检索结果-内蒙古大学图书馆

农产品加工 2025年第8期 86-91页

作者：邱莎曾博德阳市食品药品安全检验检测中心四川德阳618000

通过参加食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证计划、丰富检验思路,探索食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测及鉴定。按照食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证作业指导书和《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯... 详细信息

通过参加食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证计划、丰富检验思路,探索食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测及鉴定。按照食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证作业指导书和《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30—2016),通过常规生化鉴定、VITEK2全自动微生物鉴定系统、琼脂糖凝胶电泳和16S rRNA基因序列4种方法对TF04330007和TF04330008这2个样品进行单核细胞增生李斯特氏菌的检验。结果表明,编号TF04330007样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,编号TF04330007未检出单核细胞增生李斯特氏菌。实验室4种检验方法结果一致,能力验证结果满意。在常规生化鉴定的基础上,辅助VITEK2全自动微生物鉴定系统、琼脂糖凝胶电泳和16S rRNA基因序列进行检测,能够缩短检测时间,特异性和敏感性菌也较好,4种方法互相补充可确保试验结果的准确性。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌能力验证 16S rRNA基因序列

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一种单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌共增菌培养基的研制

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食品科技 2025年第2期50卷 343-351页

作者：劳嘉倩黄志深尹玮璐蒋佳希梁美丹林秀敏郑泽熙孙雪奇广州市食品检验所广东广州511406

文章研制一种能同时富集单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌的共增菌培养基(Lysteria Escherichia Salmonella enrichment broth,LES),达到同时检测3种食源性致病菌的目标。根据目标菌的生长特性,以胰酪胨大豆肉汤(... 详细信息

文章研制一种能同时富集单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌的共增菌培养基(Lysteria Escherichia Salmonella enrichment broth,LES),达到同时检测3种食源性致病菌的目标。根据目标菌的生长特性,以胰酪胨大豆肉汤(Tryptic soy broth,TSB)为基础培养基,选择不同的抑制剂及促进剂进行单因素试验,确定LES培养基的配方及比例,通过构建生长曲线、损伤菌复苏及培养基选择性试验,验证LES培养基的增菌效果。研究确立了LES培养基的配方,目标菌在LES培养基的生长曲线与使用专用选择性培养基一致,经36℃培养24 h后,菌体浓度达到10^(7)~10^(9) CFU/mL;不同混合比例下各目标菌生长情况不受影响,且LES培养基具有良好的选择性。LES培养基对损伤菌具有良好的复苏效果,复苏后目标菌均能达到10^(8) CFU/mL及以上;在人工污染样品中,目标菌经24 h培养后,菌体浓度达到10^(7) CFU/mL及以上,能满足后续分子生物学检测所需菌液浓度。LES培养基选择性强、培养效率高,能用于单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌的共增菌培养,后续可与多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法联用,以提高检测效率。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌大肠埃希氏菌O157:H7 沙门氏菌共增菌培养基损伤菌复苏

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单核细胞增生李斯特氏菌内化素InlJ对噬菌体敏感性及生物被膜形成的影响

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食品科学 2023年第16期44卷 198-204页

作者：刘半红胡梁斌陆睿吴立婷包红朵周艳王冉张辉陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安710021 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013

为深入探索单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)inlJ基因在噬菌体敏感性和生物被膜中的作用及功能,本研究通过同源重组构建inlJ基因缺失株Lm NJ05-ΔinlJ,鉴定其生长、黏附及侵袭特性,解析其对噬菌体敏感性和生物被膜形... 详细信息

为深入探索单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)inlJ基因在噬菌体敏感性和生物被膜中的作用及功能,本研究通过同源重组构建inlJ基因缺失株Lm NJ05-ΔinlJ,鉴定其生长、黏附及侵袭特性,解析其对噬菌体敏感性和生物被膜形成中的作用机制。结果表明:与野生型Lm NJ05相比,构建的缺失株Lm NJ05-ΔinlJ对RAW264.7细胞的黏附率和侵袭率分别为20.05%和4.42%,黏附和侵袭能力显著减弱;Lm NJ05-ΔinlJ对李斯特菌噬菌体vB-LmoM-NJ05的成斑率提高至2.72倍;体外裂解分析表明噬菌体vB-LmoM-NJ05对缺失株Lm NJ05-ΔinlJ裂解效果更强;噬菌体效价分别在105PFU/mL和108PFU/mL能够完全抑制和清除Lm NJ05-ΔinlJ生物被膜;生物被膜形成相关基因的转录分析表明,噬菌体作用缺失株Lm NJ05-ΔinlJ后,degU、agrA、agrD、luxS、yneA、recA和hpt基因的转录均下调(表达水平趋向于0)。由此可见,inlJ基因的缺失能够增强Lm对噬菌体敏感性,下调Lm对细胞侵袭力和生物被膜形成能力。因此,内化素基因inlJ不仅具有调控Lm自身的作用,还能够调节其对噬菌体的相互作用,为噬菌体的生物防控技术开发和应用奠定基础。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌内化素InlJ 噬菌体敏感性细胞黏附和侵袭生物被膜

