细胞开始逐渐增加,同时细胞迁移数量、聚集程度都明显优于胶原酶Ⅱ+组织块黏附法;培养至第9天时,细胞出现旋涡样生长晕,大约汇合至培养皿的80%,可进行传代纯化。细胞染色呈阳性,且纯度高达98%。增殖曲线呈典型的S形,且2~5 d是细胞的最佳增殖期。说明通过双酶消化法+组织块黏附法可以快速分离、获得牛耳成纤维细胞,是最佳的牛成纤维细胞分离培养方法。

关键词：牛成纤维细胞分离培养方法比较细胞鉴定细胞增殖

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改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法

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微循环学杂志 2006年第4期16卷 10-11,14,F0002页

作者：李玉珍刘秀华蔡莉蓉中国人民解放军总医院基础医学所病理生理研究室邮政编码北京100853

目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4min,用100μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养。用内皮细胞的重要标... 详细信息

目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4min,用100μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养。用内皮细胞的重要标记物VIII因子相关抗原鉴定细胞,并通过3H-TdR掺入法观察培养细胞对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的反应性。结果:细胞的获得率为1.2×106细胞/g心肌组织,显微镜观察培养细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征;VIII因子免疫细胞化学染色呈阳性;证实获得的是内皮细胞。bFGF刺激后3H-TdR掺入率与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:本研究利用改良的酶消化法,缩短了消化时间,提高了细胞获得率,同时培养的内皮细胞对生长因子具有良好反应性,表明该方法是一种比较理想的体外心肌微血管内皮细胞培养体系。

关键词：心肌微血管内皮细胞分离培养方法大血管内皮细胞细胞培养体系人脐静脉内皮细胞主动脉内皮细胞改良血管相关疾病

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腹泻患者粪便2种沙门菌分离培养方法的比较

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中日友好医院学报 2011年第2期25卷 124-124,126页

作者：王庭仲贾红兵王靖鄢盛恺中日友好医院输血科北京100029 中日友好医院检验科北京100029

沙门菌是人和动物感染的重要病原,是全球细菌性食源性传染病的常见病原。在门诊腹泻患者中,沙门菌感染主要是通过摄入污染的食物或饮水引起的。对于临床上非伤寒沙门菌感染引起的腹泻应及早用抗菌药物治疗,目前主要是氟喹诺酮类药物（... 详细信息

沙门菌是人和动物感染的重要病原,是全球细菌性食源性传染病的常见病原。在门诊腹泻患者中,沙门菌感染主要是通过摄入污染的食物或饮水引起的。对于临床上非伤寒沙门菌感染引起的腹泻应及早用抗菌药物治疗,目前主要是氟喹诺酮类药物（针对成人）和三代头孢菌素类药物（针对儿童）。

关键词：伤寒沙门菌感染腹泻患者分离培养方法头孢菌素类药物氟喹诺酮类药物粪便食源性传染病动物感染

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一种小鼠胰腺星状细胞分离培养方法

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中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 751-751页

作者：范昕卢旷逸马小艳张建新江苏大学附属医院普外科镇江212001 江苏大学临床医学院

本研究旨在建立一种简便的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法，现报道如下。一、材料与方法我们参考吴恺等分离培养大鼠胰腺星状细胞的方法，建立起一种新的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法：组织块分离法。具体方法如下：首先采用多聚赖氨酸... 详细信息

本研究旨在建立一种简便的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法，现报道如下。一、材料与方法我们参考吴恺等分离培养大鼠胰腺星状细胞的方法，建立起一种新的小鼠胰腺星状细胞分离培养方法：组织块分离法。具体方法如下：首先采用多聚赖氨酸包被培养瓶，多聚赖氨酸可以使组织贴壁更加牢靠，同时增加细胞贴壁能力。

关键词：胰腺星状细胞分离培养方法小鼠多聚赖氨酸贴壁能力组织块分离法培养瓶

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一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法

一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法

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作者：卢明葛丽特段答 410003 湖南省长沙市洪山桥1号解放军第163医院

本发明提供了一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法。包括以下步骤：1、配制由DMEM和F12以1∶1混合而成的基础培养液；2、即时采集病员AS；3、将采集的AS加入配制出的人嗅粘膜间充质干细胞培养基中，在35℃～38℃、加3～7％的CO2... 详细信息

标准号: CN104031881A

本发明提供了一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法。包括以下步骤：1、配制由DMEM和F12以1∶1混合而成的基础培养液；2、即时采集病员AS；3、将采集的AS加入配制出的人嗅粘膜间充质干细胞培养基中，在35℃～38℃、加3～7％的CO₂。本发明可以高效快速的获得高纯度的嗅粘膜间充质干细胞，这群细胞具有较强的克隆形成能力、自我更新能力和多向分化潜能，本发明方法获得的嗅粘膜细胞具有较强的成脂能力、成骨能力、成神经干细胞能力和成神经元的能力，为在体外获取大量的具有干细胞运用于细胞和组织再生提供了新的方法。

