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安徽农业科学 2010年第11期38卷 5576-5577,5607页

作者：刘艳萍滕立平段黄金鲁乃增王高辉塔里木大学植物科学学院新疆阿拉尔843300

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生... 详细信息

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生柽柳茎尖的胶球在0.8mol/L蔗糖溶液中培养24h可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20min可以明显提高存活率,在优化条件下存活率可高达48.3%。[结论]蔗糖浓度和预培养时间是决定沙生柽柳茎尖存活率的关键因素。

关键词：沙生柽柳休眠茎尖超低温保存包埋玻璃化法

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包埋玻璃化法超低温保存条斑紫菜O3D自由丝状体的研究

包埋玻璃化法超低温保存条斑紫菜O3D自由丝状体的研究

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作者：张岚翠辽宁师范大学

学位级别：硕士

本文采用包埋-玻璃化法超低温保存条斑紫菜自由丝状体。将1.5g／10mL(鲜重)材料包埋于含30‰的NaCl的3％的褐藻酸钙胶球中，在暗处恢复培养1d后用植物玻璃化溶液(plant vitrification solution，PVS)(5％(v／v)二甲基亚砜+30％(v／v)甘... 详细信息

本文采用包埋-玻璃化法超低温保存条斑紫菜自由丝状体。将1.5g／10mL(鲜重)材料包埋于含30‰的NaCl的3％的褐藻酸钙胶球中，在暗处恢复培养1d后用植物玻璃化溶液(plant vitrification solution，PVS)(5％(v／v)二甲基亚砜+30％(v／v)甘油+15％(v／v)乙二醇+0.4mol／L蔗糖溶液)在不同的条件下处理不同的时间。根据胶球内叶绿素的含量计算存活率。本文主要研究了PVS处理时间，装载条件，处理温度等因素对存活率的影响，以及在脱水过程和冰冻前后丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutas，SOD)活性的变化。结果如下： 1 PVS处理时间对存活率的影响将30个胶球放入100％的PVS溶液中在4℃下分别处理(min)0，2，5，10，20。结果发现，在PVS处理5min后冻存的材料存活率最高为28.1％。 2．装载时间对条斑紫菜冰冻存活率的影响在用100％PVS脱水处理之前，用25％的PVS溶液对条斑紫菜丝状体在4℃下进行装载处理(min)0，2，5，10，20，结果显示，最佳装载时间为10min，经此过程冰冻后的材料的存活率由未经装载的28.7％提高到了42.3％。 3 处理条件对条斑紫菜冰冻后存活率的影响在0℃条件下处理，条斑紫菜自由丝状体冰冻之后存活率从36.4％(25℃)增加到47.9％，提高了10个百分点。 4 化冻条件对条斑紫菜冰冻存活率的影响研究发现：在40℃的化冻温度下，条斑紫菜丝状体的存活率显著高于0℃-20℃下的存活率，为41.9％。但是化冻温度超过40℃以后，虽然进一步提高了化冻速率，但存活率却有所下降。 5 脱水和冰冻过程中MDA含量的变化冰冻后材料的MDA含量均高于未冰冻材料的MDA含量，同时经过装载处理的材料冰冻后的MDA含量低于未经装载的材料冰冻后的MDA含量，说明装载过程可以减少冰冻过程中对膜的伤害。 6 脱水和冰冻过程中SOD活性的变化冰冻后材料的SOD活性均高于未冰冻材料的SOD活性，同时经过装载处理的材料冰冻后的SOD活性低于未经装载的材料冰冻后的SOD活性。

关键词：条斑紫菜03D 自由丝状体包埋玻璃化法超低温保存 MDA SOD

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包埋玻璃化法冷冻保存两种饵料金藻的研究

包埋玻璃化法冷冻保存两种饵料金藻的研究

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作者：刘丽娜辽宁师范大学

学位级别：硕士

液氮超低温保存是目前植物种质资源长期保存的理想方法。本文总结了近十年来超低温保存植物材料所取得的主要成果。本文以绿色巴夫藻(Pavlova viridis)和球等鞭金藻(Isochrysis galbana 3011)两种饵料金藻为试验材料,用包埋玻璃化法进... 详细信息

