检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王建霞中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医学院清华大学医学部中国医学科学院

学位级别：硕士

　　在支原体的实验室检测中，主要应用的检测方法是分离培养法、血清学方法和分子生物学方法，其中血清学方法已经广泛用于病原微生物感染的实验室诊断。血清学检测结果准确性的关键是检测试剂的特异性和敏感性。为了得到支原体特异性... 详细信息

　　在支原体的实验室检测中，主要应用的检测方法是分离培养法、血清学方法和分子生物学方法，其中血清学方法已经广泛用于病原微生物感染的实验室诊断。血清学检测结果准确性的关键是检测试剂的特异性和敏感性。为了得到支原体特异性的抗原，本实验室的前期研究表明，在18种(株)支原体全菌抗原中相对分子质量为27-33×103和62-68×103的蛋白为支原体特异性的共同抗原。本研究利用这一结果制备抗支原体属共同抗原的mAb，进而建立以检测抗原为目的的双抗体夹心ELISA，以期发展一种更加特异、敏感和快速的实验动物支原体检测方法。为此，我们从以下几个方面进行了研究。　　首先，支原体属共同抗原的纯化。结果表明，经SDS-PAGE分离支原体全蛋白，使用切胶法，经缓冲液提取，获得了纯化的支原体共同抗原。试验表明纯化抗原保持了良好的抗原性和免疫原性。　　其次，mAb的制备与鉴定。以支原体共同抗原为免疫原，利用杂交瘤技术共制备出10种杂交瘤细胞株。通过染色体计数，皆为杂交瘤细胞株；免疫双扩散实验证实其分属于IgG1和IgG2b；IFA试验表明，各株mAb均不与啮齿类实验动物易感的11种细菌发生交叉反应；IFA和ELISA表明，各株mAb均可以和啮齿类实验动物易感的肺支原体、溶神经支原体和关节炎支原体进行特异性反应；免疫印迹试验显示，绝大多数mAbs识别的3种支原体抗原的相对分子质量主要是33×103，为支原体特异性的共同抗原。　　最后，我们探索了利用单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA用于实验动物支原体隐性感染检测。采用最佳配对实验，筛选出以C11作为包被抗体、E5作为检测抗体，对上述3种支原体模式菌株检测限均可达到ng级的检测水平；除此之外还可以检测到12个地方分离株及猫支原体、犬支原体和豚鼠支原体的模式菌株。　　

关键词：支原体单克隆抗体血清学分离培养法

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铁皮石斛的内生细菌多态性与优势种群分析

铁皮石斛的内生细菌多态性与优势种群分析

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作者：俞婕浙江理工大学

学位级别：硕士

铁皮石斛等兰科植物与微生物密切相关，内生菌对种子萌发、植物生长、抗逆和刺激次生代谢等都具有促进作用，因而倍受关注。20多年来，铁皮石斛内生真菌多样性及其功能研究与应用开发发展很快，但有关铁皮石斛内生细菌的研究报道较少。... 详细信息

