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中国防痨杂志 2008年第3期30卷 223-226页

作者：孙蕾杨立军郑锦辉杨文涛王莉辽宁省疾病预防控制中心沈阳110005 沈阳军区二二医院沈阳110001

结核分枝杆菌，尤其耐药结核分枝杆菌已对公众健康造成了严重危害，给结核病的防治带来了更大的挑战。其中，北京基因型结核分枝杆菌达到全球分离结核菌株的13%[1]，全世界有1/3的结核病由北京基因型结核分枝杆菌引起。该菌株已在世界... 详细信息

结核分枝杆菌，尤其耐药结核分枝杆菌已对公众健康造成了严重危害，给结核病的防治带来了更大的挑战。其中，北京基因型结核分枝杆菌达到全球分离结核菌株的13%[1]，全世界有1/3的结核病由北京基因型结核分枝杆菌引起。该菌株已在世界很多地区传播。因此，北京基因型结核分枝杆菌的研究已成为结核相关研究的热点课题之一。

关键词：北京基因型结核分枝杆菌毒性毒力结核分枝杆菌分枝杆菌属结核杆菌

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北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究

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中国人兽共患病学报 2019年第6期35卷 502-508页

作者：谢婉莹赵继利杨赛丽刘微袁俐石河子大学医学院病原微生物学与免疫学教研室

目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF... 详细信息

目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。

关键词：北京基因型结核分枝杆菌非北京基因型结核分枝杆菌毒素-抗毒素mazEF系统生长曲线

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mazEF系统及生物膜对北京基因型结核分枝杆菌生存能力的影响

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石河子大学学报（自然科学版） 2018年第6期36卷 661-668页

作者：谢婉莹赵继利刘微杨赛丽袁俐石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室

目的探索生物膜形成能力、mazEF3,6,9系统的表达与北京基因型结核分枝杆菌生存力的相关性。方法检测北京、非北京基因型菌株与标准毒力株H37Rv在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力。采用PCR技术扩增上述菌株的mazE3,6,9系统,并进... 详细信息

目的探索生物膜形成能力、mazEF3,6,9系统的表达与北京基因型结核分枝杆菌生存力的相关性。方法检测北京、非北京基因型菌株与标准毒力株H37Rv在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力。采用PCR技术扩增上述菌株的mazE3,6,9系统,并进行基因测序;使用荧光定量PCR检测所有菌株的mazEF3,6,9基因、mazF3,6,9毒素基因和mazEF3,6,9抗毒素基因的mRNA表达水平;利用WesternBlot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果北京基因型菌株在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力高于非北京基因型菌株。北京、非北京基因型菌株mazF3基因193bp处发生碱基突变,由C突变为T。在mRNA表达水平上,与H37Rv相比,北京、非北京基因型菌株中mazE3低表达;非北京菌株中mazE6低表达,mazE9高表达(P<0.05)。与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株中mazEF3高表达、mazE9低表达、mazF3、mazF6、mazF9高表达,mazF9蛋白高表达(P<0.05)。结论北京基因型菌株具有较强的生存力和生物膜形成能力。mazEF系统的差异表达、生物膜成膜能力强可能与北京基因型菌株生存能力强相关。

关键词：结核分枝杆菌北京基因型结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统生存力生物膜

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北京基因型结核分枝杆菌中心菌株的筛选

北京基因型结核分枝杆菌中心菌株的筛选

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2006中国防痨协会全国学会会议

作者：李卫民黄继翔柴利泉王博牛天贵李传友北京市结核病胸部肿瘤研究所中国农业大学北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所中国农业大学北京市结核病胸部肿瘤研究所

背景结核分枝杆菌北京基因型(Beijing Genotype)是结核分枝杆菌中一个遗传关系接近的分支(clade)。在中国北京基因型的流行程度为 64．9％。在全球广为流行且与耐药存在一定的联系。一些文献报道,北京基因型结核分枝杆菌有较强的毒性,... 详细信息

