检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈奇南昌大学

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌（简称单增李斯特菌，Listeria monocytogenes，LM）是一种常见的食源性致病菌，属于李斯特属（Listeria），是该属中唯一能引起人患病的病原菌。该菌对环境的适应性极强，可在低温、强酸、高盐等极端条件下生存... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌（简称单增李斯特菌，Listeria monocytogenes，LM）是一种常见的食源性致病菌，属于李斯特属（Listeria），是该属中唯一能引起人患病的病原菌。该菌对环境的适应性极强，可在低温、强酸、高盐等极端条件下生存和繁殖。同时，LM还能够穿越机体的多重屏障，引起严重的感染性疾病，如脑膜炎、败血症及流产等，感染后致死率高达20%-30%。近年来，欧美地区不断爆发LM的感染事件，造成了巨大的财产损失和人员伤亡。鉴于LM的高危害性，在食品安全检测的相关项目中LM被列为必检项目。因此，建立准确、高效且适用于食品行业的快速检测方法，具有迫切的现实需求和广阔的应用前景。本文首先以热灭活的LM菌体为抗原免疫BALB/c小鼠，成功筛选获得了6株能稳定分泌抗-LM单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为3F2-A8、8C8-B11、10A11-A4、10E7-H6、11B9-F4、12A6-H11。6株单抗的效价分别为1：320000、1：640000、1：640000、1：640000、1：640000、1：25600。Dot-blot结果表明，6株单抗与李斯特属内菌及部分属外菌存在不同程度的交叉反应。Western-blot结果表明，3F2-A8、8C8-B11、10A11-A4、10E7-H6、11B9-F4的对应抗原为磷壁酸类物质。针对采用菌体免疫制备抗体特异性较差的现状，本文通过构建表达载体pGEX-actA、pET-22b-InlB、pET-22b-iap进行原核表达，并以纯化的InlB和P60为抗原免疫BALB/c小鼠以制备高特异性的抗体。Dot-blot结果表明，抗-InlB多抗能特异性识别LM，与李斯特6种属内菌无交叉反应;抗-P60多抗与LMATCC13932、CMCC54001及其余50株LM食品分离株均有反应，同时也与李斯特属内菌-绵羊李斯特菌NCTC11288、英诺克李斯特菌ATCC19119、威尔李斯特菌ATCC35897存在交叉反应。上述结果表明，原核表达的InlB和P60可用于制备特异性强及亲和力高的李斯特菌单抗。此外，本文进一步以驼源天然噬菌体展示抗体库淘选了针对LM的特异性单域重链抗体。以热灭活的LM菌体为抗原，通过4轮常规淘选和1轮消减淘选。采用phage-ELISA法，对后4轮淘选洗脱物中随机挑选的384个噬菌体克隆进行了鉴定，其中阳性克隆112个。经序列比对、分类及统计，从中挑取10个亲和力较高的克隆进行特异性分析。结果显示淘选获得了2株能特异性识别LM的单域重链抗体，编号为L5-78和L5-79。构建了pET-25b-L5-78和pET-25b-L5-79的表达载体，经大肠杆菌BL21表达纯化获得单域重链抗体。性能分析结果显示2株抗体均可在极端pH、高变性剂及高温下保持较高的活性，具有良好的稳定性。以4A7单抗及L5-79单域重链抗体建立了双抗夹心ELISA法，LM检测限为5×106CFU/mL。总之，本研究通过3种方法制备针对LM的抗体，成功获得了6株单抗、2种多抗血清及2株单域重链抗体。以上研究工作为建立快速检测LM的免疫学方法奠定了基础。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体多克隆抗体单域重链抗体