铁皮石斛等兰科植物与微生物密切相关，内生菌对种子萌发、植物生长、抗逆和刺激次生代谢等都具有促进作用，因而倍受关注。20多年来，铁皮石斛内生真菌多样性及其功能研究与应用开发发展很快，但有关铁皮石斛内生细菌的研究报道较少。本论文运用微生物分子生态学方法结合传统分离培养法，对铁皮石斛根部和茎部内生细菌进行多态性和优势种群分析，以期为进一步探索内生细菌与铁皮石斛的互作奠定基础。目前，细菌分子生态学研究主要是基于16S rRNA基因多态性，为此本论文首先研究了铁皮石斛rRNA基因的多样性。采用细菌通用引物27f/1492r PCR扩增铁皮石斛田间样品和组培苗基因组DNA，获得2000bp的线粒体18S rRNA基因和约1200bp、1500bp的叶绿体16S rRNA基因序列。BLAST分析表明，铁皮石斛线粒体18S rRNA基因与芦笋线粒体18S rRNA基因的相似性为99%，叶绿体16S rRNA基因与石斛属、小兰屿蝴蝶兰的叶绿体16S rRNA基因的相似性为100%。铁皮石斛线粒体18S rRNA基因、叶绿体16S rRNA基因与***16S rRNA基因序列的相似度分别为59.5%和70.3%。将细菌常用16S rRNA基因通用引物序列与铁皮石斛rRNA基因序列分别比对，其碱基几乎完全匹配。该结论解释了常用细菌通用引物能从铁皮石斛中扩增出大量rRNA基因的原因。可见，铁皮石斛内具有丰富的rRNA基因，因此进行铁皮石斛内生细菌的多样性分析需要设计特异性引物。根据数据库中不同属的细菌16S rRNA基因序列，参考铁皮石斛rRNA基因序列，设计内生细菌特异性引物。分别设计可以区分线粒体18S rRNA基因和叶绿体16S rRNA基因的引物，共计5条上游引物和6条下游引物。通过筛选，确定特异性和通用性均较好的引物对fM1/rC5作为巢式PCR第一次扩增引物。同时，根据巢式引物设计原则和DGGE电泳对扩增产物要求，确定f515-GC和rC5作为第二次扩增引物对。采用巢式PCR-DGGE法对铁皮石斛内生细菌的分子多态性进行分析。结果显示，从萧山铁皮石斛根部和茎部、奉化根部和茎部、庆元根部和茎部分别获得DGGE条带数为16、12、13、13、13和11。对其中代表不同菌株的31个条带进行测序鉴定，结果发现伯克氏菌属、假单胞菌属、鞘脂单胞菌属和新鞘脂菌属的内生细菌数量较多。根据DGGE条带亮度，确定优势内生细菌分别为伯克氏菌属、假单胞菌属、鞘脂单胞菌属、新鞘脂菌属、沙雷氏菌属和梭菌属。可见，铁皮石斛内生细菌多样性较为丰富，且因产地、组织的不同呈现分子多态性。采用传统分离培养法，分析了铁皮石斛可培养内生细菌的多态性及优势种群。从萧山、奉化、庆元三地铁皮石斛中分离到内生细菌共计134株。依据分离物出现频率及生长速度，筛选出优势内生细菌11株，进行进一步鉴定和酶活性检测。鉴定结果显示，11株优势菌株中有9株属于芽孢杆菌属，其中苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、假单胞菌在农业上已有较为深入的研究与应用。酶活性检测结果显示，11株优势内生细菌中5株有蛋白酶活性，4株有淀粉酶活性，4株有卵磷脂酶活性，4株有固氮酶活性。这些菌株与铁皮石斛的相互作用及其对品质和产量的影响正在研究中。综上所述，本论文运用分子生态学结合传统分离培养法，对铁皮石斛内生细菌的多态性和优势种群进行了分析，表明铁皮石斛内生细菌因产地和组织不同存在多态性，其中分子多态性和可培养内生细菌多态性存在差别，产生这种差别的原因有待进一步分析。总之，本论文铁皮石斛内生细菌的多态性分析为后续内生细菌与植物互作研究奠定了基础。

关键词：铁皮石斛内生细菌微生物分子生态学 DGGE 分离培养法

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高粱籽粒霉变的真菌种群研究

引用

沈阳农业大学学报 1988年第1期 27-34页

作者：梁景颐白金铠

1985～1986年对15个高粱品种籽粒,7个高粱米样品,以滤纸保湿法和分离培养法,从高粱籽粒和高粱米内部和表面共分离鉴定出19个真菌属、26个真菌种。致使籽粒霉变的病原菌种是Fusarium moniliforme和***。两种分离方法以分离培养法出现的... 详细信息

1985～1986年对15个高粱品种籽粒,7个高粱米样品,以滤纸保湿法和分离培养法,从高粱籽粒和高粱米内部和表面共分离鉴定出19个真菌属、26个真菌种。致使籽粒霉变的病原菌种是Fusarium moniliforme和***。两种分离方法以分离培养法出现的种类和数量,远比滤纸保湿法的数量多。高粱米上寄藏的真菌种数的数量不及籽粒上出现频率高Drechslera sorghicola,Glomerella sorghi,Gonatohotrysafricanus,Stachybotrys chartarum,Torula graminis是国内新记录种。

关键词：高粱籽粒霉变真菌种群滤纸保湿法分离培养法

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免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立及其临床应用评价

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标记免疫分析与临床 2011年第2期18卷 107-111页