背景结核分枝杆菌北京基因型(Beijing Genotype)是结核分枝杆菌中一个遗传关系接近的分支(clade)。在中国北京基因型的流行程度为 64．9％。在全球广为流行且与耐药存在一定的联系。一些文献报道,北京基因型结核分枝杆菌有较强的毒性,诱导细胞引起T1／T2的失衡,使免疫保护作用降低。因此获得我国有代表性的北京基因型结核分枝杆菌,从免疫学,蛋白组和基因组学的角度研究,不但有利于我国的结核病防治,而且也利于结核病发病机制的研究。方法 2000年全国结

关键词：北京基因型结核分枝杆菌聚类分析

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北京基因型结核分枝杆菌在越南再出现

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中国人兽共患病学报 2000年第5期 120-120页

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快速筛选定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法

快速筛选定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法

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2007年中国防痨协会全国学术会议

作者：刘毅李卫民田苗孙照刚李传友周辉张治国高铁杰高峰北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市结核病胸部肿瘤研究所北京市昌平区结核病防治所北京市昌平区结核病防治所北京市昌平区结核病防治所中国动物卫生与流行病学中心

目的在经典的结核分枝杆菌基因分型方法的基础上介绍推荐一种快速准确定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法,分析说明此方法的由来、准确性和快速性。方法选定北京市昌平区的 336株临床菌株作为实验菌株。首先采用经典的基因分型方法：... 详细信息

目的在经典的结核分枝杆菌基因分型方法的基础上介绍推荐一种快速准确定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法,分析说明此方法的由来、准确性和快速性。方法选定北京市昌平区的 336株临床菌株作为实验菌株。首先采用经典的基因分型方法：间隔区寡核苷酸(Spoligotyping)分型方法对结核菌进行初步鉴定确定北京基因型结核分枝杆菌和非北京基因型结核分枝杆菌,进一步对确定为北京基因型的结核分枝杆菌运用多重 PCR 的方法区分出典型北京基因型菌株和非典型北京基因型菌株。完成运用经典分型方法后,对同批的菌株采用新的基因分型方法,即 Real-time PCR 方法,来对结核分枝杆菌重新分型,结合最新的比较基因组学的研究成果,通过判定结核分枝杆菌基因组中 RD105区是否缺失进行结核分枝杆菌北京谱系的定义。判定结核分枝杆菌基因组中 RD181区是否缺失进行典型北京基因型结核分枝杆菌和非典型北京基因型菌株的定义。最后,对经典(Spoli- gotyping 和多重 PCR)和 Real-time PCR 方法两种系统基因型分型方法的结果进行比较分析,从而对这种新的分型方法作出正确的评估。结果利用 Spoligotyping 分型方法,将336株结核分枝杆菌进行基因分型。299株为北京基因型,占全部菌株的89．1%(299/336)。采用 Real-time PCR 方法, 以定义北京基因型的 RD105为靶标分析结核分枝杆菌。其中缺失 RD105的北京基因型结核分枝杆菌为299株,占全部菌株的89．1%(299/336)。 Spoligotyping 方法鉴定的北京系与 RD105鉴定的北京系结果完全一致。而多重 PCR 方法和 Real- time PCR 方法对299株北京基因型结核分枝杆菌典型和非典型的定义结果的一致率也达到了 99．09%。结果充分说明运用两种系统分型方法对北京基因型谱系及典型和非典型北京基因型的定义结果基本一致,而且新方法的分型速度更快捷,操作更方便。结论通过与 Spoligotyping、多重 PCR 分型方法比较可知,Real-time PCR 分型方法作为一种新的快速定义北京基因型菌种的方法,具有快速,准确,简便的特点,为临床检验中的快速诊断基础科研中的快速筛选均可提供有益的补充和帮助。

关键词：北京基因型结核分枝杆菌分型方法非典型快速筛选

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北京基因型与非北京基因型结核分枝杆菌毒力测定

北京基因型与非北京基因型结核分枝杆菌毒力测定

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中华医学会结核病学分会2010年学术年会

作者：徐建陆宇付雷王彬郑梅琴李芃赵伟杰北京市结核病胸部肿瘤研究所

目的测定我国部分地区北京基因型与非北京基因型结核分枝杆菌的毒力,研究结核分枝杆菌基因型与毒力及耐药性与毒力的关系,为防治结核病提供依据。方法从我国7省市（北京、天津、河北、内蒙古、山西、河南、新疆）选择结核分枝杆菌15株... 详细信息