液氮超低温保存是目前植物种质资源长期保存的理想方法。本文总结了近十年来超低温保存植物材料所取得的主要成果。本文以绿色巴夫藻(Pavlova viridis)和球等鞭金藻(Isochrysis galbana 3011)两种饵料金藻为试验材料,用包埋玻璃化法进行冰冻保存.选择静止初期的藻细胞包埋在含有30‰氯化钠的3%褐藻酸钙胶球中,细胞负载约300万个细胞/胶球,用60% PVS(PVS球等鞭金藻: 30%甘油(GLY)+ 20%乙二醇(EG)+ 10%二甲基亚砜(DMSO),用f/2培养基定容;PVS绿色巴夫藻: 30%甘油(GLY) + 20%乙二醇(EG)+ 10%二甲基亚砜(DMSO)+ 5%聚乙烯吡咯烷酮(PVP),用f/2培养基定容)溶液装载后,用100%PVS溶液进行脱水处理,冻存24h后取出冻存管并迅速投入40 oC恒温水浴中快速化冻约3min,探讨了装载液成分、浓度,装载时间,脱水时间,洗涤液浓度及洗涤时间对球等鞭金藻和绿色巴夫藻超低温保存的影响。结果表明: 1.球等鞭金藻,21℃装载60 min,0℃脱水60min,0.5M山梨醇洗涤60min条件下,球等鞭金藻的存活率最高,为45%。 2.绿色巴夫藻,21℃下装载180 min,0℃脱水60min,1.0M山梨醇洗涤40min条件下,球等鞭金藻的存活率最高,为40%。与常规的两步法和包埋脱水法相比,包埋-玻璃化法简单、快速且存活率高,在藻类种质保存中有广阔的应用前景。

关键词：绿色巴夫藻球等鞭金藻冰冻保存包埋玻璃化法装载脱水洗涤

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包埋玻璃化法超低温保存裙带菜雌、雄配子体的研究

包埋玻璃化法超低温保存裙带菜雌、雄配子体的研究

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作者：谷月辽宁师范大学

学位级别：硕士

内容摘要:液氮超低温保存是目前植物种质资源长期保存的理想方法。本文综述了近十年来超低温保存植物材料所取得的主要成果。近些年来,由于对海洋生物的资源开发,藻类在我们的生产和生活中扮演着越来越重要的角色,它们在生物技术上的潜... 详细信息

内容摘要:液氮超低温保存是目前植物种质资源长期保存的理想方法。本文综述了近十年来超低温保存植物材料所取得的主要成果。近些年来,由于对海洋生物的资源开发,藻类在我们的生产和生活中扮演着越来越重要的角色,它们在生物技术上的潜力与日俱增,因此,藻类种质超低温保存的研究日益受到重视。国内外对藻类种质资源超低温保存的方法也有了相当的研究,其中,包埋-玻璃化法是20世纪90年代在玻璃化法和包埋脱水法基础上发展起来的超低温保存植物种质的新技术。与常规的两步法和包埋脱水法相比,包埋玻璃化法具有操作简单、重演性好、能同时处理大量材料等优点,在藻类种质保存中有广阔的应用前景。本文首次以裙带菜雌、雄配子体为试验材料,用包埋玻璃化法进行超低温保存。首先将裙带菜配子体包埋在含有30‰氯化钠的3%褐藻酸钙的胶球中,在暗处恢复培养1d,光下恢复3d后,用装载液装载,再用100%玻璃化溶液(plant vitrification solution,PVS)进行脱水处理,冻存1h后,取出装有样品的冻存管,并迅速投入40 oC恒温水浴中,快速化冻约2min,化冻后样品经洗涤液洗涤后用于存活率测定。探讨了装载液成分,装载时间,玻璃化溶液成分,脱水时间,洗涤液成分及洗涤时间对裙带菜雌、雄配子体超低温保存的影响。结果表明: 1、裙带菜雌配子体:25℃2M甘油+0.6M蔗糖装载120min,0℃PVS2脱水50min,1.2M蔗糖溶液洗涤两次,每次10min的条件下,裙带菜雌配子体保存后的存活率最高,为31%。 2、裙带菜雄配子体:25℃2M甘油+0.6M蔗糖装载90min,0℃PVS2脱水40min,1.2M蔗糖溶液洗涤两次,每次10min的条件下,裙带菜雄配子体保存后的存活率最高,为26%。本实验将裙带菜雌、雄配子体分开进行纯化和超低温保存,有利于育种的需要,而且超低温保存后的雌、雄配子体具有完全的再生能力,能够正常地发育成孢子体。本实验首次采用包埋玻璃化法保存裙带菜配子体,大大地简化了超低温保存程序,为长期保存裙带菜种质资源提供了新途径。

关键词：裙带菜配子体包埋玻璃化法超低温保存存活率

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红芽芋茎尖的包埋玻璃化法超低温保存（英文）

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植物分类与资源学报 2015年第6期37卷 801-812页