作者：唐盛林恒先龚海涛单万水深圳大学医学院广东深圳518060 深圳市迈科龙生物技术有限公司广东深圳518057 深圳市第三人民医院检验科广东深圳518020

通过试验研究,确定了抗体荧光标记的最佳条件、免疫荧光法检测的最适抗体浓度及最佳反应条件,从而研究免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立,并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验,评价其检测效果。采用分离培养法和奈瑟... 详细信息

通过试验研究,确定了抗体荧光标记的最佳条件、免疫荧光法检测的最适抗体浓度及最佳反应条件,从而研究免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立,并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验,评价其检测效果。采用分离培养法和奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒对1100例临床样本进行平行检测,并以分离培养法检测结果为对照,统计免疫荧光试剂盒与分离培养法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率。试验结果统计分析显示,受测免疫荧光试剂盒检测与分离培养法检测的总符合率为97.64%,阳性符合率为93.28%,阴性符合率为98.17%,Kappa值>0.8,表明受测免疫荧光试剂盒与分离培养法的临床检测结果无显著性差异。受测免疫荧光法检测试剂盒检测快速、简便、经济、准确,可用于奈瑟氏淋球菌的临床快速诊断。

关键词：奈瑟氏淋球菌分离培养法免疫荧光法单克隆抗体

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肠出血性大肠杆菌O157:H7检测技术进展

引用

国际检验医学杂志 2013年第19期34卷 2570-2572页

作者：王培育周梅广西宁明县卫生监督所广西宁明532500 广西宁明县疾病预防控制中心广西宁明532500

肠出血性大肠杆菌O157：H7（*** O157：H7）是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型,主要引起人的食源性疾病,以突发性腹痛、腹泻、血便为主要症状,严重时并发肾衰竭,病死率高。*** O157：H7广泛分布于自然界,其引起的疾病与食用未烘... 详细信息

肠出血性大肠杆菌O157：H7（*** O157：H7）是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型,主要引起人的食源性疾病,以突发性腹痛、腹泻、血便为主要症状,严重时并发肾衰竭,病死率高。*** O157：H7广泛分布于自然界,其引起的疾病与食用未烘烤的饼干面团[1]、生菜有关[2],在猪、牛粪便及猪肉、牛肉中分离率极高,对公众健康构成严重威胁[3]。因此,

关键词：大肠杆菌O157 H7 食源性疾病分离培养法聚合酶链反应

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两种方法检测LGC盲样及效果探讨

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中国疗养医学 2015年第1期24卷 87-89页

作者：韩毅彭浩无锡市疾病预防控制中心 214023

目的检测LGC盲样中的小肠结肠炎耶尔森氏菌并对过程和结果进行探讨。方法 1分离培养法。2实时荧光PCR法。结果两者均检出小肠结肠炎耶尔森氏菌。结论两种方法的有效结合对目标菌检出有更重要的意义。

关键词：盲样小肠结肠炎耶尔森氏菌分离培养法实时荧光PCR法

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水产品中霍乱弧菌4种检测方法的效果比较

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中国卫生检验杂志 2016年第8期26卷 1119-1121页

作者：谢朝梅肖慧芳刘保湘谢燕湘张红曾希鹏常德市疾病预防控制中心湖南常德415000 湖南省疾病预防控制中心湖南长沙410005

目的研究出一套高效、实用的水产品中霍乱弧菌检测方法,监测外环境和食品中霍乱弧菌污染状况,及时、有效地防控霍乱疫情。方法按照2012年版《全国霍乱监测方案》和第6版《霍乱防治手册》,配制含不同浓度霍乱弧菌的阳性水产品样品和不含... 详细信息

目的研究出一套高效、实用的水产品中霍乱弧菌检测方法,监测外环境和食品中霍乱弧菌污染状况,及时、有效地防控霍乱疫情。方法按照2012年版《全国霍乱监测方案》和第6版《霍乱防治手册》,配制含不同浓度霍乱弧菌的阳性水产品样品和不含霍乱弧菌的阴性水产品样品,用碱性蛋白胨水增菌6 h后,分别用胶体金法、上转发光法、实时荧光PCR法、分离培养法4种方法检测不同水产品中霍乱弧菌的检测效果。结果胶体金法、上转发光法、实时荧光PCR法、分离培养法检测水产品中霍乱弧菌,每种方法的检测时间和检测成本各不相同,方法的敏感性不同,但特异性无差异。结论在进行水产品中霍乱弧菌监测时,可以将4种方法有机结合,先选择1种-2种快速方法进行初筛。其中上转发光法是比较理想的快速筛查方法,对筛出的阳性标本再用分离培养法进一步确证和溯源分析,可以大大提高霍乱弧菌的检测效果,更加有效地防控霍乱疫情。

