检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2018年第10期39卷 1109-1114页

作者：徐娟张力航高金超赵文娟殷明上海交通大学药学院神经药理学实验室上海200240

目的探讨单纯疱疹病毒ⅰ型(HSV-1)感染对人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Yβ-淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响。方法通过非洲绿猴肾细胞Vero扩增HSV-1,测定病毒滴度。取感染复数(MOI)为10的3.2×108PFU/mL HSV-1分别感染SH-SY5Y细胞12、24 h,... 详细信息

目的探讨单纯疱疹病毒ⅰ型(HSV-1)感染对人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Yβ-淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响。方法通过非洲绿猴肾细胞Vero扩增HSV-1,测定病毒滴度。取感染复数(MOI)为10的3.2×108PFU/mL HSV-1分别感染SH-SY5Y细胞12、24 h,显微镜下观察SH-SY5Y细胞的形态变化,使用PCR检测细胞中HSV-1 DNA的表达;双色免疫荧光检测SH-SY5Y细胞中Aβ和载脂蛋白E(ApoE)的表达;蛋白质印迹法检测淀粉样蛋白前体(APP)、黑素代谢酶(MME)、ApoE、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)蛋白的表达。结果 HSV-1感染SH-SY5Y细胞12 h后,镜下可见细胞突触减少,突起回缩;感染24 h后细胞开始聚集,呈圆形,并有细胞脱落。与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组相比,HSV-1感染12 h后细胞中Aβ表达增加(P<0.01),ApoE蛋白表达无明显改变;感染24 h后,Aβ表达仍增加(P<0.05),但弱于12 h时(P<0.01),APOE蛋白表达增加(P<0.01)。蛋白质印迹分析结果显示,与PBS对照组比较,HSV-1感染12 h后细胞中APP蛋白的表达水平降低(P<0.05),GSK-3β总蛋白的表达水平增加(P<0.05)且磷酸化活性增强(P<0.05),MME蛋白的表达水平增加(P<0.05);感染24 h时MME蛋白的表达水平降低(P<0.05),ApoE蛋白的表达水平增加(P<0.05)。结论 HSV-1感染后可诱导SH-SY5Y细胞Aβ表达增加,在感染12 h时可能通过促进APP代谢、GSK-3βSer9磷酸化诱导Aβ产生,而在24 h时主要是通过抑制Aβ降解促使Aβ表达增加。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型阿尔茨海默病淀粉样蛋白载脂蛋白E 淀粉样蛋白前体

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单纯疱疹病毒ⅰ型感染胎鼠原代神经元细胞模型的建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第3期17卷 237-239,T001页

作者：李伟荣王佳伟王得新首都医科大学附属北京友谊医院神经内科北京100050 首都医科大学附属北京友谊医院神经病毒室北京100050

目的　建立单纯疱疹病毒ⅰ型 (HSV Ⅰ )感染胎鼠原代皮质神经元细胞模型。方法　取孕 14～ 16d昆明小鼠皮质神经元进行细胞培养并感染HSV Ⅰ。观察倒置光学显微镜下神经元形态变化 ,并应用流式细胞仪检测二者的百分比。应用间接免疫荧... 详细信息

目的　建立单纯疱疹病毒ⅰ型 (HSV Ⅰ )感染胎鼠原代皮质神经元细胞模型。方法　取孕 14～ 16d昆明小鼠皮质神经元进行细胞培养并感染HSV Ⅰ。观察倒置光学显微镜下神经元形态变化 ,并应用流式细胞仪检测二者的百分比。应用间接免疫荧光方法观察正常及病毒感染组神经元和星形胶质细胞的变化。用特异性HSV Ⅰ荧光抗体检测神经元受染情况 ,并利用MTT比色实验检测细胞活性。结果　原代培养神经元数量、形态良好。用阿糖胞苷抑制星形胶质细胞生长后 ,神经元纯度较高。培养 3d时加入HSV Ⅰ感染神经元 ,HSV Ⅰ特异性免疫荧光反应阳性 ,受染神经元形态变化 ,活性降低。结论　HSV Ⅰ可直接感染原代培养神经元细胞。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型胎鼠原代神经元细胞动物模型细胞培养流式细胞仪间接免疫荧光