作者：王艾平尹明华洪森荣上饶师范学院生命科学学院江西上饶334001

对红芽芋(Colocasia esculenta *** ‘Hongyayu’)茎尖的包埋玻璃化法超低温保存技术进行了研究。茎尖从培养8周的试管苗上切下并包埋成海藻酸钙凝胶珠,并在MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3+0.... 详细信息

对红芽芋(Colocasia esculenta *** ‘Hongyayu’)茎尖的包埋玻璃化法超低温保存技术进行了研究。茎尖从培养8周的试管苗上切下并包埋成海藻酸钙凝胶珠,并在MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3+0.3 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中预培养24 h,随后用2 mol·L^(-1)甘油+0.4 mol·L^(-1)蔗糖的混合物在25℃下装载30 min,并用PVS2在25℃脱水20 min后将包埋的茎尖直接投入液氮保存。保存1 d后取出材料在40℃水浴快速复温3 min后,吸去冷冻管中PVS2,并用MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3+1.2 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基在25℃洗涤3次,每次10 min。最后将茎尖接种于MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3的固体培养基上,暗培养3 d后转入正常的光周期中培养。红芽芋茎尖冻后成活率约为80%,其再生植株没有发生形态学的变化。这种包埋玻璃化法程序有望成为红芽芽茎尖超低温保存的常规方法。

关键词：超低温保存包埋玻璃化法红芽芋茎尖

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药用植物黄芪离体培养茎尖的包埋脱水法和包埋玻璃化法超低温保存（英文）

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植物分类与资源学报 2015年第6期37卷 767-778页

作者：尹明华洪森荣上饶师范学院生命科学学院江西上饶334001

为找出一条黄芪种质长期包埋脱水法保存和包埋玻璃化法保存的程序,以来源于黄芪离体生长腋芽的黄芪茎尖并包埋成海藻酸钙珠。随后,在MS+0.75 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中25℃下预培养5 d后,放于干硅胶上无菌干燥5 h,直至含水量达... 详细信息

为找出一条黄芪种质长期包埋脱水法保存和包埋玻璃化法保存的程序,以来源于黄芪离体生长腋芽的黄芪茎尖并包埋成海藻酸钙珠。随后,在MS+0.75 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中25℃下预培养5 d后,放于干硅胶上无菌干燥5 h,直至含水量达23.1%(以鲜重为基础)时将材料投入液氮保存。保存1 d后,茎尖在40℃水浴中化冻2~3 min并转入固体培养基上进行再生培养,2周后大约50%的茎尖可再生出芽。黄芪茎尖包埋玻璃化法超低温保存程序也被优化,同样包埋成海藻酸钙凝胶珠的茎尖在MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+0.75 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中25℃预培养3 d,用2 mol·L^(-1)甘油+0.4 mol·L^(-1)蔗糖装载液25℃装载90 min并再用PVS2在0℃下处理120 min后直接投入液氮。保存1 d后,取出材料在37℃水浴中化冻2~3 min,并用MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+1.2 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基进行10 min的洗涤后转入MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA的固体培养基上进行再生培养。茎尖的再生率接近80%。以上两种超低温保存方式均未造成再生植株形态学上的变化。因此,包埋脱水法和包埋玻璃化法两种常规方法对于黄芪茎尖超低温保存来说均具有重要的意义。

关键词：超低温保存包埋脱水法包埋玻璃化法黄芪茎尖种质保存

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卵叶泥炭藓茎尖包埋玻璃化法超低温保存研究

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西北植物学报 2018年第3期38卷 573-578页

作者：许丹尔高雪笛李秋萍戚钰韦玉梅卢春红王健朱瑞良华东师范大学生命科学学院上海200241 中国科学院上海生命科学学院植物生理生态研究所上海200032 四川大学生命科学学院成都610000 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西喀斯特山区植物保护及生态恢复重点实验室广西桂林541006

该研究通过对脱水时间和化冻温度的探索,检验了包埋玻璃化法在超低温保存湿润生境中苔藓的可能性。结果表明:卵叶泥炭藓无菌苗在4℃条件下预培养3d后,在0℃用60% PVS_2装载30min,PVS_2脱水60min后迅速投入液氮保存,24h后用40℃水浴快速... 详细信息

该研究通过对脱水时间和化冻温度的探索,检验了包埋玻璃化法在超低温保存湿润生境中苔藓的可能性。结果表明:卵叶泥炭藓无菌苗在4℃条件下预培养3d后,在0℃用60% PVS_2装载30min,PVS_2脱水60min后迅速投入液氮保存,24h后用40℃水浴快速化冻2min再培养,成活率可达42.41%,且再生植株与常温状态下的植株形态指标没有显著性差异。研究认为,包埋玻璃化法超低温保存湿润环境中生长的苔藓植物是可行的。