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单核细胞增生性李斯特菌特异性抗体的制备研究

单核细胞增生性李斯特菌特异性抗体的制备研究

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作者：何勇琴上海海洋大学

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称LM,单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,该菌广泛地存在于环境中,传染途径繁多。近年来大规模的李斯特菌病频频爆发,引起世界各国的高度重视。目前国内外食品中单增李斯特菌的... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称LM,单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,该菌广泛地存在于环境中,传染途径繁多。近年来大规模的李斯特菌病频频爆发,引起世界各国的高度重视。目前国内外食品中单增李斯特菌的常用检测方法主要有传统的微生物学检测、分子生物学检测和免疫学检测。免疫学方法具有快速、特异性强、操作简便、结果易于判断等特点,但是抗体的特异性是限制免疫学检测灵敏度和准确性的首要因素。因此,获取针对单增李斯特菌的高特异性抗体是建立快速有效的单增李斯特菌诊断方法的物质基础。本文在单增李斯特菌的国标分离方法和ISO分离标准的基础上,采用Fraser肉汤增菌液结合PALCAM选择性培养基与PCR扩增(或16S rDNA测序)方案,建立了一种单增李斯特菌的快速分离鉴定方法。该法可以在3-5d内完成单增李斯特菌的分离与鉴定。本文所建立的方法不仅可用于一般实验室的单增李斯特菌分离纯化工作,尤其适用于大量样本中单增李斯特菌的分离与鉴定。采用三种灭活方式(强酸性电解水灭活、加热灭活、紫外灭活)处理单增李斯特菌来制备免疫抗原,并对其免疫原性进行比较分析。实验结果证实紫外灭活细菌具有较好的免疫原性,电解水处理细菌效果最差,结合电镜扫描图片可知,可初步判定细菌表面的完整性与细菌的免疫原性有一定的关系,此结论可为后续菌体抗原的制备提供一定的参考价值。本研究采用紫外灭活的细菌菌体为免疫抗原,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔,从而制备单克隆抗体和多克隆抗体。最终获得1株特异性的杂交瘤细胞株和数十毫升多克隆抗体。杂交瘤细胞株分泌的抗体能够特异性识别单增李斯特菌,与李斯特菌属其他细菌有较弱交叉反应。制备的多克隆抗体能够特异性识别李斯特菌属细菌。利用所得抗体制备免疫磁珠,从单增李斯特菌的快速富集和检测两个方面进行了抗体的应用可行性探讨。实验结果证实本研究制备抗体具有应用价值。本研究为单增李斯特菌免疫学检测的开发奠定了物质基础,对推动单增李斯特菌免疫学检测技术的发展具有重要意义。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌抗体免疫原性应用可行性

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单核细胞增生性李斯特菌分离株的生物学特性研究

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中国兽医杂志 2012年第7期48卷 11-13页

作者：吴晓薇徐成刚张朝冠江经纬叶贺佳区燕宜徐小芹廖明华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东检验检疫技术中心广东广州510623 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510642 南海出入境检验检疫局广东佛山528200

对从广州禽产品分离的6株LM进行了药敏试验、pH值的适应范围、动物致病性等生物学特性研究。6株LM分离株对先锋必、氯霉素、卡那霉素、头孢唑啉、庆大霉素等多种药物敏感;而对多黏菌素B、复方新诺明、新生霉素有耐药性。LM分离株在pH值... 详细信息

对从广州禽产品分离的6株LM进行了药敏试验、pH值的适应范围、动物致病性等生物学特性研究。6株LM分离株对先锋必、氯霉素、卡那霉素、头孢唑啉、庆大霉素等多种药物敏感;而对多黏菌素B、复方新诺明、新生霉素有耐药性。LM分离株在pH值4.0～10.5范围内可存活。以109 CFU剂量感染SPF小鼠、清洁级新西兰兔和健康粤黄鸡,小鼠的致死率达100%,可引起兔结膜炎等症状,但未引起试验鸡的任何不适。6株LM分离株的Hly基因与标准参考株基因相似性达到96.1%以上,说明该基因在LM中较为保守。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌禽产品生物学特性 Hly基因

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单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失株的构建及其蛋白质组学特性研究

单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失株的构建及其蛋白质组学特性...

