检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：项东全山西医科大学

学位级别：硕士

目的:利用细胞培养技术原代培养骨巨细胞瘤单核基质细胞(Stromal-like tumorcells,Stc)并进行细胞鉴定,研究护骨素(Osteoprotegerin,OPG)对体外骨巨细胞瘤(Giant cell tumors,GCT)的抑制增殖、诱发凋亡的作用,为GCT新的辅助治疗方案的... 详细信息

目的:利用细胞培养技术原代培养骨巨细胞瘤单核基质细胞(Stromal-like tumorcells,Stc)并进行细胞鉴定,研究护骨素(Osteoprotegerin,OPG)对体外骨巨细胞瘤(Giant cell tumors,GCT)的抑制增殖、诱发凋亡的作用,为GCT新的辅助治疗方案的确立提供初步的实验依据。方法:用胶原酶-Ⅱ消化法体外分离培养8例新鲜GCT标本进行分离培养获得原代Stc并进行传代;四种传统方法测定细胞的基本性质;噻唑蓝比色法(MTT)测OPG对Stc的细胞毒性作用;流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测Stc细胞周期比例的改变以及凋亡率的变化情况;电镜观察实验组细胞核超微结构变化;DNA-Ladder测定OPG对GCT单核基质细胞DNA影响。结果:用胶原酶-Ⅱ消化的方法可以获得较高纯度的Stc,细胞的基本性质测定符合GCT主细胞性质;MTT法结果示:OPG浓度在100μmol/L范围内,随着OPG剂量的增加(0.1、0.01、1、10、100μmol/L),细胞的吸光度减小,OPG浓度为10μmol/L时,不同作用时间(12、24、48、72h),细胞的吸光度不同,48h组最小,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞仪结果示:OPG以不同浓度(1、10、100μmol/L)分别作用48h后,细胞凋亡率及增殖指数(proliferation index,PI)分别与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成;OPG作用48h(100μmol/L)后DNA-Ladder梯形条带明显,对照组细胞DNA条带只有一条。结论:在一定浓度范围内,OPG可能会抑制人GCT单核基质细胞增殖,诱导细胞凋亡。

关键词：护骨素骨巨细胞瘤单核基质细胞细胞培养凋亡

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下调p62蛋白调控自噬抑制骨巨细胞瘤单核基质细胞胚内增殖

下调p62蛋白调控自噬抑制骨巨细胞瘤单核基质细胞胚内增殖

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作者：何豪昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]前期研究发现p62蛋白在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)组织中高表达,体外下调p62蛋白表达能够抑制GCTB单核基质细胞增殖及侵袭,但相关调控机制不明确,并且,体内下调p62蛋白能否抑制GCTB增殖有待验证。本研究通过构... 详细信息