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单纯疱疹病毒ⅰ型免疫逃避机制——ICP47抑制抗原加工相关转运蛋白

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病毒学报 2007年第1期23卷 72-75页

作者：洪敏李卫中李琦涵中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

病毒侵入宿主后的感染过程除导致相应的病理学结果外,还能引发机体非特异性、特异性抗病毒免疫反应清除病原体。在特异性免疫反应中,机体能否对“异已”抗原进行有效识别,在很大程度上是通过抗原呈递细胞实现的。抗原呈递细胞APC(包括... 详细信息

病毒侵入宿主后的感染过程除导致相应的病理学结果外,还能引发机体非特异性、特异性抗病毒免疫反应清除病原体。在特异性免疫反应中,机体能否对“异已”抗原进行有效识别,在很大程度上是通过抗原呈递细胞实现的。抗原呈递细胞APC(包括树突状细胞DC、巨噬细胞、B细胞等)能捕捉、加工、处理抗原,并以MHC-抗原肽复合物的形式表达于呈递细胞表面,最终被免疫活性细胞识别,这一过程是淋巴细胞活化、增生、发挥效应的始动环节;而机体能否进行有效的抗原呈递直接影响免疫激活或免疫耐受。MHCⅠ抗原呈递途径主要参与内源性蛋白分子,包括病毒蛋白、肿瘤抗原、同种异型抗原等分子的免疫识别。[第一段]

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型抗原加工相关转运蛋白 ICP47

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单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测方法的建立

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中国热带医学 2024年第3期24卷 340-348页

作者：张天姿王瑞晨付士红李樊殷启凯李海聂凯王环宇许松涛中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206

目的建立单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的双重微滴式数字PCR检测方法。方法基于单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的保守区域,设计特异性引物探针,通过筛选引物探针组合,优化双重微滴式数字PCR反应退火温度及引物探针浓度比,... 详细信息

目的建立单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的双重微滴式数字PCR检测方法。方法基于单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的保守区域,设计特异性引物探针,通过筛选引物探针组合,优化双重微滴式数字PCR反应退火温度及引物探针浓度比,建立双重单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测反应体系,对其他病毒进行检测,对临床样本进行验证,对建立的双重微滴式数字PCR方法的灵敏性、特异性及重复性进行分析。结果单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测方法最佳引物和探针浓度分别为800 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度是56℃;双重微滴式数字PCR检测方法的标准曲线相关系数(R2)为0.99,呈现良好的线性关系;灵敏度高,单纯疱疹病毒ⅰ型最低检测下限为2.97拷贝/µL,水痘-带状疱疹病毒最低检测下限为2.73拷贝/µL;重复性好,变异系数小,检测结果稳定;特异性强,未发现与单纯疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、巨细胞病毒、人巨细胞病毒、肠道病毒71型、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及人类核酸有交叉反应。结论本试验建立的单纯疱疹病毒ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR方法灵敏性强、特异性高、重复性好,可为不同场景下2种病毒的快速定量检测提供解决方案。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR 定量检测

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单纯疱疹病毒ⅰ型ICP0蛋白的E3泛素连接酶活性在抑制宿主免疫反应中的作用

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免疫学杂志 2019年第6期35卷 537-542,548页

作者：刘文英王莉中国人民解放军陆军军医大学西南医院皮肤科

单纯疱疹病毒ⅰ型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)编码的具有泛素连接酶(ubiquitin-ligase enzymes 3,E3)活性的ICP0(infected cell protein 0)蛋白是病毒由潜伏期进入裂解复制期的关键作用蛋白。作为E3泛素连接酶,ICP0能够直接降解多种细胞组分,阻碍细胞多种固有免疫和先天性免疫反应。本文综述了ICP0的E3泛素连接活性在对抗宿主免疫反应中的作用。重点阐述了ICP0在裂解性复制中靶向降解宿主SUMO(small ubiquitin-like modifier)化修饰的抗病毒蛋白、阻碍宿主干扰素抗病毒途径和DNA损伤反应的相关机制。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型 ICP0 免疫反应