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单核细胞增生李斯特氏菌活菌PMAxx-ddPCR检测方法的建立及应用

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食品与生物技术学报 2024年第12期43卷 164-172页

作者：魏茂琳韩钦王金凤姜彦芬王一诺王建昌河北医科大学公共卫生学院河北石家庄050017 石家庄海关技术中心河北石家庄050051 河北国际旅行卫生保健中心河北石家庄050091 河北省环境与人群健康重点实验室河北石家庄050017

【目的】将改良版叠氮溴化丙锭(improved propidium monoazide,PMAxx)与微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术相结合,建立一种针对单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)活菌的检测方法。【方法】对PMAxx终浓度、暗处理时间及曝光时间进行优化,建立最佳的PMAxx-ddPCR检测体系,并用不同体积比的LM活菌验证其准确性,考察PMAxx-ddPCR检测方法的特异性、灵敏性和重复性。用不同浓度LM活菌与死菌对奶酪棒样品进行人工污染,比较传统的平板计数法和作者建立的PMAxx-ddPCR检测方法的结果;进一步对市售金针菇和火腿肠进行检测,评估PMAxx-ddPCR检测方法的实际效果。【结果】在PMAxx终浓度为10μmol/L、暗处理时间和曝光时间均为10 min时,PMAxx可显著抑制死菌DNA扩增,但对活菌DNA扩增没有显著影响。建立的PMAxx-ddPCR检测方法仅对LM产生特异性扩增,定量限为147 CFU/mL,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于20%,重复性较好。人工污染奶酪棒试验结果表明,平板计数法和PMAxx-ddPCR检测方法对LM的定量结果差异不显著(P>0.05)。进一步分析17份金针菇和16份火腿肠样品检测结果,PMAxx-ddPCR检测法和平板计数法均从7份金针菇样品中检出LM,且2种方法定量结果没有显著差异(P>0.05)。【结论】作者建立的LM活菌的PMAxx-ddPCR检测方法可对食品中LM活菌进行特异性定量检测。

关键词：改良版叠氮溴化丙锭微滴式数字PCR 单核细胞增生李斯特氏菌活菌定量检测

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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用

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现代食品科技 2018年第8期34卷 213-218,98页

作者：王金凤刘立兵耿云云石蕊寒孙晓霞南汇珠姜彦芬王建昌河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050000 河北省检验检疫科学技术研究院河北石家庄050051 河北师范大学生命科学学院河北石家庄050024

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃... 详细信息

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌 real-time RPA hlyA基因食品安全

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单核细胞增生李斯特氏菌拮抗菌的分离鉴定及其抑菌活性

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食品科学 2013年第15期34卷 181-185页

作者：许红岩段效辉李小清烟台出入境检验检疫局山东烟台264000 临沂市技术监督信息所山东临沂276000

从烟台近郊土壤中分离出一株单核细胞增生李斯特氏菌拮抗微生物sly-3,利用传统生理生化和分子生物学相结合的方法对其进行鉴定,并采用生物测定的方法评价其抑菌活性。菌株的形态学特征和生理生化特征与枯草芽孢杆菌基本一致,其16S rDNA... 详细信息

从烟台近郊土壤中分离出一株单核细胞增生李斯特氏菌拮抗微生物sly-3,利用传统生理生化和分子生物学相结合的方法对其进行鉴定,并采用生物测定的方法评价其抑菌活性。菌株的形态学特征和生理生化特征与枯草芽孢杆菌基本一致,其16S rDNA序列与GenBank中已鉴定的枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列同源性达99%以上,据此初步确定其为枯草芽孢杆菌。抑菌谱研究发现,该菌仅对革兰氏阳性菌有抑制作用,而对革兰氏阴性菌无明显抑制作用。sly-3菌株发酵过滤液初步作用于水产品中单核细胞增生李斯特氏菌,发现可有效抑制该致病菌的生长,且在高温处理条件下保留较高的抑菌活性,在食品保鲜中显示出了良好的应用前景。

关键词：水产品单核细胞增生李斯特氏菌拮抗菌

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单核细胞增生李斯特氏菌的PCR检测方法

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食品与发酵工业 2004年第6期30卷 100-103页