[目的]前期研究发现p62蛋白在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)组织中高表达,体外下调p62蛋白表达能够抑制GCTB单核基质细胞增殖及侵袭,但相关调控机制不明确,并且,体内下调p62蛋白能否抑制GCTB增殖有待验证。本研究通过构建鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型,观察下调p62蛋白对GCTB单核基质细胞胚内增殖的影响;并明确p62蛋白是否通过调控自噬影响GCTB单核基质细胞的增殖。[方法]1.留取GCTB新鲜组织,进行原代细胞培养,分离单核基质细胞,采用免疫荧光检测组蛋白H3.3 G34W,鉴定分离的细胞确为单核基质细胞,选择稳定传代的单核基质细胞进行后续实验。采用慢病毒质粒转染,分别上调、下调p62基因表达,并通过qRT-PCR及Westerm blot实验验证感染效率,建立不同p62表达的单核基质细胞株亚组。2.通过鸡胚绒毛尿囊膜实验,在鸡胚上种植不同亚组单核基质细胞,比较不同亚组的鸡胚成瘤率及成瘤体积,并行HE染色、免疫荧光检测。3.分别使用氯喹、雷帕霉素处理GCTB单核基质细胞后,使用Western blot检测LC3B、p62蛋白表达。使用雷帕霉素处理不同亚组GCTB单核基质细胞后,采用免疫双荧光检测LC3B、p62蛋白定位情况,采用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。[结果]1.第三代单核基质细胞生长活跃且衰老比例低,用于后续实验。稳定转染后,获得不同p62表达的单核基质细胞株亚组。GCTB组:正常的GCTB单核基质细胞;shp62组:p62表达下调的GCTB单核基质细胞;NC组(下调空转组):shp62阴性对照细胞;mp62组:p62表达上调的GCTB单核基质细胞;NEG组(上调空转组):mp62阴性对照细胞。***62组种植鸡胚共16枚,全部未成瘤;NC组种植鸡胚共24枚,成瘤4枚,成瘤率为16.67%;mp62组种植鸡胚共26枚,成瘤5枚,成瘤率为19.23%。三组、任两组之间成瘤率差异均无统计学意义(P>0.05)。NC组鸡胚成瘤体积为6.179±2.315mm3,mp62 组鸡胚成瘤体积为 17.792±7.048 mm3,mp62 组较 NC组成瘤体积有所增加,且差异有统计学意义(P=0.027)。鸡胚移植瘤HE染色显示,mp62组较NC组的细胞数量更多,分布更密集,向周围侵袭的趋势更明显;H3.3 G34W免疫荧光染色显示,mp62组单核基质细胞阳性率为61%,NC组阳性率为32%,差异有统计学意义(P=0.038)。3.使用浓度为10nM的雷帕霉素(RAPA)处理GCTB组细胞24h后,LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平升高(P=0.0291),p62蛋白表达水平降低(P=0.0026);使用浓度为20μM的氯喹(CQ)处理GCTB组细胞24h后,LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达无明显变化(P>0.05),p62蛋白表达水平降低(P=0.0015)。使用浓度为1OnMRAPA处理不同亚组GCTB单核基质细胞,GCTB+RAPA组细胞增殖水平较GCTB组降低,两组比较24h时差异无统计学意义(P>0.05),48h(P=0.0005)、72h(P=0.0012)差异有统计学意义;shp62+RAPA组细胞增殖水平较NC+RAPA组降低,两组比较24h时差异无统计学意义(P>0.05),48h(P=0.0147)、72h(P=0.0069)差异有统计学意义。使用浓度为10μM RAPA处理不同亚组GCTB单核基质细胞48h后,GCTB组单核基质细胞的总凋亡比例为(15.99±0.26)%,GCTB+10μM RAPA组单核基质细胞的总凋亡比例为(20.77±0.36)%,差异有统计学意义(P=0.0004);NC+1OμMRAPA组单核基质细胞的总凋亡比例为(34.66±0.69)%,shp62+1OμM RAPA组单核基质细胞的总凋亡比例为(45.21±0.06)%,差异有统计学意义(P=0.0001)。[结论]1.下调p62蛋白表达抑制GCTB单核基质细胞的胚内增殖。2.下调p62蛋白可能通过调控自噬抑制GCTB单核基质细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词： p62蛋白骨巨细胞瘤单核基质细胞细胞增殖自噬

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p62蛋白通过RANKL-RANK-NF-κb信号通路调控骨巨细胞瘤单核基质细胞增殖及侵袭的研究

p62蛋白通过RANKL-RANK-NF-κb信号通路调控骨巨细胞瘤单核基质细...