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作者：白春光扬州大学

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是重要的人畜共患李斯特菌病的病原菌,在食品公共卫生领域受到广泛关注,该菌的致病性与调控因子PrfA (positive regulatory factor A)蛋白作用下毒力基因的表达有着密切的关系。Prf... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是重要的人畜共患李斯特菌病的病原菌,在食品公共卫生领域受到广泛关注,该菌的致病性与调控因子PrfA (positive regulatory factor A)蛋白作用下毒力基因的表达有着密切的关系。PrfA是李斯特菌最重要的毒力调控因子之一,能调节LIPI-ⅠLIPI-Ⅱ上毒力基因的表达,从而对李斯特菌黏附及侵袭宿主细胞、逃离机体免疫应答起到调控作用。虽然目前对PrfA的调控作用有了一定的了解,但是其在Lm致病中的作用尚未完全阐明。本研究通过同源重组技术构建单核细胞增生性李斯特菌的prfA基因缺失株,并在此基础上对突变株的生物学特性和蛋白质组学特性进行鉴定,以期完善PrfA的调控机制,为Lm的致病机理研究提供科学依据。 1、单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失株的构建采用PCR方法从单核细胞增生性李斯特菌LM4基因组中扩增出prfA基因的同源臂片段prs和plcA。采用SOEing PCR方法将prs、plcA基因连接起来,将连接片段prs/plcA与pMD18-T载体相连并测序。测序正确的质粒经双酶切回收后插入穿梭载体pKSV7中,构建成重组穿梭质粒pKSV7-prs/plcA.将质粒电转化到LM4中,在温度和氯霉素抗性双重选择压力下传8代进行同源重组,然后在无选择压力下传10代将质粒丢失,最终获得prfA基因缺失的菌株LM4ΔprfA。在LM4ΔprfA的回复突变实验中,(?)将prfA基因扩增出来并连接到表达载体pERL3质粒中,转化到DH10β中进行测序。将测序正确的质粒电转到LM4的prfA基因缺失株中,获得LM4AprfA的回复突变株。 2、单核细胞增生性李斯特菌PrfA的生物学功能的研究在获得LM4ΔprfA的基础上,对PrfA的生物学特性进行研究。突变株与其亲本株的生长曲线、生理生化特性、对药物的药敏性无显著差异,表明PrfA对生长代谢的影响作用不显著。溶血实验中LM4的溶血效价为24,LM4ΔprfA的溶血效价为0,突变株丧失溶血能力,而prfA回复突变株的溶血活性得以完全恢复,表明PrfA对hly基因具有调控作用。肌醇磷脂酶与卵磷脂酶实验中LM4的周围均出现透明圈,而LM4ΔprfA没有出现此现象,说明突变株细菌失去了磷脂酶活性。生物膜形成实验中,LM4的OD590值为0.8478,LM4ΔprfA的OD590值为0.6772,prfA缺失株与其亲本株之间生物膜形成能力差异显著(p<0.05),表明prfA的缺失可影响生物膜的形成。在细胞侵袭实验中,LM4的侵袭率为1.68%,LM4ΔprfA为0.38%,显示突变株的侵袭力显著下降(p<0.01)。对BALB/c小鼠的LD50实验结果表明,突变株的毒力较亲本株下降了105个数量级,突变株毒力显著降低。 3、单核细胞增生性李斯特菌prfA缺失株及其亲本株分泌蛋白的比较蛋白质组学研究本研究采用二维凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS),从蛋白质水平上研究PrfA的调控功能。实验采用基础培养基培养LM4及LM4ΔprfA,离心菌液并用三氯乙酸(TCA)对离心后的培养上清进行沉淀,从而获得分泌蛋白。二维凝胶电泳图谱的差异表达分析显示有31个点,质谱鉴定成功19个点,对应12种蛋白。结果发现已知的毒力相关蛋白有InlC、ActA、LLO,此外还新发现了一些受PrfA调控的蛋白,包括丙氨酸丙氨酰羧肽酶、GW重复表面蛋白。结合实时荧光定量PCR方法对蛋白质组学方法进行验证,结果显示hly、actA、inlC的基因表达量显著下降,丙氨酰氨羧肽酶、GW重复表面蛋白的合成也有降低,这些蛋白与PrfA之间的关系还要进一步研究。本研究成功构建了单核细胞增生性李斯特菌prfA缺失株LM4ΔprfA,并对缺失株和亲本株的生物学特性进行了系统研究,有力证明了PrfA对LIPI-Ⅰ, LIPI-Ⅱ上毒力基因的调控作用,并用比较蛋白质组学方法对PrfA的调控作用进行了探索。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 prfA 突变株生物学特性蛋白质组学