关键词：苔藓植物卵叶泥炭藓包埋玻璃化法超低温保存

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江西山药茎尖包埋玻璃化法超低温保存及其遗传稳定性检测

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浙江农业学报 2016年第6期28卷 984-991页

作者：尹明华徐志坚章省琴吕思杰曾艳红付有章夏瑾华洪森荣上饶师范学院生命科学学院江西上饶334001

采用植物组织培养法对广丰药薯茎尖的包埋玻璃化法超低温保存程序进行优化,并采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记法和流式细胞术对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测,同时将超低温程序应用到江西山药其他地方品种,旨在为薯蓣属植... 详细信息

采用植物组织培养法对广丰药薯茎尖的包埋玻璃化法超低温保存程序进行优化,并采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记法和流式细胞术对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测,同时将超低温程序应用到江西山药其他地方品种,旨在为薯蓣属植物种质资源的长期保存奠定理论基础。结果表明,广丰药薯茎尖预培养的较佳时间为5 d,较佳的蔗糖浓度为0.75 mol·L^-1;装载的较佳时间为40 min;脱水的较佳温度为0℃,较佳时间为60 min;冻后黑暗培养7 d可以显著提高其成活率。用AFLP分子标记法和流式细胞术对茎尖冻后再生植株的遗传稳定性进行检测,没有发现异常条带和染色体倍性变化,气孔观察也未发现叶下表皮气孔参数的显著变异。将这种超低温保存程序用于江西山药其他基因型,成活率约为40%-85%。该研究建立的包埋玻璃化法超低温保存程序能保证江西山药的遗传稳定性,可为建立江西山药种质资源超低温保存库提供一定的技术支撑。

关键词：江西山药茎尖包埋玻璃化法超低温保存遗传稳定性

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胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究

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新疆农业科学 2017年第12期54卷 2232-2238页

作者：张玲田洪涛刘锦涛刘艳萍塔里木大学生命科学学院/新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300

【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法,对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取深冬胡杨休眠茎尖,无菌处理后,包埋在3%褐藻酸钙胶球中,对包埋后的胶球进行蔗糖预培养,预培养后的胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预... 详细信息

【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法,对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取深冬胡杨休眠茎尖,无菌处理后,包埋在3%褐藻酸钙胶球中,对包埋后的胶球进行蔗糖预培养,预培养后的胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化保护液和处理时间对胡杨休眠茎尖存活率的影响。【结果】含有休眠茎尖的褐藻酸钙胶球在0.8 mol/L蔗糖溶液中预培养24 h,经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(4 000)+5%二甲基亚砜],于室温下处理30 min后再进行冷冻保存,可以获得较好的存活率。【结论】在优化的条件下,胡杨休眠茎尖存活率可高达77%,对保存后再生的幼芽进行遗传稳定性检测,未发现变异。采用液氮冷冻保存胡杨休眠茎尖是可行的。

关键词：胡杨休眠茎尖冷冻保存包埋玻璃化法

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树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存

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中国农学通报 2010年第18期26卷 59-62页

作者：娄汉平郭修武代汉萍沈阳农业大学园艺学院沈阳110866 辽宁职业学院园艺系辽宁铁岭112001

对树莓茎尖包埋玻璃化法种质资源保存进行了研究,以期建立简单、高效的树莓种质资源超低温保存体系。试验以树莓试管苗茎尖为材料,探讨了不同因素对树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存后成活率的影响。结果表明:长约1mm的树莓试管苗... 详细信息

对树莓茎尖包埋玻璃化法种质资源保存进行了研究,以期建立简单、高效的树莓种质资源超低温保存体系。试验以树莓试管苗茎尖为材料,探讨了不同因素对树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存后成活率的影响。结果表明:长约1mm的树莓试管苗茎尖用海藻酸钙包埋后,采用分步预培养的方法,最后终止蔗糖浓度为0.9mol/L的MS培养基中进行预培养3天,再用含2mol/L甘油和0.9mol/L蔗糖的装载液处理90min,在0℃下用PVS2处理180min后投入液氮中保存1h,在40℃下化冻3min,用含1mol/L蔗糖的MS液体培养基洗涤20min,最后转到恢复培养基上,30天后在没有形成愈伤组织的情况下形成新的植株。以上的保存程序应用于6个树莓品种,成活率达85%。该结果为树莓种质资源的超低温长期保存提供了理论依据。

关键词：树莓茎尖包埋玻璃化法

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