作者：徐宝梁贾建会陈颖赵贵明苏宁吴亚君中国进出口商品检验技术研究所北京市食品研究所北京100076

研究比较了裂解法、热煮沸法、试验盒法提取单增李斯特氏菌DNA的效果 ,认为Promega试剂盒法提取的DNA ,得率高、纯度好。同时根据单增李斯特氏菌的毒力相关基因的 5对引物 ,进行了引物的特异性研究 ,结果发现inlA引物、inlB引物、plcA... 详细信息

研究比较了裂解法、热煮沸法、试验盒法提取单增李斯特氏菌DNA的效果 ,认为Promega试剂盒法提取的DNA ,得率高、纯度好。同时根据单增李斯特氏菌的毒力相关基因的 5对引物 ,进行了引物的特异性研究 ,结果发现inlA引物、inlB引物、plcA引物特异性好。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌 PCR检测方法裂解法热煮沸法试验盒法

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单核细胞增生李斯特氏菌依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 130-132页

作者：王建广雷质文石琰璟付静芸祝素珍房保海姜英辉刘云国张健杨大伟青岛科技大学山东青岛266042 山东出入境检验检疫局山东青岛266002 中国海洋大学山东青岛266003

为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dN... 详细信息

为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌检测依赖解旋酶DNA恒温基因扩增

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单核细胞增生李斯特氏菌菌株分型与其致病潜力基因相关性研究进展

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食品科学 2021年

作者：程颖董庆利刘阳泰李红梅王园王翔上海理工大学医疗器械与食品学院上海中侨职业技术大学

单核细胞增生李斯特氏菌是一种常见的食源性致病菌，该菌型别繁多。分型技术可以实现对致病菌的预测监控、识别并为溯源提供可靠依据。不同分型的单核细胞增生李斯特氏菌致病潜力不同，这与菌株所携带的抗性基因和毒力基因不同有关。本... 详细信息

单核细胞增生李斯特氏菌是一种常见的食源性致病菌，该菌型别繁多。分型技术可以实现对致病菌的预测监控、识别并为溯源提供可靠依据。不同分型的单核细胞增生李斯特氏菌致病潜力不同，这与菌株所携带的抗性基因和毒力基因不同有关。本文调研并综述了不同分型单核细胞增生李斯特氏菌与抗性基因和致病基因的关系，结果发现与该菌抗性相关基因，如热抗性、耐冷性、酸抗性、耐高渗、耐干燥、耐金属和杀菌剂，及参与应激蛋白表达调控的基因较多，它们与分型之间的关系暂无明确相关性结论，但也发现应激生存岛1（Stress survival island 1， SSI-1）仅存在于谱系Ⅰ和谱系Ⅱ部分菌株中，SSI-2目前仅在ST121菌株中携带。毒力基因从功能毒力基因和毒力岛（Listeria pathogenicity islands， LIPI）分述，LIPI-3和LIPI-4主要存在于谱系Ⅰ菌株中。其次ST5、ST8、ST9和ST121菌株的inlA基因中出现提前终止密码子，使得菌株的毒力降低。因此研究不同分型单核细胞增生李斯特氏菌致病潜力基因的差异，有助于单核细胞增生李斯特氏菌的预警预测及防控，并对不同分型菌株的致病机制进行深入研究。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌亚型抗性基因毒力基因

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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光SPIA方法的建立

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食品工业科技 2017年第16期38卷 275-279,308页

作者：王建昌胡连霞孙晓霞李静河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050051

以单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,***)hly A基因为靶序列,设计5'端为RNA序列,3'端为DNA序列的嵌合引物和链终止Blocker序列,经过优化,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence SPIA)方法,进行特异... 详细信息

以单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,***)hly A基因为靶序列,设计5'端为RNA序列,3'端为DNA序列的嵌合引物和链终止Blocker序列,经过优化,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence SPIA)方法,进行特异性、检出限实验,并对不同DNA提取方法进行比较。结果显示,确定荧光染料SPIA法的最佳反应温度为58℃,反应30 min,引物特异性良好,只有4株不同来源的*** DNA产生典型的S型荧光扩增曲线。对***纯培养DNA的检出限为3.6×10~1fg/μL,相应菌液浓度为1.2×10~1CFU/m L;Realtime fluorescence SPIA检测试剂盒法、水煮法、溶菌酶-蛋白酶K法、饱和酚提取法四种方法提取DNA,均产生典型的扩增曲线,Ct值没有明显差异。对人工添加猪肉火腿样品中的***,采用水煮法提取DNA的检出限为1.1×10~2CFU/g。结果表明,所建立的***的Real-time fluorescence SPIA新型等温扩增方法,特异性强、灵敏度高、不受DNA纯度的影响、快速、简便。

关键词：单引物等温扩增荧光单核细胞增生李斯特氏菌 hly A基因

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