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单核细胞增生性李斯特菌Mpl蛋白的原核表达及免疫原性研究

单核细胞增生性李斯特菌Mpl蛋白的原核表达及免疫原性研究

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作者：王璐璐黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)目前在病原学上已被世界普遍公认为一种人畜共患病和食源性疾病的病原菌,能引起人、畜及禽类的李斯特菌病。单核细胞增生性李斯特菌mpl基因编码锌依赖金属蛋白酶(Zinc Metalloprotease),... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)目前在病原学上已被世界普遍公认为一种人畜共患病和食源性疾病的病原菌,能引起人、畜及禽类的李斯特菌病。单核细胞增生性李斯特菌mpl基因编码锌依赖金属蛋白酶(Zinc Metalloprotease),是LIPI-1毒力岛的重要成分之一。已有研究表明,mpl基因编码的金属蛋白酶Mpl通过裂解李斯特菌主要毒力因子卵磷脂酶C(PC-PLC)无活性前体的氨基端,使卵磷脂酶激活,裂解宿主细胞的吞噬泡膜,进而参与李斯特菌在宿主细胞间的直接传递,是李斯特菌感染和传播过程中起重要作用的毒力因子。因而,本研究通过原核表达单核细胞增生性李斯特菌Mpl蛋白,制备免疫原,研究重组蛋白的免疫原性及其对单核细胞增生性李斯特菌感染的免疫保护作用,并检测细胞免疫和体液免疫应答水平。对于研制阻断李斯特菌感染和传播的有效疫苗具有重要意义。本研究通过PCR方法对标准株***菌株的mpl基因进行扩增,并将其克隆到pGEM-T载体上。重组克隆pGEM-T-mpl经双酶切后,将mpl基因插入到pET-32a(+)载体上,构建重组质粒pET-32a(+)-mpl。重组质粒测序后与GenBank上发表的序列进行对比分析。将重组表达质粒转化大肠杆菌*** BL21(DE3),经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE鉴定Mpl融合蛋白的表达。重组蛋白经纯化后进行Western blot检测,确定其特异性抗体结合活性。将纯化的蛋白按50μg和100μg分成两组,分别免疫小白鼠,同时用对照剂免疫小白鼠作为对照。三免后用***(107CFU/只)对免疫小白鼠攻毒,观察一周并记录结果,与此同时,从初免后每隔一周对小白鼠进行采血,应用ELISA方法检测血清中抗体水平及免疫血清中IL-2、IL-4和IFN-γ细胞因子浓度。结果,本研究成功扩增并克隆单核细胞增生性李斯特菌的mpl基因,该菌株的mpl基因与GenBank上*** mpl基因序列EF183452和EF183453的核苷酸同源性均为99.7%,氨基酸同源性为100%。SDS-PAGE结果表明,重组质粒pET-32a(+)-mpl在*** BL21(DE3)中成功表达,Western Blot检测结果表明重组蛋白具有较好的抗原性;Mpl蛋白50μg组、100μg组小白鼠在三次免疫后一周,血清中抗体水平达到最高峰,分别为1:64000和1:128000。血清中细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ浓度除50μg蛋白免疫组的IL-2浓度与对照组比较升高不明显外(p>0.05),其它所有蛋白免疫组的IL-2、IL-4和IFN-γ浓度与对照组相比均显著升高(p<0.05)。攻毒保护试验结果,对照组1d内80%发病死亡,第二天全部死亡;100μg蛋白和50μg蛋白免疫组3d存活率分别为80%和70%,发病和死亡时间明显滞后于对照组;观察一周后,存活率分别是60%和50%。研究表明,表达的重组Mpl蛋白具有较好的抗原性,能够刺激小白鼠激活细胞免疫应答,并产生一定的特异性抗体,对李斯特菌强毒株的攻击产生一定的抵抗力,为深入研究李斯特菌在宿主细胞间的传播机制以及研制新型疫苗奠定了基础。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 Mpl蛋白免疫原性

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单核细胞增生性李斯特菌磷脂酶C的克隆表达及其在油脂脱胶中的应用研究

单核细胞增生性李斯特菌磷脂酶C的克隆表达及其在油脂脱胶中的应...