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作者：刘姝昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]前期研究发现p62蛋白在骨巨细胞瘤组织中高表达,下调p62蛋白表达能够抑制骨巨细胞瘤单核基质细胞增殖及侵袭。本研究将探讨该蛋白的调控机制,是否通过RANKL-RANK-NF-κb通路,明确p62蛋白是通过经典还是非经典途径激活NF-κb信号... 详细信息

[目的]前期研究发现p62蛋白在骨巨细胞瘤组织中高表达,下调p62蛋白表达能够抑制骨巨细胞瘤单核基质细胞增殖及侵袭。本研究将探讨该蛋白的调控机制,是否通过RANKL-RANK-NF-κb通路,明确p62蛋白是通过经典还是非经典途径激活NF-κb信号,是否依赖自噬反应。[方法]1.留取骨巨细胞瘤新鲜组织,进行细胞分离及原代培养,采用免疫荧光检测RANKL蛋白、组蛋白H3.3 G34W,明确分离的细胞为单核基质细胞,进行细胞传代,利用细胞衰老实验,选取增殖活跃的细胞进行后续实验。2.采用地舒单抗处理单核基质细胞,阻断RNAKL信号,通过CCK8、流式细胞仪检测细胞增殖能力改变,通过细胞侵袭及迁移实验观察单核基质细胞侵袭能力改变;同时,采用Western Blot、免疫荧光检测下游信号p62蛋白表达、NF-κb激活的变化。3.采用慢病毒质粒转染上调或下调P62基因表达,通过Western Blot、免疫荧光检测,观察p62蛋白表达水平对NF-κb信号关键激酶IκBα活性影响,观察NF-κb信号主要亚基P65、P52入核变化,观察细胞自噬LC3B Ⅱ/Ⅰ蛋白表达变化。[结果]1.分离出主要由单核基质细胞和破骨样多核巨细胞两种细胞组成的骨巨细胞瘤原代细胞,破骨样细胞在传代48小时后开始减少,至2-3代基本消失,对剩余的细胞检测发现,RANKL蛋白定位于细胞浆、组蛋白H3.3 G34W定位于细胞核,两个标志蛋白均特异性表达于剩余细胞中,证实分离的细胞为单核基质细胞;对不同传代的单核基质细胞,进行β-半乳糖苷酶染色发现第四代细胞生长活跃,并且衰老细胞比例最低,采用第四代单核基质细胞进行后续实验。2.地舒单抗阻断RNAKL最佳浓度为800μg/ml,使用该浓度处理单核基质细胞,地舒单抗处理组24h、48h、72h、96h细胞增殖相对OD值的均值分别为:0.568±0.023、0.595±0.012、0.706±0.022、0.921±0.049,对照组 24h、48h、72h、96h 细胞增殖相对 OD 值的均值分别为:1.404±0.040、1.758±0.064、1.889±0.613、2.584±0.098,两组间有统计学差异(P<0.05);地舒单抗处理组单核基质细胞细胞细胞凋亡百分比为23.615%,对照组细胞凋亡百分比为2.836%,两组间有统计学差异(P<0.05);地舒单抗处理组与对照组相比,单核基质细胞侵袭及迁移能力均明显下降,两组间均有统计学差异(P<0.001)。地舒单抗处理组和对照组相比,Western Blot及免疫荧光检测发现RANKL蛋白、p62蛋白、组蛋白H3.3 G34W的表达量均有不同程度下降,两组间均具有统计学差异(P<0.05);Western Blot检测发现NF-κb相关亚基P65、P52蛋白表达减少,两组间有统计学差异(P<0.05)。*** Blot结果显示shP62下调组较NC对照组NF-κb信号关键激酶IκBα磷酸化水平降低,两组间有统计学差异(P<0.05)。免疫荧光结果显示shP62下调组较NC对照组主要亚基P65、P52蛋白表达水平显著降低,两组间均具有统计学差异(P<0.05)。Western Blot检测发现shP62下调组较NC对照组LC3BⅡ/Ⅰ无明显变化,差异不具有统计学意义(ns)。免疫荧光结果显示p62蛋白表达与自噬LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达无明显相关性。[结论]1.p62蛋白可通过RANKL-R ANK-NF-κb信号调控单核基质细胞增殖及侵袭;2.p62蛋白可通过经典及非经典途径激活NF-κb信号,并且不依赖自噬反应调节。