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单纯疱疹病毒ⅰ型基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗Oka株感染小鼠的生物学特性比较

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中国生物制品学杂志 2019年第3期32卷 249-254页

作者：柳蕾徐兴丽冯敏何玉凤王丽春张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500

目的比较单纯疱疹病毒ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫... 详细信息

目的比较单纯疱疹病毒ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型突变株水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗小鼠生物学特性

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单纯疱疹病毒ⅰ型DNA聚合酶的纯化和特性及对一些已知抗生素敏感性的研究

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中国抗生素杂志 1985年第6期10卷 336-341+335页

作者：陶佩珍王淑琴中国医学科学院抗菌素研究所中国医学科学院抗菌素研究所北京

本文报道单纯疱疹病毒ⅰ型DNA聚合酶(HSV-1 DNA pol)的提纯,特性及药物抑制试验。应用高盐提取,序列通过DEAE-纤维素,P11-纤维素二种离子交换柱层析及DNA-纤维素亲和层析,由HSV-1感染BHK细胞内可制备相当纯的HSV-1 DNA pol。该酶最适盐... 详细信息

本文报道单纯疱疹病毒ⅰ型DNA聚合酶(HSV-1 DNA pol)的提纯,特性及药物抑制试验。应用高盐提取,序列通过DEAE-纤维素,P11-纤维素二种离子交换柱层析及DNA-纤维素亲和层析,由HSV-1感染BHK细胞内可制备相当纯的HSV-1 DNA pol。该酶最适盐浓度为200mM KCl;最适镁离子浓度为2mM;对4个底物的米氏常数为3μM。特异的HSV-1 DNA pol抑制剂——膦羧基甲酯及膦羧基乙酯抑制50％酶活性的剂量(ID50)分别为0.42μM及0.46μM,而二者抑制L1210 DNA polα的ID50为32μM及40μM。特异的正常细胞DNA α抑制剂——N乙基马来酰亚胺lmM抑制90％L1210 DNA pol α的活性,同样浓度对HSV-1 DNA pol活性无影响。我们选择不同化学类别具有不同作用机制的已知抗生素及其它药物27个,测定了它们在体外抑制HSV-1 DNA pol的作用。结果显示病毒诱导酶的体外模型有相当特异性并对其在筛选抗病毒抗生素中的应用进行了讨论。

关键词： DNA HSV 正常细胞诱导酶体外模型抗生素单纯疱疹病毒ⅰ型缓冲液酶活性酶活力盐浓度酶的纯化

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单纯疱疹病毒ⅰ型核衣壳结构蛋白的抗原特性分析及其在mRNA疫苗设计策略中的应用探索

单纯疱疹病毒Ⅰ型核衣壳结构蛋白的抗原特性分析及其在mRNA疫苗设...

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作者：段素琴北京协和医学院

学位级别：博士

单纯疱疹病毒ⅰ型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)作为人类疱疹病毒α亚科的成员之一,其主要特征是可以在感染机体并形成上皮组织的病理损伤之后,长期潜伏在三叉神经节中形成终身感染,当机体受到非特异性刺激,如发热、寒冷、机体免疫力... 详细信息