关键词：嗅粘膜干细胞配制神经元分离培养方法干细胞培养基自我更新能力基础培养液神经干细胞细胞和组织细胞采集病员成骨能力高纯度成脂体外潜能克隆采集再生

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一种干巴菌菌种的分离培养方法

一种干巴菌菌种的分离培养方法

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作者：罗星野罗健陈天蓉 650217 云南省昆明市东郊贵昆路211号

本发明公开了一种干巴菌菌种的分离培养方法，包括采样、表面灭菌、分离及纯培养步骤，具体包括：在云南松林地中选择幼嫩的干巴菌子实体进行采样并进行保藏；将采集的干巴菌子实体进行表面灭菌处理；切取干巴菌子实体置入干巴菌组织分... 详细信息

标准号: CN104381023A

本发明公开了一种干巴菌菌种的分离培养方法，包括采样、表面灭菌、分离及纯培养步骤，具体包括：在云南松林地中选择幼嫩的干巴菌子实体进行采样并进行保藏；将采集的干巴菌子实体进行表面灭菌处理；切取干巴菌子实体置入干巴菌组织分离培养基的培养基平面或试管斜面中，培养，再接种至干巴菌固体培养基的培养基平面或试管斜面中，培养得到目标物，移入含有针叶林废弃物做培养基质的干巴菌菌种培养基的试管斜面保存。本发明是选用野生干巴菌的幼嫩子实体活体，在云南松生长干巴菌的林地现场采集，迅速组织分离，用松树皮、松木屑、松毛等针叶林废弃物做培养基质培养得到，得到的干巴菌菌种繁殖稳定性好、成活率达99.9%以上且长势良好。

关键词：干巴菌试管斜面培养基平面针叶林培养基质组织分离云南松采样废弃物林地分离培养方法固体培养基菌种培养基菌种繁殖灭菌处理培养步骤现场采集培养基木屑培养目标物松树皮子实体灭菌活体菌种成活率长势接种采集生长

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一种人脐带间充质干细胞分离培养方法

一种人脐带间充质干细胞分离培养方法

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作者：姚惟琦武栋成 430071 湖北省武汉市东湖路185号武汉大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系

本发明提供了一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，包括以下步骤：取足月剖宫产胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除血迹；在动物细胞培养基中用无菌剪刀将洗净的脐带剪成组织块，去除其血管并弄碎，然后与动物细胞培养基充分混合振... 详细信息

标准号: CN102965336A

本发明提供了一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，包括以下步骤：取足月剖宫产胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除血迹；在动物细胞培养基中用无菌剪刀将洗净的脐带剪成组织块，去除其血管并弄碎，然后与动物细胞培养基充分混合振荡后离心，将离心所得的沉淀与MesenCult-XF完全培养基混合震荡均匀种植于细胞培养皿中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养；培养第5天，将组织块全部吸出弃去，补加MesenCult-XF完全培养基，之后每隔3天更换培养基继续培养，获得脐带间充质干细胞。本发明不使用动物血清，操作简单，重复性好，安全性高，所获细胞经多次传代后稳定。

关键词：脐带间充质干细胞动物细胞培养基完全培养基无菌分离培养方法细胞培养皿培养安全性高动物血清胎儿脐带培养基培养箱脐带剪振荡洗净剪刀冲洗血迹沉淀震荡血管细胞种植

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一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法及其应用

一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法及其应用

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作者：赵春华 100080 北京市海淀区知春路59号中关村海关606室

本发明涉及细胞的分离培养方法及其应用，具体涉及一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法及其应用。它包括取人体脂肪组织，用胶原酶消化，经梯度离心、过滤，随后在体外培养体系中进行扩增培养，其中所述体外培养体系含有DMEM/F12、EFG和... 详细信息

标准号: CN1778905B

本发明涉及细胞的分离培养方法及其应用，具体涉及一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法及其应用。它包括取人体脂肪组织，用胶原酶消化，经梯度离心、过滤，随后在体外培养体系中进行扩增培养，其中所述体外培养体系含有DMEM/F12、EFG和FCS。本发明的脂肪间充质干细胞具有CD11a^-、CD31^-、CD34^-、CD45^-和HLA-DR^-，且CD44⁺或Flk-1⁺的表型。本发明还公开了脂肪间充质干细胞新的医药用途，为组织工程、再生医学中的种子细胞来源以及为成体干细胞群的应用提供了新的选择。

关键词：干细胞脂肪分离培养方法体外培养体系人体脂肪组织种子细胞来源成体干细胞医药用途再生医学组织工程胶原酶扩增过滤细胞消化培养

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