关键词： p62蛋白骨巨细胞瘤 RANKL/RANK蛋白 NF-κb 细胞增殖细胞侵袭单核基质细胞

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二磷酸盐诱导人骨巨细胞瘤单核基质细胞凋亡中的电镜应用

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医学信息 2016年第9期29卷 172-173页

作者：项东全王小勇山西省大同市第五人民医院山西大同037006 福建省中医学院附属宁德市医院福建宁德350003

目的：通过电镜技术研究二磷酸盐对体外人骨巨细胞瘤(GCT)单核基质细胞(Stc)影响后细胞的超微结构变化，为GCT新的辅助治疗方案的确立提供初步的实验依据。方法用胶原酶-域消化法体外分离培养8例新鲜GCT标本进行分离培养获得原代Stc并... 详细信息

目的：通过电镜技术研究二磷酸盐对体外人骨巨细胞瘤(GCT)单核基质细胞(Stc)影响后细胞的超微结构变化，为GCT新的辅助治疗方案的确立提供初步的实验依据。方法用胶原酶-域消化法体外分离培养8例新鲜GCT标本进行分离培养获得原代Stc并进行传代；电镜观察实验组细胞核超微结构变化。结果二磷酸盐作用48 h(100μmol/L)后电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。结论在一定浓度范围内，二磷酸盐可抑制人GCT单核基质细胞增殖，诱导细胞凋亡，电镜技术在研究二磷酸盐对人GCT中Stc体外诱导凋亡研究中具有重要价值。

关键词：电镜二磷酸盐骨巨细胞瘤单核基质细胞细胞培养凋亡

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破骨细胞分化因子和骨保护因子在颌骨中心性巨细胞病变组织中的表达

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中华口腔医学杂志 2005年第4期40卷 294-297页

作者：孟雪梅于世凤魏明洁北京大学口腔医学院口腔病理研究室

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL,又称破骨细胞分化因子)和骨保护因子(OPG)蛋白在颌骨中心性巨细胞病变中的表达,探讨此类病变发生骨破坏的作用机制。方法采用免疫组织化学的方法检测26例颌骨中心性巨细胞病变中RANKL... 详细信息

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL,又称破骨细胞分化因子)和骨保护因子(OPG)蛋白在颌骨中心性巨细胞病变中的表达,探讨此类病变发生骨破坏的作用机制。方法采用免疫组织化学的方法检测26例颌骨中心性巨细胞病变中RANKL和OPG蛋白的表达。结果RANKL在颌骨中心性巨细胞病变中的血管、基质中有强烈表达,某些病变中的部分短梭形单核基质细胞和多核巨细胞的胞膜也为RANKL阳性;病变中大部分的多核巨细胞和少部分圆形单核基质细胞的胞质OPG表达为阳性。结论激活的血管内皮细胞通过调节RANKL的表达来促进颌骨中心性巨细胞病变中的多核破骨样巨细胞的形成;RANKL可以通过旁分泌和自分泌的方式发挥作用。同时在颌骨中心性巨细胞病变中存在由OPG介导的抑制多核破骨样巨细胞生成和骨吸收的负反馈机制。

关键词：破骨细胞分化因子骨保护因子中心性颌骨病变组织 RANKL 单核基质细胞细胞病变多核巨细胞免疫组织化学血管内皮细胞细胞核因子负反馈机制活化因子作用机制发挥作用细胞生成 OPG B受体骨破坏 G蛋白自分泌

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巨噬细胞炎症蛋白1-α、解整合素样-金属蛋白酶8、12和CD68蛋白在颌骨巨细胞病变及长骨骨巨细胞瘤中的表达

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中华病理学杂志 2005年第7期34卷 393-396页

作者：孟雪梅于世凤陆敏郑杰韩志惠北京大学口腔医学院病理研究室北京大学医学部病理学系

目的检测巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP-1α)、解整合素样-金属蛋白酶(ADAM)8、12和CD68在颌骨巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的表达,探讨其在这两种巨细胞病变中的多核巨细胞发生中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测24例颌骨中心性巨细... 详细信息