单纯疱疹病毒ⅰ型(Herpes simplex virus 1,HSV-1)作为人类疱疹病毒α亚科的成员之一,其主要特征是可以在感染机体并形成上皮组织的病理损伤之后,长期潜伏在三叉神经节中形成终身感染,当机体受到非特异性刺激,如发热、寒冷、机体免疫力低下等时,会实现HSV-1潜伏状态的再激活。而HSV-1感染导致的潜伏过程的建立、维持和再激活的路径,是基于感染过程的必要而形成的一系列生物学系统策略,它从另一面展现了 HSV-1在进化中形成的非常有效的感染策略。而这种在机体水平上HSV-1潜伏感染和反复发作的特定病理学效应,与其复杂的结构与机体的免疫系统之间多层次、不同类型的相互作用有很大的关系。从某种意义看来,这种相互作用中产生的机体免疫反应及其保护效果的不足提示了病毒感染策略的成功,亦是HSV-1感染的临床治疗和预防难以奏效的原因。过去的HSV-1疫苗策略研发重点关注于包膜糖蛋白,如gB、gD、gE等,但HSV-1的结构特征之一是其可以编码80多种蛋白质,病毒包膜糖蛋白只是其中很小的一部分。因此除了病毒糖蛋白,其他HSV-1编码的蛋白质,如形成A、B、C三种不同形式的多种核衣壳分子,又与机体的免疫系统存在什么样的免疫相互作用,以及这种相互作用如何影响整个机体的抗病毒免疫反应的形成和表型特征还没有清楚的认证。因此针对HSV-1感染宿主过程中具有重要结构意义的核衣壳的免疫原性及其与机体免疫系统的相互作用过程进行研究,将有利于我们更加深入的理解HSV-1核衣壳蛋白的免疫学特性及其与机体抗病毒免疫的相互关系。基于以上的事实,本研究第一部分利用pET32a载体克隆10种HSV-1的主要核衣壳蛋白,进行原核表达获得纯化蛋白。同时在对BALB/c小鼠进行HSV-1野毒株的滴鼻感染后的35天时利用ELISpot的方法进行的细胞特异性反应检测中发现,这10种衣壳蛋白都可以作为相应的特异性CTL反应的靶分子而诱导明显增强的T细胞免疫应答。进一步利用免疫沉淀的方法将第35天血清与纯化的10个衣壳蛋白进行共孵育免疫沉淀,可以发现血清中产生了针对UL25、UL26.5的特异性抗体,这和我们其他的相关工作共同说明了这两种蛋白可能是HSV-1感染机体后诱导机体产生抗体的优势抗原。在随后我们对HSV-1优势抗原UL25、UL26.5进行了表达特性、免疫学特性的分析表明,优势核衣壳蛋白UL25、UL26.5虽然能够促使机体产生特异性抗体表达,但基于病毒结构的复杂性及其具备的多种潜在的免疫逃逸机制,仅仅针对这些衣壳蛋白的特异性抗体并不足以形成机体对HSV-1的免疫防御。因此,在此基础上,第二部分的实验我们首先利用TMT蛋白质组学的方法对UL25和UL26.5两种抗原蛋白对上皮细胞内天然免疫反应系统的作用特征做了初步分析,结果发现UL25和UL26.5基因转染Vero细胞后,HSV-1相关的天然免疫差异蛋白p62/SQSTM1、BCL-10、STAT3、IFI16等都出现明显的降低,提示UL25和UL26.5优势抗原可能参与了 HSV-1的免疫逃逸。随后用这两种我们理解为病毒的优势编码蛋白10μg/只腹腔免疫小鼠3次,之后做野毒株的滴鼻攻毒,结果显示小鼠HSV-1临床症状显著减轻。有趣的是,小鼠在感染后第14天出现了 CD4+T细胞数量的降低以及CD8+T细胞的升高,对T细胞的mRNA转录谱分析,发现升高的CD8+T细胞亚群主要为杀伤性T细胞。后续通过ELISpot检测发现UL26.5、UL25+UL26.5重组蛋白能够特异性的刺激HSV-1感染小鼠的T细胞产生IFN-γ。以上的分析表明UL25、UL26.5免疫后可能诱导了小鼠机体的高特异性T细胞免疫反应。为进一步验证T细胞在UL25、UL26.5编码蛋白诱导的保护性免疫反应中发挥的作用,本研究接着收集UL25、UL26.5、UL25+UL26.5三次免疫后小鼠的T细胞,将其被动回输给空白的BALB/c小鼠,48h后经鼻进行HSV-1感染,结果显示虽然UL25和UL26.5编码的蛋白所特有的病毒抗原特异性T细胞反应具体的机理仍然尚不清楚,但可能IFN-γ升高的特异性细胞免疫能力,确实缓解了小鼠死亡率、临床症状。但是现有结果表明,这两种结构蛋白作为免疫原对机体的免疫并不能为机体提供完全的保护作用。因此,针对HSV-1 UL25、UL26.5这两种优势抗原的抗病毒免疫研究提示,HSV-1利用这两个优势抗原在感染过程中消耗免疫反应中的抗体资源,并能够诱导机体产生明显的细胞免疫反应。尽管目前尚不完全清楚病毒这一策略的分子机理,但利用HSV-1 UL25、UL26.5所能激起的特异性抗体反应和细胞免疫的特性,作为激发机体的免疫系统功能的诱饵功能,使这种病毒策略应用于mRNA疫苗的设计理论上可以加强目的抗原的免疫原性。我们