关键词：胶体金法上转发光法实时荧光PCR法分离培养法霍乱弧菌效果比较

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性传播疾病实验检测综述

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中国优生与遗传杂志 2004年第5期12卷 139-140,138页

作者：何江仇东辉余伍忠陈虎山桂俊豪兰州军区乌鲁木齐总医院临床医学研究所乌鲁木齐830000

本文对性传播疾病主要的实验检测方法作以简单综述 ,使广大患者和医务工作者认识和了解这些实验检测方法的临床应用价值 ,为性传播疾病的早期筛查、早期诊断和早期治疗提供一定的理论根据 ,为广泛开展婚前体检、优生咨询、产前保健、新... 详细信息

本文对性传播疾病主要的实验检测方法作以简单综述 ,使广大患者和医务工作者认识和了解这些实验检测方法的临床应用价值 ,为性传播疾病的早期筛查、早期诊断和早期治疗提供一定的理论根据 ,为广泛开展婚前体检、优生咨询、产前保健、新生儿疾病筛查等工作奠定基础。

关键词：性传播疾病分离培养法涂片镜检法酶联免疫吸附试验实时荧光定量PCR

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临床快速鉴定厌氧菌方法及评价

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中国微生态学杂志 1993年第1期5卷 76-79页

作者：邓君张德纯重庆医科大学医学检验系八八级重庆医科大学重庆630046

厌氧菌是近年来研究得较多的对人类及动物感染的原因菌。从临床标本中分离鉴定厌氧菌是临床微生物学的重要课题之一,而其常规的分离培养法一般需7～10天,不能及时为临床的细菌学诊断提供根据。为此,国内外许多学者在厌氧菌的快速检出和... 详细信息

厌氧菌是近年来研究得较多的对人类及动物感染的原因菌。从临床标本中分离鉴定厌氧菌是临床微生物学的重要课题之一,而其常规的分离培养法一般需7～10天,不能及时为临床的细菌学诊断提供根据。为此,国内外许多学者在厌氧菌的快速检出和鉴定方面作了大量研究,大大简化了鉴定的手续和时间。

关键词：厌氧菌感染分离培养法临床微生物学免疫荧光法细菌学诊断细菌检验生化鉴定荧光抗体特异性革兰氏阴性杆菌

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霍乱弧菌快速检测试剂对不同类型样本的检测效果分析

引用

中国卫生检验杂志 2009年第11期19卷 2482-2483页

作者：黄海徐海英周登仁王琼妹叶桦海南省海口市疾病预防控制中心海南海口570102

目的:对胶体金免疫快速检测法检测不同类型样本中霍乱弧菌的结果进行分析研究。方法:利用分离培养法和快速法对不同类型样本中的霍乱弧菌进行检测。结果:检测2945份各类检样,分离培养法阳性141份,快速法阳性138份,两种方法均阳性127份,... 详细信息

目的:对胶体金免疫快速检测法检测不同类型样本中霍乱弧菌的结果进行分析研究。方法:利用分离培养法和快速法对不同类型样本中的霍乱弧菌进行检测。结果:检测2945份各类检样,分离培养法阳性141份,快速法阳性138份,两种方法均阳性127份,两种方法均阴性2793份,两种方法结果不符者共25份。结论:以分离培养法为标准分析快速法结果,快速法适用于生活饮用水、外环境(水体、物表)、消杀效果检测、可疑人群筛查、快速辅助诊断新发感染患者和无症状感染者;认为快速法不适用于含菌量较少的样本,不适合用于经临床治疗后病人样本的检测,住院治疗病人要解除隔离措施,需经分离培养法确认阴性后方可解除隔离。

关键词：霍乱弧菌胶体金免疫快速检测分离培养法

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