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作者：余榛榛江南大学

学位级别：硕士

为研制具有自主知识产权的油脂脱胶用磷脂酶C（PLC）制剂，本文克隆了单核细胞增生性李斯特菌磷脂酶C基因（lm-plcB），构建了重组大肠杆菌，通过优化发酵条件，获得了高效表达的重组PLC，对其酶学性质进行研究，最终应用于植物毛油的... 详细信息

为研制具有自主知识产权的油脂脱胶用磷脂酶C（PLC）制剂，本文克隆了单核细胞增生性李斯特菌磷脂酶C基因（lm-plcB），构建了重组大肠杆菌，通过优化发酵条件，获得了高效表达的重组PLC，对其酶学性质进行研究，最终应用于植物毛油的酶法脱胶，取得了较好的效果。具体研究内容如下：克隆了lm-plcB基因，构建重组大肠杆菌*** BL21(DE3)/pET28a-lm-plcB，利用乳糖诱导剂对其进行诱导表达，并对所获重组PLC进行鉴定分析。结果表明，lm-plcB基因在重组菌*** BL21(DE3)/pET28a-lm-plcB中实现高效表达，该重组PLC的分子质量约为30.4kDa，对天然磷脂底物具有活性。优化了重组大肠杆菌*** BL21(DE3)/pET28a-lm-plcB的发酵条件，结果表明，当接种量为4%时，37℃，200r/min培养2h后，利用2.5g/L乳糖进行诱导，25℃摇瓶诱导发酵26h，可获得重组PLC的最佳酶活力达到754.6U/mL。经过离子交换层析对重组PLC进行分离纯化，最终得到的重组PLC纯化度约为83%，比酶活为473.1U/mg。研究了重组PLC的酶学性质，结果表明，最适温度为60℃；60℃条件下保温30min，PLC酶活能维持在95%以上；最适pH为5.0；当缓冲液pH在6.0～7.0左右时，残留酶活力能保留80%以上，pH为6.0时具有最佳pH稳定性。金属离子对酶活力有一定影响，其中Zn2+、Ba2+、Mg2+、Mn2+对PLC具有激活作用；Ca2+、Fe3+对PLC酶活力几乎没有影响；Cd2+对PLC酶活力有抑制作用。利用不同的磷脂底物对其进行底物特异性研究，结果表明，该PLC对磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）水解作用较强，对磷脂酰肌醇（PI）也具一定水解作用，对磷脂酸（PA）无水解作用。最后，利用该重组PLC对四种常见植物毛油进行脱胶。结果表明：该PLC能将高磷含量大豆毛油的磷含量从398.21mg/kg降至5.28mg/kg，脱胶（磷）率达98.67%；低磷含量大豆毛油的磷含量从216.67mg/kg降至3.71mg/kg，脱胶（磷）率达98.40%；菜籽毛油的磷含量从183.70mg/kg降至4.50mg/kg，脱胶（磷）率达97.55%；米糠毛油的磷含量从306.82mg/kg降至50.19mg/kg，脱胶（磷）率达83.63%。该PLC对高磷含量大豆毛油的优化脱胶工艺条件为：pH5.5，55℃，添加量1000U/kg油，反应1.5h，可将大豆毛油中磷含量从398.22mg/kg降至4.28mg/kg，满足物理精炼的要求，同时将油脂得率提高约0.5%以上。综上，本文在大肠杆菌中成功克隆表达了单核细胞增生性李斯特菌PLC，最终应用于四种不同植物毛油酶法脱胶，能够降低毛油中的磷含量，满足物理精炼的要求，并将油中磷脂水解成甘油二酯（DAG），提高油脂的精炼得率，应用前景广阔。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌磷脂酶C 克隆表达酶学性质油脂脱胶