目的检测巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP-1α)、解整合素样-金属蛋白酶(ADAM)8、12和CD68在颌骨巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的表达,探讨其在这两种巨细胞病变中的多核巨细胞发生中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测24例颌骨中心性巨细胞病变,24例长骨骨巨细胞瘤石蜡组织中的MIP-1α、ADAM8、ADAM12和CD68蛋白的表达。结果MIP-1α在24例颌骨中心性巨细胞病变和24例长骨骨巨细胞瘤中的血管、类骨质和新骨形成区中强表达,而在多核巨细胞和圆形单核细胞中为阴性;ADAM8、ADAM12和CD68在颌骨中心性巨细胞肉芽肿和长骨骨巨细胞瘤中几乎所有多核巨细胞和部分圆形单核基质细胞均为阳性。结论颌骨中心性巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的多核巨细胞可能由CD68+的圆形单核基质细胞融合而成,这些圆形单核细胞可能是由骨微环境中的趋化因子,募集外周血中循环的单核细胞到病变局部分化而成的具有破骨细胞前体细胞性质的细胞,继而在某些融合蛋白作用下发生融合,成熟为多核破骨样巨细胞。

关键词：长骨骨巨细胞瘤巨噬细胞炎症蛋白颌骨巨细胞病变解整合素样-金属蛋白酶8 CD68 MIP-1α 免疫组织化学sP法多核巨细胞单核细胞单核基质细胞巨细胞肉芽肿中心性细胞发生石蜡组织新骨形成细胞融合趋化因子骨微环境

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P62蛋白与骨巨细胞瘤细胞增殖的相关研究

P62蛋白与骨巨细胞瘤细胞增殖的相关研究

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作者：何传春昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]检测骨巨细胞瘤中P62、RANK、RANKL基因及蛋白的表达水平并分析相关性,明确P62蛋白表达对骨巨细胞瘤细胞增殖能力的影响,为骨巨细胞瘤的临床治疗寻找新的靶点。[方法]1、采用基因测序检测13例骨巨细胞瘤新鲜组织中P62基因在Exons ... 详细信息

[目的]检测骨巨细胞瘤中P62、RANK、RANKL基因及蛋白的表达水平并分析相关性,明确P62蛋白表达对骨巨细胞瘤细胞增殖能力的影响,为骨巨细胞瘤的临床治疗寻找新的靶点。[方法]1、采用基因测序检测13例骨巨细胞瘤新鲜组织中P62基因在Exons 7和Exons 8之间点突变情况,采用qRT-PCR及Western blot检测8例骨巨细胞瘤新鲜组织和瘤旁组织中P62、RANK、RANKL mRNA和蛋白的表达情况,并分析三者相关性。2.