目的测定我国部分地区北京基因型与非北京基因型结核分枝杆菌的毒力,研究结核分枝杆菌基因型与毒力及耐药性与毒力的关系,为防治结核病提供依据。方法从我国7省市（北京、天津、河北、内蒙古、山西、河南、新疆）选择结核分枝杆菌15株进行毒力测定。运用Spoligotyping分型方法鉴定北京基因型菌株。药物敏感性实验采用MABA法,测定药物包括异烟肼（H）、利福平（R）、乙胺丁醇（E）、链霉素（S）、卡那霉素（KM）、氧氟沙星（OFX）。BALB/C小鼠尾静脉感染5×10～7cfu的结核分枝杆菌,观察小鼠生存周期,分别于感染后30天、60天分别解剖小鼠称取脾重,大体肉眼病变观察,进行肺、脾活菌计数,并将感染后60天的小鼠肺、脾进行组织病理学检查。通过小鼠的半数死亡时间,脾、肺活菌计数,组织病理学检查等比较结核分枝杆菌的毒力强弱。结果选取的15株结核分枝杆菌中,9株是北京基因型菌株,其中7株北京基因型菌株比6株非北京基因型菌株毒力强。毒力最强的北京基因型菌株致小鼠的半数死亡时间为20天,生存期为23天,毒力最弱的非北京基因型菌株到感染后60天时仅死亡一只,肉眼观察肺表面光滑,但其肺活菌计数仍达到9.84±0.13logCFU,组织病理学显示肺部组织大面积实变。15株菌株中,敏感株1株,单耐异烟肼3株,敏感株毒力在15株中居中,异烟肼耐药株毒力较敏感株弱。结论结核分枝杆菌的毒力与基因分型有关,绝大多数北京基因型的比非北京基因型的菌株毒力强。单耐异烟肼的菌株毒力较敏感株毒力减弱。

关键词：北京基因型结核分枝杆菌组织病理学检查毒力测定

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潜伏期结核分枝杆菌HLA-A~*0201限制性CD8^+CTL表位的高通量筛选

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中国病原生物学杂志 2013年第1期8卷 26-29页

作者：孙燕妮王一松王海霞平国玲王甦民张力平首都医科大学基础医学院病原生物学系北京100069 北京结核病控制研究所北京100035

目的采用生物信息学软件预测并筛选结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。方法以标准株H37Rv和北京基因型结核分枝杆菌为研究对象,利用结核分枝杆菌全基因组芯片技术筛选缺氧培养后表达上调的基因... 详细信息

目的采用生物信息学软件预测并筛选结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。方法以标准株H37Rv和北京基因型结核分枝杆菌为研究对象,利用结核分枝杆菌全基因组芯片技术筛选缺氧培养后表达上调的基因,应用SYFPEITHI生物信息学软件分析相关基因编码的多肽序列中可能存在的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位;利用T2细胞进行HLA-A2结合试验,检测候选表位肽的结合亲和性,以HLA-A2解离试验检测其结合稳定性,从而筛选出HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果从SYFPEITHI数据库预测到的表位肽中筛选出4条能够结合HLA-A*0201分子的表位肽,通过HLA-A2结合试验得到Rv0440-1(KLQER-LAKL)、Rv0440-9(TLLKGAKEV)、RV0350-6(VLKGEVKDV)与HLA-A*0201分子之间均有较高的亲和性(FR>1.5),通过HLA-A2解离试验得到候选表位肽Rv0440-1和Rv0440-9与HLA-A*0201分子的结合具有较高的稳定性(DC50>4h)。结论经生物信息学技术预测以及HLA-A2结合与解离试验初步筛选出的Rv0440-1(KLAGGVAVI)和Rv0440-9(TLLKGAKEV)是潜伏期结核分枝杆菌HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,但有待进一步实验验证。

关键词： H37Rv 北京基因型结核分枝杆菌潜伏感染基因芯片技术生物信息学软件 CTL表位预测

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