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型核衣壳优势抗原免疫系统 UL25 UL26.5 mRNA疫苗设计

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单纯疱疹病毒ⅰ型主要糖蛋白免疫原性分析及糖蛋白D的基因克隆与原核表达

单纯疱疹病毒Ⅰ型主要糖蛋白免疫原性分析及糖蛋白D的基因克隆与...

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作者：张莉西安交通大学

学位级别：硕士

目的：通过建立兔病毒性眼病感染模型,分析其血清中特异性糖蛋白抗原的抗体产生和变化情况,确认单纯疱疹病毒ⅰ型感染时的主要糖蛋白免疫原;同时,对特异性糖蛋白D进行基因克隆及初步的原核表达,为建立单纯疱疹病毒ⅰ型特异性诊断方法及... 详细信息

目的：通过建立兔病毒性眼病感染模型,分析其血清中特异性糖蛋白抗原的抗体产生和变化情况,确认单纯疱疹病毒ⅰ型感染时的主要糖蛋白免疫原;同时,对特异性糖蛋白D进行基因克隆及初步的原核表达,为建立单纯疱疹病毒ⅰ型特异性诊断方法及进一步的抗原研究奠定基础.方法：病毒培养悬液接种兔眼,造成病毒性眼病,定期心脏采血,用免疫印迹法检测各个病程抗体变化情况.以病毒总DNA为模板经PCR扩增出糖蛋白D基因,与质粒载体pPROEX HTa连接后转入宿主菌*** DH5αk ,经重组质粒酶切鉴定后,将阳性克隆用IPTG诱导表达,转印至PVDF膜,用人单纯疱疹病毒ⅰ型阳性多克隆血清进行印迹鉴定.结论：（1）在单纯疱疹病毒ⅰ型感染过程中,糖蛋白C为主要免疫原,说明高分子量多肽具有较高的活性,且对机体的再感染有保护作用.（2）经原核表达的糖蛋白D为一分子量27KD的蛋白条带,具有免疫活性,能与多克降抗体发生抗原抗体反应,这对于今后建立单纯疱疹病毒ⅰ型的特异性诊断方法及进一步的抗原研究具有一定的意义.

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白基因克隆免疫印迹

来源：评论

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单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B基因疫苗安全性的初步研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗安全性的初步研究

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作者：于芳吉林大学

学位级别：硕士

目的:初步检验单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B基因疫苗对小鼠的安全性。方法:随机将昆明小鼠分为4组,即对照组、100μg组,300μg组,500μg组,每组6只,雌雄各半。各组分别股四头肌肌肉注射1ml生理盐水、100μg/ml、300μg/ml、500μg/ml pcDNA3... 详细信息

目的:初步检验单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B基因疫苗对小鼠的安全性。方法:随机将昆明小鼠分为4组,即对照组、100μg组,300μg组,500μg组,每组6只,雌雄各半。各组分别股四头肌肌肉注射1ml生理盐水、100μg/ml、300μg/ml、500μg/ml pcDNA3-gB,每10天免疫一次,共3次。末次免疫10天后,留取1ml凝血和20ul抗凝血各一份进行血液生理学、血液生化学检测,并对心、肝、脾、肾、脑、角膜、视网膜和三叉神经节8个组织器官进行病理切片检查及基因整合情况的检测。结果:免疫不同剂量单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的小鼠全部存活,并且其血液生理学、血液生化学指标、各组织器官的病理切片结果及基因整合情况与对照组小鼠的检测结果未见明显差异(P>0.05),不具有统计学意义。结论:初步说明单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B基因疫苗无病毒致病性,对小鼠是安全的,为下一步应用于大型实验动物及临床奠定了基础。

关键词：单纯疱疹病毒ⅰ型糖蛋白B 基因疫苗安全性小鼠

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