留取骨巨细胞瘤新鲜组织,进行细胞分离,培养单核基质细胞,使用慢病毒质粒转染上调或下调P62基因表达,通过CCK8试剂盒、流式细胞术检测,观察P62基因的表达对单核基质细胞的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响。[结果]1、基因测序结果显示,P62基因在Exons 7和Exons 8之间的1340bp位置有G1340A突变,但是在415位置的氨基酸R(精氨酸)未发生突变;qRT-PCR结果显示骨巨细胞瘤组织中 P62mRNA(P=0.0459)、RANK mRNA(P=0.0007)、RANKLmRNA(P=0.0001)的表达水平显著高于瘤旁组织,且RANKL与RANK(R2=0.5435、P<0.0001)、P62 与 RANKL(R2=0.3505、P<0.0001)、P62 与 RANK(R2=0.3325、P<0.0001)均呈正相关;Western blot结果显示骨巨细胞瘤组织中P62 蛋白(P=0.0023)、RANK 蛋白(P=0.0002)、RANKL 蛋白(P=0.003)的表达水平显著高于瘤旁组织,RANKL 与 RANK(R2=0.5207,P=0.0016)、P62 与 RANKL(R2=0.3476,P=0.0162)、P62 与 RANK(R2=0.4571,P=0.004)均呈正相关。2、分离出骨巨细胞瘤的原代细胞,观察到原代细胞主要由破骨样多核巨细胞和纺锤形的单核基质细胞组成,传代48小时后破骨样多核巨细胞逐渐减少,传代2-3代后基本消失,仅剩下单核基质细胞。采用第4代细胞进行实验。质粒转染下调P62蛋白表达,发现shP62下调组1-5天细胞增殖相对OD值的均值分别为:1.081±0.076、1.192±0.015、1.226±0.012、1.249±0.019、1.386±0.038;NC对照组1-5天细胞增殖相对OD值的均值分别为:1.116±0.076、1.235±0.101、1.312±0.076、1.417±0.050、1.583±0.050,两组 OD 值第 4 天(t=3.157,P=0.0343)及第5天(t=3.279,P=0.0305)的表达差异有统计学意义。shP62下调组单核基质细胞细胞凋亡百分比为37.8%,NC对照组凋亡百分比为4.98%,两者统计学差异显著;shP62下调组单核基质细胞的细胞周期分布百分比为G0/G1期75.8%、S期12.6%、M/G2期11.6%,NC对照组单核基质细胞的细胞周期分布百分比分别为G0/G1期73.6%、S期15.2%、M/G2期11.1%,两组之间统计学差异显著。[结论]1.在骨巨细胞瘤组织中,未发现P62基因在Exons 7和Exons 8之间区域发生突变,P62、RANK、RANKL mRNA及蛋白表达较瘤旁组织中升高,三者存在正相关关系;2.P62蛋白表达能够促进骨巨细胞瘤的单核基质细胞增殖,可能通过调节细胞周期及细胞凋亡发挥作用。