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单核细胞增生性李斯特菌lmo1521基因的鉴定

单核细胞增生性李斯特菌lmo1521基因的鉴定

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作者：李唤弟中国计量学院

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenesis,LM)是一种在环境中普遍存在的革兰氏阳性菌,能引起人和动物严重的食源性感染,致病率高达30%-40%。自溶素是在细菌中普遍存在的肽聚糖水解酶,与细菌的多种生物学功能有关,参与细菌的致... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenesis,LM)是一种在环境中普遍存在的革兰氏阳性菌,能引起人和动物严重的食源性感染,致病率高达30%-40%。自溶素是在细菌中普遍存在的肽聚糖水解酶,与细菌的多种生物学功能有关,参与细菌的致病过程。目前,已经从单核细胞增生性李斯特菌中鉴定出8种自溶素蛋白。单核细胞增生性李斯特菌标准菌株EGD-e(1/2a血清型)全基因组序列分析及转录组测序等技术研究表明lmo1521基因含假定酰胺酶结构域及GW模块,在侵染小鼠时该基因表达量上调,预测其可能是自溶素基因。本研究用实验证据鉴定该基因是自溶素基因。本实验以单核细胞增生性李斯特菌lmo1521基因CDS区域为目标基因序列,构建pET-22b-lmo1521重组质粒,转化至蛋白表达宿主菌***21(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,原核表达得到可溶性Lmo1521重组蛋白,用Ni-NTA树脂纯化重组蛋白,从而得到高纯度、高浓度目标蛋白Lmo1 521。综合采用多种方法研究Lmo1521蛋白是否具有细胞壁水解酶活性。首先以提纯的单增李斯特菌细胞壁为底物,采用复性SDS-PAGE电泳,观察纯化的Lmo1521蛋白对单增李斯特菌细胞壁的破坏作用,并进一步用MALDI-TOF-MS质谱技术补充分析实验数据;利用革兰氏染色法观察提纯的Lmo1521蛋白对单增李斯特菌活细胞的破坏作用,根据单增李斯特菌细胞密度及细胞形态的变化规律分析Lmo1521蛋白的活性功能。这些实验结果表明Lmo1521蛋白不仅能够水解提纯的自身细菌细胞壁,还可以有效抑制单增李斯特菌活细胞的生长繁殖,具有细胞壁水解酶活性,水解单增李斯特菌细胞壁的最适pH范围为中碱性。从而首次用实验证据从单增李斯特菌(CMC54002,血清型1/2a)中鉴定lmo1521基因具有自溶素功能。体外原核表达的Lmo1521蛋白具有很好的杀菌及抑菌效果,因此进一步实验可大量表达获得重组蛋白,验证其对更广谱性的细菌的杀菌、抑菌效果,可将其用于新型抗菌剂的研发以及单增李斯特菌病或其它疾病的防治研究。为了进一步解析lmo1521基因的功能,拟构建pMAD△lmo1521重组质粒。利用SOE-PCR分别扩增目标基因lmo1521的上下游基因lmo1520及lmo1522,克隆至穿梭载体pMAD,构建pMAD△lmo1521重组质粒,同时在上下游基因中间加入卡那霉素抗性基因kanamycin,便于重组质粒及后续△lmo1521缺失突变株的筛选。后续实验将pMAD△lmo1521重组质粒电转入野生型单增李斯特菌,根据基因敲除原理筛选△lmo1521缺失突变株,深入研究lmol521基因的生物学功能,pMAD△lmo1521重组质粒的成功构建为后续研究奠定实验基础。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌自溶素 lmo1521基因原核表达 Ni-NTA纯化细胞壁水解酶活性复性SDS-PAGE电泳

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IL-17B通过抑制巨噬细胞浸润调控单核细胞增生性李斯特菌感染

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第1期43卷 10-19页

作者：程红燕荆丽娜孙爽爽王长莹熊化保山东大学齐鲁医学院济南250000 济宁医学院基础医学院免疫学与分子医学研究所济宁272067

目的通过研究IL-17B在小鼠单核细胞增生性李斯特菌感染中的作用和机制,探讨IL-17B调控宿主免疫应答的相关机制。方法C57BL/6雄鼠(n=18)随机分成空白对照组、PBS组和李斯特菌感染组(野生型,WT),每组6只。空白对照组不做处理,PBS组小鼠尾... 详细信息