关键词： P62蛋白骨巨细胞瘤 RANK/RANKL蛋白单核基质细胞细胞增殖

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地舒单抗治疗骨巨细胞瘤后p62蛋白表达变化及相关分析

地舒单抗治疗骨巨细胞瘤后p62蛋白表达变化及相关分析

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作者：叶帆昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]地舒单抗是治疗骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)唯一的靶向药物,其详细作用机制并未完全明确。前期研究发现p62蛋白在GCTB组织中高表达,下调p62蛋白表达能够抑制GCTB单核基质细胞增殖及侵袭,可能与地舒单抗疗效相关... 详细信息

[目的]地舒单抗是治疗骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)唯一的靶向药物,其详细作用机制并未完全明确。前期研究发现p62蛋白在GCTB组织中高表达,下调p62蛋白表达能够抑制GCTB单核基质细胞增殖及侵袭,可能与地舒单抗疗效相关。本研究通过检测地舒单抗治疗GCTB前后p62蛋白表达变化,分析p62蛋白与地舒单抗疗效的相关性,初步探讨p62蛋白在地舒单抗治疗GCTB中发挥的作用及可能机制。[方法]1.收集地舒单抗治疗前后配对GCTB新鲜组织标本6对,采用RT-qPCR、Western Blot检测p62 mRNA及蛋白;采用ELISA检测9对配对血清中p62蛋白,比较地舒单抗治疗GCTB前后,p62表达是否发生变化。2.收集地舒单抗治疗GCTB前后石蜡标本40例,采用IHC检测p62蛋白,分析p62蛋白表达水平与GCTB临床Campanacci分级、病理性骨折、复发等临床特征的相关性。3.分别留取GCTB新鲜组织(T)及转移的GCTB新鲜组织(M),进行原代细胞培养,分离并鉴定出单核基质细胞(T株和M株);采用慢病毒质粒转染,获得p62低表达并稳定传代的单核基质细胞,使用地舒单抗处理并分组,包括:GCTB control组;shp62组:p62表达下调的单核基质细胞;shp62-Denosumab组:地舒单抗处理p62表达下调的单核基质细胞;NC组:shp62阴性对照细胞;NC-Denosumab组:地舒单抗处理shp62对照细胞。4、地舒单抗处理不同组单核基质细胞,采用Western Blot及免疫荧光检测p62蛋白变化;采用CCK8检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡、Transwell检测细胞迁移及侵袭能力变化,观察地舒单抗对不同p62蛋白表达水平单核基质细胞的抑制作用。[结果]1.新鲜GCTB组织标本中,地舒单抗治疗后p62 mRNA及蛋白表达较治疗前下降,统计学差异显著(均P<0.05);血清标本中,地舒单抗治疗前后p62蛋白表达未见差异(P>0.05)。***石蜡标本中,地舒单抗治疗后p62蛋白表达水平较治疗前下降,差异具有统计学意义(P<0.05);下降水平同GCTB临床Cammpanacci分级、病理性骨折无相关性(均P>0.05);与肿瘤复发负相关(P<0.05)。3.从1例股骨下段GCTB肿瘤组织(T株)及1例肱骨上段GCTB肩胛骨转移肿瘤组织中(M株)分离原代细胞。肿瘤组织均由破骨样多核巨细胞和单核基质细胞组成,转移组织中多核巨细胞较少;传代48小时后多核巨细胞逐渐减少,2-3代后消失,剩余细胞H3.3 G34W免疫荧光染色阳性,即为单核基质细胞,使用第四代细胞进行后续实验。慢病毒质粒转染后,获得p62低表达并稳定传代的单核基质细胞。4.采用地舒单抗800 μg/ml分别处理M株不同组单核基质细胞细,p62蛋白表达均有不同程度下降,shp62-Denosumab组单核基质细胞p62蛋白水平较对照组(NC-Denosumab组)降低,两组统计学差异明显(P<0.05);T株、M株shp62-Denosumab组单核基质细胞增殖水平均较对照组降低,两组统计学差异明显(P<0.0001,P<0.01);T株、M株shp62-Denosumab组单核基质细胞较对照组明显停滞于G0/G1期,两组统计学差异明显(均P<0.05);T株、M株shp62-Denosumab组单核基质细胞凋亡比率分别为27.730%、45.960%,高于对照组15.399%、39.750%,两组统计学差异明显(P<0.01,P<0.05);T株、M株shp62-Denosumab组单核基质细胞迁移数分别为30.330±0.881及61.000±7.550,低于对照组111.000±3.055及148.000±4.619,两组统计学差异明显(P<0.0001,P<0.001);T 株、M 株 shp62-Denosumab 组单核基质细胞侵袭数分别为 51.000±1.528 及 58.670±2.603,低于对照组 73.330±1.856 及 97.670±5.548,两组统计学差异明显(P<0.001,P<0.05)。[结论]1.地舒单抗治疗GCTB后,p62蛋白表达下调,可能与地舒单抗疗效相关;2.地舒单抗通过下调p62蛋白表达,抑制单核基质细胞增殖及迁移侵袭能力;3.下调p62蛋白表达后,地舒单抗通过诱导单核基质细胞凋亡,进一步抑制细胞增殖及迁移侵袭。

关键词： p62蛋白骨巨细胞瘤地舒单抗单核基质细胞细胞迁移及侵袭

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Siglec-15在骨巨细胞瘤中的表达及其对肿瘤细胞生物学特性的影响

Siglec-15在骨巨细胞瘤中的表达及其对肿瘤细胞生物学特性的影响

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作者：范梦科河北医科大学

学位级别：硕士

目的:研究Siglec-15在骨巨细胞瘤(Giant Cell Tumor of Bone,GCTB)组织中的表达,并探讨Siglec-15在GCTB组织中表达与患者临床特征之间的关系。检测Siglec-15在GCTB单核基质细胞(Hs 737.T)表达,通过si RNA靶向沉默Siglec-15基因,观察敲低Siglec-15表达对GCTB单核基质细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:收集河北医科大学第三医院病理科2012年1月1日至2017年12月31日GCTB肿瘤组织切片标本56例。通过免疫组织化学染色检测Siglec-15在GCTB组织中的表达,并分析Siglec-15表达与患者性别、年龄、位置、肿瘤大小、Companacci’s分期和肿瘤复发等临床特征的关系。通过免疫荧光染色和RT-PCR测定Siglec-15在Hs 737.T细胞中的表达位置和表达水平。通过Siglec-15 si RNA沉默Hs 737.T细胞的Siglec-15基因表达。通过RT-PCR和Western Blot分别测定Siglec-15在基因和蛋白质水平的沉默效率。通过增殖、克隆形成、划痕和Transwell等实验测定Siglec-15基因表达降低对Hs 737.T细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果:免疫组织化学染色显示,Siglec-15阳性染色主要存在GCTB组织细胞的细胞质、细胞膜中。在56例切片样本中,其中51例表达Siglec-15阳性(91.07%)。另外,Siglec-15表达与Companacci’s分期、肿瘤复发之间差异有显著性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤定位和肿瘤大小之间差异无显著性(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示Siglec-15在Hs 737.T细胞质表达;RT-PCR显示Siglec-15 m RNA在Hs 737.T细胞的表达量(Siglec-15/β-actin)为1.636±0.012,属于高表达。RT-PCR证明了si RNA组的Hs 737.T细胞表达的Siglec-15基因明显低于阴性对照组。另外,Western Blot证明了si RNA组的Hs 737.T细胞的Siglec-15蛋白的表达明显低于阴性对照组。体外实验显示,si RNA组Hs 737.T细胞的增殖、迁移、侵袭功能均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:Siglec-15在GCTB组织中高表达,其表达水平在肿瘤Companacci’s分期、肿瘤复发中差异有显著性。Siglec-15在Hs 737.T细胞中高表达。Siglec-15基因表达降低可使Hs 737.T细胞的增殖、迁移、侵袭功能明显下降。这些结果提示,Siglec-15表达可能在GCTB生长、侵袭、转移中扮演重要角色,可能成为GCTB患者临床诊断、治疗和预后判断的新指标。

关键词： Siglec-15 骨巨细胞瘤单核基质细胞 siRNA

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骨巨细胞瘤的细胞生物学

引用

福建医科大学学报 2001年第2期35卷 131-133页

作者：黄健文胡世平高美钦福建医科大学病理解剖学教研室福州350004 福建省立医院骨科福州350001

目的　探讨骨巨细胞瘤中多核巨细胞和单核基质细胞的起源及在肿瘤中的作用。　方法　应用免疫组织化学方法检测 5 0例骨巨细胞瘤手术标本的增殖细胞核抗原 (PCNA )、巨噬细胞抗原 (CD6 8)、波形蛋白、抗糜蛋白酶 (AACT)、抗胰蛋白酶 (A... 详细信息

目的　探讨骨巨细胞瘤中多核巨细胞和单核基质细胞的起源及在肿瘤中的作用。　方法　应用免疫组织化学方法检测 5 0例骨巨细胞瘤手术标本的增殖细胞核抗原 (PCNA )、巨噬细胞抗原 (CD6 8)、波形蛋白、抗糜蛋白酶 (AACT)、抗胰蛋白酶 (ACT)以及溶菌酶的表达和分布状况。　结果　多核巨细胞主要表达 CD6 8、AACT、ACT以及溶菌酶 ,无一表达 PCNA;单核基质细胞可分为两种类型 ,以纤维母细胞型占优势 ,主要表达波形蛋白和PCNA;组织细胞型主要表达 CD6 8、AACT、ACT以及溶菌酶。　结论　多核巨细胞并非肿瘤细胞 ,它可能来自单核巨噬细胞系统。单核基质细胞中的纤维母细胞型为肿瘤的主要增殖成分 ,可能来自间充质。

关键词：骨巨细胞瘤免疫组织化学单核基质细胞巨细胞

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