目的通过研究IL-17B在小鼠单核细胞增生性李斯特菌感染中的作用和机制,探讨IL-17B调控宿主免疫应答的相关机制。方法C57BL/6雄鼠(n=18)随机分成空白对照组、PBS组和李斯特菌感染组(野生型,WT),每组6只。空白对照组不做处理,PBS组小鼠尾静脉注射100μl无菌PBS,WT组小鼠和IL-17B缺陷(IL-17B^(-/-))雄鼠尾静脉注射100μl单核细胞增生性李斯特菌19115,每只2×104个菌落形成单位(CFU)。感染48 h后处死小鼠,取小鼠外周血、脾脏和肝脏,以涂板计数法检测脾脏和肝脏中的细菌定植量;HE染色评估组织病理学损伤;流式细胞术检测各组织中免疫细胞的变化;ELISA和qRT-PCR检测血清或脾脏中IL-1β、IL-6、IL-12p40、TNF-α、IFN-γ、iNOS的水平,qRT-PCR检测IL-17B、IL-17RB的水平。结果与WT组比较,IL-17B^(-/-)小鼠脾脏荷菌量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与PBS组比较,C57BL/6小鼠感染单核细胞增生性李斯特菌后脾脏中IL-17B和IL-17RB表达水平显著增加(P<0.05,P<0.01)。WT组和IL-17B^(-/-)组小鼠脾脏病理损伤差异无统计学意义。与WT组比较,IL-17B^(-/-)小鼠脾脏中巨噬细胞、M1型巨噬细胞显著增加(P<0.01),NK细胞也显著增加(P<0.05),外周血中巨噬细胞和M1型巨噬细胞显著增加(P<0.05,P<0.01),血清和脾脏中IL-6表达增加(P<0.05),脾脏中IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、iNOS mRNA水平升高(P<0.05)。结论IL-17B可通过抑制巨噬细胞浸润、IL-6的分泌抑制宿主清除单核细胞增生性李斯特菌。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 IL-17B 巨噬细胞细胞因子

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单核细胞增生性李斯特菌酶联免疫检测试剂盒

单核细胞增生性李斯特菌酶联免疫检测试剂盒

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作者：刘箐郭慧琴吴淑燕 200093 上海市杨浦区军工路516号

本发明公开了一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的酶联免疫试剂盒。所述的试剂盒含有两株能特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体，一株为专门作为捕捉抗体的单克隆抗体1B4E7A6C9，另一株是作为检测抗体的单克隆抗体6D4H... 详细信息

标准号: CN103940995B

本发明公开了一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的酶联免疫试剂盒。所述的试剂盒含有两株能特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体，一株为专门作为捕捉抗体的单克隆抗体1B4E7A6C9，另一株是作为检测抗体的单克隆抗体6D4H7C8B6。大量测试证实，本发明的试剂盒可特异、高效地检测单核细胞增生性李斯特菌，但和其它68种常见病原细菌无交叉反应，是一种性能极好的病原细菌检测产品。

关键词：单克隆抗体李斯特菌核细胞检测单试剂盒增生单核细胞增生性李斯特菌酶联免疫试剂盒病原细菌捕捉抗体检测产品检测抗体无交叉常见病一种细菌测试证实反应公开结合

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单核细胞增生性李斯特菌致病相关机制的研究进展

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疾病监测 2011年第11期26卷 914-919页

作者：李爱华叶长芸中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogens,LM)是一种重要的食源性疾病病原菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。LM采用多种策略逃逸宿主天然防御屏障,进而侵入宿主细胞并复制生存。本文结合近年来LM致病机制方面的研究,介绍了... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogens,LM)是一种重要的食源性疾病病原菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。LM采用多种策略逃逸宿主天然防御屏障,进而侵入宿主细胞并复制生存。本文结合近年来LM致病机制方面的研究,介绍了致病相关毒力因子的分子特点及其在致病过程中的作用。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌毒力因子致病机制基因组

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